Përgatitja e mostrës me VialTweeter tejzanor
Përgatitja e mostrës para analizës mund të kërkojë procese të ndryshme paraanalitike si homogjenizimi i indeve, liza, nxjerrja e proteinave, ADN-së, ARN-së, organeleve dhe substancave të tjera ndërqelizore, tretja dhe degazimi. VialTweeter është një pajisje unike ultrasonike që përgatit tuba të shumëfishtë mostrash në të njëjtën kohë në të njëjtat kushte. Për shkak të sonikimit indirekt të epruvetave të mbyllura, shmanget kontaminimi i kryqëzuar dhe humbja e mostrës.
përgatitja e mostrës me ultratinguj
Ekzaminimi me ultratinguj është një teknikë e zakonshme e trajtimit të kampionit me qëllim që të bëhet gati mostra për analiza të tilla si reaksioni zinxhir i polimerit (PCR), Western Blots, analizat, sekuenca molekulare, kromatografia etj. në mënyrë analitike. Një avantazh i madh i sonication është se parimi i punës së ultrazërit bazohet në forca thjesht mekanike. Liza tejzanor dhe prishja e qelizave arrihet nga forcat prerëse sonomekanike, gjë që i jep ultratingullit avantazhin që tretësit e përdorur për nxjerrjen e proteinave mund të përdoren edhe gjatë lizës. Ndërprerësit tejzanor të qelizave si VialTweeter thyejnë muret / membranat qelizore dhe nxisin transferimin e masës midis brendësisë së qelizës dhe tretësit. Në këtë mënyrë, analiti (p.sh. ADN, ARN, proteina, organele etj.) transferohen në mënyrë efikase nga matrica e qelizës në tretës. Kjo do të thotë që hapat e shuarjes dhe nxjerrjes mbivendosen me procesin e ndërprerjes së qelizave tejzanor, gjë që e bën lizën tejzanor shumë efektive. Për më tepër, përgatitja e mostrës me ultratinguj nuk kërkon detergjentë dhe reagjentë të tjerë të lizës, të cilët mund të ndryshojnë dhe shkatërrojnë strukturën e lizës dhe janë të njohura për problemet e mëvonshme me pastrimin. Një metodë tjetër lize, ndërprerja enzimatike kërkon kohë të gjata inkubimi dhe jep rezultate shpesh të pa riprodhueshme. Përgatitja e mostrës tejzanor kapërcen problemet e zakonshme në përgatitjen e mostrës si homogjenizimi i indeve, prishja e qelizave, liza, nxjerrja e proteinave dhe tretja e lizatit. Meqenëse intensiteti i trajtimit me ultratinguj mund të kontrollohet saktësisht dhe të përshtatet me kampionin biologjik, degradimi dhe humbja e mostrës shmangen. Temperatura e mostrës së monitoruar dhe e kontrolluar automatikisht, mënyra e pulsit dhe kohëzgjatja e sonikacionit sigurojnë rezultate optimale.
VialTweeter është veçanërisht i përshtatshëm për punë laboratorike që kërkon përgatitjen e njëkohshme të mostrave të shumta në të njëjtat kushte. VialTweeter është një sonotrode bllok tejzanor që mund të mbajë deri në 10 shishe (p.sh. Eppendorf, centrifugë, tuba NUNC, krio-shishkë) dhe i bën ato me zë të lartë në kushte të kontrolluara saktësisht. Meqenëse energjia tejzanor lidhet përmes mureve të shisheve në mediumin e mostrës, flakonet mbahen të mbyllura gjatë trajtimit. Në këtë mënyrë, humbja e mostrës dhe kontaminimi i kryqëzuar shmangen plotësisht.

Njësia përgatitore e mostrës tejzanor VialTweeter: VialTweeter sonotrode dhe procesor tejzanor UP200 St
Shishkë dhe tuba që përshtaten me VialTweeter
VialTweeter është i përshtatshëm për të mbajtur 10 tuba të zakonshëm konik ose me fund të rrumbullakët si Eppendorf, centrifugë, krio-flakon dhe lloje të ndryshme shishe NUNC, por vrimat mund të personalizohen në madhësi të tjera të shisheve dhe tubave sipas kërkesës. Ju lutemi na tregoni se çfarë lloj epruvetash dëshironi të përdorni në mënyrë që ne të mund të modifikojmë VialTweeter-in tuaj në përputhje me rrethanat. Për epruveta më të mëdha si tubat Falcon dhe kontejnerë të tjerë testues, gota dhe enë, VialPress është një zgjidhje e përshtatshme.
Lexoni më shumë rreth modelit VialTweeter VT26dxx të personalizuar për madhësinë tuaj specifike të epruvetës, p.sh. tubat Falcon!
VialTweeter me VialPress
Ndërsa vetë VialTweeter me 10 vrimat e tubave është tashmë një pajisje ultrasonike unike dhe shumë funksionale, shtesa VialPress e bën VialTweeter edhe më të gjithanshëm dhe fleksibël për funksionim. VialPress është një aksesor për VialTweeter që përbëhet nga një shirit ngjitës që lejon fiksimin e tubave më të mëdhenj të mostrës si tubat Falcon ose gota të tjera testimi të vogla deri të mesme në pjesën e përparme të VialTweeter. Figura në të majtë tregon VialTweeter që mban 10 shishe Eppendorf në bllok, ndërsa VialPress fikson një epruvetë më të madhe në pjesën e përparme për sonikacion. VialPress është në gjendje të mbajë deri në 5 epruveta më të mëdha për sonikacion intensiv.
Protokollet e përgatitjes së mostrave të VialTweeter
VialTweeter përdoret gjerësisht për sonikimin e mostrave biologjike. Përpara analizës, mostrat duhet të përgatiten për analiza dhe analiza biokimike ose biofizike, p.sh. me anë të lizës, homogjenizimit të indeve, nxjerrjes së proteinave, prerjes së ADN/ARN-së, degazimit etj. VialTweeter i përmbush këto procese tejzanor në mënyrë të besueshme dhe jep rezultate të riprodhueshme. Një aplikim i zakonshëm i VialTweeter është liza/përçarja e qelizave të indeve të gjitarëve (njerëzve dhe kafshëve), si dhe qelizave të baktereve dhe grimcave virale. Mostrat biologjike të trajtuara me sukses nga VialTweeter përfshijnë qelizat epiteliale të mushkërive të njeriut, qelizat burimore hematopoietike, qelizat e leuçemisë mieloide, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mykobakteret / kompleksi Mycobacterium tuberculosis (MTBC) dhe shumë qeliza të tjera bakteriale, botanike dhe mikrobike.
Më poshtë, mund të gjeni disa protokolle të zgjedhura që paraqesin VialTweeter.

VialTweeter sonikon tubat Eppendorf 1.0, 1.5 dhe 2.0 ml me intensitet të lartë pa ndotje të kryqëzuar ose humbje të mostrës.
- Homogjenizimi i indeve
- prishja e qelizave & liza
- nxjerrja e proteinave
- Prerja e ADN/ARN-së
- tretja e peletit qelizor
- zbulimi i patogjenit
- degazimi
- diagnostifikimi in-vitro
- trajtim paraanalitik
- proteomika
E.Coli Lysis Me VialTweeter për Përcaktimin e Glutathione In-Vivo
Bakteret Escherichia coli të shtamit MG1655 u rritën në mjedis minimal MOPS në një vëllim total prej 200 ml derisa u arrit një A600 prej 0.5. Kultura u nda në kultura 50 ml për trajtimin e stresit. Pas 15 minutash inkubacion me 0,79 mM allicin, 1 mM diamide ose dimetil sulfoksid (kontrolli), qelizat u mblodhën në 4000 g në 4°C për 10 minuta. Qelizat u lanë dy herë me tampon KPE përpara risuspensionit të peletit në 700 μl bufer KPE. Për deproteinim, 300 μl acid sulfosalicilik 10% (w/v) u shtuan përpara ndërprerjes së qelizave me anë të ultrazërit (3 x 1 min; ultrasonikator VialTweeter). Supernatantët u mblodhën pas centrifugimit (30 min, 13,000 g, 4°C). Përqendrimet e acidit sulfosalicilik u ulën në 1% me shtimin e 3 vëllimeve të tamponit KPE. Matjet e glutationit total dhe GSSG u kryen siç përshkruhet më sipër. Përqendrimet qelizore të glutationit u llogaritën në bazë të një vëllimi qelizash E. coli prej 6,7×10-15 litra dhe një densitet qelizor prej A600 0,5 (ekuivalente me kulturën 1×108 qeliza ml-1). Përqendrimet e GSH u llogaritën duke zbritur 2 [GSSG] nga glutationi total. (Müller et al. 2016)
Fragmentimi i fibrileve Alfa-Sinuklein me VialTweeter
Sonicatori VialTweeter përdoret gjerësisht për fragmentimin e besueshëm dhe efikas të fibrileve dhe shiritave alfa-sinukleinë. Klikoni këtu për të gjetur përshkrime të detajuara, protokolle dhe referenca për fragmentimin e alfa-sinukleinës me VialTweeter!
Liza e qelizave me VialTweeter përpara spektrometrisë së përthithjes atomike të furrës grafiti
Bacillus subtilis 168 (trpC2) u ekspozuan ndaj stresit antibiotik për 15 minuta, më pas qelizat u mblodhën në 3,320 xg, u lanë pesë herë me 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, u risuspenduan në 10 mM Tris, pH 7.5 dhe u ndërprenë me ultratinguj. në një instrument Hielscher VialTweeter. (Wenzel et al. 2014)
Përgatitja e mostrës së VialTweeter përpara spektrometrisë së masës
Peletat qelizore të liofilizuara të qelizave burimore/progjenitore hematopoietike CD34 njerëzore u risuspenduan në 10µl (200µl për përgatitjen me shumicë HEK293 për serinë e hollimit të peptideve) prej 8 M ure në 100 mM hidrogjen karbonat amonit të izoluar dhe të izoluar me solucion. në një amplitudë prej 60%, një cikël prej 60% dhe një kohëzgjatje prej 20 sekondash për tre herë me ftohje të ndërmjetme në akull. (Amon et al. 2019)
Protokollet e përgatitjes së mostrave duke përdorur VialPress
Marulja e freskët (Lactuca sativa) u homogjenizua në tampon HEPES 0,5 M (pH 8, KOH i rregulluar) në një raport prej 1 g bimë (peshë e freskët) me 200, 100, 50 ose 20 mL tretësirë buferike. Raporti i masës së bimëve ndaj vëllimit të tretësirës tampon ndryshoi për të mbajtur vëllimin total të homogjenatit midis 3.5 dhe 12 mL. Raporti i masës së bimëve ndaj vëllimit të tretësirës tampon ndryshoi për të mbajtur vëllimin total të homogjenit midis 3.5 dhe 12 mL, duke lejuar homogjenizimin me sondë. Homogjenatet më pas iu nënshtruan ultrazërit indirekt duke përdorur një UP200St me VialTweeter të pajisur me 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Gjermani) për 3 minuta (80% puls dhe 100% fuqi). Përdorimi i kësaj pajisjeje evitoi ndotjen. (Laughton et al. 2019)

VialTweeter me 10 shishka Eppendorf në procesorin ultrasonik UP200 St
Kontroll i besueshëm i temperaturës gjatë sonikimit me VialTweeter
Temperatura është një faktor vendimtar që ndikon në proces që është veçanërisht i rëndësishëm për trajtimin e mostrave biologjike. Si të gjitha teknikat mekanike të përgatitjes së mostrës, sonikimi krijon nxehtësi. Megjithatë, temperatura e mostrave mund të kontrollohet mirë kur përdorni VialTweeter. Ne ju paraqesim opsione të ndryshme për të monitoruar dhe kontrolluar temperaturën e mostrave tuaja gjatë përgatitjes së tyre me VialTweeter dhe VialPress për analizë.
- Monitorimi i temperaturës së mostrës: Procesori tejzanor UP200St, i cili drejton VialTweeter, është i pajisur me një softuer inteligjent dhe një sensor të temperaturës që mund të mbyllet. Futni sensorin e temperaturës në UP200St dhe futni majën e sensorit të temperaturës në një nga tubat e mostrës. Nëpërmjet ekranit me prekje dixhitale me ngjyra, mund të vendosni në menynë e UP200St një gamë specifike të temperaturës për sonikacionin tuaj të mostrës. Ultrasonikatori do të ndalojë automatikisht kur të arrihet temperatura maksimale dhe do të ndalojë derisa temperatura e mostrës të bjerë në vlerën më të ulët të temperaturës së caktuar ∆. Pastaj sonication fillon automatikisht përsëri. Kjo veçori inteligjente parandalon degradimin e shkaktuar nga nxehtësia.
- Blloku VialTweeter mund të ftohet paraprakisht. Vendosni bllokun VialTweeter (vetëm sonotrode pa dhënës!) në frigorifer ose ngrirës për të ftohur paraprakisht bllokun e titanit, ndihmon për të shtyrë rritjen e temperaturës në mostër. Nëse është e mundur, edhe vetë kampioni mund të ftohet paraprakisht.
- Përdorni akull të thatë për t'u ftohur gjatë sonikimit. Përdorni një tabaka të cekët të mbushur me akull të thatë dhe vendosni VialTweeter në akullin e thatë në mënyrë që nxehtësia të mund të shpërndahet me shpejtësi.
Konsumatorët në mbarë botën përdorin VialTweeter dhe VialPress për punën e tyre të përditshme të përgatitjes së mostrave në laboratorët biologjikë, biokimikë, mjekësorë dhe klinikë. Softueri inteligjent dhe kontrolli i temperaturës së procesorit UP200St, temperatura kontrollohet në mënyrë të besueshme dhe shmanget degradimi i mostrës i shkaktuar nga nxehtësia. Përgatitja e mostrës tejzanor me VialTweeter dhe VialPress jep rezultate shumë të besueshme dhe të riprodhueshme!
Detajet teknike të VialTweeter
VialTweeter është një sonotrode bllok i bërë nga titani që mund të mbajë deri në 10 shishe në vrimat brenda bllokut. Për më tepër, deri në 5 epruveta më të mëdha mund të mbërthehen në pjesën e përparme të VialTweeter duke përdorur VialPress. VialTweeter është projektuar në mënyrë të tillë që energjia e ultrazërit shpërndahet në mënyrë uniforme në secilën shishkë të futur për të siguruar rezultate të besueshme dhe uniforme të sonikacionit. Një strumbullar i vogël rregullon sonotrode VialTweeter në tokë të pabarabartë dhe rreshton epruvetat vertikalisht.
Përparësitë e VialTweeter me një shikim
- Sonication intensive deri në 10 flakon në të njëjtën kohë
- Sonication indirekte me intensitet të lartë tejzanor përmes murit të anijes në mostër
- Sonicizimi indirekt shmang kontaminimin e kryqëzuar dhe humbjen e mostrës
- Rezultate të riprodhueshme për shkak të amplitudës së tingullit të rregullueshëm dhe të kontrollueshëm
- VialPress ju mundëson të nxirrni tubat më të mëdhenj
- Amplituda e rregullueshme nga 20 në 100%
- Modaliteti i rregullueshëm i pulsit nga 0 në 100%
- E autoklavueshme
VialTweeter mundësohet nga UP200 St, një procesor ultrasonik i fuqishëm 200 vat. UP200St është i pajisur me një softuer inteligjent që lejon kontrollin e saktë mbi të gjithë parametrat e rëndësishëm të procesit tejzanor si amplituda, koha e sonikimit, pulsimi dhe temperatura. Kjo e bën VialTweeter një mjet të besueshëm për rezultate të suksesshme të procesit të riprodhueshëm në laboratorët biologjikë dhe biokimikë.
Amplituda mund të rregullohet midis 20 dhe 100% dhe në këtë mënyrë ju lejon të përshtatni intensitetin tejzanor me mostrën tuaj. Për shembull, prerja dhe fragmentimi i ADN-së dhe ARN-së kërkon një amplitudë më të butë për të parandaluar prodhimin e fragmenteve shumë të vogla të ADN-së, homogjenizimi i indeve të trurit të miut ka nevojë për sonikacion me intensitet të lartë. Zgjidhni amplituda, intensiteti dhe kohëzgjatja ideale e tingullit nëpërmjet menysë së zgjuar dhe intuitive në procesorin UP200St. Menyja dhe cilësimet mund të aksesohen dhe përdoren lehtësisht nëpërmjet ekranit me prekje me ngjyra. Në cilësimet mund të paracaktoni parametrat e tingullit si amplituda, modaliteti i pulsimit / ciklit, kohëzgjatja e tingullit, hyrja totale e energjisë dhe kufijtë e temperaturës. Në kërkimin dhe prodhimin, përsëritshmëria e provave dhe rezultateve të testeve është thelbësore. Kjo do të thotë se regjistrimi i saktë i kushteve të procesit dhe protokolleve të tingullit janë jashtëzakonisht të rëndësishme. Protokollimi automatik i të dhënave i shkruan të gjitha të dhënat e tingullit në një skedar CSV në një kartë SD të integruar, në mënyrë që të mund të kontrolloni dhe krahasoni me lehtësi ekzekutimet e ndryshme të sonication. Të gjitha të dhënat e procesit tejzanor mund të aksesohen dhe ndahen lehtësisht si skedar CSV.
Hielscher Ultrasonics përpiqet t'ju ofrojë teknologji të avancuar për të lehtësuar dhe përmirësuar punën tuaj kërkimore!
VialTweeter tejzanor në Kërkim dhe Shkencë
VialTweeter është një procesor ultrasonik i fuqishëm 200 watts, që është ideal për përgatitjen e njëkohshme të mostrës me ultratinguj të shisheve të shumta Eppendorf ose epruveta të ngjashme. Prandaj, VialTweeter përdoret shpesh në laboratorët biologjikë dhe biokimikë për kërkime dhe shkencë të jetës. Më poshtë mund të gjeni një përzgjedhje të artikujve shkencorë që paraqesin procesorin ultrasonik VialTweeter. Artikujt mbulojnë aplikime të ndryshme si nga homogjenizimi i mostrës me ultratinguj, përçarja dhe liza e qelizave, prerja dhe fragmentimi i ADN-së, nxjerrja e proteinave dhe komponimeve bioaktive si dhe inaktivizimi i koronavirusit SARS-CoV-2. Nëse jeni duke kërkuar për një aplikacion specifik dhe referenca shkencore përkatëse, ju lutemi na kontaktoni.
- FactSheet VialTweeter VT26dxx – Customized VialTweeter Sonicator for Single Test Tubes or Vials
- FactSheet VialTweeter – Sonicator for Simultaneous Sample Preparation
- Gajek, Ryszard; Barley, Frank; She, Jianwen (2013): Determination of essential and toxic metals in blood by ICP-MS with calibration in synthetic matrix. Analytical Methods 5, 2013. 2193-2202.
https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2013/ay/c3ay26036d - Nordenfelt P, Waldemarson S, Linder A, Mörgelin M, Karlsson C, Malmström J, Björck L. (2012): Antibody orientation at bacterial surfaces is related to invasive infection. Journal of Experimental Medicine 17;209(13), 2012. 2367-81.
- Wenzel, M., A. I. Chiriac, A. Otto, D. Zweytick, C. May, C. Schumacher, R. Gust, et al. (2014): Small Cationic Antimicrobial Peptides Delocalize Peripheral Membrane Proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences 111, No. 14, 2014. E1409–E1418.
- Lindemann, C., Lupilova, N., Müller, A., Warscheid, B., Meyer, H. E., Kuhlmann, K., Eisenacher, M., Leichert, L. I. (2013): Redox proteomics uncovers peroxynitrite-sensitive proteins that help Escherichia coli to overcome nitrosative stress. The Journal of biological chemistry, 288(27), 2013. 19698–19714.
- Wenzel, M., Patra, M., Albrecht, D., Chen, D. Y., Nicolaou, K. C., Metzler-Nolte, N., Bandow, J. E. (2011): Proteomic signature of fatty acid biosynthesis inhibition available for in vivo mechanism-of-action studies. Antimicrobial agents and chemotherapy, 55(6), 2011. 2590–2596.
- Laughton, S., Laycock, A., von der Kammer, F. et al. (2019): Persistence of copper-based nanoparticle-containing foliar sprays in Lactuca sativa (lettuce) characterized by spICP-MS. Journal of Nanoparticle Research 21, 174 (2019).
- Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J. E., Slusarenko A. J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry, Vol. 291, No. 22, 2016. 11477-11490.
- Tim Krischuns; Franziska Günl; Lea Henschel; Marco Binder; Joschka Willemsen; Sebastian Schloer; Ursula Rescher; Vanessa Gerlt; Gert Zimmer; Carolin Nordhoff; Stephan Ludwig; Linda Brunotte (2018): Phosphorylation of TRIM28 Enhances the Expression of IFN-β and Proinflammatory Cytokines During HPAIV Infection of Human Lung Epithelial Cells. Frontiers in immunology Vol. 9, September 2018.
- Sabine Amon, Fabienne Meier-Abt, Ludovic C. Gillet, Slavica Dimitrieva, Alexandre P. A. Theocharides, Markus G. Manz, Ruedi Aebersold (2019): Sensitive Quantitative Proteomics of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Data-independent Acquisition Mass Spectrometry. Molecular & Cellular Proteomics 18, 2019. 1454–1467.

Përpunimi me ultratinguj: Hielscher ju ndihmon nga fizibiliteti dhe optimizimi deri te prodhimi komercial!