Protokolli i analizës MBEC duke përdorur sonikatorin e pllakës me 96 pus UIP400MTP

Analiza MBEC përdoret për të përcaktuar përqendrimin e agjentëve antimikrobikë të nevojshëm për të eliminuar biofilmat e formuar në kapakët me gozhdë. Për të vlerësuar jetëgjatësinë e biofilmave, biofilmat duhen së pari të shkëputen nga kapakët me gozhdë të një pllake me 96 pus. Sonikimi është metoda më e besueshme dhe efikase për këtë shkëputje. Sonikatori i pllakës me shumë pus UIP400MTP është projektuar posaçërisht për të procesuar pllakat e analizës me efikasitet dhe lehtësi maksimale, duke thjeshtuar dhe duke përshpejtuar analizat MBEC me kapacitet të lartë.

Sonikimi për shkëputjen e biofilmave

Sonikimi është një hap thelbësor në analizat e Përqendrimit Minimal të Zhdukjes së Biofilmave (MBEC), duke lejuar heqjen efektive të qelizave të biofilmës nga lidhja e tyre me sipërfaqen. Biofilmat janë në thelb komunitete të strukturuara mikroorganizmash të mbështjella në një matricë ekstracelulare, gjë që i bën ato dukshëm më rezistente ndaj agjentëve antimikrobikë në krahasim me qelizat planktonike. Gjatë analizave MBEC, sonikimi përdor valë ultrasonike për të gjeneruar kavitacion të kontrolluar, duke shkatërruar matricën e biofilmës dhe duke liruar qelizat e integruara në një tretësirë. Ky hap siguron që qelizat e biofilmës të shpërndahen në mënyrë të njëtrajtshme në mediumin e rikuperimit, duke lehtësuar vlerësime të sakta të jetëgjatësisë përmes metodave të kultivimit në pjata, hollimit ose spektrofotometrike. Pa një shkëputje të duhur të biofilmës, komponentët e mbetur të matricës mund të mbrojnë qelizat, duke çuar në nënvlerësimin e efikasitetit antimikrobik. Prandaj, sonikimi është i pazëvendësueshëm për të marrë vlera MBEC të besueshme dhe të riproshkueshme, që pasqyrojnë potencialin real të zhdukjes së agjentëve të testuar. Sonikatori i pllakës me shumë pus UIP400MTP lejon përgatitjen e lehtë të mostrave me kapacitet të lartë në pllakat e analizës.

Protokolli i analizës së Përqendrimit Minimal të Zhdukjes së Biofilmave (MBEC)

Hapi 1: Formimi i biofilmës

1. Përgatitni tretësirën bakteriale:
   Rritni bakteret në media të përshtatshme deri në fazën logaritmike të rritjes.
   Holloni kulturën bakteriale në një densitet optik të përcaktuar (p.sh., OD600 ~0,1).
2. Inokuloni pllakën me 96 pus:
   Shtoni tretësirën bakteriale (p.sh., 150–200 µL) në çdo pus të një pllake standarde me 96 pus mikrotiter.
3. Vendosni kapakun me gozhdë:
   Vendosni kapakun me gozhdë mbi pllakën e inokuluar për të lejuar formimin e biofilmës në sipërfaqet e gozhdëve.
4. Inkuboni pllakën:
   Inkuboni sistemin në një temperaturë të përshtatshme (p.sh., 37°C) për 24–48 orë pa trazuar për të promovuar rritjen e biofilmës.

Hapi 2: Trajtimi me agjentë antimikrobikë

• Përgatitni tretësirat antimikrobike:
  Përgatitni një gamë përqendrimesh antimikrobike në media të freskëta.
  Ekspozoni biofilmat ndaj agjentëve antimikrobikë:
  Hiqni kapakun me gozhdë nga kultura bakteriale dhe larë atë në ujë të kripur steril ose PBS për të hequr qelizat planktonike.
  Vendosni kapakun me gozhdë në një pllakë të re me 96 pus që përmban tretësirat antimikrobike.
• Inkuboni pllakën:
  Inkuboni për një periudhë të përcaktuar (p.sh., 24 orë) për të lejuar ekspozimin antimikrobik.

Hapi 3: Sonikimi me sonikatorin e pllakës me 96 pus UIP400MTP

Hapi i sonikimit është kritik për shkëputjen e biofilmave nga kapakët me gozhdë për të vlerësuar jetëgjatësinë. Ndiqni këto hapa për sonikatorin UIP400MTP:

1. Përgatitni sistemin:
   Mbushni një pllakë të re me 96 pus me medium rikuperimi (p.sh., lëng neutralizues ose medium rritjeje të freskët) në çdo pus.
2. Transferoni kapakun me gozhdë:
   Hiqni kapakun me gozhdë nga pllaka e trajtimit antimikrobik.
   Lani kapakun me gozhdë në ujë të kripur steril ose PBS për të hequr agjentët antimikrobikë të mbetur.
3. Vendosni pllakën dhe sonikatorin:
   Vendosni kapakun me gozhdë mbi pllakën e mediumit të rikuperimit.
   Vendosni pllakën e mediumit të rikuperimit mbi platformën e sonikatorit UIP400MTP, duke siguruar që pllaka të jetë e qendërzuar dhe e qëndrueshme.
4. Rregulloni parametrat e sonikimit:
   Caktoni parametrat e sonikimit në UIP400MTP (Rregullimet mund të përshtaten me biofilmin):
   Amplituda: 70–100%.
   Koha e sonikimit: 1–3 minuta (rregulloni bazuar në qëndrueshmërinë e biofilmës) në modalitetin ciklik.
5. Sonikoni:
   Filloni procesin e sonikimit. Vibrimi ultrasonik do të shkëpusë biofilmat nga sipërfaqet e gozhdëve në mediumin e rikuperimit.
6. Monitoroni procesin:
   Përdorni sensorin e temperaturës të lidhshëm për të monitoruar temperaturën e mostrës në pus. UIP400MTP mund të lidhet me një ftohës laboratori për ftohje.
7. Trajtimi pas sonikimit:
   Transferoni menjëherë mediumin e rikuperimit (tani që përmban biofilmat e shkëputura) në një pllakë të re sterile për analizën pasuese.

(A) Pllakë që përmban TSB me 2% glukozë e përdorur për formimin e biofilmës, rikuperimin e qelizave, dhe
përcaktimin e MIC dhe MBCB; (B) Kapak me gozhdë për formimin e biofilmave stafilokoke. përcaktimin e MIC dhe MBCB; (B) Kapak me gozhdë për formimin e biofilmave stafilokoke.
Qelizat e biofilmës të formuara në gozhdë u shkëputën me sonikim (Hielscher Ultrasound Technology) për 5 min në pllaka me 96 pus që përmbanin medium kulture të freskët për rikuperimin e qelizave.
(Foto dhe studim: ©de Oliveira et al., 2016)

Hapi 4: Vlerësimi i jetëgjatësisë

Kultivoni dhe rrisni biofilmat e shkëputura:

1. Kryeni hollime serike të mediumit të rikuperimit dhe kultivojini në agar për të numëruar njësitë formuese të kolonive (CFU).
   Në mënyrë alternative, përdorni një analizë jetëgjatësie kolorimetrike ose bazuar në fluoreshencë.
2. Regjistroni rezultatet:
   Përcaktoni MBEC si përqendrimin më të ulët të antimikrobikut që zhduk jetëgjatësinë e detektueshme të biofilmës.

Projektim, Prodhim dhe Konsulencë – Cilësi e Bërë në Gjermani

Ultrasonikatorët Hielscher janë të njohur për standardet e tyre më të larta të cilësisë dhe projektimit. Qëndrueshmëria dhe operimi i lehtë lejojnë integrimin e qetë të ultrasonikatorëve tanë në impiantet industriale. Kushtet e vështira dhe ambientet kërkesëtare trajtohen lehtësisht nga sonikatorët Hielscher.

Hielscher Ultrasonics është një kompani e certifikuar ISO dhe i jep rëndësi të veçantë ultrasonikatorëve me performancë të lartë që karakterizohen nga teknologji moderne dhe lehtësi përdorimi. Sigurisht, ultrasonikatorët Hielscher janë në përputhje me CE dhe plotësojnë kërkesat e UL, CSA dhe RoHs.

Lexoni këtu se si përdoret UIP400MTP për shkëputjen e biofilmave si hap përgatitjeje të mostrës gjatë protokollit ASTM E2799 për testimin e efikasitetit të dezinfektuesve kundër biofilmës Pseudomonas aeruginosa duke përdorur analizën MBEC.