Lyse von Hefezellen in Mikrotiterplatten mit hochintensivem Ultraschall
Mikrobiologen und Forscher aus den Lebenswissenschaften, die mit Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris / Komagataella phaffii, und auch andere Hefesysteme kennen diese Herausforderung: Hefezellen sind robust, eine reproduzierbare Lyse kann schwierig sein, und das manuelle Aufbrechen der Proben wird schnell zum Engpass, wenn viele Stämme, Klone, Kulturbedingungen oder Expressionskonstrukte untersucht werden müssen.
Hochdurchsatz-Hefe-Lyse für die Mikrobiologie, Molekularbiologie und Proteinanalyse
Hielscher Mikroplatten-Sonikatoren wie der UIP400MTP (400 W) und der UIP550MTP (550 W) bieten eine Lösung Hoch-Durchsatz-Platform für die mechanische Lyse von Hefezellen direkt in Mikroplatten. Anstatt Proben einzeln mit einer Ultraschall-Sonotrode zu bearbeiten, können ganze Mikrotiterplatten unter einheitlichen Bedingungen beschallt werden. Dadurch wird die ultraschall-gestützte Hefe-Lyse schneller, reproduzierbarer und lässt sich leichter in moderne Arbeitsabläufe der Mikrobiologie, Proteinexpression, Enzym-Screening und Omics integrieren.
Ganz gleich, ob Sie rekombinante Proteine aus P. pastoris freisetzen, Hefelysate für Enzymtests aufbereiten, S. cerevisiae für die Proteinanalyse aufbrechen oder Dutzende von Hefeklonen parallel screenen möchten – die Hielscher Mikroplatten-Sonikatoren bieten eine leistungsstarke, auf Kavitation basierende Lyse mit präziser Prozesssteuerung.
Suchen Sie eine reproduzierbare Methode zur Lyse von S. cerevisiae, P. pastorisoder anderen Hefestämmen in Mikrotiterplatten? Teilen Sie uns Ihr Plattenformat, das Probenvolumen, die Zelldichte und den zu analysierenden Analyten mit. Wir helfen Ihnen dabei, geeignete Ultraschallparameter für Ihren Workflow mit dem UIP400MTP oder UIP550MTP zu definieren.
HielscherMulti-Well Plate Sonicator für die Lyse von Hefezellen – Probenvorbereitung im Hochdurchsatzverfahren
Warum für Hefezellen eine effiziente mechanische Lyse notwendig ist
Hefezellen lassen sich schwerer aufschließen als viele Bakterien- oder Säugetierzellen, da sie durch eine starre Zellwand geschützt sind, die hauptsächlich aus Polysacchariden, Glucanen, Mannoproteinen und Chitin besteht. Diese Zellwand sorgt für mechanische Stabilität, schränkt jedoch auch die Freisetzung intrazellulärer Proteine, Nukleinsäuren, Metaboliten und Enzyme ein.
Zu den herkömmlichen Methoden zur Hefelyse zählen das Bead-Beating, die enzymatische Aufspaltung, Gefrier-Auftau-Zyklen, die chemische Lyse und die Beschallung mit einer Ultraschallspitze. Diese Methoden sind zwar wirksam, weisen jedoch auch deutliche Einschränkungen auf. Das Bead-Beating kann zu Zelltrümmern und Erwärmung führen, der enzymatische Abbau verursacht zusätzliche Kosten und erzielt häufig variierende Resultate, und die Ultraschallbehandlung mit dem Ultraschallstab einzelner Proben ist zeitaufwendig, wenn eine große Anzahl an Proben verarbeitet werden muss.
Durch hochintensive, fokussierte Ultraschallkavitation lassen sich diese Einschränkungen überwinden, indem intensive mechanische Scherkräfte, Druckschwankungen und Mikroströmungen auf die Hefesuspension einwirken. Das Ergebnis ist ein schneller Aufbruch der Zellwände und -membranen, eine verbesserte intrazelluläre Freisetzung sowie eine in hohem Maße reproduzierbare Probenvorbereitung im Plattenformat.
Beschallung von Mikroplatten zur parallelen Probenvorbereitung von Hefe
Die Hielscher Multiwell-Sonikatoren UIP400MTP und UIP550MTP sind für die gleichmäßige Beschallung von Mikroplatten, Multiwell-Platten, PCR-Platten und Tube Racks ausgelegt. Im Gegensatz zur Beschallung mit der Ultraschallspitze müssen die Proben nicht einzeln behandelt werden. Die gesamte Platte wird kontrollierter Ultraschallenergie ausgesetzt, wodurch sich der Arbeitsablauf hervorragend für die parallele Probenverarbeitung eignet.
Dies ist besonders hilfreich für:
- das Screening von S. cerevisiae Mutanten oder Expressionsstämmen
- Lyse von P. pastoris / K. phaffii Klonen nach der Expression rekombinanter Proteine
- Herstellung von Hefe-Lysaten für Enzymtests
- Proteinextraktion für SDS-PAGE, Western-Blot, ELISA, LC-MS/MS oder Aktivitätsbestimmungen
- Freisetzung intrazellulärer Metaboliten für die Metabolomik
- Aufbereitung von DNA- und RNA-Proben nach einer geeigneten Reinigung
- Hochdurchsatz-Optimierung von Lysepuffern, Additiven und Extraktionsbedingungen
Wie Ultraschallkavitation Hefezellen aufschließt
Bei der Ultraschallbehandlung erzeugt fokussierter Hochleistungsultraschall in der flüssigen Probe abwechselnde Kompressions- und Rarefaktionszyklen. Bei ausreichender Intensität führen diese Druckschwankungen zu akustischer Kavitation. Es bilden sich Kavitationsblasen, die schwingen und zusammenbrechen, wodurch lokale Scherkräfte, Mikrostrahlen, Turbulenzen und starke Druckgradienten entstehen.
In Zellsuspensionen - wie z.B. Hefe - schwächen diese mechanischen Einwirkungen die Zellwand und die Zellmembran und führen zu deren Aufbrechen. Intrazelluläre Proteine, Enzyme, Nukleinsäuren und Metaboliten werden in den Lysepuffer freigesetzt. Da es sich um einen mechanischen Prozess handelt, lässt er sich mit vielen verschiedenen Puffersystemen anwenden und kann mit Proteaseinhibitoren, Reduktionsmitteln, Detergenzien, Salzen oder einer milden enzymatischen Vorbehandlung kombiniert werden.
Allgemeines Protokoll: Lyse von Hefezellen in Multiwell-Platten
Das folgende Protokoll bietet einen praktischen Ausgangspunkt für die Hefelyse mit den Hielscher Mikroplatten-Sonikatormodellen UIP400MTP oder UIP550MTP. Die Parameter sollten entsprechend dem Hefestamm, der Zelldichte, dem Zielmolekül, der Pufferzusammensetzung, dem Plattentyp und dem nachgelagerten Assay optimiert werden.
1. Hefezellen ernten und waschen
Züchten Sie Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Debaryomyces oder einen anderen Hefestamm unter den gewünschten Kulturbedingungen. Ernten Sie die Zellen durch Zentrifugation und entfernen Sie das Kulturmedium. Waschen Sie das Pellet mit kaltem destilliertem Wasser, PBS oder dem ausgewählten Lysepuffer, um restliche Medienbestandteile zu entfernen, die die nachfolgende Analyse beeinträchtigen könnten.
Halten Sie die Proben für die Proteinextraktion kühl und arbeiten Sie zügig. Falls Proteasen ein Problem darstellen könnten, kühlen Sie alle Puffer und Verbrauchsmaterialien vorab.
2. Zellpellet resuspendieren
Das Hefepellet in einem geeigneten kalten Lysepuffer resuspendieren. Für eine effiziente Proteinfreisetzung ist eine hohe Zelldichte oft von Vorteil. Verwenden Sie als Ausgangspunkt etwa 10–20 % (w/v) feuchtes Zellpellet oder eine dichte Suspension, die einer OD von600 > 10, je nach Assay.
Ein typischer Lysepuffer für Hefeproteine kann folgende Komponenten enthalten:
- Puffersystem wie Tris-HCl, Phosphatpuffer oder HEPES
- Salz wie NaCl oder KCl
- Protease-Inhibitor-Cocktail
- ein optionales Reduktionsmittel wie DTT oder β-Mercaptoethanol
- optional ein Tensid wie Triton X-100, NP-40, SDS oder CHAPS, je nach Kompatibilität mit den nachgeschalteten Prozessschritten
- Optionale Phosphatase-Inhibitoren für Phosphorylierungsstudien
Bei schwierigen Hefestämmen oder zur besonders schonenden Proteinextraktion kann vor der Ultraschallbehandlung eine kurze Vorbehandlung mit Zymolyase, Lyticase oder einem anderen zellwandabbauenden Enzym durchgeführt werden. Diese enzymatische Vorbehandlung ist optional, kann jedoch die Lyseeffizienz verbessern oder die erforderliche Ultraschallintensität verringern.
3. Proben in eine geeignete Mikrotiterplatte überführen
Die Hefesuspension in eine für die Ultraschallbehandlung geeignete Mikrotiterplatte geben. Rundbodenplatten werden oft bevorzugt, da sie die Probenentnahme verbessern und Totzonen reduzieren. Verwenden Sie in allen Vertiefungen gleiche Probenvolumina, um die Reproduzierbarkeit zu verbessern.
Verschließen Sie die Platte mit einer geeigneten Abdeckung oder Folie, um Verdunstung, Aerosolbildung und Kreuzkontamination zu verhindern. Stellen Sie sicher, dass der Verschluss mit den gewählten Temperatur- und Ultraschallbedingungen kompatibel ist.
Die üblichen Arbeitsvolumina hängen vom Plattenformat und der Anwendung ab. Zu den gängigen Formaten zählen 96-Well-Platten, Deep-Well-Platten, PCR-Platten oder geeignete Tube Racks.
4. Kühlung der Proben
Die Lyse von Hefezellen erfordert eine hohe Ultraschallintensität, und durch die mechanische Aufbrechung entsteht Wärme. Die Temperaturkontrolle ist daher von entscheidender Bedeutung, insbesondere für die Analyse von Proteinen, Enzymen, RNA oder Phosphorylierungen.
Nutzen Sie eine geeignete Kühlstrategie, zum Beispiel:
- vorgekühlter Lysepuffer
- vorgekühlte Mikrotiterplatten
- Kühlpausen zwischen den Ultraschallbehandlungsintervallen
- Laborkühler anschließen
Das Ziel besteht darin, die Probe ausreichend kühl zu halten, um eine Denaturierung der Proteine, eine Inaktivierung der Enzyme, einen RNA-Abbau sowie durch Hitze bedingte Schwankungen in der Probe zu verhindern.
5. Die Hefesuspension beschallen
Setzen Sie die Platte in den Hielscher UIP400MTP oder UIP550MTP Microplate Sonicator ein und wählen Sie ein gepulstes Ultraschallprogramm aus. Die gepulste Ultraschallbehandlung wird empfohlen, da sie während der EIN-Phasen eine mechanische Aufbrechung und während der AUS-Phasen eine Wärmeableitung ermöglicht.
Hier finden Sie Ausgangsparamter für die Lyse von Hefezellen:
| Parameter | Empfohlener Startbereich | Zweck |
|---|---|---|
| Amplitude | 60–100 % | Hohe Kavitationsintensität bei robusten Hefezellen |
| Pulsmodus | 10–30 Sek. EIN / 30–60 Sek. AUS | Effiziente Lyse bei kontrollierter Wärmeentwicklung |
| Kumulative ON-Zeit | Fünf bis fünfzehn Minuten | Je nach Belastung, Dichte und Zielmolekül anpassen |
| Temperatur | Proben kühl halten | Schützen Sie Proteine, Enzyme, RNA und Metaboliten |
| Plattenversiegelung | Empfohlen | Verhindert Verdunstung, Aerosolbildung und Kreuzkontamination |
Bei hochresistenten Hefesuspensionen, dichter P. pastoris-Biomasse oder der schwierigen Extraktion von rekombinanten Proteinen sollten Sie die kumulative Einschaltzeit schrittweise erhöhen. Bei hitzeempfindlichen Proteinen oder Enzymassays sollten Sie kürzere Impulse, längere Abkühlpausen und eine niedrigere Startamplitude verwenden.
Aufschluss von Hefezellen im Hochdurchsatz in Multiwell-Platten mit dem UIP400MTP
6. Lysat klären
Nach der Ultraschallbehandlung zentrifugieren Sie die Mikrotiterplatte oder füllen Sie die Proben zur Zentrifugation in Röhrchen um. Entfernen Sie Zelltrümmer durch Zentrifugation bei geeigneter Drehzahl und Temperatur. Sammeln Sie den Überstand für die weitere Analyse.
Je nach Anwendungszweck kann das Lysat für folgende Zwecke verwendet werden:
- Quantifizierung von Proteinen
- Enzymaktivitätsbestimmungen
- SDS-PAGE und Western-Blot
- ELISA und Immunoassays
- LC-MS/MS-Proteomik
- Metabolitenanalyse
- DNA- oder RNA-Aufreinigung
7. Methode optimieren und dokumentieren
Um eine reproduzierbare Hefelyse zu gewährleisten, sollten alle relevanten Parameter dokumentiert werden, darunter Stamm, Kulturbedingungen und OD600, Masse der feuchten Zelle, Pufferzusammensetzung, Plattentyp, Probenvolumen, Amplitude, Impulszyklus, kumulative Einschaltzeit, Kühlmethode und Endtemperatur der Probe.
Ist der Hielscher-Ultraschallapparat mit einer automatischen Datenerfassung ausgestattet, können die Prozessdaten zur Dokumentation, Methodenentwicklung, Skalierung und Qualitätskontrolle genutzt werden.
Tipps zur Optimierung der Hefelyse
Um eine maximale Proteinfreisetzung zu erzielen, sollten Sie dichte Hefesuspensionen, eine hohe Ultraschallintensität und eine ausreichende kumulative Einschaltzeit verwenden. Bei empfindlichen Proteinen sollten Sie die Amplitude verringern, die Kühlpausen verlängern und die Platte während des gesamten Durchlaufs kühl halten.
Sollte die Lyse unvollständig sein, erhöhen Sie die Ultraschallbehandlungszeit schrittweise, prüfen Sie eine enzymatische Vorbehandlung, verringern Sie die Viskosität der Probe oder optimieren Sie den Puffer. Sollten Proteine abgebaut werden oder an Aktivität verlieren, verbessern Sie die Kühlung, verkürzen Sie die Einschaltintervalle, fügen Sie Inhibitoren hinzu und vergewissern Sie sich, dass das Detergenssystem mit dem Zielprotein kompatibel ist.
Da sich Hefestämme hinsichtlich Zellwandstruktur, Wachstumsphase, Expressionssystem und Biomasse-Dichte erheblich unterscheiden, wird eine kurze Optimierungsmatrix empfohlen. Testen Sie beispielsweise drei Amplituden, zwei Impulszyklen und zwei Gesamt-Einschaltzeiten und bewerten Sie anschließend die Lyseeffizienz und die Proteinintegrität.
Ganz gleich, ob Sie nur wenige Assay-Platten verarbeiten oder ein Hochdurchsatz-Screening von Hefen durchführen – Hielscher unterstützt Sie gerne bei der Auswahl des passenden Microplate Sonicators und der Entwicklung eines robusten Lyseprotokolls. Kontaktieren Sie uns und teilen Sie uns Ihren Hefestamm, Ihren Arbeitsablauf und Ihre Anforderungen an den Durchsatz mit!
Vorteile der Hielscher Microplate Sonicator für den Hefe-Aufschluss
Die Mikroplatten-Ultraschallgeräte von Hielscher eignen sich ideal für Labore, die eine reproduzierbare Lyse bei einer großen Anzahl von Proben benötigen. Sie machen die zeitaufwändige Bearbeitung einzelner Proben bei der Sondenultraschallbehandlung überflüssig und reduzieren Schwankungen, die durch die manuelle Positionierung der Sonde, die Eintauchtiefe und Unterschiede bei der Handhabung der einzelnen Proben verursacht werden.
Die wichtigsten Vorteile sind:
- High-Throughput Processing: Behandeln Sie zahlreiche Hefeproben parallel in Mikrotiterplatten oder kompatiblen Probenhaltern mit Ultraschall.
- Reproduzierbare Bedingungen: Einheitliche Ultraschallbedingungen in allen Vertiefungen für gleichmäßige, vergleichbare Lyseergebnisse.
- Keine Kreuzkontamination: Die Proben bleiben während der Ultraschallbehandlung versiegelt, wodurch einr Kreuzkontamination verhindert wird.
- Geeignet für robuste Zellen: Hochintensiver Ultraschall unterstützt den Aufbruch der Zellwände von Hefezellen.
- Effizienter Arbeitsablauf: Ideal zum Screening von Stämmen, Klonen, Expressionsbedingungen und Lysepuffern.
- Effizienter Arbeitsablauf: Programmierbare Einstellungen, automatische Datenerfassung und geeignet für die Laborautomatisierung.
Anwendungen in der Biotechnologie und Life Science
Die Ultraschall-Hefe-Lyse in Mikrotiterplatten unterstützt zahlreiche Forschungs- und Screening-Arbeitsabläufe. Bei der Expression rekombinanter Proteine können Klone von P. pastoris und S. cerevisiae parallel lysiert werden, um Expressionsniveaus oder Enzymaktivitäten zu vergleichen. In der Systembiologie und den Omics-Disziplinen verbessert eine standardisierte Lyse die Vergleichbarkeit unter verschiedenen Bedingungen. In der Mikrobiologie ermöglicht die Ultraschallbehandlung die schnelle Aufbereitung von Lysaten aus verschiedenen Stämmen, unter unterschiedlichen Medienbedingungen oder nach Stressbehandlungen.
Zu den typischen Anwendungsbereichen gehören:
- Hefeproteinextraktion
- Screening von rekombinanten Proteinen
- Screening der Enzymaktivität
- Klonauswahl nach der Transformation
- Optimierung der Gärung
- Probenvorbereitung für die Proteomik
- Probenvorbereitung für die Metabolomik
- Untersuchungen zur Zellwandaufspaltung
- Mikrobiologische Hochdurchsatz-Assays
Zuverlässige Hefelyse beginnt mit kontrolliertem Ultraschall
Die Hefelyse kann bei steigender Probenanzahl schwierig sein, doch die Mikroplatten-Ultraschallgeräte von Hielscher machen den Prozess schneller, sauberer und reproduzierbarer. Mit dem UIP400MTP und dem UIP550MTP können Forscher ganze Platten unter definierten Ultraschallbedingungen bearbeiten, wodurch der Durchsatz gesteigert und der manuelle Aufwand reduziert wird.
Für Mikrobiologen, Molekularbiologen, Proteinforscher und Biotechnologielabore ist die Mikrotiterplatten-Ultraschallbehandlung ein leistungsstarkes Werkzeug, um intrazelluläre Hefekomponenten effizient und reproduzierbar freizusetzen.
Häufig gestellte Fragen zur Lyse von Hefezellen durch Ultraschall in Mikrowells
Können Hefezellen durch Ultraschall aufgeschlossen werden?
Ja. Hefezellen wie Saccharomyces cerevisiae und Pichia pastoris können durch hochintensive Ultraschallbehandlung aufgebrochen werden. Durch die Ultraschallkavitation entstehen starke mechanische Scherkräfte, die die Zellwand und die Membran der Hefezellen aufbrechen, wodurch Proteine, Enzyme, Nukleinsäuren und Metaboliten freigesetzt werden.
Warum lassen sich Hefezellen schwerer aufbrechen als Bakterienzellen?
Hefezellen verfügen über eine dicke und mechanisch widerstandsfähige Zellwand, die hauptsächlich aus Glucanen, Mannoproteinen und Chitin besteht. Aufgrund dieser starren Struktur lassen sich Hefezellen schwerer aufbrechen als viele Bakterien- oder Säugetierzellen. Daher erfordert die Lyse von Hefezellen in der Regel eine höhere Intensität, eine längere Bearbeitungszeit oder gegebenenfalls eine enzymatische Vorbehandlung.
Welche Hielscher-Ultraschallgeräte eignen sich für die Hefelyse in Mikrotiterplatten?
Die Modelle UIP400MTP und UIP550MTP von Hielscher eignen sich für die Hochdurchsatz-Hefe-Lyse in Mikrotiterplatten. Das UIP400MTP eignet sich ideal für die routinemäßige parallele Probenvorbereitung, während das UIP550MTP eine höhere Ultraschallleistung für anspruchsvolle Lysieraufgaben, dichte Suspensionen und robuste Hefestämme bietet.
Kann Pichia pastoris in einem Mikroplatten-Ultraschallgerät lysiert werden?
Ja. Pichia pastoris, auch bekannt als Komagataella phaffii, lässt sich mittels hochintensiver Mikrotiterplatten-Ultraschallbehandlung aufbrechen. Da P. pastoris eine dichte Biomasse bilden kann und über eine robuste Zellwand verfügt, wird eine Optimierung von Amplitude, Impulszyklus, Kühlung und Gesamtdauer der Ultraschallbehandlung empfohlen.
Was sind typische Ultraschallparameter für die Hefelyse?
Ein sinnvoller Ausgangsbereich liegt bei einer Amplitude von 50–80 %, einem gepulsten Betrieb (z. B. 10–30 Sekunden EIN und 30–60 Sekunden AUS) sowie einer kumulativen Einschaltzeit von 5–15 Minuten. Die genauen Parameter hängen vom Hefestamm, der Zelldichte, dem Probenvolumen, dem Plattentyp, dem Puffer und dem Zielmolekül ab.
Warum sollte die Hefelyse im Pulsmodus durchgeführt werden?
Der Pulsmodus reduziert die Wärmeentwicklung während der Ultraschallbehandlung. In der Einschaltphase werden die Zellen durch Ultraschallkavitation aufgebrochen. In der Ausschaltphase kann die Probe abkühlen. Dies ist wichtig, da übermäßige Hitze Proteine denaturieren, die Enzymaktivität verringern, RNA abbauen und die Reproduzierbarkeit beeinträchtigen kann.
Ist vor der Ultraschallbehandlung von Hefezellen eine enzymatische Vorbehandlung erforderlich?
Eine enzymatische Vorbehandlung ist nicht immer erforderlich, kann jedoch die Lyseeffizienz verbessern. Enzyme wie Zymolyase oder Lyticase bauen die Hefezellwand teilweise ab und können so die für eine vollständige Lyse erforderliche Ultraschallintensität oder -dauer verringern. Dies kann bei empfindlichen Proteinen oder schwierigen Stämmen von Nutzen sein.
Wie lässt sich eine Überhitzung bei der Ultraschallbehandlung von Hefe verhindern?
Verwenden Sie vorgekühlte Puffer, den Pulsmodus, Kühlpausen und eine gekühlte Mikrotiterplatte. Halten Sie die Mikrotiterplatte verschlossen und überwachen Sie die Temperatur, soweit möglich. Verwenden Sie bei empfindlichen Proteinen kürzere Einschaltintervalle, längere Ausschaltintervalle und verarbeiten Sie die Proben unter kalten Bedingungen.
Kann die Mikrotiterplatten-Ultraschallbehandlung das Bead-Beating zur Hefe-Lyse ersetzen?
In vielen Arbeitsabläufen ist dies der Fall. Die Mikrotiterplatten-Ultraschallbehandlung kann das Bead-Beating ersetzen, wenn eine saubere, reproduzierbare und parallele Lyse erforderlich ist. Sie macht die Handhabung von Beads überflüssig, verringert die Komplexität der Verbrauchsmaterialien und vereinfacht die Automatisierung. Allerdings sollte jede Anwendung durch einen Vergleich der Lyseausbeute, der Proteinintegrität und der Assay-Leistung validiert werden.
Eignet sich die Mikrotiterplatten-Ultraschallbehandlung zur Proteinextraktion aus Hefe?
Ja. Die Mikrotiterplatten-Ultraschallbehandlung eignet sich gut für die Proteinextraktion aus Hefe, insbesondere wenn viele Klone oder Kulturbedingungen verglichen werden müssen. Proteaseinhibitoren, Kaltpuffer und kontrollierte Impulseinstellungen tragen dazu bei, die Proteinqualität zu erhalten.
Kann dieselbe Methode für die Extraktion von DNA, RNA und Proteinen verwendet werden?
Es kann dasselbe grundlegende Ultraschallprinzip angewendet werden, allerdings sollten der Puffer und die Prozessbedingungen an das Zielmolekül angepasst werden. Bei Protein-Workflows sind eine Proteasehemmung und eine Temperaturkontrolle erforderlich. Bei RNA-Workflows sind eine RNase-freie Handhabung und eine starke Kühlung erforderlich. Bei DNA-Workflows können unterschiedliche Lyse- und Aufbereitungsbedingungen erforderlich sein, je nachdem, ob intakte genomische DNA oder fragmentierte DNA gewünscht wird.
Welcher Plattentyp sollte für die Hefelyse verwendet werden?
Verwenden Sie eine für die Ultraschallbehandlung geeignete Mikroplatte oder Deep-Well-Platte mit geeigneter Abdichtung. Rundbodenplatten erweisen sich häufig als nützlich für die Handhabung von Suspensionen. Die Platte sollte den gewählten Ultraschallbedingungen, der Probentemperatur und den Zentrifugationsschritten standhalten.
Woran erkenne ich, ob die Hefelyse abgeschlossen ist?
Die Lyseeffizienz lässt sich durch Mikroskopie, Proteinausbeute, Enzymaktivität, Viskositätsabnahme, SDS-PAGE-Analyse, DNA-/RNA-Ausbeute oder durch Vergleich mit einer bekannten Lysemethode überprüfen. Bei der Methodenentwicklung sollten sowohl die Ausbeute als auch die Qualität des freigesetzten Zielmoleküls bewertet werden.
UIP400MTP oder UIP550MTP: Welchen Mikroplatten-Sonikator sollten Sie wählen?
Der UIP400MTP ist ein leistungsstarker Mikroplatten-Ultraschallapparat für die routinemäßige Probenvorbereitung mit hohem Durchsatz, darunter Hefelyse, Proteinextraktion, DNA-Zerkleinerung, Biofilmablösung und Assay-Vorbereitung. Er eignet sich für Labore, die eine reproduzierbare Ultraschallbehandlung in Standardplattenformaten benötigen.
Das UIP550MTP bietet eine höhere Ultraschallleistung und wird empfohlen, wenn anspruchsvollere Anwendungen eine stärkere akustische Intensität, kürzere Verarbeitungszeiten, höhere Probenmengen oder robustere Aufbrechbedingungen erfordern. Bei der Hefe-Lyse eignet sich das UIP550MTP besonders für dichte Biomasse, schwierige Stämme, größere Arbeitsvolumina und Expressionsscreenings mit hohem Durchsatz.
Lässt sich die Hefelyse durch Ultraschallbehandlung in Mikrotiterplatten automatisieren?
Ja. Die mikroplattenbasierte Ultraschallbehandlung eignet sich gut für automatisierte Laborabläufe, da die Proben im Plattenformat verbleiben. Dies ermöglicht die Integration in Pipettiersysteme, die Plattenhandhabung, die Zentrifugation, die Assay-Vorbereitung sowie in Hochdurchsatz-Screening-Workflows.
Literatur / Literaturhinweise
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- FactSheet UIP550MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
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