Ultratingulli është një metodë e rëndësishme përpunimi për izolimin e virusit të lisë së majmunit (MPXV) nga mostrat analitike, për fragmentimin e ADN-së së virusit si dhe në prodhimin e vaksinës së lisë së majmunit. Për përgatitjen e mostrës përpara diagnostikimit dhe analizës (PCR, ELISA etj.) përdoret ultratingulli për lizimin e qelizave në mënyrë që të çlirohet virusi i lisë së majmunit nga brendësia e qelizës dhe/ose për të fragmentuar ADN-në. Në prodhimin e vaksinave, aplikimet variojnë nga përgatitja e grimcave të virusit / ADN-së, kapsulimi në bartës të ilaçeve dhe formulimi i inokulës.
Më poshtë mund të gjeni informacion të detajuar në lidhje me përgatitjen e mostrës së virusit ultrasonik të lisë së majmunit, si dhe prodhimin e vaksinës MPXV të asistuar në mënyrë ultrasonike.

Çfarë do të gjeni në këtë faqe:

• Liza me ultratinguj për nxjerrjen e virusit të lisë së majmunit
• Fragmentimi tejzanor i ADN-së së virusit të lisë së majmunit
• Aplikime tejzanor në prodhimin e vaksinës MPXV

Liza tejzanor dhe fragmentimi i ADN-së përpara reaksionit zinxhir polimerazë (PCR)

Infeksioni i virusit të lisë së majmunit zbulohet nga testimi i amplifikimit të acidit nukleik (NAAT), duke përdorur në kohë reale ose reaksion zinxhir polimerazë konvencional (PCR), për zbulimin e sekuencave unike të ADN-së virale. Mostra (p.sh. nga shkëmbimi i nazofaringit ose biopsitë e lëkurës) përmban virusin në qeliza.
Për analizë, virusi duhet të çlirohet nga qelizat dhe ADN-ja virale duhet të fragmentohet për PCR.

Liza me ultratinguj:

Ndërprerja/liza e qelizave tejzanor është një metodë e besueshme dhe efikase për të izoluar viruset nga mostrat e qelizave dhe në këtë mënyrë një teknikë e preferueshme ndaj agjentëve kimikë, si lizozima, proteinaza K dhe detergjentë të ndryshëm të cilët përdoren në mënyrë alternative për të arritur lizën e qelizave dhe çlirimin e ADN-së.
Megjithatë, përdorimi i reagentëve të tillë kimik kërkon përgatitjen e mostrës që kërkon shumë kohë në disa hapa përpara analizës PCR për të parandaluar frenimin e reaksionit PCR. Meqenëse frenuesit e PCR ndikojnë në efikasitetin e amplifikimit, variacionet e vogla të sasisë së inhibitorëve që nuk hiqen mund të çojnë në ndryshime të mëdha në amplifikimin e produktit PCR (Diaco, 1995).
Avantazhi i ultrazërit për lizë është se prishja e plotë e strukturave qelizore dhe lirimi i ADN-së pa nevojën e reagentëve lizues dhe përgatitjes së mostrës që kërkon shumë kohë janë të dëshirueshme. (krh. Fykse et al., 2003)

Fragmentimi tejzanor i ADN-së:

Fragmentimi tejzanor i ADN-së është i thjeshtë dhe i besueshëm pasi prodhon fragmente të ADN-së të sintonizueshme në gjatësi (çiftet bazë, bp). Duke përdorur ultratinguj, ADN-ja mund të fragmentohet në mënyrë efektive në gjatësinë e synuar të ADN-së. Kontrolli i saktë mbi parametrat tejzanor dhe opsionet e sofistikuara të ftohjes parandalojnë degradimin e ADN-së.
Lexoni më shumë rreth fragmentimit tejzanor të ADN-së!

Aplikime tejzanor në vaksinën kundër virusit të lisë së majmunit

Vaksinat e përdorura kundër virusit të lisë së majmunit janë aktualisht vaksina të virusit të gjallë. Vaksinat e zhvilluara rishtazi mund të përdorin platforma të tjera, si p.sh. me bazë ADN-në. Aktualisht përmban një virus të modifikuar të Vaccinia Ankara, një ortopoksvirus të dobësuar, që nuk riprodhohet. Ai gjithashtu përmban Tris (tris-aminometan) dhe klorur natriumi. Vaksina mund të përmbajë gjithashtu sasi të vogla të ADN-së dhe proteinave nga qelizat fibroblast të embrionit të pulës, të cilat përdoren për të rritur virusin e vaksinës, benzonazën dhe komponimet antibiotike si gentamicina dhe ciprofloxacina.

Homogjenizimi tejzanor përdoret në prodhimin e vaksinave të virusit të dobësuar të gjallë, vaksinave të ADN-së, koktejeve të ADN-së shumëvalente, vaksinave mRNA, vaksinave të proteinave rekombinante, vaksinave të grimcave të ngjashme me virusin, etj.

Mund të gjeni më shumë informacion të thelluar në lidhje me aplikacionet tejzanor për prodhimin e përmirësuar të vaksinave!

Protokolli për izolimin me ultratinguj të virusit të lisë së majmunit

Ekipi hulumtues i Stittelaar (2005) përdori lizën tejzanor për të çliruar virusin e lisë së majmunit nga kultura e qelizave pritëse të rritjes si dhe nga qelizat e marra nëpërmjet shkëmbimeve të fytit nga primatët e infektuar.

Përgatitja e vaksinës kundër lisë së majmunit:

Viruset e lisë së majmunit u rritën në qelizat fibroblaste të embrionit të pulës pa patogjene specifike. Pas inkubimit për 1 deri në 2 ditë, suspensioni i qelizave virus u mor me një raund ngrirje-shkrirje dhe më pas u përqendrua me centrifugim. Peleti u risuspendua dhe iu nënshtrua disa raundeve të homogjenizimit tejzanor.

Izolimi i virusit të lisë së majmunit nga makakët e vaksinuar:

Mostrat u ngrinë-shkrirë tre herë dhe sonicated në një CupHorn tejzanor. Dy hollime (1:10 dhe 1:100) në mjedisin transportues të plotësuar me 1% serum të fetusit të gjedhit u përdorën për të inokuluar monoshtresat e qelizave Vero në pllaka me gjashtë pusi. Pas 1 ore inkubimi në 37°C, inokulat u hoqën dhe u zëvendësuan me mjedis kulture të plotësuar me 1% serum fetusi të gjedhit. Shtresat e vetme u kultivuan për 5 ditë në 37°C dhe u ngjyrosën me një tretësirë kristal vjollce.
(krh. Stittelaar et al., 2005)

Ultrasonikë për analizën e viruseve dhe prodhimin e vaksinave

Portofoli i gjerë i produkteve Hielscher Ultrasonics ofron ultrasonikatorin ideal për laboratorët kërkimorë dhe analitikë, si dhe për prodhimin e vaksinave industriale.
Hielscher Ultrasonics është e specializuar në projektimin, prodhimin dhe shpërndarjen e ultratingujve me performancë të lartë dhe sono-bioreaktorëve për përdorim në laboratorët kërkimorë dhe analitikë, si dhe për zbatimin në prodhimin e vaksinave industriale (p.sh. vaksinat, API).
Sonication mund të aplikohet në enët e hapura, reaktorët e mbyllur të trazuar vazhdimisht dhe reaktorët me rrjedhje të vazhdueshme. Të gjitha pjesët e sistemeve tejzanor, të cilat bien në kontakt me mjedisin e lëngshëm, janë bërë prej çeliku inox, titani ose qelqi. Pjesët e autoklavueshme dhe pajisjet sanitare sigurojnë prodhimin nën kushtet e shkallës farmaceutike.
Regjistrimi automatik i të dhënave: Programi inteligjent regjistron automatikisht parametrat e procesit të zërit në kartën e integruar SD. Kontrolli i saktë i të gjithë parametrave të procesit siguron riprodhueshmërisë, standardizimi i prodhimit, dhe lehtëson përmbushjen e standardeve të sigurisë së produkteve farmaceutike.
Hielscher Ultrasonics’ Procesorët tejzanor janë shumë të besueshëm dhe mund të kontrollohen me saktësi. Të gjithë ultrasonikët industrialë mund të rregullohen për të ofruar gamën e plotë nga amplituda më të ulëta në shumë të larta. Fortësia e sistemeve tejzanor të Hielscher lejon funksionimin 24/7 në punë të rënda dhe në mjedise kërkuese.

Tabela më poshtë ju jep një tregues të kapacitetit të përafërt të përpunimit të ultrasonicators tonë: