Përgatitja e mostrave FFPE me kapacitet të lartë përpunimi: Ekstraktimi i proteinave dhe fragmentimi i acideve nukleike me forca prerëse
Me ultrasonikatorin UIP400MTP me kapacitet të lartë përpunimi, Hielscher Ultrasonics trajton sfidat e përgatitjes së indeve të fiksuara në formalinë dhe të përfshira në parafinë (FFPE). Mësoni se si trajtimi me ultratinguj përpunon një numër të madh mostrash FFPE për deparafinizimin e tyre, lizën e indeve, homogjenizimin, ekstraktimin e proteinave dhe fragmentimin e ADN-së/ARN-së me forca prerëse! Përfitoni nga përgatitja me ultratinguj e indeve FFPE – përpunimi i një numri të madh mostrash në pllaka me shumë puse! Përftoni mostra me cilësi të lartë dhe siguroni një numër të madh mostrash për rezultate të besueshme kërkimore! Dhe së fundi, por jo më pak e rëndësishme, kurseni kohë dhe para!
Përgatitja e mostrave FFPE e lehtësuar nga sonikimi me kapacitet të lartë përpunimi
Fiksimi në formalinë dhe përfshirja në parafinë (FFPE) është metoda më e zakonshme për ruajtjen dhe arkivimin e indeve të ngurta. Ekstraktimi i biomolekulave nga mostrat e indeve FFPE shpesh paraqet sfida të konsiderueshme për shkak të cilësisë së mostrave të ruajtura. Këto mostra, të cilat janë burime të paçmueshme në biologjinë molekulare dhe kërkimin klinik, ofrojnë një burim të pasur informacioni biologjik për studime retrospektive dhe validimin e biomarkerëve diagnostikues. Megjithatë, procesi i fiksimit në formalinë dhe përfshirjes në parafinë, ndonëse ruan arkitekturën dhe morfologjinë e indeve, e ndërlikon ekstraktimin e acideve nukleike dhe proteinave me cilësi të lartë. Formalina nxit formimin e lidhjeve të kryqëzuara të acideve nukleike dhe proteinave, duke çuar në fragmentim molekular dhe modifikime kimike. Mësoni se si ultrasonikatori UIP400MTP me kapacitet të lartë përpunimi i kapërcen sfidat e përgatitjes së mostrave FFPE!
Ultrasonikator për përgatitjen efikase të mostrave FFPE
- Rrjedhë pune e lehtë për t’u përdorur: Procese të thjeshtuara që janë të lehta për përdoruesin.
- Deparafinizimi, ekstraktimi i proteinave, fragmentimi i ADN-së / ARN-së me forca prerëse
- Përpunim i shpejtë me kapacitet të lartë: Trajtim efikas i pllakave me shumë puse.
- Deparafinizim efektiv: Tretshmëri e përmirësuar e proteinave.
- Tretës jotoksikë: Shmang përdorimin e tretësve organikë të dëmshëm si ksileni.
Sonikatori UIP400MTP me kapacitet të lartë përpunimi për përpunimin e mostrave FFPE me kapacitet të lartë në pllaka me shumë puse
Përparime në teknikat e ekstraktimit të proteinave nga indet FFPE
Hielscher Ultrasonics trajton sfidat e përgatitjes së mostrave FFPE me kapacitet të lartë përpunimi. Sonikimi përdor valë ultrasonike për të gjeneruar dridhje mekanike dhe kavitacion të fokusuar, duke shpërbërë në mënyrë efektive strukturat qelizore dhe duke përmirësuar tretshmërinë e biomolekulave. Kjo teknikë është bërë e njohur për aftësinë e saj për të rritur efikasitetin dhe rendimentin e ekstraktimit të acideve nukleike dhe proteinave nga indet FFPE, si dhe të fragmentimit të ADN-së dhe ARN-së me forca prerëse për përgatitjen e bibliotekave. Është shumë e rëndësishme të theksohet se trajtimi me ultratinguj duke përdorur sonikatorin UIP400MTP për pllaka me shumë puse ruan integritetin e këtyre biomolekulave për aplikimet pasuese.
Fragmentimi i acideve nukleike me forca prerëse duke përdorur trajtimin me ultratinguj me kapacitet të lartë përpunimi
Aparati ultrasonik UIP400MTP për pllaka me shumë gropëza, për përdorim në kushte me kapacitet të lartë përpunimi, e çon përgatitjen e mostrave FFPE në një nivel të ri. Kjo metodë sonikimi të pllakave me shumë gropëza ofron një zgjidhje efikase dhe të besueshme për përpunimin e njëkohshëm të shumë mostrave. Ajo lehtëson ekstraktimin e shpejtë dhe të riprodhueshëm të ADN-së, ARN-së dhe proteinave, të cilat janë thelbësore për teknika të ndryshme analitike, përfshirë sekuencimin e gjeneratës së ardhshme (NGS), PCR-në sasiore dhe analizat proteomike. Optimizimi i parametrave të sonikimit, si amplituda, kohëzgjatja dhe temperatura, përmirëson më tej cilësinë dhe sasinë e biomolekulave të ekstraktuara.
Aparati i sonikimit UIP400MTP për pllaka me shumë gropëza ofron përparësi të konsiderueshme për fragmentimin dhe copëtimin nga forcat prerëse të ADN-së dhe ARN-së nga indi FFPE. Një nga veçoritë më të spikatura të këtij sistemi është aftësia e tij për të arritur madhësi të fragmenteve të ADN-së dhe ARN-së brenda një intervali të ngushtë, duke mundësuar rregullimin e saktë të intensitetit të sonikimit për të përftuar fragmente të shkurtra prej 150–200 çiftesh bazash (bp) ose fragmente më të gjata prej 15–20 kiloçiftesh bazash (kbp). Kjo shkathtësi e bën UIP400MTP të domosdoshëm për aplikimet e sekuencimit si me lexime të shkurtra, ashtu edhe me lexime të gjata, duke siguruar rezultate me cilësi të lartë për sekuencimin e gjeneratës së ardhshme (NGS) dhe sekuencimin e të gjithë gjenomit (WGS). Kontrolli i tij i saktë mbi madhësinë e fragmenteve është thelbësor për studiuesit në të gjitha fushat e gjenomikës, pasi mundëson përgatitjen e mostrave sipas specifikimeve.
Na kontaktoni për zgjidhje të avancuara për indet FFPE
Zbuloni aparatin e sonikimit UIP400MTP për pllaka me shumë gropëza për rikuperimin efikas të biomolekulave nga mostrat FFPE, duke ruajtur integritetin e acideve nukleike dhe proteinave të ekstraktuara dhe duke siguruar riprodhueshmërinë e rezultateve. Kjo teknologji integrohet pa vështirësi me rrjedha të tjera pune përgatitore dhe analitike, duke thjeshtuar dhe përmirësuar hulumtimet molekulare që përdorin arkivat e indeve FFPE.
Fiksuesit dhe efektet e tyre
Fiksimi është një hap thelbësor në përgatitjen e mostrave, i cili ruan strukturat qelizore, ndalon reaksionet biokimike dhe parandalon degradimin. Përdoren fiksues të ndryshëm në varësi të kërkesave specifike eksperimentale. Dy fiksuesit më të zakonshëm janë formaldehidi dhe paraformaldehidi, të cilët formojnë lidhje të kryqëzuara ndërmjet proteinave dhe acideve nukleike, duke ruajtur morfologjinë dhe antigjenicitetin e qelizave dhe indeve. Fiksues të tjerë, si etanoli, metanoli dhe glutaraldehidi, përdoren për aplikime specifike.
Fiksuesit me formaldehid dhe paraformaldehid formojnë ura metilenike ndërmjet grupeve amino, duke shkaktuar formimin e lidhjeve të kryqëzuara ndërmjet proteinave. Ky proces imobilizon në mënyrë efektive përbërësit qelizorë, duke ruajtur integritetin e tyre gjatë hapave të mëvonshëm të analizës. Efektet e këtyre fiksuesve mund të ndikohen nga faktorë si përqendrimi, pH-ja dhe temperatura, dhe optimizimi i këtyre parametrave është thelbësor për të siguruar ruajtjen optimale të strukturave qelizore.
Përparësitë e përgatitjes së mostrave FFPE me ultratinguj
Trajtimi me ultratinguj është një teknikë e fuqishme për shpërbërjen e qelizave dhe indeve të fiksuara, e cila i tejkalon teknikat konvencionale. Ai ofron disa përparësi të dukshme ndaj metodave tradicionale të lizës:
- Shpejtësia dhe efikasiteti: Liza me ultratinguj mundëson shpërbërjen e shpejtë të qelizave dhe indeve, duke ulur ndjeshëm kohën e përpunimit krahasuar me metodat mekanike ose kimike të lizës. Valët zanore me frekuencë të lartë, të gjeneruara nga sonda ultrasonike, krijojnë forca mekanike prerëse, duke shkaktuar shpërbërjen e strukturave qelizore të fiksuara. Kjo shpërbërje e shpejtë dhe efikase u mundëson studiuesve të përpunojnë vëllime të mëdha mostrash brenda një kohe të shkurtër.
- E butë dhe e rregullueshme: Liza me ultratinguj ofron një mekanizëm të butë shpërbërjeje që minimizon dëmtimin e biomolekulave të ndjeshme, si proteinat, acidet nukleike dhe enzimat. Ndryshe nga metodat mekanike që gjenerojnë nxehtësi ose forca prerëse të tepërta, liza me ultratinguj përdor kavitacion të kontrolluar për të shpërbërë qelizat, duke ruajtur njëkohësisht integritetin dhe funksionalitetin e përbërësve brendaqelizorë.
- Shkathtësia: Liza me ultratinguj mund të zbatohet me fiksues të ndryshëm, duke u mundësuar studiuesve të punojnë me një gamë të gjerë mostrash të fiksuara. Pavarësisht nëse përdoret formaldehid, paraformaldehid apo fiksues alternativë, liza me ultratinguj siguron vazhdimisht shpërbërje efikase, duke garantuar rikuperim optimal të përbërësve qelizorë.
- Rendiment dhe cilësi e lartë: Liza me ultratinguj mundëson rendimente të larta të përbërësve qelizorë të paprekur falë aftësisë së saj për të shpërbërë në mënyrë të njëtrajtshme qelizat dhe indet e fiksuara. Kjo mundëson që aplikimet pasuese, si analiza e proteinave, ekstraktimi i acideve nukleike dhe analizat enzimatike, të japin rezultate të besueshme dhe të riprodhueshme.
- Pajtueshmëria me automatizimin: Liza me ultratinguj mund të integrohet lehtësisht në sisteme të automatizuara, duke mundësuar përpunimin e mostrave me kapacitet të lartë. Kjo pajtueshmëri u mundëson studiuesve të përmirësojnë rrjedhën e punës dhe të rrisin produktivitetin, veçanërisht në studime në shkallë të gjerë.
Sonikatori UIP400MTP për pllaka me 96 puse për sonikimin e pllakave të mikrotitrimit dhe pllakave me shumë puse
Liza me ultratinguj ka revolucionarizuar shpërbërjen e qelizave dhe indeve të fiksuara, duke ofruar përparësi të shumta krahasuar me metodat tradicionale të lizës. Shpejtësia, efikasiteti, selektiviteti, shkathtësia, rendimenti i lartë dhe pajtueshmëria e saj me automatizimin e bëjnë atë një mjet të domosdoshëm në kërkimet në biologjinë molekulare dhe bioteknologji. Duke ofruar si sonikatorë pa kontakt, ashtu edhe sonikatorë me sondë, Hielscher Ultrasonics ofron homogjenizuesin me ultratinguj më të përshtatshëm për aplikimin tuaj në shkencat e jetës. Pavarësisht nëse dëshironi të përpunoni njëkohësisht mostra të veçanta, disa mostra apo një numër shumë të madh mostrash, ne do t’ju ofrojmë sonikatorin më të mirë që përmbush kërkesat tuaja kërkimore dhe diagnostikuese.
Lexoni më shumë rreth sonikatorëve pa kontakt Hielscher për përgatitjen e shumë mostrave dhe përgatitjen e mostrave me kapacitet të lartë përpunimi!
- investim i vetëm
- përdorni materialet tuaja harxhuese
- pa kosto të përsëritura për aksesorë dhe materiale harxhuese ekskluzive të prodhuesit
- kapacitet i lartë përpunimi
- kontroll me saktësi të lartë
- teknologji e fjalës së fundit
- besueshmëri dhe qëndrueshmëri
- kontroll i rregullueshëm dhe i saktë i procesit
- cilësi industriale: mund të funksionojë vazhdimisht 24/7
- i lehtë dhe i sigurt për t’u përdorur
- pak mirëmbajtje
Lexoni më shumë rreth aplikimeve të sonikatorëve në shkencat e jetës!
Sonikatori për pllaka UIP400MTP për çdo pllakë me 96 puse, pllakë mikrotitrimi dhe pllakë me shumë puse.
Projektim, prodhim dhe këshillim – Cilësi e prodhuar në Gjermani
Pajisjet me ultratinguj Hielscher njihen për standardet e tyre më të larta të cilësisë dhe projektimit. Qëndrueshmëria dhe përdorimi i lehtë mundësojnë integrimin pa vështirësi të pajisjeve tona me ultratinguj në impiante industriale. Pajisjet me ultratinguj Hielscher përballojnë lehtësisht kushte të ashpra dhe mjedise kërkuese.
Hielscher Ultrasonics është një kompani e certifikuar sipas ISO dhe i kushton vëmendje të veçantë pajisjeve me ultratinguj me performancë të lartë, që ofrojnë teknologjinë e fjalës së fundit dhe lehtësi përdorimi. Sigurisht, pajisjet me ultratinguj Hielscher janë në përputhje me CE dhe përmbushin kërkesat e UL, CSA dhe RoHs.
Na kontaktoni! / Na pyesni!
Pajisja me ultratinguj UIP400MTP: Përgatitje e mostrave FFPE me kapacitet të lartë përpunimi në pllakë me shumë puse
Pyetje të shpeshta
Më poshtë u përgjigjemi pyetjeve të shpeshta që lidhen me përgatitjen e indeve FFPE dhe trajtimin me ultratinguj të mostrave FFPE.
Si përgatitet indi FFPE?
Hapat për përgatitjen e indeve FFPE: Trajtimi dhe përpunimi i kujdesshëm i indeve të freskëta janë vendimtarë për të përftuar mostra FFPE me cilësi të lartë. Sigurimi i ruajtjes së arkitekturës qelizore, acideve nukleike dhe proteinave është thelbësor për saktësinë e analizave të mëtejshme. Çdo hap – nga marrja deri te përfshirja në parafinë – kërkon saktësi për të ruajtur integritetin e mostrës për analiza të ndryshme, përfshirë ekzaminimin histologjik, imunohistokiminë dhe studimet molekulare. Kur kryhet siç duhet, ky proces fiksimi dhe përfshirjeje në parafinë siguron që indi i ruajtur të pasqyrojë me saktësi gjendjen in vivo, duke mundësuar rezultate të besueshme diagnostikuese dhe kërkimore.
Ju udhëzojmë nëpër 6 hapat kryesorë të procesit të përfshirjes në parafinë të mostrave të indeve FFPE.
- Marrja e indeve
Si biopsitë nga gjitarët e gjallë, ashtu edhe kulturat indore janë burime të përshtatshme për të siguruar inde të freskëta për përgatitjen e mostrave FFPE.
Është e rëndësishme të përdoret një teknikë aseptike: Përdorni instrumente dhe doreza sterile për të shmangur kontaminimin. Në kushte ideale, merrini indet në një mjedis steril, si një sallë operacioni ose një kabinet me rrjedhje laminare.
Meqë mostra është shumë e brishtë, trajtimi i saj me kujdes është thelbësor: Minimizoni vonesat në përpunim dhe filloni menjëherë përpunimin e mëtejshëm të indit pas heqjes kirurgjikale. Kjo është vendimtare për të parandaluar autolizën dhe degradimin. Mbajeni indin në temperaturën e dhomës; shmangni ngrirjen, pasi ajo mund të shkaktojë formimin e kristaleve të akullit dhe dëmtimin e indit. - Fiksimi i indeve
Së pari, indi trajtohet me një tretësirë fiksuese: Përdorni formalinë 10% të tamponuar në pH neutral (NBF), e cila është e barasvlershme me formaldehid 4% në ujë, të tamponuar në pH neutral.
Zhyteni indin plotësisht në formalinë. Siguroni një raport vëllimor të fiksuesit ndaj indit prej të paktën 10:1. Koha e fiksimit zakonisht varion nga 6 deri në 24 orë, në varësi të llojit dhe madhësisë së indit. Është e rëndësishme që fiksuesi të mund të depërtojë plotësisht në ind. Megjithatë, fiksimi i tepërt mund të çojë në formimin e lidhjeve të kryqëzuara që e vështirësojnë rikthimin e antigjeneve, ndërsa fiksimi i pamjaftueshëm mund të rezultojë në ruajtje të dobët të indit. - Prerja e indeve në përmasat e duhura
Së dyti, priteni indin në një trashësi prej rreth 3–5 mm për të mundësuar depërtimin e mjaftueshëm të fiksuesit. Siguroni orientimin e duhur të indit për të përfshirë strukturat histologjike përkatëse. Kjo lehtëson procesin e ekstraktimit kur indi përdoret më vonë për analizë. - Përpunimi i mostrës së fiksuar
Tani, indi i fiksuar duhet të dehidratohet: Pas fiksimit, indi duhet të dehidratohet për të siguruar depërtimin e plotë të dyllit të parafinës. Kalojeni indin nëpër një seri tretësirash etanoli me përqendrime në rritje (70%, 80%, 90% dhe 100%) për të larguar ujin.
Kthjellimi me ksilen: Dylli i parafinës është i patretshëm në ujë, por i tretshëm në ksilen. Prandaj, uji në ind duhet të zëvendësohet me ksilen. Megjithatë, vetë ksileni është i patretshëm në ujë, por i tretshëm në alkool, gjë që kërkon një hap të ndërmjetëm ku uji zëvendësohet fillimisht me alkool. Zhyteni indin në ksilen ose në një zëvendësues të ksilenit për të larguar etanolin dhe për ta përgatitur indin për infiltrimin me parafinë.
Infiltrimi me parafinë: Përfshijeni indin në dyllë parafine të shkrirë, duke siguruar infiltrimin e plotë. Ky hap zakonisht përfshin disa ndërrime të parafinës për të siguruar ngopjen e plotë. - Përfshirja e indit në parafinë
Në këtë hap, indi formohet në një bllok indor: Vendoseni indin në një kallëp me orientimin e dëshiruar dhe derdhni mbi të parafinë të shkrirë. Lëreni parafinën të ngurtësohet duke e ftohur në temperaturën e dhomës ose mbi një pllakë të ftohtë. - Prerja në seksione dhe montimi
Mikrotomia: Për ta prerë indin e përfshirë në parafinë, përdorni një mikrotom për të prerë seksione të holla (zakonisht 4–5 mikrometra) nga blloku i parafinës. Më pas mostra montohet, duke i vendosur seksionet mbi lamela qelqi për ngjyrosjen dhe analizën mikroskopike të mëtejshme.
Në fund, kontrolloni cilësinë histologjike: Vlerësoni seksionet e para nën mikroskop për të siguruar fiksimin dhe përpunimin e duhur. Përshtatni protokollet sipas nevojës, bazuar në llojin e indit dhe cilësinë e vërejtur.
Indet FFPE mund të përdoren për të përftuar RNA, DNA dhe proteina, si dhe për të zbuluar shenja të kancerit ose të sëmundjeve të tjera. Ato mund të ruhen për vite dhe janë një pjesë thelbësore e mënyrës se si studiuesit dhe mjekët përdorin mostrat e indeve për diagnostikim dhe kërkim shkencor.
Cilat janë problemet dhe sfidat e zakonshme me indet FFPE?
Mostrat e indeve të fiksuara në formalinë dhe të përfshira në parafinë (FFPE) përdoren gjerësisht në kërkimin shkencor dhe diagnostikim, por paraqesin disa sfida dhe probleme të zakonshme:
- Degradimi i biomolekulave: Fiksimi i zgjatur mund të çojë në degradimin e DNA-së, RNA-së dhe proteinave, duke e vështirësuar ekstraktimin e acideve nukleike ose proteinave me cilësi të lartë për aplikime të mëtejshme. Fiksimi i saktë (duke shmangur fiksimin e pamjaftueshëm dhe atë të tepërt) është thelbësor për ruajtjen e indeve.
- Maskimi i antigjeneve: Procesi i fiksimit mund të maskojë vendet antigjenike, duke ulur efektshmërinë e lidhjes së antitrupave në imunohistokimi dhe në analiza të tjera imunologjike. Kjo shpesh kërkon rikuperimin e antigjeneve, një procedurë përmes së cilës hiqet maskimi i një epitopi dhe rivendoset lidhja epitop–antitrup. Megjithatë, antigjeniciteti i plotë mund të mos rikthehet gjithmonë.
- Cilësia e ndryshueshme e fiksimit: Ndryshimet në kohëzgjatjen dhe kushtet e fiksimit mund të çojnë në cilësi jo të njëtrajtshme të mostrave, duke ndikuar në riprodhueshmërinë dhe krahasueshmërinë e rezultateve. Përdorni protokolle të besueshme fiksimi dhe shmangni fiksimin e pamjaftueshëm dhe atë të tepërt.
- Dëmtimi dhe fragmentimi i DNA-së: Fiksimi në formalinë i mostrave FFPE mund të shkaktojë lloje të ndryshme dëmtimi të DNA-së, duke përfshirë deaminimin e citozinës (mutacione nga C në T), dëmtimin oksidativ (p.sh., 8-okso-guanina që çon në mutacione nga G në T), si dhe dëmtime fizike, si këputje në njërin varg, boshllëqe dhe vende pa baza, të cilat pengojnë aktivitetin e DNA-polimerazës. Procesi i fiksimit në formalinë mund të shkaktojë fragmentimin e DNA-së, duke ndërlikuar analizat gjenetike dhe gjenomike, si PCR-ja dhe sekuencimi.
- Cilësia e RNA-së: RNA-ja e ekstraktuar nga indet FFPE shpesh është e fragmentuar dhe e modifikuar kimikisht, gjë që e vështirëson kryerjen e analizave transkriptomike me cilësi të lartë.
- Modifikimet e proteinave: Formalina mund të nxisë modifikime kimike në proteina, duke ndikuar në strukturën dhe funksionin e tyre, gjë që mund të ndërhyjë në analizat proteomike.
- Artefaktet nga përpunimi i mostrave: Gjatë procesit të përfshirjes në parafinë dhe të prerjes në seksione, sforcimi mekanik dhe nxehtësia mund të krijojnë artefakte dhe të shkaktojnë dëmtime të mëtejshme të indit.
- Ndryshueshmëria ndërmjet serive: Ndryshimet në protokollet e fiksimit dhe të përfshirjes në parafinë ndërmjet serive të ndryshme mund të çojnë në ndryshueshmëri të konsiderueshme të rezultateve, duke ndërlikuar krahasimet ndërmjet studimeve.
- Problemet e ruajtjes: Ruajtja afatgjatë e blloqeve FFPE mund të çojë në degradim shtesë dhe humbje të integritetit të acideve nukleike me kalimin e kohës, duke ndikuar në përshtatshmërinë e mostrave arkivore për studime retrospektive.
Lidhja e tërthortë: Fiksimi në formalinë shkakton lidhje të tërthorta ndërmjet proteinave dhe acideve nukleike, të cilat mund të pengojnë analizën molekulare dhe të ndikojnë në saktësinë e imunohistokimisë dhe të analizave të tjera.
Përdorimi i protokolleve të optimizuara, trajtimi i kujdesshëm i mostrave dhe zbatimi i teknikave të avancuara ndihmojnë në përmirësimin e cilësisë dhe besueshmërisë së të dhënave të përftuara nga indet FFPE.
Cili është ndryshimi ndërmjet indit FFPE dhe indit të ngrirë?
Indi FFPE (i fiksuar në formalinë dhe i përfshirë në parafinë) ruhet duke përdorur formalinë për fiksimin e indit dhe më pas përfshihet në dyllë parafine, duke mundësuar ruajtjen afatgjatë në temperaturën e dhomës dhe duke ruajtur morfologjinë e indit. Në të kundërt, indi i ngrirë konservohet shpejt përmes ngrirjes, e cila ruan më mirë integritetin e acideve nukleike dhe proteinave, por kërkon ruajtje në temperatura shumë të ulëta.
Cilat kimikate përdoren për përfshirjen në parafinë të indeve FFPE?
Kimikatet e përdorura për përfshirjen në parafinë gjatë përgatitjes së mostrave FFPE zakonisht përfshijnë formalinën për fiksim dhe dyllin e parafinës për përfshirje. Për përfshirjen në parafinë gjatë përgatitjes së mostrave FFPE, indet zakonisht fiksohen duke përdorur ose formalinë 10% (v/v) të tamponuar në pH neutral (FA), ose një tretësirë formaldehidi 4% (w/v) (PFA) të sapopërgatitur nga pluhuri i paraformaldehidit. Formalina, e cila është një tretësirë e formaldehidit në ujë, tamponohet në pH neutral për të ruajtur morfologjinë e indeve dhe për të parandaluar lidhjen e kryqëzuar të tepërt. Tretësira me bazë paraformaldehidi gjithashtu siguron fiksim efikas duke krijuar lidhje të kryqëzuara ndërmjet proteinave, duke stabilizuar kështu strukturën e indit për përfshirjen e mëvonshme në dyll parafine. Këto kimikate janë thelbësore për ruajtjen e integritetit dhe morfologjisë së indeve gjatë procesit të fiksimit dhe përfshirjes në parafinë.
Si hiqet parafina nga mostrat FFPE?
Për të hequr parafinën nga mostrat FFPE, prerjet e indeve zakonisht i nënshtrohen një serie larjesh me ksilen, të ndjekura nga rihidratimi përmes një serie alkoolesh me përqendrime të shkallëzuara dhe, në fund, me ujë. Meqenëse ksileni është shumë toksik dhe paraqet rreziqe për shëndetin, si probleme të frymëmarrjes, acarim të lëkurës dhe efekte të mundshme afatgjata nga ekspozimi i përsëritur, heqja e parafinës me ultratinguj po shfaqet si një alternativë premtuese në shumë laboratorë. Kjo metodë përdor valë intensive ultrasonike për të hequr parafinën me efikasitet dhe në mënyrë të sigurt, pa pasur nevojë për tretës toksikë si ksileni, duke zvogëluar kështu rrezikun për personelin laboratorik dhe duke krijuar një mjedis pune më të sigurt.
Për sa kohë duhet t’i fiksoj indet e mia për të siguruar cilësi të mirë të mostrave FFPE?
Rekomandimet e përgjithshme për kohëzgjatjen e fiksimit zakonisht sugjerojnë fiksimin e mostrave të indeve në formalinë për 24 deri në 48 orë. Kjo kohëzgjatje është përgjithësisht e mjaftueshme për të ruajtur morfologjinë e indeve dhe strukturat qelizore, duke minimizuar njëkohësisht fiksimin e tepërt, i cili mund të çojë në lidhje të kryqëzuara të tepërta dhe degradim të acideve nukleike dhe proteinave. Megjithatë, koha optimale e fiksimit mund të ndryshojë në varësi të madhësisë dhe llojit të indit, ndërsa mostrat më të vogla ose më delikate kërkojnë kohë më të shkurtra fiksimi. Është thelbësore të arrihet një ekuilibër duke siguruar fiksim të mjaftueshëm për të parandaluar autolizën dhe degradimin e indeve, ndërkohë që shmanget fiksimi i zgjatur që mund të ndërlikojë analizat molekulare të mëvonshme.