Teknologjia e ultrazërit Hielscher

Përgatitja e mostrës tejzanor për analizat ELISA

Analizat si ELISA përdoren gjerësisht për diagnostikimin in-vitro, zbulimin e proteinave në lidhje me sëmundjen dhe kontrollin e cilësisë (p.sh. monitorimi i alergjenëve ushqimorë). Përgatitja e mostrës tejzanor është një teknikë e shpejtë, e besueshme dhe e riprodhueshme për të lyzuar qelizat dhe për të izoluar proteinat intraqelizore, ADN-në, ARN-në dhe organelet. Hielscher Ultrasonics ofron zgjidhje të ndryshme tejzanor për përgatitjen e përshtatshme të mostrave të vetme, shisheve të shumëfishta, si dhe për pllakat mikrotiter dhe pllakat 96-pusesh.

ELISA – Analiza imunosorbente e lidhur me enzimat

ELISA qëndron për provën imunosorbente të lidhur me enzimat dhe është një teknikë e përdorur gjerësisht e analizës biokimike të kategorisë së provave të lidhjes së ligandit. Në ELISA, një mostër e lëngshme shtohet në një fazë të palëvizshme të palëvizshme me veti të veçanta të lidhjes. Normalisht, faza e palëvizshme e palëvizshme zbatohet si veshje në një pllakë pusi ose pllakë ELISA. Pastaj, reagens të ndryshëm të lëngshëm shtohen në mënyrë sekuenciale, inkubohen dhe lahen, në mënyrë që më në fund të ndodhë një ndryshim optik (p.sh., zhvillimi i ngjyrës nga produkti i një reaksioni enzimatik) në lëngun përfundimtar në pus. Ndryshimi optik lejon të matet sasia e analizës me një të ashtuquajtur sasiore “lexim ”. Për leximin sasior, përdoret një spektrofotometër, fluorometër ose luminometër për të zbuluar dhe matur intensitetin e dritës së transmetuar. Ndjeshmëria e zbulimit ndikohet nga amplifikimi i sinjalit gjatë reaksioneve analitike. Meqenëse reaksionet e enzimave janë të hetuara mirë dhe procese të besueshme të amplifikimit, enzimat përdoren për të krijuar sinjalin. Enzimat janë të lidhura me reagensët e zbulimit në proporcione fikse për të lejuar sasinë e saktë, e cila shpjegon edhe emrin e imunosorbentit të lidhur me enzimat.
Ndërsa analizat ELISA kryhen në pllaka mikrotiteri / pllaka 96 pusesh, ajo njihet si teknikë e vlerësimit të bazuar në pllaka dhe përdoret p.sh. në diagnostikimin, hulumtimin klinik, zhvillimin e ilaçeve etj. Për zbulimin dhe vlerësimin e antitrupave, peptideve, proteinave, dhe hormonet.
Teknika ELISA përdoret shpesh si një mjet diagnostikues në mjekësi, bioteknologji, patologji bimore dhe është gjithashtu një matje e rëndësishme e kontrollit të cilësisë në shumë industri.

Përcaktimi i plotë i VialTweeter: ViolTweeter sonotrode në procesorin UP200St

Njësia e përgatitjes së mostrës tejzanor VialTweeter përdoret për lizën qelizore dhe nxjerrjen e proteinave para analizave ELISA

Kërkesë informacioni





Përgatitja e mostrës tejzanor para ELISA

Para se të kryhet analiza ELISA, mostrat kërkojnë hapa të përgatitjes si liza qelizore dhe nxjerrja e proteinave brendaqelizore, ADN-ja, ARN-ja etj. Përparësia e lizës tejzanor të qelizave dhe izolimi i proteinave është efikasiteti, besueshmëria dhe riprodhueshmëria e saj e lartë. Të gjithë këta faktorë janë të rëndësishëm në mënyrë që të merrni rezultate të diagnostikimit dhe kërkimit me cilësi të lartë

Avantazhet e Lizës tejzanor para ELISA

  • Trajtimi homogjen i mostrës
  • Lizë e plotë
  • Nxjerrja e plotë e proteinave (p.sh. antitrupat, ADN)
  • Përshtatja optimale me llojin e qelizave
  • Për çdo madhësi të mostrës
  • riprodhueshme
  • e kontrolluar nga temperatura
  • Protokolli automatik i të dhënave në kartën SD

Protokolli për Analizën e Qelizave Ultrasonike Pre-ELISA

Prova-tip insonifier UP200St për lizë

  • Për kulturat qelizore: Para lizës së qelizave tejzanor, centrifugoni qelizat për 5 minuta në 270 xg në një mikrocentrifugë. Hiqni supernatantin me anë të thithjes dhe rishpërtheni qelizat në 30 - 100 μL tampon RIPA. Pastaj, inkuboni pelletin qelizor në akull për 30 min.
  • Tani, mostra e qelizës është e gatshme për lizë tejzanor:
    Përdorni një ultrasonicator të tipit sondë (p.sh. UP200Ht me sondë S26d2) ose një pajisje me shumë mostra tejzanor (p.sh. VialTweeter për sonifikim të njëkohshëm deri në 10 shishka ose UIP400MPT për pllaka mikrotiteri / pllaka 96-pusesh) në varësi të sasisë së mostrave që duhet të përgatitni.
    Për sonifikimin e tipit sondë të një mostre të vetme, vendosni qelizat në tuba mikrocentrifugë 1,5 ml.
  • Vendosni paraprakisht kohëzgjatjen tuaj tejzanor, hyrjen totale të energjisë, modalitetin e ciklit dhe / ose kufijtë e temperaturës në menunë dixhitale të ultrasonicatorit. Kjo siguron sonifikim dhe përsëritshmëri shumë të besueshme.
  • Vendosni sonotrodën dhe ndizni pajisjen tejzanor. Butësisht lëvizni mikro-majën e sondës tejzanor përmes kampionit për të sonifikuar mostrën në mënyrë uniforme.
    Për shumicën e qelizave, liza ultrasonike do të përfundojë pas 2 -4 cikleve me sonifikim prej 10 sekondash.
  • Pas zërit, hiqni sonotrodën nga mostra. Mostrat duhet të inkubohen në akull për 5 min. Pastaj, centrifugoni në 10,000 xg për 20 min për të pelet mbeturinat. Transferoni supernatantët në një tub të ri mikrocentrifuge. Etiketoni analitët dhe ruani në -20 ° C.
  • Sonotroda tejzanor mund të pastrohet duke e fshirë atë siç duhet me alkool ose sonikat në një gotë të mbushur me alkool, p.sh. 70% etanol. Të gjithë sondat tejzanor të bëra nga titani janë të autoklavueshme.

Për homogjenetet e indeve:

  • Shpëlajeni indin me PBS të ftohtë në akull (0,01M, pH = 7,4) për të hequr tërësisht gjakun e tepërt të hemolizës.
  • Peshoni indet (veshka, zemra, mushkëritë, shpretka etj.) Dhe makerojeni ato në copa të vogla, të cilat homogjenizohen në PBS. Vëllimi i PBS-së së kërkuar lidhet me peshën e indeve. Si rregull, 1g ind kërkon rreth. 9 ml PBS. Rekomandohet të shtoni disa frenues të proteazës në PBS. (RIPA ose tampon hipotonik i lizës që përmban koktej frenues të proteazës dhe fosfatazës mund të përdoret në mënyrë alternative.)
  • Në varësi të madhësisë së indeve, një trajtim i shkurtër i vorbullës (afro 1-2 min. Në impulse 15 sek.) Mund të jetë i dobishëm për të para-trajtuar indin.
  • Montoni një mikro-tip, p.sh. S26d2, në ultrasonicatorin tuaj. Vendoseni tubin e mostrës me indet në një banjë akulli.
  • Sonifikoni mostrën me ultrasonicatorin tuaj, p.sh. UP200St (amplituda 80%) për 1 min. në modalitetin e impulsit (15 sekonda ndezur, 15 sekonda pauzë). Mbajeni kampionin në banjën e akullit.
  • Homogjenet pastaj centrifugohen për të marrë pellgje specifike (citosolik, bërthamor, mitokondrial ose lizosomal) në mënyrë që të pasurohet proteina për analizë. Duke centrifuguar kampionin për 5 minuta në 5000 × g, supernatanti merret.
Sonotrode MTP-24-8-96 ka tetë sonda ultrasonike për sonifikimin e puseve të pllakave të mikrotiterit.

Sonotrode MTP-24-8-96 ka tetë sonda ultrasonike për sonifikimin e puseve të pllakave të mikrotiterit.

Kontroll i besueshëm i temperaturës gjatë sonifikimit

Temperatura është një faktor vendimtar që ndikon në proces, i cili është veçanërisht i rëndësishëm për trajtimin e mostrave biologjike, p.sh. për të parandaluar degradimin termik të proteinave. Si të gjitha teknikat mekanike të përgatitjes së mostrës, sonifikimi krijon nxehtësi. Sidoqoftë, temperatura e mostrave mund të kontrollohet mirë kur përdorni pajisjet Hielscher Ultrasonics. Ne ju paraqesim mundësi të ndryshme për të monitoruar dhe kontrolluar temperaturën e mostrave tuaja ndërsa i përgatisni ato me një ultrasonicator të një sondë ose VialTweeter para-analitikisht.

  1. Monitorimi i temperaturës së mostrës: Të gjithë procesorët dixhitalë ultrasonikë të Hielscher janë të pajisur me një softuer inteligjent dhe një sensor të temperaturës të mbyllur. Lidhni sensorin e temperaturës në pajisjen tejzanor (p.sh., UP200Ht, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) dhe futni majën e sensorit të temperaturës në një nga tubat e mostrës. Përmes ekranit me prekje dixhitale me ngjyrë, mund të vendosni në menunë e procesorit tejzanor një gamë specifike të temperaturës për sonifikimin tuaj të mostrës. Ultrasonicator automatikisht do të ndalet kur të arrihet temperatura maksimale dhe të ndalojë derisa temperatura e mostrës të ulet në vlerën më të ulët të temperaturës së caktuar. Pastaj sonifikimi fillon përsëri automatikisht. Kjo veçori inteligjente parandalon degradimin e shkaktuar nga nxehtësia.
  2. Lidhur me njësinë tejzanor me shumë mostra VialTweeter, blloku i titanit, i cili mban tubat e mostrës, mund të ftohet paraprakisht. Vendosni bllokun VialTweeter (vetëm sonotrode pa këmbyes!) Në frigorifer ose frigorifer për të ftohur paraprakisht bllokun e titanit ndihmon në shtyrjen e rritjes së temperaturës në mostër. Nëse është e mundur, vetë kampioni mund të ftohet gjithashtu paraprakisht.
  3. Përdorni një banjë akulli ose akull të thatë për t’u ftohur gjatë sonifikimit. Vendosni tubat (et) tuaj të mostrës gjatë zërit në një banjë akulli. Për VialTweeter, përdorni një tabaka të cekët të mbushur me akull të thatë dhe vendoseni VialTweeter në akull të thatë në mënyrë që nxehtësia të shpërndahet shpejt.

Klientët në mbarë botën përdorin sondën Hielscher-ultrasonicators si dhe njësitë shumëkampionuese të sonikimit VialTweeter dhe UIP400MTP për punën e tyre ditore të përgatitjes së mostrës në laboratorë biologjikë, biokimikë, mjekësorë dhe klinikë. Programi inteligjent dhe kontrolli i temperaturës së procesorëve Hielscher, temperatura kontrollohet në mënyrë të besueshme dhe shmanget degradimi i mostrës i nxitur nga nxehtësia. Përgatitja tejzanor e mostrës me zgjidhje ultrasonike Hielscher jep rezultate shumë të besueshme dhe të riprodhueshme!

Na kontaktoni! / Pyet Na!

Pyesni për më shumë informacion

Ju lutemi përdorni formularin më poshtë për të kërkuar informacione shtesë në lidhje me procesorët tejzanor, aplikacionet dhe çmimin. Ne do të jemi të lumtur të diskutojmë procesin tuaj me ju dhe t'ju ofrojmë një sistem tejzanor që plotëson kërkesat tuaja!









Ju lutem vini re tonë Politika e privatësisë.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics prodhon homogjenizues tejzanor me performancë të lartë për përzierjen e aplikacioneve, shpërndarjen, emulsifikimin dhe nxjerrjen në shkallë laboratorike, pilot dhe industriale.

Literatura / Referencat



Fakte të vlefshme

Llojet e ELISA

Ekzistojnë disa lloje të ELISA, të cilat dallohen nga parimi i tyre i funksionimit. Ata njihen si ELISA direkte, ELISA indirekte, ELISA sanduiçe, ELISA konkurruese dhe ELISA e kundërt. Më poshtë, ju paraqesim një përmbledhje mbi llojet e ndryshme të ELISA-s dhe karakteristikat dhe dallimet e tyre kryesore.
ELISA mund të drejtohet në një format cilësor ose sasior. Rezultatet cilësore sigurojnë një rezultat të thjeshtë pozitiv ose negativ, ndërsa në ELISA sasiore dendësia optike (OD) e mostrës krahasohet me një kurbë standarde, e cila zakonisht është një hollim serik i një tretësire me përqendrim të njohur të molekulës së synuar.

ELISA e drejtpërdrejtë

ELISA e drejtpërdrejtë është forma më e thjeshtë e provës së Elisa, ku përdoret vetëm një antitrup primar i etiketuar me enzimë dhe antitrupat dytësorë nuk kërkohen. Antitrupi primar i etiketuar me enzimë lidhet drejtpërdrejt me shënjestrën, pra me antigjenin. Zgjidhja e zbutur e antigjenit shtohet në secilën pus të një pllake mikrotiteri (zakonisht pllaka me 96 puse, pllaka ELISA), ku ngjitet në sipërfaqen plastike përmes ndërveprimeve të ngarkesës. Kur enzima e lidhur me antitrupin primar reagon me substratin e saj, ajo prodhon një sinjal të dukshëm që mund të matet përmes spektrofotometrit, fluorometrit ose luminometrit.

ELISA indirekte

Për testin indirekt ELISA, kërkohet si një antitrup primar ashtu edhe një antitrup dytësor. Sidoqoftë, në kundërshtim me ELISA të drejtpërdrejtë, jo antitrupi primar, por antitrupi sekondar është etiketuar me një enzimë. Antigjeni imobilizohet në pllakën e pusit dhe lidhet nga antitrupi primar. Më pas, antitrupi sekondar i etiketuar me enzimë lidhet me antitrupin primar. Më në fund, enzima e lidhur me antitrupin sekondar reagon me substratin e saj për të prodhuar një sinjal të dukshëm që mund të zbulohet.

Sanduiç ELISA

Ndërsa në provat ELISA direkte dhe indirekte, antigjeni imobilizohet dhe veshet në sipërfaqen e pllakës së pusit, në sanduiçin ELISA antitrupi imobilizohet në sipërfaqen plastike të pllakës ELISA. Antitrupat e palëvizshëm në ELISA sanduiç njihen si antitrupa kapës. Përveç antitrupave kapës, në sanduiç ELISA kërkohen edhe të ashtuquajtur antitrupa zbulues. Antitrupat e zbulimit përfshijnë një antitrup zbulues primar të pa etiketuar dhe një antitrup sekondar të etiketuar me enzimë.
Hap pas hapi, antigjeni me interes lidhet me antitrupin kapës të imobilizuar në pllakë. Pastaj, antitrupi primar i zbulimit lidhet me antigjenin. Më pas, antitrupi sekondar i zbulimit lidhet me antitrupin primar të zbulimit. Në hapin e fundit të reagimit, enzima reagon me substratin e saj për të prodhuar një sinjal të dukshëm që mund të zbulohet në mënyrë optike.

ELISA konkurruese

ELISA konkurruese, e njohur gjithashtu si ELISA frenuese, është lloji më kompleks i ELISA sepse përfshin përdorimin e një antigjeni frenues. Secili prej tre formateve, ELISA direkte, indirekte dhe sanduiç, mund të përshtatet me formatin konkurrues ELISA. Në ELISA konkurruese, antigjeni frenues dhe antigjeni me interes konkurrojnë për lidhjen me antitrupin primar.
Për ELISA konkurruese, antitrupat e pa etiketuar inkubohen në prani të antigjenit të tij, pra të mostrës. Këto komplekse të lidhura me antitrupa / antigjen shtohen më pas në një pus të veshur me antigjen.
Pllaka është larë, në mënyrë që antitrupat e palidhur të hiqen. ELISA konkurruese e ka emrin për shkak të faktit se sa më shumë antigjen është në mostër, aq më shumë formohen komplekse antigjen-antitrup. Kjo do të thotë, ka më pak antitrupa të palidhur në dispozicion për t'u lidhur me antigjenin në pus dhe antigjenet duhet të konkurrojnë për një antitrup në dispozicion. Shtohet një antitrup dytësor, që përputhet me antitrupin primar. Ky antitrup i dytë është i lidhur me enzimën. Kur shtohet substrati, enzimat e mbetura prodhojnë një sinjal kromogjenik ose fluoreshent.
Në këtë pikë, reagimi ndalet për të shmangur ngopjen eventuale të sinjalit.
Disa komplete konkurruese ELISA përfshijnë një antigjen të lidhur me enzimat në vend të një antitrupi të lidhur me enzimat. Antigjeni i etiketuar konkurron për vendet e lidhjes së antitrupave primar me antigjenin e mostrës (pa etiketim). Sa më pak antigjen në mostër, aq më shumë antigjen i etiketuar ruhet në pus dhe aq më i fortë është sinjali.

Eris ELISA

Reverse ELISA nuk përdor pllaka pusi, por i lë antigjenët të pezulluar në lëngun e provës. Testi i kundërt ELISA mat sasinë e antitrupave të lidhur përmes antigjenit. Ajo u zhvillua posaçërisht për të zbuluar dhe hetuar proteinën e mbështjellësit të virusit Nili Perëndimor dhe se si është në gjendje të gjejë antitrupa specifikë të virusit.

Shënues enzimatik që përdoret për ELISA

Lista më poshtë jep shënuesit më të zakonshëm enzimatikë të përdorur në analizat ELISA, të cilat lejojnë që rezultatet e analizës të maten pas përfundimit.

  • OPD (o-fenilenediamin dihidroklorid) kthehet qelibar për të zbuluar HRP (Peroksidaza rrikë), e cila shpesh përdoret për të qenë një proteinë e konjuguar.
  • TMB (3,3′, 5,5′-tetrametilbenzidina) bëhet blu kur zbulon HRP dhe bëhet e verdhë pas shtimit të acidit sulfurik ose fosforik.
  • ABTS (2,2′-Kripa e azinobisit [3-etilbenzotiazolinë-6-sulfonik] -diamonik) bëhet jeshile kur zbulon HRP.
  • PNPP (fosfat p-nitrofenil, kripë natriumi) bëhet e verdhë kur zbulon fosfatazën alkaline.