Përgatitja e mostrave me sonikatorin VialTweeter

Përgatitja e mostrave para analizës mund të kërkojë procese të ndryshme paraanalitike, si homogjenizimi i indeve, liza, ekstraktimi i proteinave, ADN-së, ARN-së, organeleve dhe substancave të tjera brendaqelizore, tretja dhe degazimi. VialTweeter është një sonikator unik që përgatit njëkohësisht disa tuba mostrash në kushte saktësisht të njëjta. Falë sonikimit të tërthortë të epruvetave të mbyllura, shmangen kontaminimi i kryqëzuar dhe humbja e mostrës.

Përgatitja e mostrave me ultratinguj

Trajtimi me ultratinguj është një teknikë e zakonshme për trajtimin e mostrave për t’i përgatitur ato për analiza si reaksioni zinxhir i polimerazës (PCR), analizat Western blot, provat analitike, sekuencimi molekular, kromatografia etj. Trajtimi me ultratinguj është një teknikë që përdoret gjerësisht në laboratorë për trajtimin paraanalitik të mostrave. Një përparësi kryesore e sonikimit është se parimi i funksionimit të ultratingujve bazohet në forca thjesht mekanike. Liza dhe shpërbërja e qelizave me ultratinguj arrihen përmes forcave prerëse sonomekanike, gjë që i jep trajtimit me ultratinguj përparësinë që tretësit e përdorur për ekstraktimin e proteinave mund të përdoren edhe gjatë lizës. Pajisjet për shpërbërjen e qelizave me ultratinguj, si VialTweeter, çajnë muret / membranat qelizore dhe nxisin transferimin e masës midis brendësisë së qelizës dhe tretësit. Kështu, analitet (p.sh. ADN-ja, ARN-ja, proteinat, organelet etj.) transferohen me efikasitet nga matrica qelizore në tretës. Kjo do të thotë se hapat e ndalimit të reaksioneve dhe të ekstraktimit mbivendosen me procesin e shpërbërjes së qelizave me ultratinguj, gjë që e bën lizën me ultratinguj shumë efektive. Për më tepër, përgatitja e mostrave me ultratinguj nuk kërkon detergjente dhe reagentë të tjerë të lizës, të cilët mund të ndryshojnë dhe të shkatërrojnë strukturën e lizatit dhe njihen për problemet që shkaktojnë më pas gjatë pastrimit. Një metodë tjetër e lizës, shpërbërja enzimatike, kërkon kohë të gjata inkubimi dhe shpesh jep rezultate të pariprodhueshme. Përgatitja e mostrave me ultratinguj kapërcen problemet e zakonshme gjatë përgatitjes së mostrave, si homogjenizimi i indeve, shpërbërja e qelizave, liza, ekstraktimi i proteinave dhe solubilizimi i lizatit. Meqenëse intensiteti i trajtimit me ultratinguj mund të kontrollohet me saktësi dhe të përshtatet sipas mostrës biologjike, shmangen degradimi dhe humbja e mostrës. Temperatura e mostrës, mënyra e pulsimit dhe kohëzgjatja e sonikimit, të monitoruara dhe të kontrolluara automatikisht, sigurojnë rezultate optimale.
 

VialTweeter është veçanërisht i përshtatshëm për punën laboratorike që kërkon përgatitjen e njëkohshme të disa mostrave në të njëjtat kushte. VialTweeter është një sonotrodë ultrasonike në formë blloku që mund të mbajë deri në 10 flakonë (p.sh. tuba Eppendorf, tuba centrifugimi, tuba NUNC, krioflakonë) dhe i sonikon intensivisht në kushte të kontrolluara me saktësi. Meqenëse energjia ultrasonike transmetohet përmes mureve të flakonëve në mjedisin e mostrës, flakonët mbeten të mbyllur gjatë trajtimit. Kështu, humbja e mostrës dhe kontaminimi i kryqëzuar shmangen plotësisht.

Flakonët dhe tubat që përshtaten me VialTweeter

VialTweeter është i përshtatshëm për të mbajtur 10 tuba të zakonshëm konikë ose me fund të rrumbullakët, si tubat Eppendorf, tubat e centrifugimit, krioflakonët dhe lloje të ndryshme flakonësh NUNC, por vrimat mund të përshtaten sipas kërkesës për madhësi të tjera flakonësh dhe tubash. Ju lutemi, na tregoni se çfarë lloj epruvetash dëshironi të përdorni, që të mund ta modifikojmë VialTweeter tuaj në përputhje me to. Për epruveta më të mëdha, si tubat Falcon, dhe për enë të tjera laboratorike, gota kimike dhe enë, VialPress është një zgjidhje e përshtatshme.
Lexoni më shumë për modelin VialTweeter VT26dxx të përshtatur për madhësinë specifike të epruvetës suaj, p.sh. tubat Falcon!

VialTweeter me VialPress

Ndërsa vetë VialTweeter, me 10 vrimat e tij për tuba, është tashmë një pajisje unike dhe shumë funksionale me ultratinguj, shtesa VialPress e bën VialTweeter edhe më të gjithanshëm dhe më fleksibël në përdorim. VialPress është një aksesor për VialTweeter që përbëhet nga një shufër kapëse, e cila mundëson fiksimin e tubave më të mëdhenj të mostrave, si tubat Falcon, ose të gotave të tjera laboratorike të vogla deri në mesatare në pjesën e përparme të VialTweeter. Figura në të majtë tregon VialTweeter që mban 10 flakonë Eppendorf në bllok, ndërsa VialPress fikson një tub prove më të madh në pjesën e përparme për sonikim. VialPress mund të mbajë deri në 5 tuba prove më të mëdhenj për sonikim intensiv.

Protokolle për përgatitjen e mostrave me VialTweeter

VialTweeter përdoret gjerësisht për sonikimin e mostrave biologjike. Para analizës, mostrat duhet të përgatiten për analiza dhe teste biokimike ose biofizike, p.sh. nëpërmjet lizës, homogjenizimit të indeve, ekstraktimit të proteinave, copëtimit të ADN-së / ARN-së nga forcat prerëse, degazimit etj. VialTweeter i kryen këto procese me ultratinguj në mënyrë të besueshme dhe jep rezultate të riprodhueshme. Një përdorim i zakonshëm i VialTweeter është liza/shkatërrimi qelizor i indeve të gjitarëve (njerëzve dhe kafshëve), si dhe i qelizave bakteriale dhe grimcave virale. Mostrat biologjike të trajtuara me sukses me VialTweeter përfshijnë qeliza epiteliale të mushkërive të njeriut, qeliza staminale hematopoietike, qeliza të leukemisë mieloide, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mikobaktere, kompleksin Mycobacterium tuberculosis (MTBC) dhe shumë qeliza të tjera bakteriale, bimore dhe mikrobiale.
Më poshtë mund të gjeni disa protokolle të përzgjedhura që përdorin VialTweeter.

Liza e E.Coli me VialTweeter për përcaktimin e glutationit in vivo

Bakteret Escherichia coli të shtamit MG1655 u kultivuan në mjedis minimal MOPS në një vëllim të përgjithshëm prej 200ml derisa u arrit një A600 prej 0,5. Kultura u nda në kultura prej 50-ml për trajtim me stres. Pas 15 min inkubimi me 0,79 mM alicinë, 1 mM diamid ose dimetilsulfoksid (kontroll), qelizat u mblodhën në 4 000g në 4°C për 10 min. Qelizat u lanë dy herë me tampon KPE përpara risuspendimit të sedimenteve në 700µl tampon KPE. Për deproteinizim, u shtuan 300µl acid sulfosalicilik 10% (w/v) përpara shkatërrimit të qelizave me ultratinguj (3 x 1 min; sonikator VialTweeter). Supernatantët u mblodhën pas centrifugimit (30 min, 13 000g, 4°C). Përqendrimet e acidit sulfosalicilik u ulën në 1% duke shtuar 3 vëllime tampon KPE. Matjet e glutationit total dhe GSSG u kryen siç përshkruhet më sipër. Përqendrimet qelizore të glutationit u llogaritën duke u bazuar në një vëllim të qelizave E. coli prej 6,7×10-15 litër dhe një dendësi qelizore prej A600 0,5 (e barasvlershme me 1×108 qeliza ml-1 kulturë). Përqendrimet e GSH u llogaritën duke zbritur 2[GSSG] nga glutationi total. (Müller et al. 2016)

Fragmentimi i fibrileve të alfa-sinukleinës me VialTweeter

Sonikatori VialTweeter përdoret gjerësisht për fragmentimin e besueshëm dhe efikas të fibrileve dhe shiritave të alfa-sinukleinës. Klikoni këtu për të gjetur përshkrime të hollësishme, protokolle dhe referenca për fragmentimin e alfa-sinukleinës me VialTweeter!

Liza qelizore me VialTweeter përpara spektrometrisë së absorbimit atomik me furrë grafiti

Bacillus subtilis 168 (trpC2) u ekspozuan ndaj stresit antibiotik për 15 min, pastaj qelizat u mblodhën në 3 320 x g, u lanë pesë herë me 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, u risuspenduan në 10 mM Tris, pH 7,5 dhe u shkatërruan me ultratinguj në një instrument Hielscher VialTweeter. (Wenzel et al. 2014)

Përgatitja e mostrave me VialTweeter përpara spektrometrisë së masës

Peletat qelizore të liofilizuara të qelizave burimore/progjenitore hematopoietike njerëzore CD34􏰀 u risuspenduan në 10µ􏰇l (200µl për përgatitjen në masë të HEK293 për serinë e hollimeve të peptideve) ure 8 M në hidrogjenkarbonat amoni 100 mM dhe iu nënshtruan lizës me ndihmën e sonikimit me Hielscher VialTweeter, me amplitudë 60%, cikël 60% dhe kohëzgjatje 20s, tri herë, me ftohje të ndërmjetme mbi akull. (Amon et al. 2019)

Protokolle të përgatitjes së mostrave duke përdorur VialPress

Sallata e freskët (Lactuca sativa) u homogjenizua në tampon HEPES 0,5 M (pH 8, i rregulluar me KOH), në raportin 1 g bimë (peshë e freskët) me 200, 100, 50 ose 20 mL tretësirë tampon. Raporti i masës bimore ndaj vëllimit të tretësirës tampon u ndryshua për ta mbajtur vëllimin e përgjithshëm të homogjenatit ndërmjet 3,5 dhe 12 mL. Raporti i masës bimore ndaj vëllimit të tretësirës tampon u ndryshua për ta mbajtur vëllimin e përgjithshëm të homogjenatit ndërmjet 3,5 dhe 12 mL, duke mundësuar homogjenizimin me sondë. Më pas, homogjenatet iu nënshtruan trajtimit të tërthortë me ultratinguj duke përdorur një UP200St me VialTweeter të pajisur me 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Gjermani) për 3 min (80% pulsim dhe 100% fuqi). Përdorimi i kësaj pajisjeje shmangu kontaminimin. (Laughton et al. 2019)

Kontroll i besueshëm i temperaturës gjatë sonikimit me VialTweeter

Temperatura është një faktor vendimtar që ndikon në proces dhe është veçanërisht i rëndësishëm për trajtimin e mostrave biologjike. Ashtu si të gjitha teknikat mekanike të përgatitjes së mostrave, sonikimi gjeneron nxehtësi. Megjithatë, temperatura e mostrave mund të kontrollohet mirë kur përdoret VialTweeter. Ju paraqesim mundësi të ndryshme për të monitoruar dhe kontrolluar temperaturën e mostrave tuaja gjatë përgatitjes së tyre me VialTweeter dhe VialPress për analizë.

1. Monitorimi i temperaturës së mostrës: Procesori ultrasonik UP200St, që vë në punë VialTweeter, është i pajisur me një softuer inteligjent dhe një sensor temperature që mund të lidhet me të. Lidheni sensorin e temperaturës me UP200St dhe futeni majën e sensorit të temperaturës në njërin prej tubave të mostrave. Nëpërmjet ekranit dixhital me ngjyra dhe me prekje, mund të caktoni në menynë e UP200St një interval të caktuar temperature për sonikimin e mostrës suaj. Sonikatori do të ndalet automatikisht kur të arrihet temperatura maksimale dhe do të qëndrojë në pauzë derisa temperatura e mostrës të ulet në vlerën e poshtme të intervalit të caktuar të temperaturës ∆. Më pas, sonikimi rifillon automatikisht. Ky funksion inteligjent parandalon degradimin e shkaktuar nga nxehtësia.
2. Blloku i VialTweeter mund të ftohet paraprakisht. Vendoseni bllokun e VialTweeter (vetëm sonotrodën pa transduktor!) në frigorifer ose në ngrirës për ta ftohur paraprakisht bllokun e titanit, gjë që ndihmon në vonimin e rritjes së temperaturës në mostër. Nëse është e mundur, edhe vetë mostra mund të ftohet paraprakisht.
3. Përdorni akull të thatë për ftohje gjatë sonikimit. Përdorni një tabaka të cekët të mbushur me akull të thatë dhe vendoseni VialTweeter mbi akullin e thatë, në mënyrë që nxehtësia të shpërndahet shpejt.

Klientët në mbarë botën përdorin VialTweeter dhe VialPress për punën e tyre të përditshme të përgatitjes së mostrave në laboratorë biologjikë, biokimikë, mjekësorë dhe klinikë. Nëpërmjet softuerit inteligjent dhe kontrollit të temperaturës të procesorit UP200St, temperatura kontrollohet në mënyrë të besueshme dhe shmanget degradimi i mostrave i shkaktuar nga nxehtësia. Përgatitja e mostrave me ultratinguj me VialTweeter dhe VialPress jep rezultate shumë të besueshme dhe të riprodhueshme!

Detaje teknike të VialTweeter

VialTweeter është një sonotrodë në formë blloku prej titani që mund të mbajë deri në 10 flakonë në vrimat brenda bllokut. Përveç kësaj, deri në 5 tuba më të mëdhenj prove mund të fiksohen me kapëse në pjesën e përparme të VialTweeter duke përdorur VialPress. VialTweeter është projektuar në mënyrë që energjia e trajtimit me ultratinguj të shpërndahet në mënyrë të njëtrajtshme në secilin flakon të futur, për të siguruar rezultate sonikimi të besueshme dhe të njëtrajtshme. Një mbështetëse e vogël rrotulluese e përshtat sonotrodën VialTweeter me sipërfaqet e pabarabarta dhe i drejton vertikalisht tubat e provës.

Përparësitë e VialTweeter me një vështrim

• Sonikim intensiv i deri në 10 flakonëve njëkohësisht
• Sonikim i tërthortë me intensitet të lartë ultrasonik përmes murit të enës drejt mostrës
• Sonikimi i tërthortë shmang kontaminimin e kryqëzuar dhe humbjen e mostrës
• Rezultate të riprodhueshme falë amplitudës së rregullueshme dhe të kontrollueshme të sonikimit
• VialPress ju mundëson të sonikoni epruveta më të mëdha
• Amplitudë e rregullueshme nga 20 deri në 100%
• Regjim pulsimi i rregullueshëm nga 0 deri në 100%
• I sterilizueshëm në autoklavë

VialTweeter furnizohet me energji nga UP200St, një procesor ultrasonik me fuqi prej 200 vatësh. UP200St është i pajisur me një softuer inteligjent që mundëson kontrollin e saktë të të gjithë parametrave të rëndësishëm të procesit ultrasonik, si amplituda, koha e sonikimit, pulsimi dhe temperatura. Kjo e bën VialTweeter një mjet të besueshëm për arritjen me sukses të rezultateve të riprodhueshme të procesit në laboratorët biologjikë dhe biokimikë.
Amplituda mund të rregullohet ndërmjet 20 dhe 100%, duke mundësuar kështu përshtatjen e intensitetit ultrasonik me mostrën tuaj. Për shembull, prerja dhe fragmentimi i ADN-së dhe ARN-së kërkojnë një amplitudë më të ulët për të parandaluar formimin e fragmenteve tepër të vogla të ADN-së, ndërsa homogjenizimi i indit të trurit të miut kërkon sonikim me intensitet të lartë. Zgjidhni amplitudën, intensitetin dhe kohëzgjatjen ideale të sonikimit përmes menysë inteligjente dhe intuitive të procesorit UP200St. Menyja dhe cilësimet mund të hapen dhe të përdoren lehtësisht përmes ekranit me prekje me ngjyra. Te cilësimet mund të paracaktoni parametrat e sonikimit, si amplituda, pulsimi, regjimi i ciklit, kohëzgjatja e sonikimit, energjia totale e transmetuar dhe kufijtë e temperaturës. Në kërkim dhe prodhim, përsëritshmëria e provave dhe e rezultateve të testimit është thelbësore. Kjo do të thotë se regjistrimi i saktë i kushteve të procesit dhe i protokolleve të sonikimit është jashtëzakonisht i rëndësishëm. Regjistrimi automatik i të dhënave i shkruan të gjitha të dhënat e sonikimit në një skedar CSV në një kartë SD të integruar, në mënyrë që të mund të kontrolloni dhe krahasoni lehtësisht kryerje të ndryshme të sonikimit. Të gjitha të dhënat e procesit ultrasonik mund të hapen lehtësisht dhe të ndahen si skedar CSV.
Hielscher Ultrasonics përpiqet t’ju ofrojë teknologji të përparuar për të lehtësuar dhe përmirësuar punën tuaj kërkimore!