Protokolli i Kultivimit dhe Shkëputjes së Biofilmit Staphylococcus

Metodat e standardizuara janë thelbësore për rezultate të besueshme kërkimore. Këtu mund të gjeni një protokoll kultivimi dhe shkëputjeje për biofilmat stafilokokë. Ky protokoll fokusohet në përgatitjen e thjeshtë të mostrës me fuqi të lartë, duke përdorur sonikatorin e pllakave me shumë puse UIP400MTP për shkëputje efikase të biofilmit me kapacitet të lartë në pllaka me 96 pusi. Protokolli përmban gjithashtu hapa kyç për kultivimin, larjen dhe vizualizimin e biofilmit, me fokus në minimizimin e ndryshueshmërisë dhe sigurimin e riprodhueshmërisë.

Staphylococcus Biofilm dhe Kërkime Antibiotike

Biofilmat e stafilokokut luajnë një rol kritik në infeksionet e vazhdueshme për shkak të rezistencës së tyre ndaj antibiotikëve dhe përgjigjeve imune. Formimi i biofilmit siguron një mjedis mbrojtës për bakteret, duke i bërë infeksionet të vështira për t'u trajtuar. Kërkimet në biofilma shpesh përqendrohen në të kuptuarit e formimit, sjelljes dhe ndjeshmërisë së tyre ndaj antimikrobikëve, me theks në metodat me performancë të lartë për të përmirësuar rrjedhat eksperimentale të punës.
Sonicatori me pllaka me shumë puseta UIP400MTP ofron një avantazh të rëndësishëm në kërkimin e biofilmit duke mundësuar shkëputjen e shpejtë dhe efikase të biofilmave nga pllakat me 96 pusi. Kjo pajisje siguron energji uniforme tejzanor për të gjitha puset, duke siguruar rezultate të qëndrueshme duke minimizuar ndryshueshmërinë.

Protokolli për Kultivimin dhe Shkëputjen e Biofilmit të Stafilokokut

Më poshtë, ne ju udhëzojmë me një udhëzim hap pas hapi për procesin e kultivimit dhe shkëputjes së një biofilmi stafilokoku. Si hap shembullor analitik, ne ju tregojmë se si të përcaktoni sasinë spektrofotometrike të biomasës së kultivuar me ngjyrosje kristal violet.

Kultivimi i Staphylococcus Biofilm

Materialet e kërkuara:

• Pllaka mikrotitërore sterile me fund të sheshtë 96 pusesh, të trajtuara me kulturë indeve polistiren, me kapak
• Thyptic Soy Broth (TSB) me 0,25% glukozë
• Kabineti i sigurisë biologjike

Hapat:

1. Përgatitni një mjedis pune steril në një kabinet sigurie biologjike për të minimizuar ndotjen.
2. Shtoni TSB që përmban 0,25% glukozë në pusetat e pllakës së mikrotitrit. TSB pa glukozë në përgjithësi nuk mbështet formimin e biofilmit dhe duhet të përdoret vetëm si kontroll nëse kërkohet.
3. Inokuloni puset me shtame bakteriale të përgatitura siç përshkruhet më poshtë:
4. Përgatitni pezullime bakteriale, duke siguruar që të mos ketë grupime qelizash paraekzistuese duke i homogjenizuar pezullimet duke përdorur sonikacion ose duke i copëtuar grupet me një gjilpërë me matës 23 dhe vorbullim të shkurtër.
5. Mbyllni pllakën me kapakun e saj dhe inkuboni në kushte optimale për formimin e biofilmit (p.sh. 37°C për 24 orë).
6. Kryeni eksperimentin në tre kopje për çdo shtam bakterial (tre puse për soj) për të siguruar besueshmëri.
7. Ndani gjashtë puse për pjatë për kontrollet negative. Mund të testohen deri në 30 shtame për pjatë 96 pusesh.

Vizualizimi dhe Larja e Biofilmit

1. Pas inkubimit, hidheni me kujdes mediumin për të shmangur shqetësimin e biofilmit.
2. Lani çdo pus katër herë me kripë fiziologjike për të hequr bakteret planktonike.
3. Inspektoni pjesën e poshtme të puseve për njolla të bardha që tregojnë praninë e biofilmit.

Shkëputja e biofilmit duke përdorur Sonicatorin me shumë pllakë UIP400MTP

Konfigurimi dhe parametrat e pajisjes:

• UIP400MTP sonikues me pllaka me shumë pusi
• Cilësimet e funksionimit: 60% amplitudë, modaliteti i ciklit me 60 sekonda ON / 30 sekonda FAKT

Hapat:

1. Vendoseni pllakën e larë të mikrotitrit në platformën UIP400MTP.
2. Soniconi mostrat në cilësimet e rekomanduara (60% amplitudë, 60 sekonda ON, 30 sekonda FAKT). Rregulloni cilësimet për tendosjen e baktereve.
3. Filloni procesin e sonikimit për të shkëputur biofilmin. Valët ultrasonike prishin matricën e biofilmit, duke çliruar bakteret ngjitëse.
4. UIP400MTP siguron ekspozim uniform në të gjitha puset për rezultate të qëndrueshme shkëputjeje.

Hapi analitik: Kuantifikimi i biomasës së biofilmit të stafilokokut të shkëputur duke përdorur Crystal Violet (CV)

Materialet e kërkuara:

• 0.1% tretësirë kristal violet (CV).
• 95% etanol ose 30% acid acetik (për tretshmëri)
• Lexues i mikropllakës i aftë për të lexuar në 570 nm
• Pllaka sterile mikrotitërore për ngjyrosje

Hapat:

1. Përgatitja e Pllakës Ngjyrosëse: Transferoni 100 µL të suspensionit të biofilmit të shkëputur nga çdo pus i pllakës së sonikuar në pusetat përkatëse të një pllake mikrotitri të pastër, sterile 96-pushash. Kjo siguron një mjedis të qartë dhe uniform për ngjyrosje.
2. Ngjyrosja e biofilmit të shkëputur: Shtoni 150 µL tretësirë kristal violet 0,1% në çdo pus që përmban suspensionin e biofilmit të shkëputur. Hidhni butësisht me pipetë për të siguruar përzierjen e barabartë të suspensionit të biofilmit dhe kristal violet.
3. Inkubimi: Lëreni pjatën të inkubojë në temperaturën e dhomës për 15 minuta për të mundësuar që kristal vjollca të njollosë biomasën në mënyrë efektive.
4. Larja: Pas inkubimit, hidhni me kujdes tretësirën kristal vjollce nga pusetat pa e shqetësuar biomasën. Lani çdo pus tri herë me kripë fiziologjike sterile për të hequr njollën e palidhur.
5. Tharja: Lëreni pjatën të thahet në temperaturën e dhomës ose nën një kapuç steril për rrjedhjen e ajrit. Shmangni ngrohjen, pasi kjo mund të ndryshojë rezultatet.
6. Tretësira: Shtoni 200 µL etanol 95% (ose 30% acid acetik, në varësi të praktikave standarde laboratorike) në çdo pus për të tretur kristal violetën e lidhur. Përziejini butësisht duke vënë pipet ose duke e tundur pjatën për 10 minuta në temperaturën e dhomës.
7. Matja: Matni densitetin optik (OD) të tretësirës së kristal violet të tretshme në 570 nm duke përdorur një lexues mikropllakë.
8. Analiza e të dhënave: Zbrisni vlerën mesatare OD570 të kontrolleve negative (puset me TSB por pa inokulum bakterial) nga puset eksperimentale për të llogaritur ngjyrosjen e sfondit. Regjistroni dhe analizoni të dhënat.

Shënim: Kryeni eksperimentin në tre kopje për çdo kusht për të siguruar riprodhueshmëri. Siguroni trajtimin e duhur të kristal violetës dhe etanolit, duke iu përmbajtur protokolleve të sigurisë dhe asgjësimit.
 

Përfitimet kryesore të UIP400MTP me një shikim:

• Përpunimi me performancë të lartë: Projektuar posaçërisht për pllaka me shumë pus, duke ju lejuar të përpunoni mostra të shumta në të njëjtën kohë.
• Shpërndarja uniforme tejzanor: Siguron intensitet të barabartë tejzanor nëpër puse, duke siguruar rezultate të qëndrueshme në të gjitha mostrat.
• Përdorni çdo pllakë standarde: UIP400MTP mund të trajtojë çdo pjatë standarde me shumë pus, pjata Petri dhe raft tubash. Nuk kërkohen pllaka të shtrenjta të pronarit!
• Ndërfaqja miqësore për përdoruesit: Lehtë për t'u vendosur dhe kontrolluar, duke e bërë atë një mjet të shkëlqyer për rritjen e produktivitetit të laboratorit. Cilësimet e programueshme dhe automatizimi lehtësojnë standardizimin e procesit!