Lizë tejzanor e mostrave Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster përdoret gjerësisht në laboratorë si organizëm model. Prandaj, hapat e përgatitjes para-analitike të tilla si liza, përçarja e qelizave, nxjerrja e proteinave dhe prerja e ADN-së e mostrave të Drosophila melanogaster duhet të kryhen shpesh. Dismembratorët tejzanor janë të besueshëm dhe efikas dhe mund të përdoren për të kryer detyra të ndryshme të tilla si liza, nxjerrja e proteinave ose copëzimi i ADN-së lehtësisht duke rregulluar vetëm parametrat e procesit tejzanor. Homogjenizuesit tejzanor janë mjete fleksibël me një gamë të gjerë aplikimesh.

Lizë tejzanor dhe Nxjerrja e proteinave

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Liza, tretja qelizore, homogjenizimi i indeve dhe nxjerrja e proteinave janë detyra tipike për dismembratorët tejzanor në laboratorët biologjikë. Shpërbërësit tejzanor dhe përçarësit e qelizave janë të përshtatshme për të homogjenizuar indet e kafshëve, insektet (p.sh., Drosophila melanogaster, C. elegans) ose ekzemplarët e bimëve. Zbatimet pasuese të ultrasonikacionit janë liza e pezullimeve qelizore dhe peletave si dhe nxjerrja e proteinave intraqelizore.
Liza tejzanor dhe nxjerrja e proteinave janë procese shumë të besueshme dhe të riprodhueshme, të cilat mund të kryhen në bazë të protokolleve të vendosura. Meqenëse intensiteti i procesit tejzanor mund të rregullohet saktësisht përmes parametrave të sonifikimit të tilla si amplituda, modaliteti i ciklit / impulsit, temperatura dhe vëllimi i mostrës, pasi protokollet e provuara mund të përsëriten me të njëjtin rezultat pa pushim.

Avantazhet e Përgatitjes së Mostrës Ultrasonic

  • shumë efikas
  • Rregullohet në materialin specifik të mostrës
  • I përshtatshëm për çdo vëllim
  • Trajtimi jo-termik
  • Rezultatet e riprodhueshme
  • E thjeshtë dhe e sigurt

Fragmentimi tejzanor i ADN-së dhe ARN-së

Pas lizës qelizore dhe nxjerrjes së proteinave, një hap i zakonshëm i kërkuar në përgatitjen e mostrës është prerja dhe copëtimi i ADN-së, ARN-së dhe kromatinës, p.sh. para imunopresipitimit të kromatinës (ChIP). Fragmentimi i ADN-së dhe ARN-së mund të arrihet në mënyrë të besueshme duke thyer lidhjet kovalente që mbajnë ADN-në së bashku nga forcat fizike. Duke përdorur qethje fizike të tilla si zërit, në fillim fijet e ADN-së prishen, pastaj ADN-ja copëtohet në copa më të vogla.
Fragmentimi tejzanor i ADN-së është i besueshëm dhe efikas në prerjen e ADN-së në një gjatësi të synuar, p.sh. 500bp (çifte bazash). Përparësitë kryesore të copëzimit tejzanor të ADN-së përfshijnë kontrollin e saktë të parametrave dhe intensitetit të procesit tejzanor. Parametrat e procesit tejzanor mund të rregullohen duke akorduar intensitetin e zërit, ciklet dhe kohën saktësisht. Kjo bën të mundur krijimin e madhësive të dëshiruara të ADN-së dhe gjatësia e synuar e ADN-së mund të prodhohet, si dhe të riprodhohet në mënyrë të besueshme. Prerja tejzanor e ADN-së është gjithashtu ideale për të krijuar fragmente të ADN-së me peshë të lartë molekulare.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

ultrasonicator UP200Ht me mikrotip 2mm S26d2 për sonifikimin e mostrave të Drosophila

Kërkesë informacioni





Protokollet për Lizën tejzanor të Drosophila melanogaster

Më poshtë mund të gjeni protokolle të ndryshme për lizën e asistuar në mënyrë ultrasonike, nxjerrjen e proteinave dhe fragmentimin e ADN-së ose kromatinës të mostrave të Drosophila.

Analizë tejzanor për analizën e imunopresipitimit ndër-lidhës (CLIP)

Analiza CLIP u krye siç është raportuar më parë me disa modifikime. Përafërsisht 20 mg vezore nga femrat e tipit të egër 0 deri në 1 ditë ishin të kryqëzuara me UV (3 × 2000 μJ / cm2), të homogjenizuara në akull në 1 ml tampon RCB (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 2.5 mM MgCl2, 0,1% Triton X-100, 250 mM saharoze, 1 mM DTT, 1 × EDTA Frenues të Plotë të Proteazës, 1 mM PMSF) të plotësuara me 300 U RNAseOUT dhe të vendosura në akull për 30 min. Homogjenati u sonifikua në akull, me 80% energji, pesë herë në shpërthime 20 s me një pushim 60 s në mes duke përdorur procesorin tejzanor Hielscher UP100H (100 W, 30 kHz) dhe centrifugohet (16000 g për 5 min në 4 ° C). Ekstrakt i tretshëm u pastrua me 20 μl dynabeads Protein-G për 20 min në 4 ° C. Pas heqjes së mostrave për imunoblotim dhe sasisë së hyrjes së ARN (1%), HP1 u imunopresipitua me antitrupa anti-HP1 9A9 nga 450 μl ekstrakt të parapërzier me inkubacion për 4 orë me 50 μl dynabeads Protein-G. Imunopresipitimet janë larë 4 herë me RCB. Për të elutuar ARN-të e imunopresipituar, rruazat e peletit ishin zier në 100 μL Uji të trajtuar me UltraPure DEPC për 5 min. 900 μL Reagent Qiazol u shtua në supernatantin e rikuperuar për përgatitjen e ARN. ARN-ja e pastruar u përdor si një model për të sintetizuar cDNA-në duke përdorur oligo dT, heksamerë të rastësishëm dhe superScript reverse transcriptase III sipas protokollit të prodhuesit.
(Cassale et al. 2019)

Lizë tejzanor për Analizën e Imunoprecipitimit të Kromatinës

Imunopresifikimi i kromatinës u krye sipas metodës së përshkruar nga Menet me modifikime të vogla. Përafërsisht 20 mg vezore nga femrat e tipit të egër 0 deri në 1 ditë u homogjenizuan në 1 ml tampon NEB (10 mM HEPES-Na në pH 8.0, 10 mM NaCl, 0.1 mM EGTA-Na në pH 8, 0.5 mM EDTA-Na në pH 8, 1 mM DTT, 0,5% NP-40, 0,5 mM Spermidinë, 0,15 mM Sperminë, 1 × EDTA pa Frenues të Proteazës së Plotë) me një shpërndarës homogjenizues / zhytës 1 min (në 3000 rpm). Homogjeni u transferua në një hedhje qelqi të para-ftohur dhe 15 goditje të plota u aplikuan me një shtypës të ngushtë. Bërthamat e lira u centrifuguan më pas në 6000xg për 10 min në 4 ° C. Fishekët që përmbajnë bërthama u rishpenzuan në 1 mL NEB dhe u centrifuguan në 20000 × g për 20 min në gradientin e saharozës (0,65 mL 1,6 M saharoze në NEB, 0,35 mL 0,8 M saharoze në NEB). Pellet u rishpenzua në 1 mL NEB dhe formaldehid në një përqendrim përfundimtar prej 1%. Bërthamat u kryqëzuan për 10 min në temperaturën e dhomës dhe u shuan duke shtuar 1/10 vol të 1,375 M glicinë. Bërthamat u mblodhën me centrifugim në 6000 g për 5 min. Bërthamat janë larë dy herë në 1 mL NEB dhe janë rindezur në 1 mL Buffer Lysis (15 mM HEPES-Na në pH 7,6, 140 mM NaCl, 0,5 mM EGTA, 1 mM EDTA në pH 8, 1% Triton X-100, 0,5 mM DTT, 0,1% Na Deoksikollat, 0,1% SDS, 0,5% N-lauroylsarcosine dhe 1 × EDTA Frenues të Plotë të Proteazës). Bërthamat u sonifikuan duke përdorur një Procesor tejzanor Hielscher UP100H (100 W, 30 kHz) gjashtë herë për 20 s në dhe 1 min mbi akull. Bërthamat e sonifikuara u centrifuguan në 13000 g për 4 min në 4 ° C. Pjesa më e madhe e kromatinës së sonifikuar ishte 500 deri në 1000 palë bazë (bp) në gjatësi. Për çdo imunopranim, 15 μg kromatinë u inkubatua në prani të 10 μg antitrup monoklonal HP1 9A9 (3 orë në 4 ° C në një rrotë rrotulluese). Pastaj, u shtuan 50 μl proteinë G dynabeads dhe inkubacioni vazhdoi brenda natës në 4 ° C. Supernatantët u hodhën dhe mostrat u lanë dy herë në Lifer Buffer (secila larje 15 min në 4 ° C) dhe dy herë në TE Buffer (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl në pH 8). Kromatina u pastrua nga rruaza në dy hapa; së pari në 100 μl të Buffer Eluition 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl në pH 8) në 65 ° C për 15 min, e ndjekur nga centrifugimi dhe rikuperimi i supernatanit. Materiali i rruazave u ekstraktua në 100 μl TE + 0.67% SDS. Eluata e kombinuar (200 μl) u inkubatua brenda natës në 65 ° C për të kthyer lidhjet e kryqëzuara dhe u trajtua nga 50 μg / ml RNaseA për 15 min në 65 ° C dhe nga 500 μg / ml Proteinaza K për 3 orë në 65 ° C. Mostrat u nxorrën fenol-kloroform dhe precipituan etanoli. ADN-ja u rishpenzua në 25 μl ujë. Për maksimizimin e analizave molekulare me imunopresipituar të ADN-së, gjenet kandidate u amplifikuan në çifte përmes një protokolli të optimizuar dupleks-PCR duke përdorur dy grupe të ndryshme të abetareve që kanë temperatura të ngjashme të shkrirjes në një reagim të vetëm.
(Casale et al. 2019)

UP200St TD_CupHorn për sonifikimin indirekt të mostrave

UP200St TD_CupHorn për sonifikimin indirekt të mostrave si ADN dhe prerja e kromatinës

Përçarës qelizash tejzanor me performancë të lartë për mostrat biologjike

Hielscher Ultrasonics është partneri juaj me përvojë të gjatë kur bëhet fjalë për ultrasonicatorët me performancë të lartë për përçarjen e qelizave, lizën, nxjerrjen e proteinave, ADN-në, ARN-në dhe copëzimin e kromatinës si dhe hapat e tjerë të përgatitjes së mostrës para-analitike. Duke ofruar një portofol gjithëpërfshirës të homogjenizuesve laboratorikë tejzanor dhe njësive të përgatitjes së mostrave, Hielscher ka pajisjen ideale tejzanor për aplikimin dhe kërkesat tuaja biologjike.
Prova-tip insonifier UP200St për lizëUltrasonicator klasik i sondës me mikro-majë të tillë si UP200St (200W; shih foton majtas) ose një nga njësitë e përgatitjes së mostrës tejzanor VialTweeter ose UP200ST_TD_CupHorn me VialHolder janë modelet e preferuara në laboratorët kërkimorë dhe analitikë. Sonda klasike tejzanor është ideale, kur përgatitni më pak mostra duhet të lizohen, nxirren ose copëzohen. Njësitë e përgatitjes së mostrës VialTweeter dhe UP200St_TD_CupHorn lejojnë sonifikimin e njëkohshëm të përkatësisht deri në 10 ose 5 shishka.
Nëse duhet të përpunohen numra të lartë të mostrës (p.sh. pllaka 96 puse, pllaka mikrotiteri etj.), UIP400MTP është konfigurimi ideal i sonifikimit. UIP400MTP funksionon si një cifër më i madh, i cili është i mbushur me ujë dhe ka hapësirë të mjaftueshme për të mbajtur pllaka mikro-pusi. Mundësuar nga një procesor tejzanor i fuqishëm 400 vat, UIP400MTP jep një sonifikim shumë të njëtrajtshëm dhe intensiv të pllakave me shumë puse në mënyrë që të prishë qelizat, të lyzojë mostrat, të tretë peletët, të nxjerrë proteinat ose ADN-në e prerjes.

Kontroll i saktë përmes softverit inteligjent

Procesorët industrialë të Hielscher të serisë hdT mund të jenë të rehatshme dhe të përdorimit të përdorimit nëpërmjet telekomandës së shfletuesit.Të gjitha zgjidhjet e sonifikimit të Hielscher nga 200 vat e lart janë të pajisura me një ekran me prekje me ngjyra dixhitale dhe një softuer inteligjent. Përmes protokollimit të të dhënave inteligjente, të gjithë parametrat e procesit tejzanor ruhen automatikisht si skedar CSV në një kartë SD të integruar sapo të fillojë ultrasonicatori. Kjo e bën hulumtimin dhe protokollimin shumë më të përshtatshëm. Pas provave të sonifikimit ose përgatitjes së mostrës, thjesht mund të rishikoni parametrat e sonifikimit të secilës ekzekutim të sonifikimit dhe t'i krahasoni ato.
Nëpërmjet menusë intuitive, parametra të shumtë mund të vendosen paraprakisht para sonifikimit: Për shembull, për të kontrolluar temperaturën në mostër dhe për të parandaluar degradimin termik të tij, mund të vendoset një kufi i sipërm i temperaturës së mostrës. Një sensor i mbyllur i temperaturës, i cili vjen me njësinë tejzanor, i jep procesorit ultrasonik reagime mbi temperaturën aktuale të zërit. Kur të arrihet kufiri i sipërm i temperaturës, pajisja tejzanor ndërpret derisa të arrihet kufiri i poshtëm i setT së vendosur dhe fillon më pas automatikisht duke bërë zëri përsëri.
Nëse kërkohet sonifikim me një input specifik të energjisë, mund të paracaktoni energjinë përfundimtare tejzanor të ekzekutimit të sonifikimit. Sigurisht, pulsimi tejzanor dhe modaliteti i ciklit mund të vendosen individualisht, gjithashtu.
Për të ripërdorur parametrat tuaj më të suksesshëm të sonifikimit, mund të kurseni mënyra të ndryshme të sonifikimit (p.sh. kohën e zërit, intensitetin, modalitetin e ciklit etj.) Si mënyra të paracaktuara, në mënyrë që ato të jenë të lehta dhe të fillojnë përsëri me shpejtësi.
Për një lehtësi më operacionale, të gjitha njësitë dixhitale tejzanor mund të operohen përmes telekomandës së shfletuesit në çdo shfletues të zakonshëm (p.sh., InternetExplorer, Safari, Chrome etj.). Lidhja LAN është një konfigurim i thjeshtë plug-n-play dhe nuk kërkon instalim shtesë të softuerit.
Ne në Hielscher e dimë që sonifikimi i suksesshëm i mostrave biologjike kërkon saktësi dhe përsëritshmëri. Prandaj, ne kemi dizenjuar ultrasonicatorët tanë si pajisje inteligjente me të gjitha tiparet që mundësojnë një përgatitje të efektshme, të besueshme, të riprodhueshme dhe të përshtatshme të mostrës.

Na kontaktoni tani dhe na tregoni për mostrat tuaja biologjike dhe hapat e kërkuar të përgatitjes. Ne do t'ju propozojmë pajisjen më të përshtatshme për përgatitjen e mostrës tejzanor dhe do t'ju ndihmojmë me informacione shtesë si protokollet dhe rekomandimet.

Tabela më poshtë ju jep një tregues të kapacitetit të përafërt të përpunimit të sistemeve tona tejzanor nga mikro-këshillat tejzanor dhe homogjenizuesit klasikë tejzanor te ultrasonicatorët MultiSample për përgatitjen e përshtatshme, të besueshme të mostrave të shumta:

Vëllimi i Serisë Shkalla e rrjedhjes Devices rekomanduara
Pllaka 96-pus / mikrotiter na UIP400MTP
10 shishka à 0.5 deri 1.5 ml na VialTweeter në UP200St
CupHorn për sonifikim indirekt, p.sh. deri në 5 shishka na UP200ST_TD_CupHorn
00,01 deri në 250 ml 5 deri në 100mL / min UP50H
0.01 deri në 500 ml 10 deri 200mL / min UP100H
00,02 në 1L 20 deri 400mL / min UP200Ht / UP200St
10 deri në 2000 ml 20 deri 400mL / min UP200Ht, UP400St
0.25 deri në 5L 0.05 deri në 1L / min UIP500hdT

Na kontaktoni! / Pyet Na!

Pyesni për më shumë informacion

Ju lutemi përdorni formularin më poshtë për të kërkuar informacione shtesë në lidhje me procesorët tejzanor, aplikacionet dhe çmimin. Ne do të jemi të lumtur të diskutojmë procesin tuaj me ju dhe t'ju ofrojmë një sistem tejzanor që plotëson kërkesat tuaja!









Ju lutem vini re tonë Politika e privatësisë.


The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Njësia e përgatitjes me shumë mostra tejzanor VialTweeter lejon sonifikimin e njëkohshëm deri në 10 shishka. Me pajisjen e fiksimit VialPress, deri në 4 tuba shtesë mund të shtypen në pjesën e përparme për sonifikim intensiv.

Literatura / Referencat



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrasonikët me performancë të lartë! Gama e produkteve të Hielscher mbulon spektrin e plotë nga ultrasonicatori i laboratorit kompakt mbi njësitë e nivelit të lartë deri te sistemet tejzanor tërësisht industriale.


Fakte të vlefshme

Metabolomika

Metabolomika është studimi i molekulave të vogla, të njohura si metabolitë, të pranishëm brenda qelizave, biofluideve, indeve ose organizmave. Këto molekula të vogla dhe bashkëveprimet e tyre brenda një sistemi biologjik përmblidhen nën termin ombrellë "metabolome" dhe fusha e kërkimit quhet metabolomikë. Hulumtimi i metabolomës është i lidhur ngushtë me fushën e shpejtë të shfaqjes së mjekësisë precize. Kuptimi i metabolomës dhe lidhja e tij me sëmundje të ndryshme ndihmon në zhvillimin e parandalimit të sëmundjes dhe strategjive të kujdesit klinik ndërsa ndryshueshmëria individuale në mjedis, stilin e jetës, gjenetikën dhe fenotipin molekular. Për të çliruar molekulat e metaboliteve nga qelizat, ultrasonikacioni përdoret shpesh në laboratorët biologjikë për përgatitjen e mostrës para-analitike si përçarja e qelizave, liza dhe nxjerrja e proteinave, lipideve dhe molekulave të tjera.