Izolimi tejzanor i qelizave staminale
- Cavitation tejzanor është një metodë shumë efektive mekanike për të izoluar qelizat burimore nga indet dhjamore të njeriut.
- Pjesë ultrasonically izoluar stromal vaskulare (SVF) tregojnë një potencial të lartë rigjeneruese për aplikimet mjekësore.
- Hielscher Ultrasonics ofron opsione të ndryshme të sonication direkt dhe indirekt për korrjen e qelizave staminale.
Izolimi tejzanor i qelizave burimore
Nga trupi njerëzor i nxjerrë indet dhjamore (nëpërmjet liposuktit) trajtohet me ultratinguj për të hequr indet nga qelizat burimore dhe qelizat e tjera të rritjes. Kjo pjesë e ndarë e qelizave njihet si qeliza fraksioni vaskular stromal (SVF).
Teknika e izolimit tejzanor të qelizave staminale nga indet dhjamore bazohet vetëm në parimin e punës së cavitation tejzanor, që është qethje mekanike. Forcat e qethjes cavitational prishin indin dhjamor, në mënyrë që qelizat burimore të lirohen nga struktura e indit të yndyrës. Izolimi i qelizave staminale tejzanor është një procedurë e lirë enzimë, duke shmangur përdorimin e kolagenazës, trypsinës, ose shpërndarjes.
Për të ndarë qelizat burimore të nxjerra, qelizat burimore mesenchymal, prekursorët endotelialë dhe llojet e qelizave të tjera të rritjes, indi dhjamor i zërit është centrifuguar.
Qelizat burimore të ndara grumbullohen dhe analizohen për cilësinë e tyre duke përfshirë numërimin e qelizave, qëndrueshmërinë, endotoksinën dhe njollat Gram para se të përdoren menjëherë për transplantim autolog ose mbahen në ruajtjen e kriogeve.
Pse të shmangen enzimat?
Meqënëse tretja enzimatike për izolimin e qelizave staminale shoqërohet me kostot e larta dhe rreziqet e mundshme të sigurisë si dhe mungesa e efikasitetit [Oberbauer et al. 2015], metodat e izolimit jo-enzimatik si cavitation tejzanor janë të preferuar. Hapi i izolimit tejzanor zëvendëson tretjen enzimatike duke ndarë qelizat dhe agregatët qelizorë mekanikisht nga indi dhjamor.
GDmini2 në UP200St-TD Transducer (200 watts)
- i shpejtë
- efikas
- riprodhueshme
- i sigurt
- Enzimë-Free
- Kosto-efektive
- Opsionet sterile
Qelizat burimore të rrjedhura nga stomaku
Niveli i qelizave burimore
Publikuar metodën e izolimit SVF duke përdorur prodhimin e tejzhvillimit të cavitation në 1.67-2.24 × 107 qeliza me një qëndrueshmëri prej 97.1–98.9% [Victor, S., 2014]. Rendimentet qelizore prej rreth 2–4 milion qelizash / ind dhjamor gram u morën nga liza ultrasonike e adipociteve të pjekur në indin dhjamor të disociuar [Bright et al., 2014].
Qelizat e përgatitura me ultratinguj posedojnë potencial të diferencimit adipogjenik dhe osteogjen të barabartë në krahasim me një metodë standarde të izolimit enzimatik [Oberbauer et al. 2015].
Sistemet tejzanor për izolimin e qelizave staminale
Për të siguruar sigurinë më të lartë dhe cilësinë më të mirë, pajisjet tejzanor të besueshme, të cilat lejojnë kontroll të saktë mbi trajtimin e qelizave staminale, është një faktor kyç për një trajtim të suksesshëm të pacientëve. Hielscher Ultrasonics ofron opsione të ndryshme për një proces të ndarjes autolog të tejzgjatur të kavitacionit për të izoluar dhe korrur qelizat rrjedhëse dhe endoteliale.
Sonication direkte
Për procesin e izolimit të qelizave staminale përmes sonikimit të drejtpërdrejtë, bri tejzanor (sonotrode, tip tejzanor / probe) është zhytur në indin yndyror dhjamor. Nëpërmjet sonotrode, valët ultratinguj shoqërohen drejtpërsëdrejti në yndyrën autologe, kështu që cavitation tejzanor liron qelizat staminale dhe qelizat stromale nga indet e mbetura. Hielscher përpunuesit tejzanor UP200Ht dhe UP200St me sonotrode S26d14 janë sisteme të përdorura zakonisht për trajtimin autolog të qelizave staminale. Izolimi SVF me sonication direkte është më së shumti i përshtatshëm për përdorim në ambientet e pastërta.
sonication indirekt
Meqenëse qelizat burimore përdoren për aplikime autologe, steriliteti i procesit është shumë i rëndësishëm. Prandaj, Hielscher ka zhvilluar disa opsione të sonication indirekt të tilla si GDmini2, VialTweeter dhe sisteme të tjera të personalizuara. Me sonication indirekte, valët ultratinguj janë bashkuar përmes enë mur në ind dhjamor. Pjesa vaskulare stromale (SVF) është e shkëputur nga indet dhjamore nga cavitation tejzanor si njëjtë si gjatë sonication direkte.
Procesi indirekt sonication ofron avantazhin për të procesuar qelizat në një anije të mbyllur nën kushte pa ndotje pasi që rreziku i kontaminimit të kryqëzuar duke futur bri ultratinguj (sonotrode) është eliminuar. Izolimi i qelizave kryhet në një sistem të mbyllur duke siguruar kushte të procesit steril.
Pajisjet digjitale tejzanore të Hielscher mund të kontrollohen saktësisht nëpërmjet ekranit të prekjes ose kontrollit të shfletuesit. Procedurat e zërit mund të paracaktohen nëpërmjet menysë intuitive. Pajisjet tejzanor janë të pajisura me një regjistrim automatik të të dhënave (të gjitha të dhënat e procesit të zërit janë të ruajtura në një SD-Card të integruar). Inputi tejzanor i fuqisë mund të përshtatet saktësisht me protokollin e izolimit të qelizës.
Letërsi / Referencat
- Oberbauer, Eleni; Steffenhagen, Carolin; Wurzer, Christoph; Gabriel, Christian; Redl, Heinz; Wolbank, Susanne (2015): Sisteme izolimi enzimatik dhe jo-enzimatik për qelizat që rrjedhin nga indet dhjamore: gjendja aktuale e artit. Rigjenerimi i qelizave (2015) 4: 7.
Fakte të vlefshme
qelizat burimore
Qelizat burimore janë qeliza të padiferencuara të një organizmi multicellular që kanë aftësinë për të prodhuar një numër të caktuar të qelizave të të njëjtit lloj. Ato karakterizohen nga potenciali i shquar për t'u zhvilluar në shumë lloje qelizash të ndryshme në trup gjatë gjendjes së hershme të jetës dhe rritjes. Tipari më dallues i qelizave staminale është aftësia e tyre për t'u ripërtërirë nga ndarja e qelizave dhe aftësia e tyre për t'u kthyer në qeliza specifike të indeve ose organeve me funksione të veçanta. Qelizat burimore pluripotente kanë potencial të diferencohen në secilën nga tre qelizat embrionale: endodermi (rindërtimi i brendshëm i stomakut, traktin gastrointestinal, mushkëritë), mesoderma (muskujt, kockat, gjaku, urogjenitalët) ose ektoderma (indet epidermale dhe sistemi nervor).
Në disa organe, të tilla si barku dhe palca e eshtrave, qelizat burimore ndahen rregullisht për të riparuar dhe zëvendësuar indet e konsumuara ose të dëmtuara. Në organe të tjera, të tilla si pankreasi dhe zemra, qelizat burimore ndahen vetëm në kushte të veçanta.
Qelizat stromale / qelizat burimore (MSC), të cilat ofrojnë një potencial të lartë për aplikime të shumta terapeutike në mjekësinë rigjeneruese dhe estetike, gjenden kryesisht në palcën e eshtrave, por ato mund të jenë të izoluara nga indet e tjera (p.sh. kërc, yndyrë, qeliza muskulore) too. Qelizat staminale Mesenchymal konsiderohen si qeliza staminale prototypike të rritura, të cilat karakterizohen nga kapaciteti i tyre i vetë-rinovimit.
Hulumtimet dhe trajtimet e qelizave burimore përdoren për të kultivuar indet dhe organet për qëllime transplantimi (inxhinieri indetike). Fusha të tjera mjekësore për aplikimin e qelizave staminale mund të gjenden në trajtimin e sëmundjeve të trurit (p.sh. sëmundja Parkinson dhe Alzheimer), terapia me mangësi të qelizave, sëmundje të gjakut (p.sh. leuçemia), degjenerim i përbashkët dhe kërc (p.sh. osteoartriti) (p.sh. trajtimet kundër plakjes). Në përgjithësi, qelizat burimore kanë një madhësi prej përafërsisht. 15-25 mikron në diametër.
Qelizat burimore Mesenchymal (Qelizat e kockave), myocytet (qelizat e muskujve), dhe adipocitet (qelizat e yndyrës), qelizat e stomakut (MSC) janë qeliza shumë-potenciale stromale, të cilat kanë aftësinë për t'u diferencuar në lloje të ndryshme qelizash.
Frakti Stromal Vaskular (SVF)
Fraction Stromal Vascular (SVF) është një komponent i lipoaspirate i cili mund të nxirret nëpërmjet liposuktit nga indet dhjamore në trupin e njeriut. Lipoaspirate konsiston në një përzierje heterogjene të qelizave dhe ka një përmbajtje të lartë të qelizave staminale, të njohura si qeliza burimore që rrjedhin nga dhjamërat (ASC ose ADSC), të cilat tregojnë ngjashmëri me qelizat burimore të palcës së eshtrave, të tilla si aftësia e tyre për të dalluar në qelizat multilineage.
Popullata heterogjene e SVF përfshin qelizat endoteliale, eritrocitet, fibroblastet, limfocitet, monocitet / makrofagët dhe pericitetet ndër të tjera, si dhe një pjesë e rëndësishme e qelizave staminale të rrjedhjes së dhjamit.
Stromale / qelizat burimore me origjinë adipoze (ASC)
Faktori i rritjes së fibroblastit (bFGF), faktori i rritjes së keratinocitit (KGF), faktori i rritjes së qelizave stomale (ASC / ADSC) , Faktori i rritjes së hepatitit (HGF), faktor i rritjes së transformatorit beta (TGF-β), faktori i rritjes së insulinës (IGF) dhe faktori neurotrofik i trurit (BDNF). ACS jo vetëm që liron faktorët e rritjes, por gjithashtu nxjerr sekrete të citokineve duke përfshirë ligandin tyrosine kinase 3 (Flt-3) të lidhura me FMS, faktorin stimulues të kolonisë granulocite (G-CSF), faktorin stimulues të kolonizimit makrofag granulocit (GM-CSF), makrofag (IL-6), IL-7, IL-8, IL-11 dhe IL-12, faktori frenues i leukemisë (LIF) dhe alfa faktor i nekrozës së tumorit (M-CSF) (TNF-α).
Nxjerrja e llojeve të qelizave të stemës
Stemcells autolog të rritur nga njerëzit mund të nxirren nga burimet e mëposhtme:
- Palca e kockave, e cila kërkon nxjerrjen nga vjelja, domethënë shpime në kockë.
- Indet e dhjamit (qelizat lipidet), të cilat kërkojnë nxjerrjen nga liposukcioni.
- Gjaku, i cili kërkon nxjerrjen nëpërmjet aferezës, ku gjaku nga donatori kalon përmes një aferë “dializë” makinë ku qelizat burimore janë nxjerrë ndërsa komponentët e tjerë të gjakut kthehen përsëri tek donatori.