溶解バッファーは、超音波組織ホモジナイザーを使用して効率的かつ迅速に調製することができます。超音波処理器は、混合、溶解、分散のための夢のツールであるため、溶解バッファーの信頼性の高いユーザーフレンドリーな調製を可能にします。

溶解バッファーの超音波調製

超音波組織ホモジナイザーは、細胞破壊、溶解および抽出のための一般的なツールであり、したがって、ほとんどの研究室で利用可能です。プローブ型超音波処理器の二次用途は、溶解バッファーの調製です。

溶解バッファーは、細胞を切断(溶解)し、ダウンストリーム分析のためにその内容物を放出するために使用される溶液です。溶解バッファーの具体的な組成は、溶解される細胞の種類とダウンストリームアプリケーションによって異なります。ただし、一般的な溶解バッファーには、界面活性剤、塩、プロテアーゼ阻害剤などの成分が含まれています。緩衝塩(例えばTris-HCl)およびイオン性塩(例えばNaCl)は、ライセートのpHおよび浸透圧を調節するために一般的に使用される。
溶解バッファーを作るために、成分は適切な濃度とpHで一緒に混合されます。混合物は通常、成分が溶解しそして溶液が均質になるまで撹拌または振盪される。
超音波均質化は、成分の混合および溶解を改善することによって良好な溶解緩衝液を作るのを助けるために使用することができる方法です。この方法では、超音波 – 通常20〜30kHzの範囲 – 混合物に適用され、崩壊して強烈な局所エネルギーを生成するキャビテーション気泡を生成し、成分の機械的せん断と混合につながります。
超音波均質化プロセスは、成分の塊や凝集体を分解し、溶液が均一に混合されていることを確認するのに役立ちます。その結果、このような改良された溶解バッファーは、より効率的な細胞破壊および抽出された物質のより高い収率をもたらし得る。さらに、超音波均質化は、従来の攪拌または振とう方法と比較して、溶解バッファーを作るのに必要な時間を短縮することができます。
全体として、超音波均質化は、溶解バッファー調製の品質と効率を改善するための強力なツールです。

超音波溶解バッファー調製のためのプロトコル

これは、プローブ型超音波装置を使用して溶解バッファーを作成するための一般的なプロトコルです。
 
材料：

• 選択した洗剤(例:トリトンX-100、SDS、CHAPS)
• 選択した塩(例:NaCl、KCl)
• プロテアーゼ阻害剤(例:PMSF、アプロチニン、ロイペプチン)
• 超音波装置
• スターラー
• 脱イオン水
• pHメーターまたはpHストリップ

 
 
手順：

1. 溶解する細胞または組織、およびライセートを使用するダウンストリームアプリケーションに基づいて、溶解バッファーの組成を決定します。界面活性剤、塩、プロテアーゼ阻害剤のストック溶液を希望の濃度で調製します。
2. 洗剤、塩、プロテアーゼ阻害剤のストック溶液をビーカーまたはフラスコに加えます。
3. 脱イオン水を加えて、容量を希望のバッファー量まで上げます。
4. プレミックス溶液を得るためにスターラーを使用して成分を混合する。
5. pHメーターまたはpHストリップを使用してバッファーのpHを測定し、必要に応じて少量の酸または塩基でpHを調整します。
6. プローブ型超音波処理器を使用して、非常に均質な溶液が得られるようにプレミックス溶液を均質化する。したがって、溶液が完全に混合され、塊や凝集体が分解されるまで、数秒間溶液を超音波処理します。超音波処理の期間とパワーは、使用される特定の溶解バッファーと超音波処理器に基づいて最適化することができます。
7. 超音波処理後、バッファーのpHを再測定し、必要に応じて調整します。
8. 0.2ミクロンのフィルターを通してバッファーをろ過して、超音波処理中に形成された可能性のある破片や凝集体を除去します。
9. これで、溶解バッファーを使用する準備が整いました。

 
注:溶解バッファーの正確な組成とpHは、溶解する細胞または組織、および下流のアプリケーションによって異なります。上記のプロトコルは一般的なガイドラインであり、特定のアプリケーション用に最適化する必要がある場合があります。
 
超音波ホモジナイザーは、細胞破壊および細胞内分子の抽出に一般的に使用されます。したがって、多くの溶解アプリケーションは、溶解バッファーの調製だけでなく、機械的細胞破壊および抽出のためにプローブ型超音波処理を使用する。
これは、超音波組織ホモジナイザーを実験室のための汎用性の高いツールにし、微生物学、バイオテクノロジーおよびライフサイエンスにおける超音波装置の幅広い使用を説明します。

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