Aplikime Ultrasonike në Virusin e Mpoksit të Majmunit

Ultrasonikimi është një metodë e rëndësishme procesimi për izolimin e virusit të mpoksit të majmunit (MPXV) nga mostrat analitike, për fragmentimin e ADN-së së virusit si dhe në prodhimin e vaksinës kundër mpoksit të majmunit. Për përgatitjen e mostrave para diagnostikimit dhe analizës (PCR, ELISA etj.) ultrasonikimi përdoret për të shpërbërë qelizat në mënyrë që të lirohet virusi i mpoksit të majmunit nga brendësia e qelizës dhe / ose për të fragmentuar ADN-në. Në prodhimin e vaksinave, aplikimet variojnë nga përgatitja e particleve të virusit / ADN-së, kapsulimi në mbartës ilaçesh dhe formulimi i inokuleve.
Më poshtë mund të gjeni informacion të detajuar rreth përgatitjes së mostrave të virusit të mpoksit të majmunit me ultratinguj si dhe prodhimin e vaksinës MPXV të asistuar me ultratinguj.

 

Çfarë do të gjeni në këtë faqe:

• Lizë Ultrasonike për Ekstraktimin e Virusit të Mpoksit të Majmunit
• Fragmentimi Ultrasonik i ADN-së së Virusit të Mpoksit të Majmunit
• Aplikime Ultrasonike në Prodhimin e Vaksines MPXV

Lizë Ultrasonike dhe Fragmentim i ADN-së para Reaksionit të Zinxhirit të Polimerazës (PCR)

Një infeksion me virusin e mpoksit të majmunit zbulohet nga testi i amplifikimit të acidit nukleik (NAAT), duke përdorur reaksionin e zinxhirit të polimerazës (PCR) në kohë reale ose konvencional, për zbulimin e sekuencave unike të ADN-së virale. Mostra (p.sh. nga tamponi nasofaringeal ose biopsitë e lëkurës) përmban virusin në qeliza.
Për analizë, virusi duhet të lirohet nga qelizat dhe ADN-ja virale duhet të fragmentohet për PCR.

Lizë Ultrasonike:

Shpërbërja / liza ultrasonike e qelizave është një metodë e besueshme dhe efikase për izolimin e viruseve nga mostrat qelizore dhe rrjedhimisht një teknikë e preferueshme mbi agjentët kimikë, si lizozoma, proteinaza K dhe detergjentë të ndryshëm të cilët përdoren alternativisht për të arritur lizën e qelizave dhe lirimin e ADN-së.
Megjithatë, përdorimi i tillë reagentësh kimikë kërkon përgatitje të mostrave që konsumon kohë në disa hapa para analizës PCR për të parandaluar inhibimin e reaksionit PCR. Meqenëse inhibitorët e PCR ndikojnë në efikasitetin e amplifikimit, variacionet e vogla të sasisë së inhibitorëve që nuk hiqen mund të çojnë në variacione të mëdha në amplifikimin e produktit PCR (Diaco, 1995).
Avantazhi i ultrasonikimit për lizë është që shpërbërja e plotë e strukturave qelizore dhe lirimi i ADN-së pa nevojën për reagentë lize dhe përgatitje mostrash që konsumon kohë janë të dëshirueshme. (cf. Fykse et al., 2003)

Fragmentimi Ultrasonik i ADN-së:

Fragmentimi ultrasonik i ADN-së është i thjeshtë dhe i besueshme pasi prodhon fragmente ADN-je të rregullueshme në gjatësi (çifte bazash, bp). Duke përdorur ultratinguj, ADN-ja mund të fragmentohet efektivisht në gjatësinë e synuar të ADN-së. Kontrolli i saktë mbi parametrat ultrasonikë dhe opsionet e avancuara të ftohjes parandalojnë degradimin e ADN-së.
Lexoni më shumë rreth fragmentimit ultrasonik të ADN-së!

Aplikime Ultrasonike në Vaksinen kundër Virusit të Mpoksit të Majmunit

Vaksinet e përdorura kundër virusit të mpoksit të majmunit aktualisht janë vaksina me virus të gjallë. Vaksinat e zhvilluara rishtas mund të përdorin platforma të tjera si ato të bazuara në ADN-ë Aktualja përmban një virus Vaccinia Ankara të modifikuar, një ortopoks virus të dobësuar, jo-replikues. Ai gjithashtu përmban Tris (tris-aminometan) dhe klorur natriumi. Vaksina mund të përmbajë gjithashtu sasi të vogla të ADN-së dhe proteinës nga qelizat Fibroblast të Embrionit të Pulës, të cilat përdoren për të rritur virusin e vaksinës, benzonaza dhe komponime antibiotike si gentamicina dhe ciprofloksacina.

Homogjenizimi ultrasonik përdoret në prodhimin e vaksinave me virus të gjallë të dobësuar, vaksinave ADN, koktejeve multi-valente ADN, vaksinave mRNA, vaksinave me proteinë rekombinante, vaksinave me particle të ngjashme me virusin, etj.

Mund të gjeni informacion më të thellë rreth aplikimeve ultrasonike për prodhimin e përmirësuar të vaksinave!

Protokoll për Izolimin Ultrasonik të Virusit të Mpoksit të Majmunit

Ekipi i kërkimit i Stittelaar (2005) përdori lizën ultrasonike për të liruar virusin e mpoksit të majmunit nga kultura e qelizave mbajtëse të rritjes si dhe nga qelizat e marra përmes tamponëve të fytit nga primatet e infektuara.

Përgatitja e Vaksines kundër Mpoksit të Majmunit:

Viruset e mpoksit të majmunit u rritën në qeliza fibroblast embrioni pula specifike pa patogjenë. Pas inkubimit për 1 deri në 2 ditë, suspendimi virus-qelizë u mbollua nga një raund ngrirje-shkrirjeje dhe më pas u përqendrua me centrifugim. Sedimenti u riresuspendua dhe u nënshtrua në disa raunde homogjenizimi ultrasonik.

Izolimi i Virusit të Mpoksit të Majmunit nga Makakat e Vaksinuar:

Mostrat u ngrinë-shkrinë tre herë dhe u sonifikuan në një CupHorn ultrasonik. Dy hollime (1:10 dhe 1:100) në medium transporti të pasuruar me 1% serum fetal bovin u përdorën për të inokuluar monoshkresat e qelizave Vero në pjata me gjashtë pushe. Pas 1 h inkubimi në 37°C, inokulet u hoqën dhe u zëvendësuan me medium kulture të pasuruar me 1% serum fetal bovin. Monoshkresat u kultivuan për 5 ditë në 37°C dhe u ngjyrosën me një tretësirë kristali vjollce.
(cf. Stittelaar et al., 2005)

Ultrasonikatorë për Analizën e Viruseve dhe Prodhimin e Vaksineve

Portofoli i gjerë i produkteve Hielscher Ultrasonics ofron ultrasonikatorin ideal për laboratorët e kërkimit dhe analitikë si dhe për prodhimin industrial të vaksinave.
Hielscher Ultrasonics është e specializuar në dizajnin, prodhimin dhe shpërndarjen e ultrasonikatorëve me performancë të lartë dhe sono-bioreaktorëve për përdorim në laboratorët e kërkimit dhe analitikë si dhe për implementim në prodhimin industrial të vaksinave (p.sh. vaksina, API).
Sonifikimi mund të aplikohet në enë të hapura, reaktorë të mbyllur të trazuar vazhdimisht dhe reaktorë me rrjedhë të vazhdueshme. Të gjitha pjesët e sistemeve ultrasonike, që bien në kontakt me mediumin e lëngshëm, janë bërë nga çeliku inoks, titan, ose xham. Pjesët e autoklavueshme dhe pajisjet sanitare sigurojnë prodhimin nën kushte të nivelit farmaceutik.
Regjistrim Automatiku i të Dhënave: Softueri inteligjent regjistron parametrat e procesit të sonifikimit automatikisht në kartën e integruar të memories SD. Kontrolli i saktë i të gjithë parametrave të procesit siguron riprodushmërinë, standardizimin e prodhimit, dhe lehtëson përmbushjen e standardeve të sigurisë së produktit farmaceutik.
Procesorët ultrasonikë të Hielscher Ultrasonics janë shumë të besueshëm dhe mund të kontrollohen me saktësi. Të gjithë ultrasonikatorët industrialë mund të rregullohen për të dhënë gamën e plotë nga amplitudat e ulëta deri në ato shumë të larta. Robustësia e sistemeve ultrasonike të Hielscher lejon operim 24/7 në kushte të rënda dhe në mjedise kërkesuese.

Tabela më poshtë ju jep një ide të kapacitetit të përafërt të procesimit të ultrasonikatorëve tanë: