Preparazione a ultrasuoni del siero ricco di piastrine
- Il plasma ricco di piastrine (PRP) è plasma sanguigno arricchito di piastrine, utilizzato per trattamenti medici ed estetici.
- La lisi e il condizionamento a ultrasuoni sono un metodo molto efficace per preparare il plasma ricco di piastrine.
- Hielscher Ultrasonics offre diversi sistemi a ultrasuoni che soddisfano i requisiti del trattamento del sangue (ad es. per la preparazione all’interno e all’esterno di una camera bianca).
Siero ricco di piastrine
La sonicazione è un metodo affidabile e semplice per lisare le piastrine nel siero ematico autologo al fine di rilasciare i fattori di crescita. Le frazioni derivate dalle piastrine – note anche come siero autologo condizionato (ACS) – vengono utilizzate per la riparazione dei tessuti o per trattamenti estetici. Per ottenere risultati ottimali, il PRP viene arricchito prima dell’iniezione.
Per preparare plasma arricchito di fattori di crescita cellulare, la sonicazione è un metodo molto efficace ed efficiente per lisare le membrane cellulari e rilasciare quasi tutti i fattori di crescita cellulare dalle piastrine. La lisi e il condizionamento a ultrasuoni consentono di utilizzare anche sangue trattato con anticoagulanti.
Il condizionamento del PRP mediante sonicazione è un modo pratico ed economicamente conveniente per ottenere fattori di crescita concentrati.
Lisi a ultrasuoni del plasma ricco di piastrine (PRP)
Effetti della lisi a ultrasuoni
Il trattamento a ultrasuoni del siero ematico produce una lisi omogenea delle piastrine al fine di rilasciare i fattori di crescita intrappolati (fattore di crescita AB (PDGF-AB), fattore di crescita AA (PDGF-AA), fattore di crescita BB (PDGF-BB), fattore di crescita dell’endotelio vascolare (VEGF), fattore di crescita trasformante β (TGF-β), fattore di crescita epidermico (EGF), fattore di crescita insulino-simile (IGF), fattore di crescita delle cellule epiteliali ECGF e fattore di crescita dei fibroblasti (FGF)). Le piastrine e i loro granuli alfa vengono disgregati mediante sonicazione, sfruttando il fenomeno della cavitazione acustica. L’impiego della cavitazione ultrasonica per la lisi delle piastrine riduce il possibile impatto negativo del metodo di congelamento e scongelamento ripetuti sull’attività dei fattori di crescita.
Protocollo per la preparazione del PRP a ultrasuoni
Un campione di circa 16mL di sangue autologo appena prelevato viene delicatamente capovolto 8–10 volte in una provetta affinché il sangue e gli anticoagulanti si mescolino bene. Successivamente, il campione viene centrifugato a 1800 g per 20 min a temperatura ambiente. Dopo la centrifugazione, le piastrine e le cellule mononucleate formano uno strato biancastro nella parte inferiore dello strato di plasma, noto come plasma ricco di piastrine (PRP). Lo strato superiore è noto come plasma povero di piastrine (PPP). Le cellule mononucleate possono essere rimosse oppure rimanere nel campione. Spesso le cellule mononucleate vengono lasciate nel campione di PRP per evitare ulteriori passaggi che comportano un rischio di contaminazione.
Nota: il trattamento a ultrasuoni del PRP autologo deve essere eseguito in condizioni sterili.
Il PRP e il PPP vengono separati e raccolti. Al PPP si aggiungono 1,5mL di soluzione di cloruro di calcio al 10%, mentre al PRP si aggiungono 0,5mL di etanolo al 5%. Entrambe le sospensioni vengono agitate delicatamente e lasciate riposare per 5 min a temperatura ambiente. Infine, si aggiunge 1mL di PPP alla sospensione di PRP e si lascia riposare fino alla formazione di un coagulo di fibrina.
Trattamento a ultrasuoni: Poiché il gel piastrinico formatosi funge da serbatoio per i fattori di crescita rilasciati, il gel di fibrina deve essere disgregato per liberare i fattori di crescita disponibili. I parametri per la lisi a ultrasuoni e il rilascio dei fattori di crescita sono i seguenti: sottoporre il campione nella provetta a sonicazione con un UP200Ht o UP200St (200W, 26kHz) dotato di sonotrodo S26d2. Per evitare il surriscaldamento del campione di sangue, la sonicazione può essere eseguita in cicli pulsati (ad es. 10 sec. di funzionamento, 30 sec. di pausa). Il campione dovrebbe essere posto sul ghiaccio per il raffreddamento, in modo che la temperatura venga mantenuta idealmente tra 2 – 5°C. Dopo la sonicazione, il campione viene centrifugato a 16.000 g per 5 min. a temperatura ambiente. Il surnatante viene raccolto e può essere conservato a -70°C.
Con il metodo che impiega la sonicazione, la concentrazione piastrinica nella frazione di PRP è risultata aumentata di 1,7 – 4,5 volte rispetto alla conta piastrinica media nel sangue intero riportata in letteratura.
Il PRP è stato combinato con la terapia con cellule staminali derivate dal tessuto adiposo (cellule staminali autologhe liberate dal tessuto adiposo mediante ultrasuoni, miscelate con il PRP e reiniettate nel tessuto del paziente per la riparazione).
Apparecchiature a ultrasuoni
Hielscher Ultrasonics è specializzata in tecnologie a ultrasuoni sofisticate e affidabili. I nostri dispositivi a ultrasuoni vengono utilizzati in tutto il mondo per la lisi, l’estrazione e la preparazione dei campioni – mediante trattamento diretto e indiretto. Gli accessori autoclavabili e quelli monouso garantiscono un trattamento privo di contaminazione dei campioni di sangue autologo. La maggior parte dei nostri sistemi può essere utilizzata per la lisi a ultrasuoni delle cellule staminali e del PRP, rendendo i nostri dispositivi a ultrasuoni ancora più efficienti dal punto di vista economico.
La tabella seguente elenca i nostri dispositivi a ultrasuoni adatti alla preparazione del plasma ricco di piastrine e i rispettivi volumi di campione raccomandati. Sono disponibili anche sonicatori più grandi e sistemi personalizzati.
| Dispositivo | Potenza [W] | Freq. [kHz] | Tipo | Volume [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | autonomo | 0,5 | – | 1,5 |
| UP50H | 50 | 30 | portatile o montato su stativo | 0,01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | portatile o montato su stativo | 0,01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | portatile o montato su stativo | 0,1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | montato su stativo | 0,1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | montato su stativo | 5,0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | autonomo | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | cella di flusso priva di contaminazione | |||
Contattateci oggi stesso! Saremo lieti di aiutarvi a trovare il dispositivo a ultrasuoni ottimale!
Contattateci! / Chiedeteci informazioni!
GDmini2 sul trasduttore UP200St-TD (200 watt)
Bibliografia e riferimenti
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Il gel di lisato piastrinico e i progenitori endoteliali stimolano la formazione di reti microvascolari in vitro: implicazioni per l’ingegneria tissutale. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Plasma ricco di piastrine (PRP) per le lesioni muscolari acute: una revisione sistematica. PLOS ONE Volume 9, Numero 2, 2014.
Informazioni utili
Plasma ricco di piastrine
Il plasma ricco di piastrine contiene il fattore di crescita AB (PDGF-AB), il fattore di crescita AA derivato dalle piastrine (PDGF-AA), il fattore di crescita BB derivato dalle piastrine (PDGF-BB), il fattore di crescita dell’endotelio vascolare (VEGF), il fattore di crescita trasformante β (TGF-β), il fattore di crescita epidermico (EGF), il fattore di crescita insulino-simile (IGF), il fattore di crescita delle cellule epiteliali ECGF e il fattore di crescita dei fibroblasti (FGF), che sono importanti stimolatori della crescita e del rinnovamento cellulare.
Siero autologo condizionato (ACS)
Il plasma autologo condizionato (ACP) è un plasma ricco di piastrine estratto dal sangue autologo, utilizzato per favorire la rigenerazione in diverse condizioni ortopediche e procedure chirurgiche. Il siero condizionato viene preparato separando il plasma dagli altri componenti del sangue (come gli eritrociti) e concentrandolo. L’ACP è un plasma ricco di piastrine (PRP). PRP è un termine generico che indica un tipo di plasma contenente una concentrazione di trombociti significativamente più elevata rispetto al sangue intero. Viene estratto dal sangue intero. I principali componenti dell’ACP comprendono i trombociti (piastrine) e diversi fattori di crescita che sono fondamentali nei processi di guarigione. A differenza di altre formulazioni di plasma ricco di piastrine, l’ACP si distingue per una bassa concentrazione di globuli bianchi, come i granulociti neutrofili, che possono compromettere il processo di guarigione quando sono presenti in concentrazioni elevate.
Iniezioni di plasma ricco di piastrine
Il plasma ricco di piastrine viene somministrato mediante iniezione nella medicina rigenerativa e nelle procedure estetiche. L’applicazione del PRP promette una significativa accelerazione della guarigione e del recupero muscolare. Inoltre, viene utilizzato con successo per trattare infiammazioni, artrite, dolore, ferite, ferite aperte a lenta guarigione e gravi ustioni cutanee. Il PRP contiene un livello elevato di fattori di crescita, che stimolano e proteggono le cellule coinvolte nella guarigione affinché il tessuto danneggiato venga riparato.
Nei trattamenti estetici, il PRP si è dimostrato efficace nello stimolare la crescita dei capelli e il rinnovamento della pelle (noto anche come trattamento vampiro).
Fattori di crescita derivati dalle piastrine (PDGF)
Il termine fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF) si riferisce ai fattori PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C e PDGF-D. Si tratta di una rete di segnalazione costituita da quattro ligandi (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C e PDGF-D) e due recettori, PDGFR-alpha e PDGFR-beta.
I fattori di crescita, o proteine, regolano la crescita e la divisione cellulare. In quanto principale mitogeno presente nel siero dei mammiferi, rilasciato dalle piastrine durante la formazione del coagulo, svolge un ruolo significativo nella formazione dei vasi sanguigni (angiogenesi), ossia nella crescita di vasi sanguigni a partire da tessuto vascolare già esistente.