Protokolli ASTM E2799-22 për Vlerësimin Antimikrobik

Hielscher UIP400MTP është një sonikator i fuqishëm dhe efikas me shumë vrima, i dizajnuar për të racionalizuar hapin e sonikimit në protokollin ASTM E2799-22. Duke ofruar energji ultrasonike uniforme në të gjithë pllakën mikrotiter, UIP400MTP siguron shkëputje konsistente dhe të besueshme të biofilmeve nga kapakët me gozhdë pa dëmtuar qelizat ose duke komprometuar integritetin e mostrës. Kapaciteti i tij i lartë i përpunimit dhe operimi i lehtë për përdorues zvogëlojnë ndjeshëm kohën e përpunimit ndërsa rrisin riprodusueshmërinë, duke e bërë atë një zgjidhje ideale për laboratorët që kryejnë analizat e jetëgjatësisë së biofilmeve dhe testimin e efikasitetit antimikrobik.

ASTM E2799

ASTM E2799 është një metodë testi e standardizuar e dizajnuar për të vlerësuar efikasitetin e agjentëve antimikrobikë kundër biofilmeve, duke u fokusuar veçanërisht në Pseudomonas aeruginosa. Biofilmët janë komunitete komplekse mikrobike që ngjiten në sipërfaqe dhe shfaqin rezistencë të lartë ndaj trajtimeve antimikrobike, duke i bërë ato një sfidë të rëndësishme në kontekste shëndetësore, industriale dhe mjedisore. Kjo metodë përdor analizën e Përqendrimit Minimal të Zhdukjes së Biofilmave (MBEC) për të ofruar një kuadër të besueshëm dhe të riprodusueshëm për testimin e dezinfektuesve në kushte reale biofilmash.

Si kontribuon Sonikimi në ASTM E2799?

Sonikimi luan një rol kritik në protokollin ASTM E2799 duke lehtësuar shkëputjen e biofilmeve nga sipërfaqet e testit, duke siguruar një vlerësim të saktë të jetëgjatësisë mikrobike pas trajtimit. Duke përdorur energji ultrasonike të kontrolluar, protokolli arrin shqetësim efikas dhe konsistent të biofilmave pa dëmtuar qelizat, duke mundësuar rezultate të sakta dhe të riprodusueshme. Kjo e bën ASTM E2799 një mjet thelbësor për avancimin e kërkimeve mbi biofilmat dhe zhvillimin e strategjive efikase antimikrobike.

Si të Kryeni Analizën MBEC në përputhje me ASTM E2799-22

Protokolli ASTM E2799-22 përshkruan hapat për vlerësimin e efikasitetit të agjentëve antimikrobikë kundër biofilmeve. Kur përdoret sonikatori me pllakë mikrotiter Hielscher UIP400MTP, protokolli mund të përshtatet për të integruar këtë metodë të avancuar sonikimi për shkëputjen e biofilmave. Më poshtë është një përshkrim i hapave të përshtatur për përdorimin e sonikatorit me pllakë mikrotiter UIP400MTP:

1. Përgatitja e Biofilmeve
   Përgatitni një pllakë mikrotiter sterile me 96 vrima me kapakë të heqshëm me gozhdë.
   Inokulojini vrimat me një suspendim bakterial të standardizuar në një medium rritjeje të përshtatshëm.
   Vendosni kapakun me gozhdë mbi pllakë, duke siguruar që gozhdët të jenë plotësisht të zhytur në suspendimin bakterial.
   Inkuboni pllakën nën kushte të kontrolluara (p.sh., temperaturë dhe kohë) për të lejuar formimin e biofilmave në gozhdë.
2. Trajtimi me Agjentë Antimikrobikë
   Pas formimit të biofilmave, zëvendësoni mediumin me medium të freskët që përmban agjentët antimikrobikë të testit në përqendrime të ndryshme.
   Rivendosni kapakun me gozhdë dhe inkuboni nën kushtet e specifikuara në dizajnin e testit.
3. Përgatitja për Shkëputjen e Biofilmave
   Pas trajtimit, shpëlajini kapakun me gozhdë duke e zhytur atë në një tretësirë sterile shpëlarjeje për të hequr agjentët antimikrobikë residualë dhe qelizat planktonike të lidhura lirshëm.
4. Shkëputja e Biofilmave duke përdorur Sonikatorin UIP400MTP
   Përgatitni një pllakë të re mikrotiter me 96 vrima që përmban një medium rikuperimi (p.sh., supë neutralizuese).
   Shkëputni biofilmat duke vendosur kapakun me gozhdë në vrimat e pllakës së mediumit të rikuperimit.
   Vendosni pllakën në sonikatorin UIP400MTP, duke siguruar që kapaku dhe pllaka të jenë të alinuara si duhet.
   Vendosni sonikatorin në amplitudë 70%-80% dhe sonikoni për 3-4 minuta në modalitetin ciklik, për të siguruar shkëputje konsistente të biofilmave pa lizë qelizore.
5. Vlerësimi i Jetëgjatësisë së Biofilmave
   Pas sonikimit, përpunoni mediumin e rikuperimit që përmban qeliza të shkëputura biofilmash duke përdorur teknika standarde mikrobiologjike ose analitike, të tilla si:
   • Numërimi i njësisë që formon koloni (CFU): Kryeni hollime serike dhe vendosni në agar për numërimin e qelizave të gjalla.
   • Matjet e densitetit optik (OD): Përdorni analizë spektrofotometrike për të vlerësuar densitetin e qelizave.
   • Analizat e jetëgjatësisë bazuar në fluoreshencë: Kuantifikoni qelizat e gjalla dhe të vdekura duke përdorur ngjyrues fluoreshentë.
6. Analiza e të Dhënave
   Krahasoni të dhënat e jetëgjatësisë së biofilmeve të trajtuara dhe të patrajtuara për të përcaktuar efikasitetin e agjentëve antimikrobikë.
   Llogaritni përqendrimin minimal të zhdukjes së biofilmave (MBEC) bazuar në përqendrimin e kërkuar për të eliminuar qelizat e gjalla të biofilmave.
7. Kontrolli i Cilësisë
   Siguroni kushte konsistente sonikimi duke kalibruar rregullisht UIP400MTP dhe duke verifikuar që procesi i shkëputjes së biofilmave të mos rezultojë në lizë ose shkatërrim të rëndësishëm qelizor.
   Përfshini kontrolle të përshtatshme, të tilla si biofilma të patrajtuar dhe blanko vetëm me medium, për të validuar rezultatet.

Qelizat e biofilmave të formuara në gozhdë u shkëputën nga sonikimi (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Gjermani, UIP250MTP) për 5 min në pllaka me 96 vrima që përmbanin medium të freskët kulture për rikuperimin e qelizave.
(Foto dhe studim: ©de Oliveira et al., 2016)

Duke integruar UIP400MTP në rrjedhën e punës ASTM E2799-22, procesi i shkëputjes së biofilmave optimizohet për konsistencë, efikasitet dhe aplikime me kapacitet të lartë.