Shkëputja e qelizave tejzanor
Shkëputja e qelizave tejzanor është një teknikë shumë efektive dhe e besueshme e përgatitjes së mostrës që përdoret në fusha të ndryshme të biologjisë dhe bioteknologjisë qelizore. Duke përdorur valë tejzanor, sonikatori me pllaka me shumë pllakë UIP400MTP shkëput qelizat ngjitëse nga sipërfaqet e kulturës dhe përgatit suspensionet e qelizave për aplikime në rrjedhën e poshtme. Sonication ofron disa avantazhe mbi teknikat tradicionale enzimatike, kimike dhe mekanike të shkëputjes, duke e bërë atë një mjet të vlefshëm për studiuesit.
Parimi i shkëputjes së qelizave tejzanor
Shkëputja e qelizave tejzanor mbështetet në përdorimin e ultrazërit të fuqisë për të prishur ndërveprimet midis qelizave dhe substratit me të cilin janë ngjitur. Valët tejzanor gjenerojnë mikroflluska, kavitacion akustik dhe dridhje në mjedisin e kulturës, duke prodhuar forca mekanike që shpërndajnë butësisht, por në mënyrë efektive qelizat. Ky proces zakonisht kryhet duke përdorur sonikatorin pa kontakt UIP400MTP për pllaka me shumë pus.

Sonicator pa kontakt UIP400MTP për shkëputjen e qelizave
Shkëputja e qelizave është thelbësore gjatë kultivimit të qelizave ngjitëse. Ndërsa tripsinizimi është teknika më e përdorur, ajo mund të zvogëlojë qëndrueshmërinë e qelizave duke dëmtuar membranën qelizore dhe matricën jashtëqelizore. Për të përmirësuar efikasitetin e kulturës qelizore, është e rëndësishme të minimizohet ky dëm. Shkëputja e qelizave tejzanor është një teknikë shumë efektive dhe e besueshme pa enzima. Kjo e bën sonikatorin e mikropllakës UIP400MTP një alternativë të shkëlqyer për shkëputjen e qelizave me bazë enzima. Sonication aplikon kavitacion akustik dhe agjitacion në një mjedis pa serum, i cili i zhvendos butësisht qelizat pa i dëmtuar ato.
Krahasimi i shkëputjes së qelizave tejzanor me teknikat tradicionale
Përparësitë | Shkëputja me ultratinguj | Shkëputja enzimatike | Shkëputja kimike |
---|---|---|---|
Qëndrueshmëria e qelizave | Lartë | E mesme | E ndryshueshme |
Shpejtësia | E shpejtë (minuta) | E moderuar (minuta në orë) | E ndryshueshme (minuta në orë) |
Ruajtja e shënuesve të sipërfaqes | E shkëlqyeshme | Mund të ndryshohet | Mund të ndryshohet |
Shkallëzueshmëria | Lartë | E mesme | E ndryshueshme |
Pa mbetje | po | Jo (mbetje enzime) | E ndryshueshme (mbetje kimike) |
Kostoja e pajisjeve | Investim një herë, pa pajisje të disponueshme pronësore, pa kosto të përsëritura | Shpenzimet e përsëritura | Shpenzimet e përsëritura |
Lehtësia e Optimizimit | Lehtë | Lehtë | E ndryshueshme |
Më poshtë, gjeni një udhëzim shembullor për shkëputjen e qelizave duke përdorur sonikatorin e pllakave me shumë pllakë UIP400MTP.
Pajisjet dhe materialet për shkëputjen e qelizave tejzanor
- Sonicator pa kontakt për pllaka me shumë pusi UIP400MTP: Ky sonikator me fuqi të lartë është mjeti kryesor. Sonicatori i pjatave UIP400MTP është i përshtatshëm për çdo pjatë standarde me shumë pus dhe mikrotitra, si dhe për pjatat Petri. Valët e ultrazërit sigurojnë energjinë e nevojshme mekanike për shkëputjen e qelizave.
- Pjata për kultivimin e qelizave ose gjellë Petri: Anijet standarde të përdorura për të rritur kulturat qelizore ngjitëse.
- Mjeti i kulturës: Mjeti i lëngshëm në të cilin rriten dhe mirëmbahen qelizat.
- PBS sterile (solucion fiziologjik i izoluar me fosfat): Përdoret për larjen e qelizave para shkëputjes.
- Tubat e koleksionit: Për mbledhjen e suspensionit të qelizave të shkëputura.
Protokolli për shkëputjen me ultratinguj duke përdorur Plate Sonicator UIP400MTP
- Përgatitja
– Sigurohuni që të gjitha pajisjet të jenë të pastra dhe sterile për të parandaluar kontaminimin.
– Ngroheni paraprakisht mjedisin e kulturës dhe PBS në temperaturën e duhur (zakonisht 37°C). - Larja e qelizave
– Aspirojeni mjedisin e kulturës nga balona ose pllaka e kulturës qelizore.
– Lani butësisht qelizat me PBS steril për të hequr çdo mjedis të mbetur dhe qeliza të shkëputura. - sonikacion
– Shtoni një vëllim të vogël PBS ose medium të freskët të kulturës në balonë ose pjatë për të mbuluar një shtresë qelizore.
– Vendoseni enën ose pjatën Petri në sonikatorin UIP400MTP.
– Sonicate për një kohëzgjatje të caktuar, zakonisht duke filluar nga disa sekonda në disa minuta, në varësi të llojit të qelizës dhe fuqisë së lidhjes. - Koleksioni i pezullimit të qelizave
– Pas sonikimit, vëzhgoni qelizat nën një mikroskop për të siguruar shkëputjen.
– Hidhni butësisht pezullimin e qelizës për të mbledhur qelizat e shkëputura.
– Transferoni pezullimin në një tub grumbullimi. - Përpunimi pas shkëputjes
– Centrifugoni suspensionin e qelizave nëse është e nevojshme për të përqendruar qelizat.
– Risuspendoni qelizat në mjedis të freskët të kulturës ose tampon për aplikime në rrjedhën e poshtme.
Shënime: Parametrat (si koha dhe intensiteti i sonikimit) duhet të optimizohen për lloje të ndryshme qelizash për të shmangur dëmtimin e qelizave. Disa lloje qelizash delikate mund të jenë më të ndjeshme ndaj trajtimit me ultratinguj, duke kërkuar optimizim të kujdesshëm.
Aplikime praktike të shkëputjes së qelizave tejzanor
Shkëputja e qelizave tejzanor përdoret në mjedise të ndryshme kërkimore dhe klinike:
- Rrjedhin cytometry: Përgatitja e suspensioneve njëqelizore për analizë.
- Numërimi i qelizave dhe analizat e qëndrueshmërisë: Shkëputja e qelizave për numërim të saktë dhe vlerësime të qëndrueshmërisë.
- Nënkulturimi: Transferimi i qelizave nga një enë kulture në tjetrën.
- Eksperimentet e biologjisë molekulare: Izolimi i qelizave për nxjerrjen e ADN-së, ARN-së dhe proteinave.
Pse duhet ta zëvendësoj gërvishtjen e qelizave me shkëputjen e qelizave me mikropllakën UIP400MTP Sonciator?
Zëvendësimi i gërvishtjes së qelizave me shkëputjen e qelizave duke përdorur sonikatorin e mikropllakës UIP400MTP u ofron studiuesve disa avantazhe. Ndryshe nga gërvishtja manuale, sonikacioni i kontrollueshëm saktësisht me UIP400MTP siguron shkëputje të qëndrueshme dhe të butë të qelizave, duke minimizuar dëmtimet mekanike dhe duke ruajtur qëndrueshmërinë e qelizave. UIP400MTP siguron kontroll të saktë mbi parametrat e tingullit, duke mundësuar trajtim uniform në të gjitha puset dhe duke eliminuar ndryshueshmërinë midis mostrave. Kjo metodë është më e shpejtë, më efikase dhe e shkallëzueshme, duke e bërë atë ideale për aplikime me performancë të lartë, duke ruajtur riprodhueshmërinë dhe integritetin e kulturave qelizore të ndjeshme. Gjeni studimin krahasues këtu!

Sonicator me pllaka 96 pusesh UIP400MTP për sonikimin e pllakave mikrotitërore dhe shumëpushash

Sonicator me pllaka 96 pusesh UIP400MTP: Lëngu transmetues i ultrazërit rrethon të gjitha puset dhe siguron sonikacion uniform të çdo kampioni
Llojet e zakonshme të qelizave për shkëputjen e qelizave tejzanor
- Fibroblastet:
Zakonisht përdoret në inxhinierinë e indeve dhe kërkimin e shërimit të plagëve.
Qeliza ngjitëse që kërkojnë shkëputje për kalim dhe eksperimente. - Qeliza epiteliale:
Përdoret në studimet e barrierave të indeve, kërkimin e kancerit dhe testimin e ilaçeve.
Kërkojnë shkëputje për analizë dhe nënkulturim. - Qelizat endoteliale:
E rëndësishme për kërkimet vaskulare dhe studimet mbi angiogjenezën.
Qelizat ngjitëse që kanë nevojë për shkëputje për analizat in vitro. - Qelizat burimore:
Përfshirë qelizat burimore mezenkimale dhe qelizat burimore pluripotente të induktuara.
Kërkojnë metoda të buta shkëputjeje për të ruajtur qëndrueshmërinë dhe pluripotencën. - Linjat e qelizave të kancerit:
Përdoret gjerësisht në kërkimin e kancerit dhe zhvillimin e ilaçeve.
Qelizat ngjitëse që kërkojnë shkëputje të rregullt për manipulim eksperimental. - Hepatocitet:
Përdoret në studimet e funksionit të mëlçisë dhe në studimin e metabolizmit të barnave.
Kërkohet shkëputja për modelet dhe analizat in vitro. - Keratinocitet:
Lloji mbizotërues i qelizave në epidermë dhe përdoret zakonisht në kërkimet e lëkurës, studimet e shërimit të plagëve dhe testimet kozmetike.
Ashtu si qelizat e tjera ngjitëse, keratinocitet rriten të ngjitura në sipërfaqen e balonave ose pllakave të kulturës dhe duhet të shkëputen për procedura të ndryshme eksperimentale, duke përfshirë kalimin, analizën dhe nënkulturimin. - Makrofagët:
Shpesh kërkojnë shkëputje kur kultivohen in vitro.
Makrofagët janë qeliza ngjitëse, të cilat zakonisht ngjiten në sipërfaqen e balonave ose pllakave të kulturës. Për t'i mbledhur ato për aplikime në rrjedhën e poshtme të tilla si analiza, nënkultura ose eksperimente, ato duhet të shkëputen nga sipërfaqja e kulturës.
Literatura / Referencat
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- UIP400MTP-Multi-well-Plate-Sonicator-Infographic
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Fakte që ia vlen të dihen
Çfarë është shkëputja e qelizave?
Shkëputja e qelizave është procesi i ndarjes së qelizave ngjitëse nga sipërfaqja e enës së tyre të kulturës, duke mundësuar mbledhjen dhe përgatitjen e tyre për procedura ose analiza të mëtejshme eksperimentale. Kjo mund të arrihet përmes metodave enzimatike, kimike, mekanike ose tejzanor.
Çfarë është shpërbërja e qelizave?
Disociimi i qelizave është procesi i zbërthimit të agregateve ose indeve qelizore në qeliza individuale, të qëndrueshme. Kjo arrihet duke prishur matricën jashtëqelizore dhe ngjitjen qelizë-qelizë duke përdorur metoda enzimatike, mekanike (p.sh. sonication) ose kimike. Disociimi i qelizave është thelbësor për aplikime të ndryshme, duke përfshirë kulturën primare të qelizave, analizën me një qelizë dhe përgatitjen e pezullimeve të qelizave për eksperimente dhe përdorime terapeutike.
Cili është ndryshimi midis një kulture qelizore aderuese dhe një biofilmi?
Kultura e qelizave ngjitëse i referohet rritjes së qelizave, zakonisht eukariote, që ngjiten në një substrat në një mjedis të kontrolluar laboratorik, duke u mbështetur në lëndët ushqyese të furnizuara përmes mjedisit të kulturës. Në të kundërt, një biofilm është një bashkësi mikrobike komplekse, natyrale që ngjitet në një sipërfaqe dhe është e mbyllur në një matricë jashtëqelizore, me qeliza që demonstrojnë sjellje kolektive, gradient kimik dhe rezistencë të shtuar ndaj streseve të jashtme. Ndërsa kulturat qelizore ngjitëse janë artificiale dhe përdoren për qëllime kërkimore, biofilmat janë ekosisteme dinamike që gjenden në mjedise natyrore ose të inxhinieruara.
Sonicizimi me UIP400MTP është një teknikë shumë efikase, pa enzima për të shkëputur qelizat ngjitëse dhe për të hequr biofilmat. Lexoni më shumë për avantazhet e zhvendosjes së biofilmit nga mikropllakat dhe enët Petri duke përdorur sonikatorin e pllakave me shumë puseta UIP400MTP!
Cilat janë avantazhet e shkëputjes së qelizave tejzanor?
- I butë ndaj qelizave: Shkëputja tejzanor është më pak e ashpër në krahasim me metodat enzimatike (si trypsinizimi) dhe gërvishtja mekanike, duke ruajtur qëndrueshmërinë e qelizave dhe shënuesit e sipërfaqes.
- E shpejtë dhe efikase: Procesi është i shpejtë, shpesh zgjat vetëm disa minuta dhe mund të shkëpusë në mënyrë efikase qelizat edhe nga sipërfaqet e mëdha të kulturës.
- Shkallëzueshmëria: I përshtatshëm si për aplikime laboratorike në shkallë të vogël ashtu edhe për procese më të mëdha bioteknologjike.
- Nuk ka mbetje enzime: Eliminon nevojën për enzima, duke reduktuar rrezikun e ndryshimit të proteinave të sipërfaqes së qelizës ose futjes së ndotësve.