ヒールシャー超音波技術

超音波によるBL21細胞の細胞リシス

BL21細胞は、高効率のタンパク質を発現する能力により、研究所、バイオテクノロジー、工業生産で広く使用されている大腸菌の株です。超音波細胞破壊、ライシスおよびタンパク質抽出は、BL21細胞の細胞内部から標的タンパク質を単離し、収集する一般的な方法である。超音波処理は細胞を完全に破壊し、すべての包まれっとたんぱく質を放出し、タンパク質の100%を利用可能にします。

タンパク質発現用BL21細胞

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21細胞は、T7 RNAポリメラーゼ-IPTG誘導システムを用いた変換および高レベルタンパク質発現に適した化学的に有能な大腸菌株です。BL21細胞はT7プロモーターの制御下にあるあらゆる遺伝子の高効率タンパク質発現を可能にする。大腸菌株BL21(DE3)は、T7プロモーターベースの発現ベクターと組み合わせたT7 RNAポリメラーゼベースのタンパク質産生株であり、組換えタンパク質を作製するために研究室や産業で広く応用されています。BL21(DE3)では、組換えタンパク質をコードする遺伝子の発現は、従来の大腸菌RNAPに比べ8倍速く転写される染色体コードT7 RNAポリメラーゼ(T7 RNAP)によって転写される。これにより、株BL21(DE3)は高効率になり、最も好ましいタンパク質発現細胞系の1つに変わります。

BL21細胞からの超音波リシスおよびタンパク質抽出のためのプロトコル

BL21細胞の細胞リシスは、主にラウロイルサルコシン酸ナトリウム(サルコシルとも呼ばれる)をリシス緩衝液として組み合わせて超音波処理を行う。超音波細胞破壊とタンパク質抽出の利点は、信頼性、再現性だけでなく、超音波器のシンプルで安全かつ迅速な操作にあります。以下のプロトコルは、超音波BL21細胞のリシスのためのステップバイステップの方向を与えます:

溶解のためUP200St insonifierプローブ型

超音波セル破壊器 UP200St リシスおよびタンパク質抽出用マイクロチップ S26d2

情報要求




私たちの注意してください 個人情報保護方針


  • シャペロンタンパク質を除去するために、BL21細菌ペレットを50mlの氷冷トリスEDTA(STE)緩衝液(10 mMトリス-HCL、pH 8.0、1mM EDTA、150 mM NaClで100 mM PMSFで補う)の50mlに再懸濁した。
  • 500ulのリソザイム(10mg/ml)を加え、15分間氷上で細胞をインキュベートする。
  • その後、500ulのDTTと7mlのサルコシル(10%(w/v)をSTEバッファーで構成する)を添加する。
  • すべての精製バッファーを氷冷に保ち、常に氷の上にサンプルを維持することが不可欠です。すべての精製ステップは、可能であれば冷たい部屋で行われるべきです。
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • 超音波の分析とタンパク質抽出のために、サンプルは、超音波処理されます。 バイアルツイーター マルチサンプル超音波処理器 各超音波処理の間に2分間隔で100%振幅で4 x 30秒のために。あるいは、マイクロチップを有するプローブ式超音波ホモジナイザー、例えば、 Uf200ःトン S26d2(3 x 30秒、超音波サイクル間の2分の休止、80%振幅)を使用することができます。
  • さらなる精製工程では、サンプルを氷上に保管するか、またはさらに処理するまで-80°Cで保存する必要があります。

プレシス温度制御下の超音波リシス

生物学的サンプルを扱う際には、正確で信頼性の高い温度制御が重要です。高温は、サンプル中に熱誘発タンパク質分解を開始します。
すべての機械的サンプル調製技術として、超音波処理は熱を作成します。ただし、VialTweeterを使用する場合、サンプルの温度を十分に制御できます。分析のためにVialTweeterとVialPressでそれらを準備しながら、あなたのサンプルの温度を監視し、制御するための様々なオプションを提示します。

  1. サンプル温度を監視する:VialTweeterを駆動する超音波プロセッサUP200Stは、インテリジェントなソフトウェアとプラグ可能な温度センサーが装備されています。温度センサーをUP200Stに差し込み、温度センサーの先端をサンプルチューブの1つに差し込みます。デジタルカラーのタッチディスプレイを介して、UP200Stのメニューでサンプル超音波処理のための特定の温度範囲を設定することができます。超音波処理器は、最大温度に達すると自動的に停止し、サンプル温度が設定温度の低い値まで∆されるまで一時停止します。その後、超音波処理が再び自動的に開始します。このスマートな特徴は熱誘起の低下を防ぐ。
  2. VialTweeterブロックは事前に冷却することができます。VialTweeterブロック(トランスデューサーなしのソトロードのみ!)を冷蔵庫または冷凍庫に入れて、チタンブロックを事前に冷却すると、サンプルの温度上昇を延期するのに役立ちます。可能であれば、サンプル自体も事前に冷却することができます。
  3. 超音波処理中に冷却するためにドライアイスを使用してください。ドライアイスで満たされた浅いトレイを使用し、熱が急速に消散できるように、氷の上にVialTweeterを置きます。

世界中のお客様は、生物、生化学的、医療、臨床検査室での毎日のサンプル調製作業にVialTweeterとVialPressを使用しています。UP200Stプロセッサのインテリジェントなソフトウェアと温度制御により、温度が確実に制御され、熱誘起試料劣化を回避します。VialTweeterとVialPressでの超音波サンプル調製は、信頼性が高く、再現性の高い結果を提供します!

あなたのLysisアプリケーションのための最適な超音波ディスラプターを見つける

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.ヒールシャー超音波は、ラボ、ベンチトップ、工業用スケールシステムのための高性能超音波セル破壊機とホモジナイザーの長年の経験豊富なメーカーです。あなたの細菌細胞培養サイズ、研究や生産目標、1時間または1日あたりの処理する細胞の量は、アプリケーションに適した超音波細胞破壊剤を見つけるために不可欠な要因です。
ヒールシャー超音波は、マルチサンプル(VialTweeterで最大10バイアル)と質量サンプル(すなわち、複数の超音波処理のための様々なソリューションを提供しています。 マイクロタイタープレート/ ELISAプレートとUIP400MTP)、および50〜400ワットの異なる電力レベルを持つ古典的なプローブタイプのラボ超音波装置は、商業用細胞破壊および大規模な生産におけるタンパク質抽出のために、1ユニットあたり最大16,000ワットの完全工業用超音波プロセッサに。すべてのヒールシャー超音波処理器は、全負荷の下で24/7/365操作のために構築されています。堅牢性と信頼性は、当社の超音波デバイスのコア機能です。
すべてのデジタル超音波ホモジナイザーは、ラボや生産設備で便利な作業ツールに超音波デバイスを作るスマートソフトウェア、色のタッチディスプレイと自動データプロトコルが装備されています。
どのような細胞、どのような体積、周波数、どのようなターゲットを使用して生物学的サンプルを処理する必要がありますのかお知らせください。私たちはあなたのプロセスの要件に最適な超音波セルの破壊を推奨します。

以下の表は、コンパクトなハンドヘルドホモジナイザーやマルチサンプル超音波装置から商用アプリケーション用の産業用超音波プロセッサまでの超音波システムのおおよその処理能力を示しています。

バッチ容量 流量 推奨デバイス
96ウェル/マイクロティタープレート N.A。 UIP400MTP
10バイアルア0.5〜1.5mL N.A。 UP200StでVialTweeter
0.01~250mL 5~100mL/分 UP50H
0.01~500mL 200mL /分で10 UP100H
2000mlの10〜 20 400mLの/分 Uf200ःトンUP400St
00.1 20Lへ 04L /分の0.2 UIP2000hdT
100Lへ10 10L /分で2 UIP4000hdT
N.A。 10 100L /分 UIP16000
N.A。 大きな のクラスタ UIP16000

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超音波プロセッサ、アプリケーション、価格に関する追加情報を要求するには、以下のフォームを使用してください。私たちはあなたとあなたのプロセスを議論し、あなたの要件を満たす超音波システムを提供するために喜んでいるでしょう!









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Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

超音波装置 Uf200ःトン 小さいサンプルの超音波処理のための2mmマイクロティップS26d2と

文献 / 参考文献



知る価値のある事実

大腸菌

大腸菌は、非胞毛形成、グラム陰性であり、ストレートロッドの形態によって特徴付けられる細菌タイプである。大腸菌は、人間や動物の環境、食品、腸内に存在します。大腸菌は通常、腹性の旗エラを使用してモチルであるが、非motileタイプもあります。大腸菌は、いわゆる気性嫌気性のケムーアガノートロフ生物であり、呼吸と発酵の両方の代謝が可能であることを意味します。ほとんどの大腸菌タイプは良性であり、体内で有用な機能を果たす,例えば有害な細菌種の増殖を抑制し,ビタミンを合成する等.
いわゆるB型の大腸菌細胞は、バクテリオファージ感受性や制限修飾系などの機構を調べる研究で広く使用されている大腸菌株の特殊なカテゴリーです。さらに、大腸菌は、バイオテクノロジーおよびライフサイエンス研究所におけるタンパク質発現のための信頼できる役馬として評価されています。例えば、大腸菌は、工業的規模でタンパク質やオリゴ糖などの化合物を合成するために使用されます。プロテアーゼ欠乏症、高レベルのグルコースでの低酢酸産生、透過性の向上など、特に特長が高いため、大腸菌B細胞は遺伝子組み換えタンパク質の産生に最も頻繁に宿主細胞を使用しています。

組換えタンパク質

化学生産、医薬、化粧品、人畜医学、農業、食品、廃棄物処理産業など、マニホールドの枝で組換えタンパク質(rProt)が重要な重要性を増しています。
組換えタンパク質の生産には、発現系の使用が必要です。組換えDNAの産生のための細胞系を発現させるとして、原核細胞および真核細胞の両方を使用することができる。細菌細胞は、低コスト、容易な拡張性および単純な媒体条件などの要因のためにタンパク質発現に最も広く使用されている一方で、哺乳類、酵母、藻類、昆虫および無細胞系は確立された代替手段である。タンパク質タイプとしては、機能的活性、並びに発現タンパク質の必要な収量が、タンパク質発現に使用される細胞系の選択に影響を及ぼす。
組換えタンパク質を発現させるためには、特定の細胞を組換えDNAの鋳型を含むDNAベクターをトランスフェクトする必要があります。その後、テンプレートにトランスフェクトされた細胞が培養されます。細胞機構の結果として、細胞は、目的のタンパク質を転写および翻訳し、それによって標的タンパク質を産生する。
発現したタンパク質が細胞マトリックスに閉じ込められているので、細胞を分解(破壊および破壊)してタンパク質を放出する必要があります。その後の精製工程において、タンパク質は分離され、精製される。
治療に使用された最初の組換えタンパク質は、1982年に組換えヒトインスリンであった。現在、世界中で170種類以上の組換えタンパク質が医療用に生産されています。医学で使用される一般的に使用される組換えタンパク質は、例えば組換えホルモン、インターフェロン、インターロイキン、 成長因子、腫瘍壊死因子、血液凝固因子、血栓溶解薬、糖尿病、小人症、心筋梗塞、うっ血性心不全、脳アポレクシー、多発性硬化症、好中球減少症、血小板減少症、貧血、肝炎、慢性関節リウマチ、喘息、慢性疾患、喘息、慢性疾患、慢性疾患、慢性疾患、慢性疾患、慢性疾患、血液凝固薬、血栓溶解薬、および主要疾患を治療するための酵素(cf. Phuc V. Pham, オミックステクノロジーズとバイオエンジニアリング, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

高性能超音波!ヒールシャーの製品範囲は、完全工業用超音波システムにベンチトップユニット上のコンパクトラボ超音波装置から完全なスペクトルをカバーしています。