ELISAアッセイのための超音波サンプル調製

ELISAなどのアッセイは、体外診断、疾患関連タンパク質の検出、品質管理(食物アレルゲンのモニタリングなど)に広く使用されています。超音波サンプル調製は、細胞を溶解し、細胞内タンパク質、DNA、RNAおよびオルガネラを単離するための迅速で信頼性が高く再現性のある技術です。ヒールシャー超音波は、単一のサンプル、複数のバイアル、ならびにマイクロタイタープレートおよび96ウェルプレートの便利な調製のための様々な超音波ソリューションを提供しています。

ELISAの – 酵素結合免疫吸着アッセイ

ELISAは、Enzyme-linked Immunosorbent Assayの略で、リガンド結合アッセイのカテゴリーで広く使用されている生化学分析技術です。ELISAでは、液体サンプルを特殊な結合特性を持つ固定固相に添加します。通常、固定固相はウェルプレートまたはELISAプレートにコーティングとして塗布されます。次に、さまざまな液体試薬を順次添加、インキュベート、洗浄することで、最終的にウェル内の最終液体に光学的変化(酵素反応の生成物による色現像など)が生じます。光学的変化により、いわゆる定量的な方法で分析物の量を測定することができます “読書”.定量的な読み取りには、分光光度計、蛍光光度計、またはルミノメーターを使用して、透過光の強度を検出および測定します。検出感度は、分析反応中のシグナルの増幅に影響されます。酵素反応は十分に研究されており、信頼性の高い増幅プロセスであるため、酵素を使用してシグナルを作成します。酵素は、正確な定量を可能にするために一定の比率で検出試薬に結合されており、これが名前の由来でもあります “酵素結合” 免疫吸着アッセイ。
ELISAアッセイはマイクロタイタープレート/96ウェルプレートで行われるため、プレートベースアッセイ技術として知られており、抗体、ペプチド、タンパク質、ホルモンの検出や定量など、臨床の体外診断、研究、創薬などに使用されています。
ELISA技術は、医学、バイオテクノロジー、植物病理学の診断ツールとして頻繁に使用されており、複数の業界で重要な品質管理測定でもあります。

ELISA前の超音波サンプル調製

ELISAアッセイを実行する前に、サンプルには細胞溶解や細胞内タンパク質、DNA、RNAなどの抽出などの調製ステップが必要です。超音波細胞溶解およびタンパク質単離の利点は、その高い効率、信頼性および再現性である。これらの要素はすべて、質の高い診断と研究結果を得るために重要です

Pre-ELISA超音波細胞溶解のためのプロトコル

• 細胞培養の場合: 超音波細胞溶解の前に、微量遠心分離機で270×gで5分間細胞を遠心分離します。吸引により上清を除去し、細胞を30〜100μLのRIPAバッファーに再懸濁します。次に、細胞ペレットを氷上で30分間インキュベートします。
• これで、細胞サンプルを超音波溶解する準備が整いました。
  プローブタイプの超音波装置を使用してください(例: UP200HTの S26d2プローブ付き)または超音波マルチサンプルデバイス(例:VialTweeter最大10バイアルの同時超音波処理用またはマイクロタイタープレート/ 96ウェルプレート用のUIP400MPT)調製する必要のあるサンプルの量によって異なります。
  単一のサンプルのプローブタイプの超音波処理では、細胞を1.5mLの微量遠心チューブに入れます。
• 超音波のデジタルメニューで、超音波持続時間、総エネルギー入力、サイクルモード、および/または温度制限を事前設定します。これにより、信頼性の高い超音波処理と再現性が保証されます。
• ソノトロードをはめ込み、超音波装置のスイッチを入れます。超音波プローブのマイクロチップをサンプル全体にゆっくりと動かして、サンプルを均一に超音波処理します。
  ほとんどの細胞では、超音波溶解は10秒の超音波処理の2〜4サイクル後に完了します。
• 超音波処理後、サンプルからソノトロードを取り出します。サンプルを氷上で5分間インキュベートする必要があります。次に、10,000 x gで20分間遠心分離し、破片をペレット化します。上清を新しい微量遠心チューブに移します。分析種を標識し、-20°Cで保存します。
• 超音波ソノトロードは、アルコールで適切に拭くか、アルコール、例えば70%エタノールで満たされたビーカーで超音波処理することにより洗浄することができる。チタン製のすべての超音波プローブはオートクレーブ可能です。

• 氷冷したPBS(0.01M、pH=7.4)で組織を洗い流し、余分な溶血血液を徹底的に除去します。
• 組織(腎臓、心臓、肺、脾臓など)を秤量し、それを小片に浸軟させ、PBSで均質化します。必要なPBSの量は、組織の重量に関連しています。目安として、1gのティッシュには約9mLのPBSが必要です。PBSにプロテアーゼ阻害剤を追加することをお勧めします。(RIPAまたはプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを含む低張溶解バッファーを代わりに使用できます。
• 組織のサイズにもよりますが、短いボルテックス処理(15秒パルスで約1〜2分)が組織の前処理に役立ちます。
• マイクロチップ、例えばS26d2を超音波装置に取り付けます。組織を入れたサンプルチューブを氷浴に入れます。
• あなたの超音波装置、例えばUP200St(80%振幅)でサンプルを超音波処理しますパルスモード(15秒オン、15秒一時停止)で1分間。サンプルを氷浴に保管します。
• 次に、ホモジネートを遠心分離して特定のプール(細胞質、核、ミトコンドリア、またはリソソーム)を取得し、分析用のタンパク質を濃縮します。サンプルを5000×gで5分間遠心分離することにより、上清を回収します。

超音波処理中の信頼性の高い温度制御

温度は、タンパク質の熱分解を防ぐなど、生体サンプルの処理に特に重要なプロセスに影響を与える重要な要因です。すべての機械的なサンプル調製技術と同様に、超音波処理は熱を発生させます。しかし、ヒールシャー超音波装置を使用するとき、サンプルの温度を十分に制御できます。私たちはあなたにあなたのサンプルの温度を監視および制御するためのさまざまなオプションを提示します プローブ型超音波処理装置 またはVialTweeterを事前に分析します。

1. サンプル温度の監視:すべてのヒールシャーデジタル超音波プロセッサは、インテリジェントなソフトウェアとプラグ可能な温度センサーが装備されています。温度センサーを超音波装置(例:、 UP200HTの, UP200セント, バイアルツイーター, マルチウェルプレートソニケーター UIP400MTP)をクリックし、温度センサーの先端をサンプルチューブの1つに挿入します。デジタルカラータッチディスプレイを介して、超音波プロセッサのメニューでサンプル超音波処理の特定の温度範囲を設定できます。超音波装置は、最高温度に達すると自動的に停止し、サンプル温度が設定温度∆の低い値まで下がるまで一時停止します。その後、超音波処理が自動的に再開されます。このスマートな機能により、熱による劣化を防ぎます。
2. 超音波マルチサンプルユニットに関しては VialTweeter、サンプルチューブを保持するチタンブロックを予冷できます。VialTweeterブロック(トランスデューサーなしのソノトロードのみ)を冷蔵庫または冷凍庫に入れて、チタンブロックを予冷すると、サンプルの温度上昇を延期するのに役立ちます。可能であれば、サンプル自体も予冷することができます。
3. 超音波処理中に冷やすために氷浴またはドライアイスを使用してください。超音波処理中にサンプルチューブを氷浴に入れます。の場合 VialTweeter、ドライアイスで満たされた浅いトレイを使用し、 VialTweeterをドライアイスの上に置いて、熱が急速に放散されるようにします。

世界中のお客様がヒールシャープローブ型超音波装置とマルチサンプル超音波処理ユニットを使用しています VialTweeter そして UIP400MTP 生物学的、生化学的、医療および臨床研究所での毎日のサンプル調製作業のために。ヒールシャープロセッサのインテリジェントなソフトウェアと温度制御により、温度は確実に制御され、熱によるサンプル劣化が回避されます。ヒールシャー超音波ソリューションによる超音波サンプル調製は、高い信頼性と再現性のある結果を提供します!
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