超音波処理で調製した緩衝液

溶解バッファーは、超音波組織ホモジナイザーを使用して効率的かつ迅速に調製できます。超音波処理器は、混合、溶解、分散のための夢のツールであるため、溶解緩衝液の信頼性が高くユーザーフレンドリーな調製が可能です。

溶解緩衝液の超音波調製

超音波組織ホモジナイザーは、細胞の破壊、溶解および抽出のための一般的なツールであり、したがって、ほとんどの研究室で利用可能である。プローブ型超音波装置の二次的な用途は、溶解緩衝液の調製である。

Lysis Bufferは、細胞を分離(溶解)し、その内容物を放出して下流の分析に利用する溶液です。溶解バッファーの特定の組成は、溶解する細胞の種類と下流のアプリケーションによって異なります。ただし、一般的な溶解バッファーには、界面活性剤、塩、プロテアーゼ阻害剤などの成分が含まれています。緩衝塩(Tris-HClなど)とイオン性塩(NaClなど)は、ライセートのpHと浸透圧を調節するために一般的に使用されます。
溶解バッファーを作るには、成分を適切な濃度とpHで混合します。混合物は通常、成分が溶解し、溶液が均一になるまで攪拌または振とうされます。
超音波均質化は、成分の混合および溶解を改善することにより、良好な溶解緩衝液を作るのを助けるために使用できる方法である。この方法では、超音波 – 通常、20〜30kHzの範囲です – 混合物に適用されると、キャビテーション気泡が発生して崩壊し、強い局所エネルギーが生成され、機械的なせん断と成分の混合につながります。
超音波均質化プロセスは、成分の塊または凝集体をバラバラにし、溶液が均一に混合されるようにするのに役立ちます。その結果、このような改良された溶解バッファーは、より効率的な細胞破壊と抽出された材料のより高い収率につながる可能性があります。さらに、超音波均質化は、従来の攪拌または振とう方法と比較して、溶解緩衝液の作成に必要な時間を短縮することができる。
全体として、超音波均質化は、溶解緩衝液調製の品質と効率を向上させるための強力なツールです。

超音波溶解バッファー調製のためのプロトコル

これは、プローブ型超音波装置を使用して溶解緩衝液を作成するための一般的なプロトコルです。
 
料：

• お好みの洗剤(Triton X-100、SDS、CHAPSなど)
• 選択した塩(NaCl、KClなど)
• プロテアーゼ阻害剤(PMSF、アプロチニン、ロイペプチンなど)
• 超音波装置
• スターラー
• 脱イオン水
• pHメーターまたはpHストリップ

 
 
手順：

1. ライシスバッファーの組成は、ライシングする細胞または組織、およびライセートを使用するダウンストリームアプリケーションに基づいて決定します。界面活性剤、塩類、プロテアーゼ阻害剤の原液を所望の濃度で調製します。
2. 洗剤、塩、プロテアーゼ阻害剤のストック溶液をビーカーまたはフラスコに加えます。
3. 脱イオン水を加えて、必要な量のバッファーまでボリュームを上げます。
4. 攪拌機を使用して成分を混合し、プレミックス溶液を得ます。
5. pHメーターまたはpHストリップを使用してバッファーのpHを測定し、必要に応じて少量の酸または塩基でpHを調整します。
6. プローブ型超音波装置を使用してプレミックス溶液を均質化し、非常に均質な溶液が得られるようにします。したがって、溶液が完全に混合され、塊や凝集体が分解されるまで、溶液を数秒間超音波処理します。超音波処理の持続時間と出力は、使用される特定の溶解緩衝液と超音波装置に基づいて最適化できます。
7. 超音波処理後、緩衝液のpHを再測定し、必要に応じて調整します。
8. 0.2ミクロンのフィルターでバッファーをろ過して、超音波処理中に形成された可能性のある破片や凝集体を取り除きます。
9. これで、溶解バッファーを使用する準備が整いました。

 
注:溶解バッファーの正確な組成とpHは、溶解する細胞または組織、および下流のアプリケーションによって異なります。上記のプロトコルは一般的なガイドラインであり、特定のアプリケーション向けに最適化する必要がある場合があります。
 
超音波ホモジナイザーは、細胞破壊および細胞内分子の抽出に一般的に使用されます。したがって、多くの溶解アプリケーションは、溶解バッファーの調製だけでなく、機械的細胞破壊および抽出にもプローブタイプの超音波処理を使用します。
これにより、超音波組織ホモジナイザーは実験室にとって用途の広いツールとなり、微生物学、バイオテクノロジー、ライフサイエンスにおける超音波装置の幅広い使用を説明しています。

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