超音波バイアルツイーターでのサンプル調製

超音波サンプル製剤

超音波処理は、ポリマー連鎖反応(PCR)、ウェスタンブロット、アッセイ、分子シーケンシング、クロマトグラフィーなどの分析のためにサンプルを準備するためにサンプル処理の一般的な技術です。超音波は、サンプルを分析的に治療するために実験室で広く使用されている技術です。超音波処理の主な利点は、超音波の作業原理は、純粋に機械的な力に基づいているということです。超音波溶解および細胞破壊は、タンパク質抽出に使用される溶媒が溶解中にも使用することができるという利点を超音波を与えるソノメカニカルせん断力によって達成される。VialTweeterのような超音波細胞破壊装置は細胞壁/膜を破壊し、細胞内部と溶媒の間の物質的な移動を促進する。それにより、検菌物(例えばDNA、RNA、タンパク質、オルガネラなど)が、細胞マトリックスから溶媒に効率よく伝達される。これは、超音波のリシスを非常に効果的にする超音波細胞破壊プロセスとの間で焼入れと抽出のステップが重複することを意味します。さらに、超音波サンプル調製は、洗浄剤および他のリシス試薬を必要とせず、これは、リゼートの構造を変更し、破壊する可能性があり、精製とその後のトラブルのために知られています。別のリシス法は、酵素破壊は長いインキュベーション時間を必要とし、しばしば再現不可能な結果を提供する。超音波サンプル調製は、組織の均質化、細胞破壊、溶解、タンパク質抽出および溶解物の可溶化などのサンプル調製における一般的な問題を克服します。超音波処理の強度を正確に制御し、生物学的サンプルに調整することができるので、分解およびサンプル損失は避ける。自動的に監視され、制御されたサンプル温度、パルスモードおよび超音波処理の持続時間は最適な結果を保障する。

VialTweeterは同じ条件の下で複数のサンプルの同時準備を必要とする実験室の仕事のために特に便利である。VialTweeterは、最大10のバイアル(例えば、エペンドルフ、遠心、NUNCチューブ、クライオバイアル)を保持し、正確に制御された条件下で激しく超音波処理することができる超音波ブロックソノトロードです。超音波エネルギーは、サンプル媒体にバイアルの壁を介して結合されているので、バイアルは、治療中に閉じた維持します。これにより、サンプルの損失とクロスコンタミネーションは完全に回避されます。

バイアルツイーターに合うバイアルとチューブ

VialTweeterは、エペンドルフ、遠心分離機、クライオバイアル、さまざまなNUNCバイアルタイプなどの10の一般的な円錐形または丸底チューブを保持するのに適していますが、穴は要求に応じて他のバイアルやチューブサイズにカスタマイズすることができます。お客様のVialTweeterを変更できるように、使用したい試験管の種類をお知らせください。ファルコンチューブや他の試験容器、ビーカーや容器などの大型試験管のために、VialPressは便利なソリューションです。

バイアルプレスとバイアルツイーター

その10チューブの穴を持つVialTweeter自体はすでにユニークで高機能な超音波デバイスですが、VialPressアドオンはVialTweeterをさらに汎用性と操作に柔軟にします。VialPressは、ファルコンチューブや他の小型から中型のテストビーカーなどのより大きなサンプルチューブをVialTweeter前面に固定することを可能にするクランプオンバーで構成されるVialTweeterのアクセサリーです。左の写真は、VialTweeterがブロック内に10個のエペンドルフバイアルを保持し、VialPressは超音波処理のために1つの大きな試験管を前面に固定している様子です。VialPressは、最大5大試験管を保持して、激しい超音波処理を行うことができます。

VialTweeter サンプル準備プロトコル

VialTweeterは、生物学的サンプルを超音波処理するために広く使用されています。分析の前に、サンプルは、例えば、リシス、組織均質化、タンパク質抽出、DNA/RNAせん断、脱気などによって、生化学的または生物物理学的分析およびアッセイのために調製されなければならない。VialTweeterは、これらの超音波プロセスを確実に満たし、再現性のある結果を提供します。VialTweeterの一般的な用途は、哺乳類(ヒトおよび動物)組織、ならびに細菌細胞およびウイルス粒子のリシス/細胞破壊である。VialTweeter処理の生物学的サンプルには、ヒト肺上皮細胞、造血幹細胞、骨髄性白血病細胞、骨髄性白血病細胞、 大腸菌、 枯草菌、 バチルス・アントラシス、 フランシセラ・トゥラレンシス、 エルジニア害虫、 レンサ球菌の膿生、 カロバクター三月、 マイコプラズマ肺炎、マイコバクテリア/結核複合体(MTBC)および他の多くの細菌、植物、および微生物細胞。
以下では、VialTweeterを搭載したいくつかの選択されたプロトコルを見つけることができます。

インビボグルタチオンの決定のためのVialTweeterと大腸菌リシス

株MG1655の大腸菌は、0.5のA600に達するまで200mlの総体積でMOPS最小培地で増殖した。培養液をストレス処理のために50ml培養に分けた。0.79 mMアリシン、1 mMジアミド、またはジメチルスルホキシド(対照)で15分間のインキュベーションの後、細胞を4°Cで4,000gで10分間収穫した。細胞を、700μlのKPEバッファー中のペレットの再懸濁液の前にKPEバッファーで2回洗浄した。デタンパク化の場合、超音波処理(3 x 1分)による細胞の破壊前に10%(w/v)スルホサリチル酸の300μlが添加された。バイアルツイーター超音波処理器)。上清は遠心分離後に回収した(30分、13,000g、4°C)。スルホサリチル酸濃度は、KPEバッファーの3体積を添加することによって1%に減少した。グルタチオンおよびGSSGの測定は、上述の通り行った。細胞グルタチオン濃度は、6.7×10-15リットルの大腸菌細胞の体積およびA600 0.5の細胞密度(1×108細胞ml-1培養に相当)に基づいて計算した。GSH濃度は総グルタチオンから2[GSSG]の減算によって計算した。(ミュラーら 2016)

グラファイト炉原子吸収分析前のVialTweeterによる細胞リシス

バチルス・サスティリス168(trpC2)は、抗生物質ストレスの15分にさらされ、その後、細胞を3,320 x gで収穫し、100 mM Tris/1 mM EDTAで5回洗浄し、pH 7.5、10 mMトリスで再懸濁し、pH 7.5を10 mMトリスで再懸濁し、ヒエルシェ・ビアラの超音波によって破壊した。(ウェンゼルら 2014年)

質量分析前のVialTweeterサンプル調製

ヒトCD34􏰀造血幹細胞/前駆細胞の凍結乾燥細胞ペレットは􏰇、100mアンモニウム炭酸水素水尿素の10μl(ペプチド希釈系列用バルクHEK293製剤用200μl)で再懸濁し、エルス・ヴィアチェルツイーターとの超音波処理によって助けられた溶解した 氷上での中間冷却で3回、60%のサイクルと20年代の持続時間。(アモンら 2019)

VialPressを使用したサンプル準備プロトコル

フレタス(ラクタサティバ)を0.5 M HEPESバッファー(pH 8、KOH調整)で均質化し、200、100、50、または20mL緩衝液の1gの植物(新鮮重量)の比率で調整した。植物質量対緩衝液容積の比率は、3.5〜12mLの間の総ホモジネート容積を保つために変化した。植物質量対緩衝液容積の比率を変化させ、総ホモゲン酸容積を3.5mLから12mLの間に保ち、プローブとの均質化を可能にした。ホモジェナテスは、3分間(80%パルスと100%パワー)のために200xt VialPress(ヒールシャー超音波GmbH、ドイツ)を装備したVialTweeterを持つUP200Stを使用して間接的な超音波を受けました。この装置を使用して汚染を避けた。(ラフトンら 2019年)

VialTweeterでの超音波処理中の信頼性の高い温度制御

温度は、生物学的サンプルの治療に特に重要なプロセスに影響を与える重要な因子です。すべての機械的サンプル調製技術として、超音波処理は熱を作成します。ただし、VialTweeterを使用する場合、サンプルの温度を十分に制御できます。分析のためにVialTweeterとVialPressでそれらを準備しながら、あなたのサンプルの温度を監視し、制御するための様々なオプションを提示します。

1. サンプル温度を監視する:VialTweeterを駆動する超音波プロセッサUP200Stは、インテリジェントなソフトウェアとプラグ可能な温度センサーが装備されています。温度センサーをUP200Stに差し込み、温度センサーの先端をサンプルチューブの1つに差し込みます。デジタルカラーのタッチディスプレイを介して、UP200Stのメニューでサンプル超音波処理のための特定の温度範囲を設定することができます。超音波処理器は、最大温度に達すると自動的に停止し、サンプル温度が設定温度の低い値まで∆されるまで一時停止します。その後、超音波処理が再び自動的に開始します。このスマートな特徴は熱誘起の低下を防ぐ。
2. VialTweeterブロックは事前に冷却することができます。VialTweeterブロック(トランスデューサーなしのソトロードのみ!)を冷蔵庫または冷凍庫に入れて、チタンブロックを事前に冷却すると、サンプルの温度上昇を延期するのに役立ちます。可能であれば、サンプル自体も事前に冷却することができます。
3. 超音波処理中に冷却するためにドライアイスを使用してください。ドライアイスで満たされた浅いトレイを使用し、熱が急速に消散できるようにドライアイスの上にVialTweeterを置きます。

世界中のお客様は、生物、生化学的、医療、臨床検査室での毎日のサンプル調製作業にVialTweeterとVialPressを使用しています。UP200Stプロセッサのインテリジェントなソフトウェアと温度制御により、温度が確実に制御され、熱誘起試料劣化を回避します。VialTweeterとVialPressでの超音波サンプル調製は、信頼性が高く、再現性の高い結果を提供します!

バイアルツイーターの技術的な詳細

VialTweeterは、ブロック内の穴に最大10バイアルを保持することができるチタンから作られたソトロードのブロックです。さらに、最大5つの大きな試験管をVialPressを使用してVialTweeterフロントにクランプすることができます。VialTweeterは、超音波エネルギーが信頼性の高い均一な超音波処理結果を確保するために、各挿入バイアルに均一に分配されるように設計されています。小さなピボットは、不均一な地面にソトロードVialTweeterを調整し、試験管を垂直に整列させる。

一目でVialTweeterのメリット

• 同時に最大10本のバイアルの強い超音波処理
• 容器壁を通してサンプルに高い超音波強度で間接的な超音波処理
• 間接的な超音波処理は、交差汚染および試料の損失を回避します
• 調節可能で制御可能な超音波処理振幅による再現可能な結果
• VialPressを使用すると、より大きなチューブを超音波処理することを可能にします
• 20~100%の調節可能な振幅
• 0から100％まで調節可能なパルスモード
• オートクレーブ

VialTweeterは、によって動力を与えられています UP200St200ワット強力な超音波プロセッサ。UP200Stは振幅、超音波処理時間、脈動、温度のようなすべての重要な超音波プロセスのパラメータを精密に制御することを可能にするインテリジェントなソフトウェアが装備されている。これにより、VialTweeterは、生物学的および生化学的な実験室で成功した再現可能なプロセスの結果のための信頼性の高いツールになります。
振幅は20と100%の間で調整することができ、それによってあなたのサンプルに超音波強度を適応させることができます。例えば、DNAおよびRNAの剪断および断片化は、あまりにも小さなDNA断片の産生を防ぐために穏やかな振幅を必要とし、マウス脳の組織均質化は高強度超音波処理を必要とする。UP200Stプロセッサでスマートで直感的なメニューを介して理想的な振幅、超音波強度と持続時間を選択してください。メニューと設定は、カラータッチディスプレイを介して簡単にアクセスして操作できます。設定では、振幅、脈動/サイクルモード、超音波処理時間、総エネルギー入力、温度制限などの超音波処理パラメータを事前に設定することができます。研究と生産では、試験と試験結果の再現性が重要です。これは、プロセス条件と超音波処理プロトコルの正確な記録が完全に重要であることを意味します。自動データプロトコルは、あなたが簡単にチェックし、様々な超音波処理の実行を比較できるように、統合されたSDカード上のCSVファイルにすべての超音波処理データを書き込みます。すべての超音波プロセスデータは、簡単にアクセスし、CSVファイルとして共有することができます。
ヒールシャー超音波は、あなたの研究作業を容易にし、改善するための高度な技術を提供するために努力しています!