Përgatitja e kampionit FFPE me kalim të lartë: Nxjerrja e proteinave dhe prerja e acidit nukleik

Me ultratingullin me fuqi të lartë UIP400MTP, Hielscher Ultrasonics trajton sfidat e fiksimit të formalinës dhe përgatitjes së indeve me parafine (FFPE). Mësoni se si ultratingulli përpunon mostrën FFPE në numër të madh për deparafinizimin e FFPE, lizën e indeve, homogjenizimin, nxjerrjen e proteinave dhe prerjen e ADN/ARN-së! Përfitoni nga përgatitja tejzanor e indeve FFPE – përpunimi i numrave të mëdhenj të mostrave në pllaka me shumë pus! Merrni mostra me cilësi të lartë dhe merrni numra të lartë të mostrave për rezultate të besueshme kërkimore! Dhe e fundit, por jo më pak e rëndësishme, kurseni kohë dhe para!

Përgatitja e kampionit FFPE Lehtësuar nga sonication me fuqi të lartë

Fiksimi i formalinës dhe futja e parafinës (FFPE) është metoda më e zakonshme për ruajtjen dhe arkivimin e indeve të ngurta. Nxjerrja e biomolekulave nga mostrat e indeve FFPE shpesh paraqet sfida të rëndësishme për shkak të cilësisë së mostrave të ruajtura. Këto mostra, të cilat janë pasuri të paçmueshme në biologjinë molekulare dhe kërkimin klinik, ofrojnë një burim të pasur informacioni biologjik për studime retrospektive dhe vërtetimin e biomarkerëve diagnostikues. Megjithatë, procesi i fiksimit të formalinës dhe futjes së parafinës, duke ruajtur arkitekturën dhe morfologjinë e indeve, ndërlikon nxjerrjen e acideve dhe proteinave nukleike me cilësi të lartë. Formalina nxit lidhjen e tërthortë të acideve nukleike dhe proteinave, duke çuar në fragmentim molekular dhe modifikime kimike. Mësoni se si ultrasonikatori UIP400MTP i kapërcen sfidat e përgatitjes së mostrës FFPE!

Ultrasonikator për përgatitjen efikase të mostrës FFPE

  • Rrjedha e punës e lehtë për t'u përdorur: Procese të thjeshtuara që janë miqësore për përdoruesit.
  • Deparafinizimi, Nxjerrja e proteinave, Prerja e ADN/ARN-së
  • Përpunim i shpejtë me kalim të lartë: Trajtim efikas i pllakave me shumë pus.
  • Deparafinizim efektiv: tretshmëri e përmirësuar e proteinave.
  • Tretës jo toksikë: Shmang përdorimin e tretësve organikë të dëmshëm si ksilen.

 

Ultrasonikatori i pllakës UIP400MTP mund të përpunojë mostra FFPE me fuqi të lartë për nxjerrjen e proteinave dhe prerjen e ADN-së dhe ARN-së

UIP400MTP sonikator me performancë të lartë për përpunimin e mostrës FFPE me performancë të lartë në pllaka me shumë pus

Kërkesë informacioni





 
Përgatitja e mostrës FFPE duke përdorur Ultrasonication - UIP400MTP sonicator pllakash me shumë pus nga Hielscher
 

Përparime në teknikat e nxjerrjes së proteinave nga indet FFPE

Hielscher Ultrasonics adreson sfidat në përgatitjen e mostrës FFPE me performancë të lartë. Sonication përdor valët tejzanor për të gjeneruar dridhje mekanike dhe kavitacion të fokusuar, duke ndërprerë në mënyrë efektive strukturat qelizore dhe duke rritur tretshmërinë e biomolekulave. Kjo teknikë ka fituar popullaritet për aftësinë e saj për të rritur efikasitetin dhe rendimentin e nxjerrjes së acidit nukleik dhe proteinave nga indet FFPE, si dhe prerjen e ADN-së dhe ARN-së për përgatitjen e bibliotekës. Është shumë e rëndësishme të theksohet se sonifikimi me ultratinguj duke përdorur sonikatorin e pllakave me shumë puseta UIP400MTP ruan integritetin e këtyre biomolekulave për aplikimet në rrjedhën e poshtme.

 

Videoja tregon sistemin e përgatitjes së mostrës me ultratinguj UIP400MTP, i cili lejon përgatitjen e besueshme të mostrës së çdo pllake standarde me shumë pusi duke përdorur ultratinguj me intensitet të lartë. Aplikimet tipike të UIP400MTP përfshijnë lizën e qelizave, ADN-në, ARN-në dhe prerjen e kromatinës, si dhe nxjerrjen e proteinave.

Ultrasonicator UIP400MTP për sonifikimin e pllakave me shumë puse

Miniatura e videos

 

Prerja e acidit nukleik duke përdorur ultratinguj me fuqi të lartë

Pllakat me 96 pusi dhe pllaka të tjera shumëpushash përpunohen më së miri duke përdorur sonikatorin UIP400MTP. Ky sistem tejzanor është ideal për lizën, fragmentimin e ADN-së dhe përpunimin e mostrave të tretshmërisë së qelizave në performancë të lartë.Ultrasonikatori me shumë pusi UIP400MTP për përdorim në cilësime me performancë të lartë sjell përgatitjen e mostrave FFPE në një nivel të ri. Kjo metodë e sonikimit me shumë pllakë ofron një zgjidhje efikase dhe të besueshme për përpunimin e njëkohshëm të mostrave të shumta. Ai lehtëson nxjerrjen e shpejtë dhe të riprodhueshme të ADN-së, ARN-së dhe proteinave, të cilat janë kritike për teknika të ndryshme analitike, duke përfshirë sekuencën e gjeneratës së ardhshme (NGS), PCR sasiore dhe analizat proteomike. Optimizimi i parametrave të sonikacionit, si amplituda, kohëzgjatja dhe temperatura, rrit më tej cilësinë dhe sasinë e biomolekulave të nxjerra.

Sonicatori UIP400MTP për pllaka me shumë pusi ofron avantazhe të rëndësishme për copëzimin dhe prerjen e ADN-së dhe ARN-së nga indet FFPE. Një nga veçoritë e spikatura të këtij sistemi është aftësia e tij për të arritur madhësi të ngushta të fragmenteve të ADN-së dhe ARN-së, duke siguruar përshtatshmëri të saktë të intensitetit të sonikimit për të marrë fragmente të shkurtra prej 150-200 çifte bazash (bp) ose fragmente më të gjata të çifteve 15-20 kilobaze. kbp). Ky shkathtësi e bën UIP400MTP të domosdoshëm si për aplikacionet e renditjes me lexim të shkurtër ashtu edhe për atë të gjatë, duke siguruar rezultate me cilësi të lartë për sekuencën e gjeneratës së ardhshme (NGS) dhe sekuencën e gjenomit të plotë (WGS). Kontrolli i saktë i tij mbi madhësinë e fragmentit është thelbësor për studiuesit në të gjitha fushat e gjenomisë, pasi lejon përgatitjen e mostrave sipas specifikimeve.

Na kontaktoni për zgjidhje të avancuara në FFPE Tissue

Zbuloni sonikatorin me pllaka UIP400MTP për rikuperim efikas të biomolekulave nga mostrat FFPE, duke ruajtur integritetin e acideve dhe proteinave nukleike të nxjerra dhe duke siguruar riprodhueshmëri të rezultateve. Kjo teknologji integrohet pa probleme me flukset e tjera të punës përgatitore dhe analitike, duke përmirësuar dhe përmirësuar hetimet molekulare duke përdorur arkivat e indeve FFPE.

Kërkesë informacioni





Fiksatorët dhe efektet e tyre

Fiksimi është një hap thelbësor në përgatitjen e mostrës që ruan strukturat qelizore, ndalon reaksionet biokimike dhe parandalon degradimin. Përdoren fiksues të ndryshëm në varësi të kërkesave specifike eksperimentale. Dy fiksuesit më të zakonshëm janë formaldehidi dhe paraformaldehidi, të cilët ndërlidhin proteinat dhe acidet nukleike, duke ruajtur morfologjinë dhe antigjenitetin e qelizave dhe indeve. Fiksues të tjerë, si etanoli, metanoli dhe glutaraldehidi, përdoren për aplikime specifike.

Fiksuesit e formaldehidit dhe paraformaldehidit formojnë ura metilenike midis amino grupeve, duke rezultuar në lidhje të kryqëzuara të proteinave. Ky proces imobilizon në mënyrë efektive komponentët qelizorë, duke ruajtur integritetin e tyre gjatë hapave të mëvonshëm të analizës. Efektet e këtyre fiksuesve mund të ndikohen nga faktorë të tillë si përqendrimi, pH dhe temperatura, dhe optimizimi i këtyre parametrave është thelbësor për të siguruar ruajtjen optimale të strukturave qelizore.

 
Përparësitë e përgatitjes FFPE me ultratinguj
 

Ultratingulli është një teknikë e fuqishme për prishjen e qelizave dhe indeve të fiksuara që i kalon teknikat konvencionale. Ai ofron disa avantazhe të dukshme mbi metodat tradicionale të lizës:

  • Shpejtësia dhe efikasiteti: Liza tejzanor siguron përçarje të shpejtë të qelizave dhe indeve, duke reduktuar ndjeshëm kohën e përpunimit në krahasim me metodat e lizës mekanike ose kimike. Valët e zërit me frekuencë të lartë të krijuara nga sonda tejzanor krijojnë forca mekanike të prerjes, duke shkaktuar ndërprerje të strukturave qelizore të fiksuara. Ky ndërprerje e shpejtë dhe efikase u mundëson studiuesve të përpunojnë vëllime të mëdha të mostrave brenda një afati të shkurtër kohor.
  • I butë dhe i rregullueshëm: Liza tejzanor ofron një mekanizëm të butë përçarjeje që minimizon dëmtimin e biomolekulave të ndjeshme si proteinat, acidet nukleike dhe enzimat. Ndryshe nga metodat mekanike që gjenerojnë nxehtësi të tepërt ose forca prerëse, liza tejzanor përdor kavitacion të kontrolluar për të prishur qelizat duke ruajtur integritetin dhe funksionalitetin e përbërësve ndërqelizor.
  • Shkathtësia: Liza tejzanor mund të aplikohet në fiksues të ndryshëm, duke i lejuar studiuesit të punojnë me një gamë të gjerë mostrash të fiksuara. Qoftë duke përdorur formaldehid, paraformaldehid ose fiksues alternativë, liza tejzanor jep vazhdimisht ndërprerje efikase, duke siguruar rikuperim optimal të komponentëve qelizor.
  • Rendiment dhe cilësi të lartë: Liza tejzanor lehtëson rendimentet e larta të komponentëve qelizorë të paprekur për shkak të aftësisë së saj për të prishur në mënyrë uniforme qelizat dhe indet e fiksuara. Kjo mundëson aplikime në rrjedhën e poshtme të tilla si analiza e proteinave, nxjerrja e acidit nukleik dhe analizat enzimatike për të dhënë rezultate të besueshme dhe të riprodhueshme.
  • Përputhshmëria e automatizimit: Liza tejzanor mund të integrohet lehtësisht në sisteme të automatizuara, duke lejuar përpunimin e mostrës me performancë të lartë. Kjo përputhshmëri u mundëson studiuesve të thjeshtojnë rrjedhën e tyre të punës dhe të rrisin produktivitetin, veçanërisht në studimet në shkallë të gjerë.
96-Well Plate Sonicator UIP400MTP për lizën e qelizave, nxjerrjen e ADN-së, fragmentimin e ADN-së, tretjen e qelizave dhe pastrimin e proteinave.

96-Sonicator pjatë pusi UIP400MTP për sonikimin e pllakave mikrotitërore dhe shumëpushash

Liza tejzanor ka revolucionarizuar prishjen e qelizave dhe indeve të fiksuara, duke ofruar përparësi të shumta mbi metodat tradicionale të lizës. Shpejtësia, efikasiteti, selektiviteti, shkathtësia, rendimenti i lartë dhe përputhshmëria e automatizimit e bëjnë atë një mjet të domosdoshëm në kërkimin e biologjisë molekulare dhe bioteknologjisë. Duke ofruar sonikatorë pa kontakt, si dhe sonikues të tipit sondë, Hielscher Ultrasonics ofron homogjenizuesin tejzanor më të përshtatshëm për aplikimin tuaj të shkencës së jetës. Pavarësisht nëse dëshironi të përpunoni mostra të vetme, mostra të shumëfishta ose numra shumë të lartë të mostrave njëkohësisht, ne do t'ju ofrojmë aparatin më të mirë të tingullit që përputhet me kërkesat tuaja kërkimore dhe diagnostikuese.
Lexoni më shumë rreth aparateve sonikë pa kontakt Hielscher për përgatitjen e mostrës me shumë mostra dhe me performancë të lartë!

Përgatitja e mostrës FFPE me Sonicatorin UIP400MTP me shumë pllakë

  • investim një herë
  • përdorni materialet tuaja konsumuese
  • nuk ka kosto të përsëritura për aksesorët dhe materialet harxhuese të pronarit
  • të lartë të xhiros
  • kontrolli i saktësisë
  • Teknologjia më e fundit
  • seriozitet & Fuqia
  • kontroll i rregullueshëm, i saktë i procesit
  • klasa industriale: mund të operohet vazhdimisht 24/7
  • Lehtë dhe e sigurt për të vepruar
  • mirëmbajtje të ulët

 
Lexoni më shumë rreth aplikimeve të sonikatorëve në shkencën e jetës!

Sonicator për përgatitjen e mostrës me fuqi të lartë! Sonicatori i pllakave UIP400MTP lehtëson lizën, nxjerrjen e proteinave, fragmentimin e ADN-së dhe tretjen e qelizave të mostrave biologjike në pllaka 96 pusesh.

Sonicator pllakash UIP400MTP për çdo pllakë 96 pusesh, pllakë mikrotitërore dhe pllaka me shumë pusi.

Dizajn, Prodhim dhe Konsulencë – Cilësi e prodhuar në Gjermani

Ultrasonikët Hielscher janë të njohur për cilësinë e tyre më të lartë dhe standardet e dizajnit. Fortësia dhe funksionimi i lehtë lejojnë integrimin e qetë të ultrasonikëve tanë në objektet industriale. Kushtet e vështira dhe mjediset kërkuese trajtohen lehtësisht nga ultrasonikët Hielscher.

Hielscher Ultrasonics është një kompani e certifikuar ISO dhe i kushton theks të veçantë ultratingujve me performancë të lartë që paraqesin teknologjinë më të fundit dhe lehtësinë ndaj përdorimit. Sigurisht, ultrasonikët Hielscher janë në përputhje me CE dhe plotësojnë kërkesat e UL, CSA dhe RoHs.

Na kontaktoni! / Pyet Na!

Pyesni për më shumë informacion

Ju lutemi, përdorni formularin e mëposhtëm për të kërkuar informacion shtesë në lidhje me ultratingullin e pllakave me shumë puse UIP400MTP, aplikimet e tij në përgatitjen e mostrës FFPE dhe çmimet. Do të jemi të lumtur të diskutojmë me ju aplikimin tuaj në gjenomikë dhe proteomikë!









Ju lutem vini re tonë Politika e privatësisë.


Renditja e ARN-së me fuqi të lartë në pllakë shumë pusesh

UIP400MTP Ultrasonikator: Përgatitja e kampionit FFPE me performancë të lartë në Multi-Well-Plate



FAQ
Më poshtë, ne u përgjigjemi pyetjeve të bëra shpesh, të cilat janë të rëndësishme për përgatitjen e indeve FFPE dhe ultratingullimin e mostrave FFPE.

Si përgatitet indi FFPE?

Hapat për përgatitjen e indit FFPE: Trajtimi dhe përpunimi i përpiktë i indeve të freskëta janë kritike për gjenerimin e mostrave FFPE me cilësi të lartë. Sigurimi i ruajtjes së arkitekturës qelizore, acideve nukleike dhe proteinave është thelbësore për analizën e saktë të rrjedhës së poshtme. Çdo hap - nga mbledhja në ngulitje - kërkon saktësi për të ruajtur integritetin e kampionit për analiza të ndryshme, duke përfshirë ekzaminimin histologjik, imunohistokiminë dhe studimet molekulare. Ekzekutuar siç duhet, ky proces fiksimi dhe ngulitjeje siguron që indi i ruajtur të pasqyrojë me saktësi gjendjen in vivo, duke mundësuar rezultate të besueshme diagnostike dhe kërkimore.
Ne ju udhëzojmë nëpër 6 hapat kryesorë të procesit të ngulitjes së mostrave të indeve FFPE.

  • Mbledhja e indeve
    Biopsitë nga gjitarët e gjallë dhe kulturat e indeve janë të dyja burime të vlefshme për marrjen e indeve të freskëta për përgatitjen e mostrës FFPE.
    Është e rëndësishme të përdorni një teknikë aseptike: Përdorni instrumente sterile dhe doreza për të shmangur kontaminimin. Idealisht, mblidhni indet në një mjedis steril, të tillë si një suitë kirurgjikale ose kapuç me rrjedhje laminare.
    Duke qenë se kampioni është shumë i brishtë, trajtimi i tij i ndjeshëm është thelbësor: Minimizoni vonesat në përpunim dhe filloni menjëherë përpunimin e mëvonshëm të indeve pas heqjes. Kjo është thelbësore për të parandaluar autolizën dhe degradimin. Mbajeni indin në temperaturën e dhomës; shmangni ngrirjen pasi mund të shkaktojë formimin e kristaleve të akullit dhe dëmtimin e indeve.
  • Fiksim i indit
    Së pari, indi trajtohet me një solucion fiksues: Përdorni 10% formalinë me pufer neutrale (NBF), e cila është e barabartë me 4% formaldehid në ujë, të buferuar në një pH neutral.
    Zhyt indin tërësisht në formalinë. Siguroni një raport fiksues ndaj vëllimit të indit të paktën 10:1. Koha e fiksimit zakonisht varion nga 6 deri në 24 orë, në varësi të llojit dhe madhësisë së indit. Është e rëndësishme që fiksuesi të mund të depërtojë tërësisht në inde. Megjithatë, fiksimi i tepërt mund të çojë në ndërlidhje që ndërlikon marrjen e antigjenit, ndërsa nënfiksimi mund të rezultojë në ruajtje të dobët të indeve.
  • Prerja e indeve
    Së dyti, shkurtoni indin në një trashësi prej rreth 3-5 mm për të lejuar depërtimin e duhur të fiksuesit. Siguroni orientimin e duhur të indit për të kapur strukturat përkatëse histologjike. Kjo lehtëson procesin e nxjerrjes kur indi përdoret më vonë për analizë.
  • Përpunimi i mostrës së fiksuar
    Tani, indet e fiksuara duhet të dehidratohen: Pas fiksimit, indi duhet të dehidrohet për të siguruar depërtim të plotë nga dylli i parafinës. Kaloni indin përmes një serie të klasifikuar të etanolit (70%, 80%, 90% dhe 100%) për të hequr ujin.
    Pastrimi me ksilen: Dylli i parafinës është i patretshëm në ujë, por i tretshëm në ksilen. Prandaj, uji në inde duhet të zëvendësohet me ksilen. Megjithatë, vetë ksileni është i patretshëm në ujë, por i tretshëm në alkool, duke kërkuar një hap të ndërmjetëm ku uji fillimisht zëvendësohet me alkool. Zhyt indin në ksilen ose një zëvendësues ksilen për të hequr etanolin dhe për të përgatitur indin për infiltrimin e parafinës.
    Infiltrimi duke përdorur parafinë: Futni indin në dyll parafine të shkrirë, duke siguruar infiltrim të plotë. Ky hap zakonisht përfshin disa ndryshime të parafinës për të siguruar impregnim të plotë.
  • Përfshirja e indit
    Në këtë hap, indi formohet në një bllok indi: Vendoseni indin në një kallëp me orientimin e dëshiruar dhe derdhni mbi të parafinën e shkrirë. Lëreni parafinën të ngurtësohet duke u ftohur në temperaturën e dhomës ose në një pjatë të ftohtë.
  • Seksionimi dhe montimi
    Mikrotomia: Për të prerë indin e ngulitur, përdorni një mikrotomë për të prerë seksione të holla (zakonisht 4-5 mikrometra) nga blloku i parafinës. Pastaj kampioni montohet, duke vendosur seksionet në rrëshqitës xhami për ngjyrosje të mëvonshme dhe analiza mikroskopike.
    Së fundi, kontrolloni cilësinë e histologjisë: Vlerësoni seksionet e para nën një mikroskop për të siguruar fiksimin dhe përpunimin e duhur. Rregulloni protokollet sipas nevojës bazuar në llojin e indit dhe cilësinë e vëzhguar.

 
Indet FFPE mund të përdoren për të rikuperuar ARN, ADN dhe proteina, si dhe për të zbuluar shenja të kancerit ose sëmundjeve të tjera. Ato mund të ruhen për vite dhe janë një pjesë thelbësore e mënyrës se si studiuesit dhe mjekët përdorin mostrat e indeve për diagnozë dhe kërkime.

Cilat janë problemet dhe sfidat e zakonshme me indin FFPE?

Mostrat e indeve të fiksuara me formalinë, të ngulitura në parafinë (FFPE) përdoren gjerësisht në kërkime dhe diagnostike, por ato paraqesin disa sfida dhe probleme të zakonshme:

  • Degradimi i biomolekulave: Fiksimi i zgjatur mund të çojë në degradimin e ADN-së, ARN-së dhe proteinave, duke e bërë të vështirë nxjerrjen e acideve nukleike ose proteinave me cilësi të lartë për aplikime në rrjedhën e poshtme. Fiksimi korrekt (shmangia e nën-fiksimit dhe mbi-fiksimit) është thelbësor për ruajtjen e indeve.
  • Lidhja e kryqëzuar: Fiksimi i formalinës shkakton ndërlidhje të proteinave dhe acideve nukleike, të cilat mund të pengojnë analizën molekulare dhe të ndikojnë në saktësinë e imunohistokimisë dhe analizave të tjera.

  • Maska antigjenike: Procesi i fiksimit mund të maskojë vendet antigjenike, duke reduktuar efektivitetin e lidhjes së antitrupave në imunohistokimi dhe analiza të tjera imunologjike. Kjo shpesh kërkon marrjen e antigjenit, një procedurë përmes së cilës maskimi i një epitopi përmbyset dhe lidhja epitop-antitrupa restaurohet. Megjithatë, antigjeniteti i plotë nuk mund të rikthehet gjithmonë.
  • Cilësia e fiksimit të ndryshueshme: Ndryshimet në kohën dhe kushtet e fiksimit mund të çojnë në cilësi të paqëndrueshme të mostrës, duke ndikuar në riprodhueshmërinë dhe krahasueshmërinë e rezultateve. Përdorni protokolle të besueshme fiksimi dhe shmangni nën-fiksimin dhe mbi-fiksimin.
  • Dëmtimi dhe fragmentimi i ADN-së: Fiksimi me formalinë i mostrave FFPE mund të shkaktojë lloje të ndryshme të dëmtimeve të ADN-së, duke përfshirë deaminimin e citozinës (mutacionet C në T), dëmtimin oksidativ (p.sh., 8-okso-guanina që çon në mutacione nga G në T), si dhe ndërprerje fizike si p.sh. boshllëqe, dhe vende abazike që pengojnë aktivitetin e polimerazës së ADN-së. Procesi i fiksimit të formalinës mund të shkaktojë fragmentim të ADN-së, duke komplikuar analizat gjenetike dhe gjenomike si PCR dhe sekuenca.
  • Cilësia e ARN-së: ARN-ja e nxjerrë nga indet FFPE shpesh fragmentohet dhe modifikohet kimikisht, duke e bërë të vështirë kryerjen e analizave transkriptomike me cilësi të lartë.
  • Ndryshimet e proteinave: Formalina mund të shkaktojë modifikime kimike në proteina, duke ndikuar në strukturën dhe funksionin e tyre, të cilat mund të ndërhyjnë në analizat proteomike.
  • Objekte të përpunimit të mostrave: Gjatë procesit të futjes dhe prerjes, stresi mekanik dhe nxehtësia mund të sjellin artefakte dhe të shkaktojnë dëme të mëtejshme në inde.
  • Ndryshueshmëria nga grupi në grup: Ndryshimet në protokollet e fiksimit dhe futjes midis grupeve të ndryshme mund të çojnë në ndryshueshmëri të konsiderueshme në rezultate, duke komplikuar krahasimet midis studimeve.
  • Problemet e ruajtjes: Ruajtja afatgjatë e blloqeve FFPE mund të çojë në degradim shtesë dhe humbje të integritetit të acidit nukleik me kalimin e kohës, duke ndikuar në qëndrueshmërinë e mostrave arkivore për studime retrospektive.

Përdorimi i protokolleve të optimizuara, trajtimi i kujdesshëm i mostrave dhe aplikimi i teknikave të avancuara ndihmojnë në përmirësimin e cilësisë dhe besueshmërisë së të dhënave të marra nga indet FFPE.

Cili është ndryshimi midis FFPE dhe indit të ngrirë?

Indi FFPE (Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded) ruhet duke përdorur formalinë për të rregulluar indin dhe më pas futet në dyll parafine, duke lejuar ruajtjen afatgjatë në temperaturën e dhomës duke ruajtur morfologjinë e indeve. Në të kundërt, indet e ngrira ruhen me shpejtësi nga ngrirja, gjë që ruan më mirë integritetin e acideve nukleike dhe proteinave, por kërkon ruajtjen në temperatura shumë të ulëta.

Cilat kimikate përdoren për futjen e FFPE?

Kimikatet e përdorura për futjen e FFPE zakonisht përfshijnë formalinë për fiksim dhe dyll parafine për ngulitje. Për futjen e FFPE, indet zakonisht fiksohen duke përdorur ose 10% (v/v) formalinë neutrale (FA) ose një zgjidhje formaldehide 4% (w/v) të sapopërgatitur (PFA) të bërë nga pluhuri paraformaldehid. Formalina, e cila është një tretësirë e formaldehidit në ujë, zbutet në një pH neutral për të ruajtur morfologjinë e indeve dhe për të parandaluar lidhjet e tepërta të kryqëzuara. Zgjidhja me bazë paraformaldehidi siguron gjithashtu fiksim efektiv duke ndërlidhur proteinat, duke stabilizuar kështu strukturën e indeve për futjen e mëvonshme në dyll parafine. Këto kimikate janë thelbësore për ruajtjen e integritetit dhe morfologjisë së indeve gjatë procesit të fiksimit dhe ngulitjes.

Si hiqet parafina nga mostrat FFPE?

Për të hequr parafinën nga mostrat FFPE, seksionet e indeve zakonisht i nënshtrohen një sërë larjesh me ksilen, të ndjekura nga rihidratimi përmes një serie alkoolesh të klasifikuara dhe në fund me ujë. Meqenëse ksileni është shumë toksik, duke paraqitur rreziqe shëndetësore si problemet e frymëmarrjes, acarimin e lëkurës dhe efektet e mundshme afatgjata me ekspozim të përsëritur, heqja e parafinës me ultratinguj po shfaqet si një alternativë premtuese në shumë laboratorë. Kjo metodë përdor valë intensive ultrasonike për të hequr parafinën në mënyrë efikase dhe të sigurt pa pasur nevojë për tretës toksikë si ksileni, duke reduktuar kështu rrezikun për personelin e laboratorit dhe duke krijuar një mjedis më të sigurt pune.

Sa kohë duhet t'i fiksoj indet e mia për cilësi të mirë të mostrës FFPE?

Rekomandimet e përgjithshme për kohëzgjatjen e fiksimit zakonisht sugjerojnë fiksimin e mostrave të indeve në formalinë për 24 deri në 48 orë. Kjo kohëzgjatje është përgjithësisht e mjaftueshme për të ruajtur morfologjinë e indeve dhe strukturat qelizore duke minimizuar fiksimin e tepërt, i cili mund të çojë në ndërlidhje të tepërt dhe degradim të acideve nukleike dhe proteinave. Megjithatë, koha optimale e fiksimit mund të ndryshojë në varësi të madhësisë dhe llojit të indit, me mostra më të vogla ose më delikate që kërkojnë kohë më të shkurtra fiksimi. Është thelbësore të balancohet fiksimi adekuat për të parandaluar autolizën dhe degradimin e indeve duke shmangur fiksimin e zgjatur që mund të komplikojë analizat molekulare në rrjedhën e poshtme.

Ne do të jemi të lumtur të diskutojmë procesin tuaj.

Le të kontaktojmë.