Nxjerrja e beta-glukaneve nga kërpudhat duke përdorur ultratinguj
Materialet dhe Pajisjet
- Kërpudha (p.sh., 100 g kërpudha të prera ose të prera në feta)
- Ujë i ftohtë i distiluar (p.sh., 500 ml)
- Blender ose mulli
- Gota ose balona qelqi
- Letër filtri ose një konfigurim filtrimi me vakum
- Centrifuga (opsionale)
- Alkooli (p.sh. etanol) për reshje
- Frigorifer
- Furra e tharjes
Protokolli i Ekstraktimit të Beta-Glukanit
- Grini ose shtypni kërpudhat (p.sh. Chaga ose Lion’ kërpudha mane) në një grimca të trashë përafërsisht. 1 deri në 3 milimetra. Për shembull, përdorni 100 g grimca të thata të kërpudhave.
- Më pas shtoni grimcat e kërpudhave në një gotë ose balonë qelqi.
- Më pas, shtoni 500 ml ujë të distiluar në gotën që përmban grimcat e kërpudhave që do të nxirren. Raporti ujë-kërpudha mund të ndryshojë në varësi të llojit specifik të kërpudhave dhe madhësisë së grimcave.
- Pasi të keni trazuar llumin, sonikoni përzierjen duke përdorur një homogjenizues laboratorik tejzanor (p.sh., UP400St me sonotrode 22 mm në amplitudë 100% ose UP200Ht me sonotrode 14 mm në amplitudë 100%) dhe mbani një temperaturë nën 90°C. Temperaturat më të ulëta ndihmojnë në ruajtjen e komponimeve të ndjeshme ndaj nxehtësisë, të tilla si beta-glukanet gjatë ekstraktimit. Sonicate për përafërsisht. 5 deri në 10 minuta kur përdorni UP400St dhe për 10 deri në minuta kur përdorni UP200Ht, përkatësisht. Ju lutemi vini re se temperatura dhe koha e nxjerrjes mund të ndryshojnë në varësi të fuqisë tejzanor të përdorur. Natyrisht, vëllimet më të mëdha do të kërkojnë kohë më të gjata të sonikimit.
- Filtroni përzierjen e sonikuar përmes letrës filtri ose përdorni një konfigurim filtrimi me vakum për të ndarë lëngun (që përmban beta-glukanet e nxjerra) nga mbetjet e ngurta të kërpudhave.
- Më pas precipitoni beta-glukanet nga lëngu duke shtuar alkool (p.sh. etanol). Në mënyrë tipike, ju mund të përdorni 2-3 vëllime alkooli për reshje.
- Pas kësaj, ruajeni përzierjen në frigorifer për disa orë për të lejuar që beta-glukanet të precipitojnë.
- Pas precipitimit, mund ta dekantoni lëngun me kujdes dhe të grumbulloni precipitatin beta-glukan.
- Në fund thajini beta-glukanet në furrë në temperaturë të ulët (p.sh. 40-50°C) derisa të hiqet i gjithë alkooli dhe të përftoni një pluhur të thatë.
Kërpudhat shfaqin ndryshime në karakteristikat e tyre. Prandaj, procesi i nxjerrjes së beta-glukanit mund të ndryshojë bazuar në faktorë të tillë si speciet specifike të kërpudhave, gjendja e kërpudhave (të thata ose të freskëta), madhësia e grimcave dhe temperatura e nxjerrjes. Për të optimizuar procedurën tuaj të nxjerrjes, merrni parasysh eksperimentimin me parametra të ndryshëm, duke përfshirë ndryshimin e raporteve të ngurtë ndaj lëngut, rregullimin e temperaturave, eksplorimin e tretësve të ndryshëm dhe testimin e kohëzgjatjeve të ndryshme të sonikacionit dhe cilësimeve të amplitudës.
Ekstraktimi enzimatik i beta-glukanit i asistuar me ultratinguj
Ekstraktimi enzimatik me ndihmën tejzanor është një metodë e përdorur për nxjerrjen e beta-glukaneve nga kërpudhat duke përdorur një kombinim enzimash dhe valësh tejzanor. Ky proces rrit efikasitetin e nxjerrjes duke thyer muret qelizore të kërpudhave dhe duke lehtësuar lirimin e beta-glukaneve.
Rritja e shkallës së nxjerrjes së beta-glukanit nga kërpudhat
Pasi të keni krijuar një protokoll të nxjerrjes së beta-glukanit që plotëson kërkesat tuaja, rritja e procesit të nxjerrjes mund të jetë një përpjekje e drejtpërdrejtë.
Rritja e shkallës së nxjerrjes së grupit
Nëse planifikoni të rriteni duke përdorur një metodë të nxjerrjes së grupit, ju rekomandojmë të rritni volumin e serisë duke mbajtur konstante raportet e ngurtë ndaj lëngut dhe të gjithë parametrat e tjerë. Nëse vazhdoni të përdorni të njëjtin homogjenizues tejzanor, sigurohuni që të rrisni proporcionalisht kohën e sonikimit. Për tufa që tejkalojnë 1 litër, mund të merrni parasysh përfshirjen e një përzierësi të ngadaltë për të ruajtur pezullimin e grimcave dhe për të përmirësuar uniformitetin e nxjerrjes. Imazhi më poshtë tregon një konfigurim të nxjerrjes së grumbullit prej 8 litrash duke përdorur një homogjenizues tejzanor UP400St në kombinim me një përzierës laboratori.
Nxjerrja në linjë e kërpudhave
Për ata që janë të interesuar në nxjerrjen e vazhdueshme të sasive më të mëdha të beta-glukaneve nga kërpudhat, Hielscher Ultrasonics ofron reaktorë të qelizave rrjedhëse të krijuar për nxjerrjen e materialit botanik. Nëse kjo vlen për ju, ju inkurajojmë të na kontaktoni drejtpërdrejt për më shumë informacion. Ekipi ynë teknik do të jetë i lumtur të ndihmojë në përcaktimin e konfigurimit më të përshtatshëm për nevojat tuaja specifike. Megjithatë, kryerja e eksperimentit në shkallë laboratorike të përmendur më parë me speciet tuaja specifike të kërpudhave mund të jetë e paçmueshme për të kuptuar kërkesat e sakta të procesit. Imazhi më poshtë tregon një reaktor me qeliza me rrjedhje të madhe me një homogjenizues tejzanor UIP4000hdT për nxjerrjen e beta-glukaneve me afërsisht 50 deri në 200 litra llucë tretës kërpudhash në orë.
Përqendrimi empirik i beta-glukanit të specieve të kërpudhave
Më poshtë, do të gjeni një listë të përqendrimit empirik të beta-glukanit që është nxjerrë nga lloje të ndryshme kërpudhash.
Llojet e kërpudhave | Gjithsej 1,3-1,6-β-D-glukan (g/100g masë e thatë) |
---|---|
Boletus pinophilus | 9,8% |
Suillus granulatus | 13,3% |
Craterellus cornucopioides | 4,5% |
Suillus variegatus | 13,7% |
Hydnum repandum | 4,1% |
Gyroporus cyanescens | 14,3% |
Tricholomopsis rutilans | 10,2% |
Agaricus bisporus (portobello) | 4% |
Agaricus bisporus (cremini) | 4% |
Auricularia auricular-judae | 16,8% |
Përmbajtja e 1,3-1,6-β-D-glukanit në kërpudhat e analizuara në rritje dhe kultivim të egër, Burimi:Mirończuk-Chodakowska et al. (2017): Vlerësimi sasior i përmbajtjes së 1,3-1,6-Β-D-glukanit në speciet në rritje të egër të kërpudhave polake ushqimore. Rocz Panstw Zakl Hig 2017;68(3):281-290.

SonoStation: Sistemi celular me çelës për përpunimin tejzanor – i përbërë nga shpërndarës tejzanor, pompë, përzierës dhe rezervuar

Homogjenizues tejzanor UIP4000hdT për përpunimin e afërsisht 50 deri në 200 litra lëng tretës kërpudhash në orë
Kuantifikimi i përqendrimit të ekstraktit të beta-glukanit të kërpudhave
Përqendrimi i beta-glukanit pas ekstraktimit mund të matet duke përdorur metoda të ndryshme, në varësi të llojit të beta-glukanit dhe kërkesave specifike të analizës. Metodat e zakonshme për përcaktimin sasior të përqendrimit të beta-glukanit janë renditur më poshtë. Sigurisht, zgjedhja e metodës varet nga faktorë të tillë si saktësia e kërkuar dhe pajisjet e disponueshme.
-
Metoda gravimetrike
- Parimi: Kjo metodë bazohet në precipitimin e beta-glukaneve me etanol, i ndjekur nga tharja dhe peshimi i precipitatit.
- Procedura: Mostra tretet në ujë, trajtohet me etanol për të precipituar beta-glukanet dhe më pas precipitati mblidhet, thahet dhe peshohet.
- Përparësitë: E thjeshtë dhe e përdorur gjerësisht.
- Kufizimet: Më pak të sakta në krahasim me metodat e tjera.
-
Metodat kolorimetrike
- Parimi: Këto metoda përfshijnë reaksione ngjyrash me reagentë specifikë që prodhojnë një ndryshim ngjyre në proporcion me përqendrimin e beta-glukanit.
-
Shembuj:
- Metoda fenol-acid sulfurik: Kjo metodë përfshin trajtimin e kampionit me acid sulfurik të koncentruar dhe fenol, i cili e kthen tretësirën në portokalli. Intensiteti i ngjyrës është proporcional me përqendrimin e beta-glukanit.
- Metoda Anthrone: Reagenti Anthrone reagon me beta-glukanet për të prodhuar një ngjyrë blu-jeshile dhe matet intensiteti i ngjyrës.
- Përparësitë: E ndjeshme dhe e përshtatshme për analiza me performancë të lartë.
- Kufizimet: Ndërhyrja nga komponimet e tjera dhe nevoja për reagentë specifikë.
-
Analizat enzimatike
- Parimi: Analizat enzimatike përdorin enzima të tilla si β-glukanaza për të zbërthyer beta-glukanet në sheqerna më të thjeshta, dhe sheqernat e liruara maten.
- Avantazhet: Shumë specifik dhe i saktë.
- Kufizimet: Kërkon pajisje dhe reagentë të specializuar.
-
Kromatografia e lëngshme me performancë të lartë (HPLC)
- Parimi: HPLC ndan dhe vlerëson përbërjet bazuar në ndërveprimet e tyre me një kolonë kromatografike.
- Procedura: Beta-glukanet hidrolizohen në monosakaride, dhe sheqernat që rezultojnë ndahen dhe kuantifikohen me HPLC.
- Avantazhet: Shumë i saktë dhe i përshtatshëm për mostra komplekse.
- Kufizimet: Kërkon pajisje dhe ekspertizë të specializuar.
-
Imunoterapia specifike
- Parimi: Analizat imunologjike përdorin antitrupa specifikë për beta-glukanet për të përcaktuar sasinë e përqendrimit të tyre.
-
Shembuj:
- ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay): Në këtë metodë, një antitrup i lidhur me enzimë prodhon një ndryshim ngjyre kur lidhet me beta-glukanet.
- Analizat e rrjedhës anësore: Këto janë teste të shpejta që ofrojnë një rezultat të dukshëm në një shirit provë.
- Përparësitë: Specifikimi dhe ndjeshmëri e lartë.
- Kufizimet: Kërkon antitrupa specifikë dhe mund të jetë më i kushtueshëm.