ヒールシャー超音波技術

ELISAアッセイのための超音波サンプル準備

ELISAなどのアッセイは、体外診断、疾患関連タンパク質検出、品質管理(例えば食物アレルゲンのモニタリング)に広く使用されています。超音波サンプル調製は、細胞をライゼし、細胞内タンパク質、DNA、RNAおよびオルガネラを単離するための迅速で信頼性の高い再現性の高い技術です。ヒールシャー超音波は、単一のサンプル、複数のバイアルだけでなく、マイクロタイタープレートと96ウェルプレートの便利な準備のための様々な超音波ソリューションを提供しています。

Elisa – 酵素結合免疫吸着アッセイ

ELISAは、酵素結合免疫吸着アッセイの略で、リガンド結合アッセイのカテゴリーの生物化学的分析技術として広く使用されています。ELISAでは、液体サンプルが特殊な結合特性を持つ定常固相に添加されます。通常、定常固相はウェルプレートまたはELISAプレートにコーティングとして適用される。次いで、種々の液体試薬が順次加えられ、インキュベートされ、洗浄され、最終的に光学的変化(例えば、酵素反応の生成物による色現像)が井戸内の最終液体中に生じることとなる。光学的変化は、いわゆる定量によって分析物の量を測定することを可能にする “読み取り"。定量的読み取りでは、分光光度計、蛍光計、またはルミノメーターを使用して、透過光の強度を検出および測定します。検出の感度は、分析反応中の信号の増幅によって影響されます。酵素反応は十分に調査され、信頼できる増幅プロセスであるため、酵素を使用してシグナルを生成します。酵素は、正確な定量を可能にするために、検出試薬に固定された割合でリンクされており、「酵素結合」免疫吸着アッセイという名前も説明しています。
ELISAアッセイはマイクロタイタープレート/96ウェルプレートで行われるため、プレートベースのアッセイ技術として知られており、抗体、ペプチド、タンパク質、ホルモンの検出と定量に関する臨床体外診断、研究、医薬品開発などに使用されています。
ELISA技術は医学、バイオテクノロジー、植物病理学の診断ツールとして頻繁に使用され、また、複数の産業で重要な品質管理測定である。

完全VialTweeterセットアップ:超音波プロセッサでVialTweeterソノトロードUP200St

超音波サンプル準備ユニット VialTweeter ELISAアッセイの前に細胞のリシスおよびタンパク質抽出に使用される

情報要求




私たちの注意してください 個人情報保護方針


ELISA前の超音波サンプル準備

ELISAアッセイを行う前に、サンプルは細胞内タンパク質、DNA、RNAなどの細胞ライシスおよび抽出などの調製手順を必要とします。超音波細胞溶解とタンパク質の分離の利点は、その高効率、信頼性と再現性です。これらの要素は、高品質の診断と研究成果を得るために重要です

ELISA前超音波ライシスの利点

  • 均質なサンプル処理
  • 完全なリシス
  • 完全なタンパク質抽出(例えば抗体、DNA)
  • 細胞タイプへの最適な適合
  • 任意のサンプルサイズ
  • 再現性
  • 温度制御
  • SDカードでの自動データプロトコル

プレELISA超音波セルライシスのためのプロトコル

溶解のためUP200St insonifierプローブ型

  • 細胞培養の場合: 超音波細胞のリシスの前に、遠心分離細胞は、マイクロ遠心分離機で270 x gで5分間の細胞。吸引によって上清を取り除き、RIPAバッファーの30〜100 μLの細胞を再懸濁します。その後、氷上の細胞ペレットを30分間インキュベートする。
  • さて、細胞サンプルは超音波の分析の準備ができています:
    プローブ型超音波式超音波器(例えば. Uf200ःトン S26d2プローブ)または超音波マルチサンプルデバイス(例えば、最大10バイアルの同時超音波処理のためのVialTweeterまたはマイクロティタープレート/96ウェルプレート用UIP400MPT)を準備する必要があるサンプルの量に応じて。
    単一サンプルのプローブ型超音波処理の場合、細胞を1.5 mLマイクロ遠心分離チューブに入れる。
  • 超音波処理器のデジタルメニューに超音波の持続時間、総エネルギー入力、サイクルモードおよび/または温度制限を事前に設定します。これは高い信頼性の超音波処理および反復性を保障する。
  • ソトロードをインセットし、超音波デバイスをオンに切り替えます。サンプルを通して超音波プローブのマイクロチップを穏やかに動かして、サンプルを均一に超音波処理します。
    ほとんどの細胞では、超音波ライシスは10秒超音波処理の2-4サイクル後に完了します。
  • 超音波処理の後、サンプルからソトロードを取り除きます。サンプルは氷上で5分間インキュベートする必要があります。その後、10,000xgで遠心分離機を20分間ペレットし、破片をペレット化する。上清を新しいマイクロ遠心チューブに移します。検数にラベルを付け、-20°Cで保存します。
  • 超音波ソトロードは、アルコール、例えば70%エタノールで満たされたビーカーでアルコールまたは超音波で適切にそれを拭くことによって洗浄することができます。チタンから作られたすべての超音波プローブは、オートクレーブ可能です。

組織ホモジナイズの場合:

  • 過剰な溶血血液を徹底的に除去するために、氷冷PBS(0.01M、pH=7.4)で組織をすすぎ。
  • 組織(腎臓、心臓、肺、脾臓など)を計量し、PBSで均質化された小片に浸食します。必要なPBSの体積は、組織の重量に関連する。経験則として、1gの組織は約9mL PBSを必要とする。PBSにプロテアーゼ阻害剤を加えることを推奨します。(プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを含むRIPAまたは低張性リシスバッファーを代用することができる)
  • 組織の大きさに応じて、短い渦処理(約1〜15秒パルス)が組織を前処理するのに役立ちます。
  • マイクロチップ(S26d2など)を超音波処理器に取り付ける。サンプルチューブを組織と一緒に氷浴に入れる。
  • サンプルを超音波処理器で超音波処理し、例えば、UP200St(80%振幅)パルスモード(15秒、15秒の休止)で1分間超音波処理します。氷浴中にサンプルを保管してください。
  • ホモジナートは、分析のためにタンパク質を濃縮するために、特定のプール(細胞質、核、ミトコンドリアまたはリソソーム)を得るために遠心化される。5000gで5分間サンプルを遠心×することにより、上清を取り出す。
ソトロードMTP-24-8-96は、マイクロティタープレートの井戸の超音波処理のための8つの超音波プローブを持っています。

ソトロードMTP-24-8-96は、マイクロティタープレートの井戸の超音波処理のための8つの超音波プローブを持っています。

超音波処理中の信頼性の高い温度制御

温度は、タンパク質の熱分解を防ぐために、生物学的サンプルの治療に特に重要なプロセスに影響を与える重要な因子です。すべての機械的サンプル調製技術として、超音波処理は熱を作成します。しかし、サンプルの温度は、ヒールシャー超音波デバイスを使用する場合によく制御することができます。プローブ型超音波処理器またはVialTweeterを事前分析的に準備しながら、サンプルの温度を監視および制御するためのさまざまなオプションをご紹介します。

  1. サンプル温度の監視:すべてのヒールシャーデジタル超音波プロセッサは、インテリジェントなソフトウェアとプラグ可能な温度センサが装備されています。温度センサーを超音波デバイスに差し込みます(例えば、 Uf200ःトンUP200StVialTweeter、UIP400MTP)をクリックし、温度センサの先端をサンプルチューブの1つに挿入します。デジタル色のタッチディスプレイを介して、あなたは、あなたのサンプル超音波処理のための特定の温度範囲の超音波プロセッサのメニューに設定することができます。超音波処理器は、最大温度に達すると自動的に停止し、サンプル温度が設定温度の低い値まで∆されるまで一時停止します。その後、超音波処理が再び自動的に開始します。このスマートな特徴は熱誘起の低下を防ぐ。
  2. 超音波マルチサンプルユニットVialTweeterに関しては、サンプルチューブを保持するチタンブロックを事前に冷却することができます。VialTweeterブロック(トランスデューサーなしのソトロードのみ!)を冷蔵庫または冷凍庫に入れて、チタンブロックを事前に冷却すると、サンプルの温度上昇を延期するのに役立ちます。可能であれば、サンプル自体も事前に冷却することができます。
  3. 超音波処理中に冷却するために氷浴やドライアイスを使用してください。超音波処理中にサンプルチューブを氷浴に入れる。VialTweeterの場合は、ドライアイスで満たされた浅いトレイを使用し、熱が急速に消散できるようにドライアイスの上にVialTweeterを置きます。

世界中のお客様は、ヒールシャープローブ超音波装置だけでなく、生物学的、生化学的、医療および臨床研究所で毎日のサンプル調製作業のために、複数サンプル超音波ユニットVialTweeterとUIP400MTPを使用しています。ヒールシャープロセッサのインテリジェントなソフトウェアと温度制御により、温度が確実に制御され、熱誘起試料劣化が回避されます。ヒールシャー超音波ソリューションと超音波サンプルの準備は、信頼性が高く、再現性の高い結果を提供します!

お問い合わせ! / 私達に聞いてくれ!

詳細を尋ねる

超音波プロセッサ、アプリケーション、価格に関する追加情報を要求するには、以下のフォームを使用してください。私たちはあなたとあなたのプロセスを議論し、あなたの要件を満たす超音波システムを提供するために喜んでいるでしょう!









予めご了承ください。 個人情報保護方針


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

ヒールシャー超音波は、ラボ、パイロット、工業規模でアプリケーション、分散、乳化および抽出を混合するための高性能超音波ホモジナイザーを製造しています。

文献 / 参考文献



知る価値のある事実

ELISAの種類

ELISAには、その機能原理によって区別されるいくつかのタイプがあります。それらは直接ELISA、間接ELISA、サンドイッチELISA、競合ELISA、および逆ELISAとして知られている。以下では、さまざまなELISAタイプとその主な特性と相違点の概要を紹介します。
ELISAは定性的または定量的な形式で実行され得る。定性的な結果は単純な正または負の結果を提供し、定量ELISAではサンプルの光学密度(OD)は標準曲線と比較され、これは典型的には標的分子の既知の濃度溶液の逐次希釈である。

ダイレクトエリサ

直接ELISAはエリサの最も単純なアッセイ形態であり、酵素標識された一次抗体のみが使用され、二次抗体は必要ありません。酵素標識された一次抗体は、標的、すなわち抗原に直接結合する。緩衝された抗原溶液は、マイクロチタープレート(通常96ウェルプレート、ELISAプレート)の各ウェルに添加され、電荷相互作用によってプラスチック表面に付着する。一次抗体に結合した酵素がその基質と反応すると、分光光度計、蛍光計、またはルミノメーターを介して測定できる可視シグナルが生成されます。

間接エリサ

間接ELISA試験では、一次抗体と二次抗体の両方が必要です。 しかし、直接ELISAに反して、一次抗体ではなく、二次抗体は酵素で標識される。抗原はウェルプレートに固定化され、一次抗体によって結合される。続いて、酵素標識二次抗体は、一次抗体に結合する。最後に、二次抗体に結合した酵素は、その基質と反応して、検出可能な可視シグナルを生成する。

サンドイッチELISA

直接および間接ELISA試験では、抗原が固定化され、ウェルプレートの表面にコーティングされ、サンドイッチELISAでは抗体がELISAプレートのプラスチック表面に固定化される。サンドイッチELISAにおける固定化抗体は、捕獲抗体として知られている。さらに、捕捉抗体には、サンドイッチELISAにおいてもいわゆる検出抗体が必要である。検出抗体は、標識されていない一次検出抗体および酵素標識二次検出抗体を含む。
段階的に、目的の抗原は、プレートに固定化された捕捉抗体に結合する。そして、一次検出抗体は抗原に結合する。その後、二次検出抗体は、一次検出抗体に結合する。最終反応ステップでは、酵素がその基質と反応して、光学的に検出できる可視シグナルを生成する。

競争力のあるELISA

競合性ELISAは、阻害ELISAとしても知られており、阻害抗原の使用を伴うため最も複雑なELISAタイプである。3つのフォーマットのそれぞれは、直接、間接、およびサンドイッチELISA、競合ELISA形式に適合させることができる。競合性ELISAにおいて、阻害剤抗原および目的の抗原は、一次抗体への結合を競う。
競合性ELISAの場合、標識されていない抗体は、その抗原、すなわちサンプルの存在下でインキュベートされる。これらの結合抗体/抗原複合体は、次いで抗原コーティングウェルに添加される。
プレートを洗浄し、非結合抗体が除去されるようにする。競合性ELISAは、サンプル中の抗原が多いほど、抗原抗体複合体が形成されるという事実のためにその名前を有する。つまり、ウェル内の抗原に結合できる非結合抗体が少なく、抗原は利用可能な抗体を競わなければならない。一次抗体と一致する二次抗体が添加される。この第二抗体は、酵素にリンクされています。基質を加えた場合、残りの酵素は発泡シグナルまたは蛍光シグナルを生成する。
この時点で、反応は、シグナルの最終的な飽和を避けるために停止されます。
いくつかの競合するELISAキットには、酵素結合抗体の代わりに酵素結合抗原が含まれる。標識された抗原は、サンプル抗原(標識なし)と一次抗体結合部位を競う。サンプル中の抗原が少ないほど、標識された抗原はウェル内に保持され、シグナルは強くなります。

リバースエリサ

リバースELISAはプレートを十分に使用しませんが、試験液中に懸濁した抗原を残します。逆ELISA試験では、抗原を介して結合抗体の量を測定する。これは、西ナイルウイルスエンベロープタンパク質を検出し、調査し、ウイルス特異的抗体を見つけることができる方法を特に開発しました。

ELISAに使用される酵素マーカー

以下のリストは、ELISAアッセイで使用される最も一般的な酵素マーカーを示しており、アッセイの結果を完了時に測定することができます。

  • OPD(オフェニレンアミンジヒドロクロリド)は、コンジュゲートタンパク質としてよく使用されるHRP(ホースラディッシュペルオキシダーゼ)を検出するために琥珀色に変わります。
  • TMB (3,3′,5,5′-テトラメチルベンジジン)は、HRPを検出すると青色に変わり、硫酸やリン酸を添加した後に黄色に変わります。
  • ABTS (2,2)′-アジノビス[3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸]-ジアンモニウム塩はHRPを検出すると緑色に変わります。
  • PNPP(p-ニトロフェニルリン酸、二ナトリウム塩)は、アルカリホスファターゼを検出すると黄色に変わります。