超音波処理は、分析サンプルからのサルポックスウイルス(MPXV)の単離、ウイルスDNA断片化、ならびにサルポックスワクチン製造のための重要な処理方法です。診断および分析(PCR、ELISAなど)前のサンプル調製のために、超音波処理は、細胞内部からサルポックスウイルスを放出するために、および/またはDNAを断片化するために細胞を溶解するために使用される。ワクチン製造における用途は、ウイルス粒子/DNA調製、薬物担体への封入および接種剤の製剤化の範囲である。
以下は、超音波サルポックスウイルスサンプル調製だけでなく、超音波支援MPXVワクチンの生産に関する詳細情報を見つけることができます。

このページで見つかるもの:

• モンキーポックスウイルス抽出のための超音波溶解
• モンキーポックスウイルスDNAの超音波断片化
• MPXVワクチン生産における超音波アプリケーション

超音波溶解とポリメラーゼ連鎖反応前のDNA断片化(PCR)

サルポックスウイルス感染は、ウイルスDNAのユニークな配列を検出するために、リアルタイムまたは従来のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を使用して、核酸増幅試験(NAAT)によって検出されます。サンプル(例えば、鼻咽頭交換または皮膚生検から)は、細胞内にウイルスを含有する。
分析のためには、ウイルスは細胞から放出されなければならず、ウイルスDNAはPCRのために断片化されなければならない。

超音波溶解:

超音波細胞破壊/溶解は、細胞サンプルからウイルスを単離するための信頼性が高く効率的な方法であり、それによって、リゾチーム、プロテイナーゼKおよび細胞溶解およびDNAの放出を達成するために代替的に使用される異なる洗剤などの化学薬品よりも好ましい技術である。
しかしながら、このような化学試薬を用いるには、PCR反応の阻害を防ぐために、PCR分析前の数工程で時間のかかる試料調製が必要となる。PCR阻害剤は増幅の効率に影響を与えるため、除去されない阻害剤の量の小さな変動は、PCR産物増幅に大きな変動をもたらし得る(Diaco、1995)。
溶解のための超音波処理の利点は、溶解試薬および時間のかかる試料調製を必要とせずに、細胞構造の完全な破壊およびDNAの放出が望ましいことである。(Fykse et al., 2003参照)

超音波DNA断片化:

超音波DNA断片化は、長さ(塩基対、bp)において調整可能なDNA断片を生成するように、単純で信頼性が高い。超音波を使用して、DNAを標的DNA長に効果的に断片化することができる。超音波パラメータの正確な制御と洗練された冷却オプションにより、DNAの分解を防ぎます。
超音波DNA断片化についてもっと読む!

モンキーポックスウイルスワクチンにおける超音波アプリケーション

モンキーポックスウイルスに対して使用されるワクチンは、現在、生ウイルスワクチンである。新しく開発されたワクチンは、DNAベースの他のプラットフォームを使用する可能性があり、現在、弱毒化、非複製オルソポックスウイルスである改変ワクシニアアンカラウイルスが含まれています。また、トリス(トリスアミノメタン)と塩化ナトリウムも含まれています。ワクチンはまた、ワクチンウイルス、ベンゾナーゼおよびゲンタマイシンおよびシプロフロキサシンなどの抗生物質化合物を増殖させるために使用されるニワトリ胚線維芽細胞からの少量のDNAおよびタンパク質を含むことができる。

超音波均質化は、生弱毒化ウイルスワクチン、DNAワクチン、多価DNAカクテル、mRNAワクチン、組換えタンパク質ワクチン、ウイルス様粒子ワクチンなどの製造に使用される。

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モンキーポックスウイルスの超音波分離のためのプロトコル

Stittelaar(2005)の研究チームは、超音波溶解を使用して、増殖宿主細胞培養物から、ならびに感染した霊長類からの喉の交換を介して得られた細胞からサル痘ウイルスを放出した。

モンキーポックスワクチン製剤:

サルポックスウイルスは、特異的病原体を含まないニワトリ胚線維芽細胞上で増殖した。1〜2日間のインキュベーションの後、ウイルス細胞懸濁液を1ラウンドの凍結融解によって回収し、次いで遠心分離によって濃縮した。ペレットを再懸濁し、超音波均質化のいくつかのラウンドに供した。

ワクチン接種を受けたマカクからのモンキーポックスウイルスの分離:

サンプルを3回凍結融解し、超音波カップホーンで超音波処理した。1%ウシ胎児血清を添加した輸送培地中の2つの希釈(1:10および1:100)を用いて、6ウェルプレートにVero細胞単層を接種した。37°Cで1時間のインキュベーション後、接種菌を除去し、1%ウシ胎児血清を添加した培養液と交換した。単層を37°Cで5日間培養し、クリスタルバイオレット溶液で染色した。
(Stittelaar et al., 2005参照)

ウイルス分析とワクチン生産のための超音波装置

ヒールシャー超音波の幅広い製品ポートフォリオは、研究や分析研究所だけでなく、工業用ワクチン製造のための理想的な超音波装置を提供しています。
ヒールシャー超音波は、研究および分析研究所での使用だけでなく、工業用ワクチン生産(例えば、 ワクチン、 Api）。
超音波処理は、開放容器、閉じた連続的に攪拌された反応器および連続的なフロースルー反応器に適用することができます。液体媒体と接触する超音波システムのすべての部分は、ステンレス鋼、チタン、またはガラスから作られています。オートクレーブ可能な部品と衛生継手は、以下の生産を保証します 製薬グレードの条件。
自動データ記録: インテリジェントソフトウェアは、統合されたSDメモリカード上で超音波処理プロセスのパラメータを自動的に記録します。すべてのプロセスパラメータの正確な制御は、 再現性、 生産の標準化医薬品の安全基準の達成を容易にします。
ヒールシャー超音波’ 超音波プロセッサは信頼性が高く、正確に制御することができます。すべての産業用超音波装置は、低振幅から非常に高い振幅までの全範囲を提供するために調整することができます。ヒールシャーの超音波システムの堅牢性は、ヘビーデューティの下で、要求の厳しい環境で24時間365日の動作を可能にします。

下の表は私達のultrasonicatorsのおおよその処理能力の目安を与えます：