ELISAなどのアッセイは、体外診断、疾患関連タンパク質検出、品質管理(例えば食物アレルゲンのモニタリング)に広く使用されています。超音波サンプル調製は、細胞をライゼし、細胞内タンパク質、DNA、RNAおよびオルガネラを単離するための迅速で信頼性の高い再現性の高い技術です。ヒールシャー超音波は、単一のサンプル、複数のバイアルだけでなく、マイクロタイタープレートと96ウェルプレートの便利な準備のための様々な超音波ソリューションを提供しています。

Elisa – 酵素結合免疫吸着アッセイ

ELISAは、酵素結合免疫吸着アッセイの略で、リガンド結合アッセイのカテゴリーの生物化学的分析技術として広く使用されています。ELISAでは、液体サンプルが特殊な結合特性を持つ定常固相に添加されます。通常、定常固相はウェルプレートまたはELISAプレートにコーティングとして適用される。次いで、種々の液体試薬が順次加えられ、インキュベートされ、洗浄され、最終的に光学的変化(例えば、酵素反応の生成物による色現像)が井戸内の最終液体中に生じることとなる。光学的変化は、いわゆる定量によって分析物の量を測定することを可能にする “読み取り"。定量的読み取りでは、分光光度計、蛍光計、またはルミノメーターを使用して、透過光の強度を検出および測定します。検出の感度は、分析反応中の信号の増幅によって影響されます。酵素反応は十分に調査され、信頼できる増幅プロセスであるため、酵素を使用してシグナルを生成します。酵素は、正確な定量を可能にするために、検出試薬に固定された割合でリンクされており、「酵素結合」免疫吸着アッセイという名前も説明しています。
ELISAアッセイはマイクロタイタープレート/96ウェルプレートで行われるため、プレートベースのアッセイ技術として知られており、抗体、ペプチド、タンパク質、ホルモンの検出と定量に関する臨床体外診断、研究、医薬品開発などに使用されています。
ELISA技術は医学、バイオテクノロジー、植物病理学の診断ツールとして頻繁に使用され、また、複数の産業で重要な品質管理測定である。

ELISA前の超音波サンプル準備

ELISAアッセイを行う前に、サンプルは細胞内タンパク質、DNA、RNAなどの細胞ライシスおよび抽出などの調製手順を必要とします。超音波細胞溶解とタンパク質の分離の利点は、その高効率、信頼性と再現性です。これらの要素は、高品質の診断と研究成果を得るために重要です

プレELISA超音波セルライシスのためのプロトコル

• 細胞培養の場合: 超音波細胞のリシスの前に、遠心分離細胞は、マイクロ遠心分離機で270 x gで5分間の細胞。吸引によって上清を取り除き、RIPAバッファーの30〜100 μLの細胞を再懸濁します。その後、氷上の細胞ペレットを30分間インキュベートする。
• さて、細胞サンプルは超音波の分析の準備ができています:
  プローブ型超音波式超音波器(例えば. Uf200ःトン S26d2プローブ)または超音波マルチサンプルデバイス(例えば、最大10バイアルの同時超音波処理のためのVialTweeterまたはマイクロティタープレート/96ウェルプレート用UIP400MPT)を準備する必要があるサンプルの量に応じて。
  単一サンプルのプローブ型超音波処理の場合、細胞を1.5 mLマイクロ遠心分離チューブに入れる。
• 超音波処理器のデジタルメニューに超音波の持続時間、総エネルギー入力、サイクルモードおよび/または温度制限を事前に設定します。これは高い信頼性の超音波処理および反復性を保障する。
• ソトロードをインセットし、超音波デバイスをオンに切り替えます。サンプルを通して超音波プローブのマイクロチップを穏やかに動かして、サンプルを均一に超音波処理します。
  ほとんどの細胞では、超音波ライシスは10秒超音波処理の2-4サイクル後に完了します。
• 超音波処理の後、サンプルからソトロードを取り除きます。サンプルは氷上で5分間インキュベートする必要があります。その後、10,000xgで遠心分離機を20分間ペレットし、破片をペレット化する。上清を新しいマイクロ遠心チューブに移します。検数にラベルを付け、-20°Cで保存します。
• 超音波ソトロードは、アルコール、例えば70%エタノールで満たされたビーカーでアルコールまたは超音波で適切にそれを拭くことによって洗浄することができます。チタンから作られたすべての超音波プローブは、オートクレーブ可能です。

• 過剰な溶血血液を徹底的に除去するために、氷冷PBS(0.01M、pH=7.4)で組織をすすぎ。
• 組織(腎臓、心臓、肺、脾臓など)を計量し、PBSで均質化された小片に浸食します。必要なPBSの体積は、組織の重量に関連する。経験則として、1gの組織は約9mL PBSを必要とする。PBSにプロテアーゼ阻害剤を加えることを推奨します。(プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを含むRIPAまたは低張性リシスバッファーを代用することができる)
• 組織の大きさに応じて、短い渦処理(約1〜15秒パルス)が組織を前処理するのに役立ちます。
• マイクロチップ(S26d2など)を超音波処理器に取り付ける。サンプルチューブを組織と一緒に氷浴に入れる。
• サンプルを超音波処理器で超音波処理し、例えば、UP200St(80%振幅)パルスモード(15秒、15秒の休止)で1分間超音波処理します。氷浴中にサンプルを保管してください。
• ホモジナートは、分析のためにタンパク質を濃縮するために、特定のプール(細胞質、核、ミトコンドリアまたはリソソーム)を得るために遠心化される。5000gで5分間サンプルを遠心×することにより、上清を取り出す。

超音波処理中の信頼性の高い温度制御

温度は、タンパク質の熱分解を防ぐために、生物学的サンプルの治療に特に重要なプロセスに影響を与える重要な因子です。すべての機械的サンプル調製技術として、超音波処理は熱を作成します。しかし、サンプルの温度は、ヒールシャー超音波デバイスを使用する場合によく制御することができます。プローブ型超音波処理器またはVialTweeterを事前分析的に準備しながら、サンプルの温度を監視および制御するためのさまざまなオプションをご紹介します。

1. サンプル温度の監視:すべてのヒールシャーデジタル超音波プロセッサは、インテリジェントなソフトウェアとプラグ可能な温度センサが装備されています。温度センサーを超音波デバイスに差し込みます(例えば、 Uf200ःトン、 UP200St、 VialTweeter、UIP400MTP)をクリックし、温度センサの先端をサンプルチューブの1つに挿入します。デジタル色のタッチディスプレイを介して、あなたは、あなたのサンプル超音波処理のための特定の温度範囲の超音波プロセッサのメニューに設定することができます。超音波処理器は、最大温度に達すると自動的に停止し、サンプル温度が設定温度の低い値まで∆されるまで一時停止します。その後、超音波処理が再び自動的に開始します。このスマートな特徴は熱誘起の低下を防ぐ。
2. 超音波マルチサンプルユニットVialTweeterに関しては、サンプルチューブを保持するチタンブロックを事前に冷却することができます。VialTweeterブロック(トランスデューサーなしのソトロードのみ!)を冷蔵庫または冷凍庫に入れて、チタンブロックを事前に冷却すると、サンプルの温度上昇を延期するのに役立ちます。可能であれば、サンプル自体も事前に冷却することができます。
3. 超音波処理中に冷却するために氷浴やドライアイスを使用してください。超音波処理中にサンプルチューブを氷浴に入れる。VialTweeterの場合は、ドライアイスで満たされた浅いトレイを使用し、熱が急速に消散できるようにドライアイスの上にVialTweeterを置きます。

世界中のお客様は、ヒールシャープローブ超音波装置だけでなく、生物学的、生化学的、医療および臨床研究所で毎日のサンプル調製作業のために、複数サンプル超音波ユニットVialTweeterとUIP400MTPを使用しています。ヒールシャープロセッサのインテリジェントなソフトウェアと温度制御により、温度が確実に制御され、熱誘起試料劣化が回避されます。ヒールシャー超音波ソリューションと超音波サンプルの準備は、信頼性が高く、再現性の高い結果を提供します!