ASTM E2799-22 Protokolli për Vlerësimin Antimikrobial
Hielscher UIP400MTP është një sonikues i fuqishëm dhe efikas me shumë pllakë, i krijuar për të thjeshtuar hapin e sonikimit në protokollin ASTM E2799-22. Duke dhënë energji uniforme tejzanor në të gjithë pllakën e mikrotitrit, UIP400MTP siguron shkëputje të qëndrueshme dhe të besueshme të biofilmave nga kapakët e kunjit pa dëmtuar qelizat ose pa kompromentuar integritetin e mostrës. Aftësia e tij e performancës së lartë dhe funksionimi miqësor për përdoruesit reduktojnë ndjeshëm kohën e përpunimit duke rritur riprodhueshmërinë, duke e bërë atë një zgjidhje ideale për laboratorët që kryejnë analiza të qëndrueshmërisë së biofilmit dhe testimin e efikasitetit antimikrobik.
ASTM E2799
ASTM E2799 është një metodë testimi e standardizuar e krijuar për të vlerësuar efikasitetin e agjentëve antimikrobikë kundër biofilmave, duke u fokusuar veçanërisht në Pseudomonas aeruginosa. Biofilmat janë bashkësi komplekse mikrobike që ngjiten në sipërfaqe dhe shfaqin rezistencë të shtuar ndaj trajtimeve antimikrobike, duke i bërë ato një sfidë të rëndësishme në kontekstet e kujdesit shëndetësor, industrial dhe mjedisor. Kjo metodë përdor analizën e Përqendrimit Minimal të Çrrënjosjes së Biofilmit (MBEC) për të ofruar një kornizë të besueshme dhe të riprodhueshme për testimin e dezinfektuesve në kushte realiste të biofilmit.

Sonicator me pllaka 96 pusesh UIP400MTP për depistim të lartë
Si kontribuon Sonication në ASTM E2799?
Sonicizimi luan një rol kritik në protokollin ASTM E2799 duke lehtësuar shkëputjen e biofilmave nga sipërfaqet e provës, duke siguruar një vlerësim të saktë të qëndrueshmërisë së mikrobeve pas trajtimit. Duke përdorur energji të kontrolluar tejzanor, protokolli arrin ndërprerje efikase dhe të qëndrueshme të biofilmit pa dëmtuar qelizat, duke mundësuar rezultate të sakta dhe të riprodhueshme. Kjo e bën ASTM E2799 një mjet thelbësor për avancimin e kërkimit të biofilmit dhe zhvillimin e strategjive efektive antimikrobike.
Si të ekzekutoni analizën MBEC në përputhje me ASTM E2799-22
Protokolli ASTM E2799-22 përshkruan hapat për vlerësimin e efikasitetit të agjentëve antimikrobikë kundër biofilmave. Kur përdorni sonikatorin e pllakave mikrotitërore Hielscher UIP400MTP, protokolli mund të përshtatet për të përfshirë këtë metodë të avancuar të sonikimit për shkëputjen e biofilmit. Më poshtë është një përshkrim i hapave të përshtatur për përdorimin e sonikatorit të mikropllakës UIP400MTP:
- Përgatitja e Biofilmave
Përgatitni një pllakë sterile me mikrotitër 96 pusesh me kapakë të ndashëm me kunj.
Inokuloni pusetat me një suspension të standardizuar bakterial në një mjedis të përshtatshëm rritjeje.
Vendosni kapakun e kunjit mbi pjatë, duke u siguruar që kunjat të jenë zhytur plotësisht në pezullimin bakterial.
Inkuboni pllakën në kushte të kontrolluara (p.sh. temperaturë dhe kohë) për të lejuar formimin e biofilmit në kunjat. - Trajtimi me agjentë antimikrobikë
Pas formimit të biofilmit, zëvendësoni mediumin me medium të freskët që përmban agjentët antimikrobikë të testuar në përqendrime të ndryshme.
Ringjisni kapakun e kunjit dhe inkuboni në kushtet e specifikuara në modelin e provës. - Përgatitja për shkëputjen e biofilmit
Pas trajtimit, shpëlajeni kapakun e kunjit duke e zhytur në një zgjidhje shpëlarëse sterile për të hequr agjentët antimikrobikë të mbetur dhe qelizat planktonike të ngjitura lirshëm. - Shkëputja e biofilmit duke përdorur Sonicatorin UIP400MTP
Përgatitni një pjatë të freskët me mikrotitër 96 pusesh që përmban një medium rikuperues (p.sh., supë neutralizuese).
Shkëputni biofilmat duke vendosur kapakun e kunjit në puset e pllakës së mesme të rikuperimit.
Futeni pllakën në sonikatorin UIP400MTP, duke u siguruar që kapaku dhe pllaka të jenë të rreshtuara siç duhet.
Vendoseni sonikatorin në amplitudë 70%-80% dhe sonikoni për 3-4 minuta në modalitetin e ciklit, për të siguruar shkëputje të qëndrueshme të biofilmit pa lizë qelizore. - Vlerësimi i qëndrueshmërisë së biofilmit
Pas sonikimit, përpunoni mjedisin e rikuperimit që përmban qeliza të shkëputura të biofilmit duke përdorur teknika standarde mikrobiologjike ose analitike, të tilla si:- Numërimi i njësive të formimit të kolonive (CFU): Kryeni hollime serike dhe pjatë në agar për numërimin e qelizave të qëndrueshme.
- Matjet e densitetit optik (OD): Përdorni analizën spektrofotometrike për të vlerësuar densitetin e qelizave.
- Analizat e qëndrueshmërisë të bazuara në fluoreshencë: Përcaktoni sasinë e qelizave të gjalla dhe të vdekura duke përdorur ngjyra fluoreshente.
- analiza e të dhënave
Krahasoni të dhënat e qëndrueshmërisë së biofilmave të trajtuar dhe të patrajtuar për të përcaktuar efikasitetin e agjentëve antimikrobikë.
Llogaritni përqendrimin minimal të çrrënjosjes së biofilmit (MBEC) bazuar në përqendrimin e kërkuar për të eliminuar qelizat e qëndrueshme të biofilmit. - kontrolli i cilësisë
Siguroni kushte të qëndrueshme sonikacioni duke kalibruar rregullisht UIP400MTP dhe duke verifikuar që procesi i shkëputjes së biofilmit nuk rezulton në lizë ose shkatërrim të rëndësishëm të qelizave.
Përfshini kontrollet e duhura, të tilla si biofilma të patrajtuar dhe boshllëqe vetëm të mesme, për të vërtetuar rezultatet.

Qelizat biofilmike të formuara në kunjat u zhvendosën me anë të sonikacionit (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Gjermani, UIP250MTP) për 5 minuta në pllaka 96 pusesh që përmbajnë mjedis të freskët të kulturës për rikuperimin e qelizave.
(Foto dhe studim: ©de Oliveira et al., 2016)
Duke integruar UIP400MTP në fluksin e punës ASTM E2799-22, procesi i shkëputjes së biofilmit është optimizuar për aplikime konsistencë, efikasitet dhe performancë të lartë.
Literatura / Referencat
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
pyetjet e bëra shpesh
Çfarë është ASTM E2799?
ASTM E2799 është një metodë standarde testimi e krijuar nga ASTM International për Testimin e Efikasitetit të Dezinfektuesit kundër Biofilmit Pseudomonas aeruginosa duke përdorur analizën MBEC. Metoda përdoret gjerësisht për të vlerësuar formimin e biofilmit, efikasitetin antimikrobik dhe ndërveprimet në sipërfaqe të materialit, duke mundësuar krahasime të standardizuara në kërkimet e lidhura me biofilmin.
Cili është ndryshimi midis ASTM E2799-22 dhe ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 dhe ASTM E2799-17?
ASTM E2799 është një metodë testimi e standardizuar që vlerëson efikasitetin e dezinfektantëve kundër biofilmave Pseudomonas aeruginosa duke përdorur analizën MBEC (Minimum Biofilm Eradication Concentration). Kjo metodë ka pësuar disa rishikime për të rritur saktësinë dhe zbatueshmërinë e saj.
- ASTM E2799-11: Ky ishte publikimi fillestar i standardit, duke vendosur procedurat themelore për vlerësimin e efikasitetit të dezinfektuesit kundër biofilmave P. aeruginosa duke përdorur analizën MBEC.
- ASTM E2799-12: Ky rishikim përfshin përditësime të vogla teknike për të përmirësuar qartësinë dhe adresuar paqartësitë e identifikuara në versionin 2011.
- ASTM E2799-17: Në këtë përditësim, modifikime më të rëndësishme janë bërë në protokoll, duke përfshirë rregullime në procesin e kultivimit të biofilmit, aplikimin e trajtimit dhe procedurat e neutralizimit, duke synuar rritjen e riprodhueshmërisë dhe përafrimin me përparimet në kërkimin e biofilmit.
- ASTM E2799-22: Rishikimi më i fundit pasqyron kuptimin më të fundit shkencor dhe përparimet teknologjike në studimet e biofilmit. Ai përfshin metodologji të rafinuara për rritjen, trajtimin dhe analizën e biofilmit, duke siguruar që metoda e testimit të mbetet e rëndësishme dhe efektive për vlerësimet aktuale të efikasitetit të dezinfektuesit.
Çdo rishikim i ASTM E2799 është bërë për të përmirësuar besueshmërinë, riprodhueshmërinë dhe rëndësinë e metodës, duke siguruar që ajo të jetë aktuale me përparimin shkencor dhe teknologjik në fushën e kërkimit të biofilmit.
Cili është ndryshimi midis analizave MBEC dhe MBIC?
Dallimi kryesor midis analizave MBEC (Përqendrimi Minimal i Çrrënjosjes së Biofilmit) dhe MBIC (Përqendrimi Minimal Inhibitor i Biofilmit) qëndron në fokusin e tyre:
Analizat MBEC matet përqendrimi më i ulët i një agjenti antimikrobik që kërkohet për të çrrënjosur plotësisht biofilmat e paraformuar, duke vlerësuar aftësinë e një substance për të vrarë mikroorganizmat e ngulitur në biofilm.
Analizat MBIC përcaktoni përqendrimin më të ulët të një agjenti antimikrobik që parandalon formimin fillestar të biofilmave, duke vlerësuar aftësinë e tij për të penguar zhvillimin e biofilmit.
Të dyja analizat janë thelbësore për të kuptuar efikasitetin e antimikrobikëve kundër biofilmave, por synojnë faza të ndryshme të ciklit jetësor të biofilmit.
Mësoni se si përdoret sonikatori i mikropllakës UIP400MTP për heqjen e biofilmit në analizat MBIC!

Hielscher Ultrasonics prodhon homogjenizues tejzanor me performancë të lartë nga laboratori te madhësia industriale.