Teknologjia e ultrazërit Hielscher

Protokolli për Inaktivimin e Koronavirusit SARS-CoV-2 me Sonication

Hielscher VialTweeter është një njësi unike e përgatitjes me shumë mostra tejzanor, e cila përdoret për të inaktivuar koronavirusin SARS-COV-2. VialTweeter lejon të përgatisë deri në 10 shishka të mostrës në të njëjtën kohë dhe në këtë mënyrë është njësia ideale për përpunimin masiv të mostrës.

Inaktivizimi i SARS-CoV-2 Coronavirus me VialTweeter

Pas heqjes së fiksuesit, mono-shtresat u lanë tre herë me kripë me fosfat-buffer (PBS) para se të kruhen qelizat në 1 ml MEM / 5% FBS dhe të sonikohen (3 × 10 sekondë në, 10 sekonda off me 100% fuqi dhe amplitudë) duke përdorur Hielscher procesor tejzanor UP200St me VialTweeter bashkëngjitje. Supernatantët u sqaruan duke centrifuguar në 3000 × g për 10 minuta. Lexoni protokollin e plotë këtu për çaktivizimin e koronavirusit SARS-CoV-2 nga Welch et al. (2020) më poshtë:

Qelizat dhe viruset

Qelizat Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) janë kultivuar në mediumin thelbësor të modifikuar të Eagle (MEM) të shtuar me 10% (v / v) serum viçi fetal (FCS). Virusi i përdorur ishte lloji SARS-CoV-2 hCOV-19 / Angli / 2/2020, i izoluar nga PHE nga grupi i parë i pacientëve në MB në 29/01/2020. Ky virus u mor në kalimin 1 dhe u përdor për studime të inaktivizimit në kalimin 2 ose 3.
Për reagjentët dhe kimikatet e përdorura për inaktivimin e SARS-CoV-2 si dhe heqjen e citotoksicitetit të reagjentëve ju lutemi shikoni raportin shkencor të Welch et al. (2020)

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Inaktivizimi i virusit nga detergjentet – Protokolli i Inaktivimit të Koronavirusit SARS-CoV-2 nga Welch et al. 2020

Inaktivimi i SARS-CoV-2

Për produktet komerciale, përgatitjet e virusit (lëngu i kulturës së indeve, titrat që variojnë nga 1 × 106 në 1 × 108 PFU / ml) u trajtuan në tre kopje me reagensë në përqendrime dhe për kohën e kontaktit të rekomanduar në udhëzimet e prodhuesve për përdorim, aty ku ka, ose për përqendrime dhe kohë të kërkuara posaçërisht nga laboratorët e testimit. Kur një gamë përqendrimesh është dhënë nga prodhuesi, është testuar raporti më i ulët i produktit ndaj mostrës (dmth. Përqendrimi më i ulët i rekomanduar i produktit të provës). Reagensët e tubave të transportit të mostrave u testuan duke përdorur një raport të një vëllimi të lëngut të kulturës indore në dhjetë vëllime të reagensit, përveç nëse një raport vëllimi i lëngut të mostrës ndaj reagensit ishte specifikuar nga prodhuesi. Detergjentët, fiksuesit dhe tretësit u testuan në përqendrimet e treguara për kohët e treguara. Të gjithë hapat e inaktivimit janë kryer në temperaturën e dhomës së ambientit (18 - 25 ° C). Për testimin e llojeve alternative të mostrave, virusi u fut në matricën e treguar të mostrës në një raport prej 1: 9, pastaj u trajtua me reagensë provë si më sipër. Të gjitha eksperimentet përfshinin shembuj të trefishtë të kontrollit të trajtuar me një vëllim ekuivalent të PBS në vend të reagensit provë. Menjëherë pas kohës së kërkuar të kontaktit, 1 ml mostër e trajtuar u përpunua duke përdorur matricën e filtrimit të zgjedhur në mënyrë të përshtatshme. Heqja e reagjentit për testimin e inaktivizimit u krye në një format më të madh të kolonës rrotulluese duke përdorur Shtyllat Spin Larguese të Detergjentit Pierce 4mL (Thermo Fisher), ose duke mbushur kolona boshe me kapacitet Pierce 10mL (Thermo Fisher) me SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR ose Sephadex LH-20 për të dhënë 4 ml rruaza të paketuara / rrëshirë. Për pastrim duke përdorur filtra Amicon, 2 × 500μl mostra u pastruan duke përdorur dy filtra centrifugale me metodën e përshkruar më parë, pastaj të bashkuara së bashku. Për formaldehidin dhe formaldehidin me heqjen e glutaraldehidit, një filtër u përdor me vëllim të mostrës 1 × 500μl, u rindez pas përpunimit në 500μl PBS dhe u shtua 400ul MEM / 5% FBS. Për inaktivizimin e të infektuarve VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STmono-shtresa, 12.5 cm2 balonë të qelizave Vero E6 (2.5 × 10)6 qelizat / balonë në 2.5 ml MEM / 5% FBS) u infektuan në MOI 0.001 dhe u inkubuan në 37 ° C / 5% CO2 për 24 orë. Supernatanti u hoq, dhe qelizat u fiksuan duke përdorur 5 ml formaldehid, ose formaldehid dhe glutaraldehid në temperaturën e dhomës për 15 ose 60 minuta. Fiksuesi u hoq, dhe mono-shtresat u lanë tre herë me PBS para se të pastronin qelizat në 1 ml MEM / 5% FBS dhe u sonifikuan (3 × 10 sekonda në, 10 sekonda jashtë në 100% të energjisë dhe amplitudës) duke përdorur një UP200St me shtojcë VialTweeter (Hielscher Ultratinguj Teknologji). Supernatantët u sqaruan duke centrifuguar në 3000 × g për 10 minuta.

VialTweeter për zhurmën intensive të shisheve të mbyllura

VialTweeter për sonifikimin intensiv të shishkave të mbyllura

Kërkesë informacioni





Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Detajet e reagjentit të përdorur për çaktivizimin e koronavirusit SARS-CoV-2 me tejzanor VialTweeter sipas protokollit nga Welch et al. 2020

Protokolli i plotë duke përfshirë përdorimin e Hielscher VialTweeter mund të gjendet këtu:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter për inaktivimin e virusit tejzanor

Avantazhet e VialTweeter në një shikim

  • Sonifikimi deri në 10 shishka njëkohësisht
  • Asnjë ndotje e tërthortë
  • Asnjë humbje e mostrës
  • Regjistrimi automatik i të dhënave
  • Lehtë dhe e sigurt për të vepruar
VialTweeter përdoret gjithashtu për të

  • Liza e qelizave
  • Prishja e grimcave virale
  • Nxjerrja e acidit nukleik: Izolimi i ADN / ARN
  • Fragmentimi i ADN / ARN
  • Solubilizimi i likatit
  • Dismembratorët ultratinguj të sofistikuar dhe përçarësit e qelizave

    Ultrasonicator multi-mostër VialTweeter është vetëm një nga shumë zgjidhje tejzanor për përgatitjen e mostrës në laboratorë biologjikë, biokimikë dhe klinikë. Hielscher Ultrasonics ofron dismembratorin ultrasonik ideal për aplikimin tuaj, p.sh lizën e qelizave, nxjerrjen e qelizave, homogjenizimin e indeve, tretjen e lizatit, shpërbërjen, degazimin e mostrave etj.
    Na tregoni se sa mostra duhet të përpunoni në orë dhe ditë, nëse preferoni sonifikimin direkt ose indirekt dhe cili është synimi i trajtimit të mostrës tejzanor. Ne do t'ju rekomandojmë njësinë më të përshtatshme tejzanor për rutinën tuaj të përditshme të punës!
    Procesorët dixhitalë ultrasonikë të Hielscher Ultrasonics janë të pajisur me softuer inteligjent, regjistrim automatik të të dhënave, mundësi të lehta paracaktimi për kontrollin e temperaturës, kohëzgjatjen e zërit, modalitetin e ciklit / impulsit si dhe ndriçimin e mostrës dhe telekomandën e shfletuesit. Ne përpiqemi t'i bëjmë pajisjet tona tejzanor sa më të zgjuara që të jetë e mundur në mënyrë që rutina juaj e kërkimit dhe punës të bëhet sa më e përshtatshme dhe e suksesshme.
    Klikoni këtu, për të gjetur më shumë aplikacione, përfshirë protokollet e përgatitjes së mostrës tejzanor me VialTweeter!

    Na kontaktoni! / Pyet Na!

    Pyesni për më shumë informacion

    Ju lutemi përdorni formularin më poshtë për të kërkuar informacione shtesë në lidhje me procesorët tejzanor, aplikacionet dhe çmimin. Ne do të jemi të lumtur të diskutojmë procesin tuaj me ju dhe t'ju ofrojmë një sistem tejzanor që plotëson kërkesat tuaja!









    Ju lutem vini re tonë Politika e privatësisë.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics prodhon homogjenizues tejzanor me performancë të lartë për përzierjen e aplikacioneve, shpërndarjen, emulsifikimin dhe nxjerrjen në shkallë laboratorike, pilot dhe industriale.

    Literatura / Referencat



    Fakte të vlefshme

    Cilat janë qelizat Vero?

    Vero E6, i njohur gjithashtu si Vero C1008 (ATCC Nr. CRL-1586) është një linjë qelizore klone nga Vero 76 dhe përdoret në kërkimin e koronavirusëve SARS-CoV dhe SARS-CoV-2. Qelizat Vero janë një prejardhje e qelizave të përdorura në kulturat qelizore. 'Vero’ prejardhja ishte e izoluar nga qelizat epiteliale të veshkave të nxjerra nga një majmun i gjelbër afrikan (Chlorocebus sp.).
    Qelizat Vero E6 tregojnë një farë frenimi të kontaktit, prandaj janë të përshtatshme për përhapjen e viruseve që replikohen ngadalë. Linjat qelizore Vero E6 përdoren zakonisht për të hetuar citopatologjinë e koronavirusëve SARS-CoV dhe SARS-CoV-2 pasi qelizat Vero (qelizat e veshkave të majmunit jeshil afrikan) shfaqin një shprehje të bollshme të receptorëve të enzimës 2 konvertuese të angiotenzinës (ACE2). Receptorët ACE2 janë një vend kryesor i ankorimit të koronavirusit SARS-CoV-2.
    Për shembull, Ogando et al. (2020) zbuloi se SARS-CoV-2 – në krahasim me SARS-CoV – gjeneruan nivele më të larta të ARN virale intraqelizore, por çuditërisht rreth 50 herë më pak pasardhës virale infektive u rikuperuan nga mesi i kulturës. Për më tepër, ata përcaktuan se ndjeshmëria e dy viruseve ndaj tre frenuesve të vendosur të replikimit të koronavirusit (Remdesivir, Alisporivir dhe klorokinë) është shumë e ngjashme, por që infeksioni SARS-CoV-2 ishte dukshëm më i ndjeshëm ndaj para-trajtimit të qelizave me interferon pegiluar alfa Një ndryshim i rëndësishëm midis dy viruseve është fakti që – me kalimin në qelizat Vero E6 – SARS-CoV-2 me sa duket është nën presion të fortë të përzgjedhjes për të marrë mutacione adaptive në gjenin e saj të proteinave spike. Këto mutacione ndryshojnë ose fshijnë një vend të prerë 'si furin' në rajonin që lidh fushat S1 dhe S2 dhe rezultojnë në një ndryshim fenotipik shumë të spikatur në analizat e pllakave.