モンキーポックスウイルスの超音波アプリケーション

超音波処理は、分析サンプルからのサルポックスウイルス(MPXV)の単離、ウイルスDNA断片化、ならびにサルポックスワクチン製造のための重要な処理方法です。診断および分析(PCR、ELISAなど)前のサンプル調製のために、超音波処理は、細胞内部からサルポックスウイルスを放出するために、および/またはDNAを断片化するために細胞を溶解するために使用される。ワクチン製造における用途は、ウイルス粒子/DNA調製、薬物担体への封入および接種剤の製剤化の範囲である。
以下は、超音波サルポックスウイルスサンプル調製だけでなく、超音波支援MPXVワクチンの生産に関する詳細情報を見つけることができます。

 

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高性能超音波装置は、多くのワクチンの製造において重要な処理ツールです。

連続フロー操作のための2x 1kW超音波装置のこのシステムは、ワクチン製造施設に設置されています。

超音波溶解とポリメラーゼ連鎖反応前のDNA断片化(PCR)

サルポックスウイルス感染は、ウイルスDNAのユニークな配列を検出するために、リアルタイムまたは従来のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を使用して、核酸増幅試験(NAAT)によって検出されます。サンプル(例えば、鼻咽頭交換または皮膚生検から)は、細胞内にウイルスを含有する。
分析のためには、ウイルスは細胞から放出されなければならず、ウイルスDNAはPCRのために断片化されなければならない。

超音波溶解:

超音波分析器UP200HtマイクロチップS26d2生物学的サンプルの超音波のリシス超音波細胞破壊/溶解は、細胞サンプルからウイルスを単離するための信頼性が高く効率的な方法であり、それによって、リゾチーム、プロテイナーゼKおよび細胞溶解およびDNAの放出を達成するために代替的に使用される異なる洗剤などの化学薬品よりも好ましい技術である。
しかしながら、このような化学試薬を用いるには、PCR反応の阻害を防ぐために、PCR分析前の数工程で時間のかかる試料調製が必要となる。PCR阻害剤は増幅の効率に影響を与えるため、除去されない阻害剤の量の小さな変動は、PCR産物増幅に大きな変動をもたらし得る(Diaco、1995)。
溶解のための超音波処理の利点は、溶解試薬および時間のかかる試料調製を必要とせずに、細胞構造の完全な破壊およびDNAの放出が望ましいことである。(Fykse et al., 2003参照)

超音波DNA断片化:

超音波DNA断片化は、長さ(塩基対、bp)において調整可能なDNA断片を生成するように、単純で信頼性が高い。超音波を使用して、DNAを標的DNA長に効果的に断片化することができる。超音波パラメータの正確な制御と洗練された冷却オプションにより、DNAの分解を防ぎます。
超音波DNA断片化についてもっと読む!

 

ビデオは高強度の超音波を使用して任意の標準的なマルチウェルプレートの信頼できるサンプルの準備を可能にする超音波サンプル調製システムUIP400MTPを示しています。UIP400MTPの代表的な用途としては、細胞溶解、DNA、RNA、クロマチンのせん断、タンパク質抽出などがあります。

マルチウェルプレート超音波処理用超音波UIP400MTP

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モンキーポックスウイルスワクチンにおける超音波アプリケーション

超音波処理は、モンキーポックスワクチンなどのワクチンを製造するために使用されます。 モンキーポックスウイルスに対して使用されるワクチンは、現在、生ウイルスワクチンである。新しく開発されたワクチンは、DNAベースの他のプラットフォームを使用する可能性があり、現在、弱毒化、非複製オルソポックスウイルスである改変ワクシニアアンカラウイルスが含まれています。また、トリス(トリスアミノメタン)と塩化ナトリウムも含まれています。ワクチンはまた、ワクチンウイルス、ベンゾナーゼおよびゲンタマイシンおよびシプロフロキサシンなどの抗生物質化合物を増殖させるために使用されるニワトリ胚線維芽細胞からの少量のDNAおよびタンパク質を含むことができる。

超音波均質化は、生弱毒化ウイルスワクチン、DNAワクチン、多価DNAカクテル、mRNAワクチン、組換えタンパク質ワクチン、ウイルス様粒子ワクチンなどの製造に使用される。

ワクチン製造における超音波の用途は、

  • ウイルス粒子および薬剤の分散
  • 乳化
  • ウイルスの不活性化
  • 薬物担体製剤(NLC、SLN)
  • カプセル化
  • 薬剤の溶解
  • アジュバントの調製
  • 脱気/脱気

 

あなたは、改善されたワクチン製造のための超音波アプリケーションに関するより詳細な情報を見つけることができます!

モンキーポックスウイルスの超音波分離のためのプロトコル

Stittelaar(2005)の研究チームは、超音波溶解を使用して、増殖宿主細胞培養物から、ならびに感染した霊長類からの喉の交換を介して得られた細胞からサル痘ウイルスを放出した。

モンキーポックスワクチン製剤:

サルポックスウイルスは、特異的病原体を含まないニワトリ胚線維芽細胞上で増殖した。1〜2日間のインキュベーションの後、ウイルス細胞懸濁液を1ラウンドの凍結融解によって回収し、次いで遠心分離によって濃縮した。ペレットを再懸濁し、超音波均質化のいくつかのラウンドに供した。

ワクチン接種を受けたマカクからのモンキーポックスウイルスの分離:

サンプルを3回凍結融解し、超音波カップホーンで超音波処理した。1%ウシ胎児血清を添加した輸送培地中の2つの希釈(1:10および1:100)を用いて、6ウェルプレートにVero細胞単層を接種した。37°Cで1時間のインキュベーション後、接種菌を除去し、1%ウシ胎児血清を添加した培養液と交換した。単層を37°Cで5日間培養し、クリスタルバイオレット溶液で染色した。
(Stittelaar et al., 2005参照)

このビデオでは、パージ可能なキャビネットでインライン操作のための2キロワットの超音波システムを紹介します。ヒールシャーは、化学工業、製薬、化粧品、石油化学プロセスだけでなく、溶剤ベースの抽出プロセスなど、ほぼすべての産業に超音波装置を供給しています。このパージ可能なステンレス鋼キャビネットは、危険区域での動作のために設計されています。この目的のために、密封されたキャビネットは、可燃性ガスまたは蒸気がキャビネットに入るのを防ぐために、窒素または新鮮な空気で顧客によってパージされ得る。

危険区域に取付けるためのパージ可能なキャビネットの2x 1000ワットの超音波装置

ウイルス分析とワクチン生産のための超音波装置

ヒールシャー超音波の幅広い製品ポートフォリオは、研究や分析研究所だけでなく、工業用ワクチン製造のための理想的な超音波装置を提供しています。
ヒールシャー超音波は、研究および分析研究所での使用だけでなく、工業用ワクチン生産(例えば、 ワクチンApi)。
ヒールシャー超音波による超音波プロセスパラメータの正確な制御' インテリジェントソフトウェア超音波処理は、開放容器、閉じた連続的に攪拌された反応器および連続的なフロースルー反応器に適用することができます。液体媒体と接触する超音波システムのすべての部分は、ステンレス鋼、チタン、またはガラスから作られています。オートクレーブ可能な部品と衛生継手は、以下の生産を保証します 製薬グレードの条件。
自動データ記録: インテリジェントソフトウェアは、統合されたSDメモリカード上で超音波処理プロセスのパラメータを自動的に記録します。すべてのプロセスパラメータの正確な制御は、 再現性生産の標準化医薬品の安全基準の達成を容易にします。
ヒールシャー超音波’ 超音波プロセッサは信頼性が高く、正確に制御することができます。すべての産業用超音波装置は、低振幅から非常に高い振幅までの全範囲を提供するために調整することができます。ヒールシャーの超音波システムの堅牢性は、ヘビーデューティの下で、要求の厳しい環境で24時間365日の動作を可能にします。

下の表は私達のultrasonicatorsのおおよその処理能力の目安を与えます:

バッチ容量 流量 推奨デバイス
マルチウェル/マイクロタイタープレート 該当なし UIP400MTP
500mLの1〜 200mL /分で10 UP100H
2000mlの10〜 20 400mLの/分 Uf200ःトンUP400St
00.1 20Lへ 04L /分の0.2 UIP2000hdT
100Lへ10 10L /分で2 UIP4000hdT
該当なし 10 100L /分 UIP16000
該当なし 大きな のクラスタ UIP16000

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超音波ホモジナイザーは、DNAの剪断のために信頼性があります

超音波DNAシャーリング
CC-BY-SA.03の下でJkwchuiから適応



文献 / 参考文献

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

知る価値のある事実

モンキーポックスウイルス

モンキーポックス(MPV、MPXV、またはhMPXV)は、ウイルス性人獣共通感染症を引き起こす二本鎖DNAウイルスの一種です。この病気はサル痘感染として知られており、人間や動物で発生する可能性があります。それはポックスウイルス科のオルソポックスウイルス属に属する。モンキーポックスウイルスは、痘瘡(VARV)、牛痘(CPX)、およびワクシニア(VACV)ウイルスとともにヒトオルソポックスウイルスの1つである。オルソポックスウイルスは、約200,000 bpの二本鎖DNAゲノムを含む大きなレンガ状のウイルス粒子によって特徴付けられる。

ELISAアッセイ

ELISAは酵素結合免疫吸着アッセイの略で、イムノアッセイのゴールドスタンダードと考えられている標識イムノアッセイです。ELISAは免疫学的検査であり、その高い診断感度が評価され、抗体、抗原、タンパク質、糖タンパク質、ホルモンなどの分子を検出および定量するために使用されます。ELISAの原理は抗原抗体相互作用に基づいています。この抗原抗体相互作用により、特異的抗体はその標的抗原に結合する。相互作用が起こる場合にのみ、基質が酵素に結合することができ、その後の基質変換が観察され得、これは肯定的な結果が得られることを意味する。


高性能超音波!ヒールシャーの製品範囲は、完全工業用超音波システムにベンチトップユニット上のコンパクトラボ超音波装置から完全なスペクトルをカバーしています。

ヒールシャー超音波は、から高性能超音波ホモジナイザーを製造しています ラボ産業サイズ。