Preparazione a ultrasuoni del siero ricco di piastrine

• Il plasma ricco di piastrine (PRP) è un plasma sanguigno arricchito di piastrine, utilizzato per trattamenti medici ed estetici.
• La lisi e il condizionamento a ultrasuoni sono un metodo molto efficace per preparare il plasma ricco di piastrine.
• Hielscher Ultrasonics offre diversi sistemi a ultrasuoni che soddisfano i requisiti del trattamento del sangue (ad esempio, per la preparazione interna ed esterna di una camera bianca).

Siero ricco di piastrine

La sonicazione è un metodo affidabile e semplice per lisare le piastrine nel siero di sangue autologo al fine di rilasciare i fattori di crescita. Le frazioni derivate dalle piastrine – noto anche come siero condizionato autologo (ACS) – sono utilizzati per la riparazione dei tessuti o per trattamenti estetici. Per ottenere risultati ottimali, il PRP viene arricchito prima dell'iniezione.
Per preparare plasma arricchito con fattori di crescita cellulare, la sonicazione è un metodo molto efficace ed efficiente per lisare le membrane cellulari e rilasciare quasi completamente i fattori di crescita cellulare dalle piastrine. Con la lisi e il condizionamento a ultrasuoni è possibile utilizzare anche sangue anticoagulato.
Il condizionamento del PRP mediante sonicazione è un metodo comodo ed economico per ottenere fattori di crescita concentrati.

Lisi ultrasonica del plasma ricco di piastrine (PRP)

Effetti di lisi degli ultrasuoni

Il trattamento con ultrasuoni del siero sanguigno determina una lisi omogenea delle piastrine per liberare i fattori di crescita intrappolati (fattore di crescita AB (PDGF-AB), fattore di crescita AA (PDGF-AA), fattore di crescita BB (PDGF-BB), fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF), fattore di crescita trasformante β (TGF-β), fattore di crescita epidermico (EGF), fattore di crescita insulino-simile (IGF), fattore di crescita delle cellule epiteliali ECGF e fattore di crescita fibroblastico (FGF)). Le piastrine e i loro alfa-granuli vengono disgregati mediante sonicazione, sfruttando il fenomeno di Cavitazione acustica. L'uso della cavitazione a ultrasuoni per la lisi piastrinica riduce il possibile impatto negativo sull'attività dei fattori di crescita del metodo ripetuto di congelamento e scongelamento.

Protocollo per la preparazione del PRP a ultrasuoni

Circa 16 ml di campione di sangue autologo fresco vengono delicatamente capovolti 8-10 volte in una provetta in modo che il sangue e gli anticoagulanti siano ben miscelati. Successivamente, il campione viene centrifugato a 1800 g per 20 minuti a temperatura ambiente. Dopo la centrifugazione, le piastrine e le cellule mononucleate formano uno strato biancastro sul fondo dello strato di plasma, noto come plasma ricco di piastrine (PRP). Lo strato superiore è noto come plasma povero di piastrine (PPP). Le cellule mononucleate possono essere rimosse o rimanere nel campione. Spesso, le cellule mononucleate rimangono nel campione PRP per evitare ulteriori passaggi, che comportano il rischio di contaminazione.
Nota: il trattamento a ultrasuoni del PRP autologo deve essere effettuato in condizioni di sterilità.
La PRP e la PPP vengono separate e raccolte. Alla PPP si aggiungono 1,5 mL di soluzione di cloruro di calcio al 10%, mentre alla PRP si aggiungono 0,5 mL di etanolo al 5%. Entrambe le sospensioni vengono agitate delicatamente e lasciate riposare per 5 minuti a temperatura ambiente. Infine, si aggiunge 1 ml di PPP alla sospensione di PRP e si lascia riposare fino alla formazione di un coagulo di fibrina.
Trattamento a ultrasuoni: Poiché il gel piastrinico formato funge da serbatoio per i fattori di crescita rilasciati, il gel di fibrina deve essere disgregato per rilasciare i fattori di crescita disponibili. I parametri per la lisi ultrasonica e il rilascio dei fattori di crescita sono i seguenti: Sonicare con un UP200Ht o UP200St (200W, 26kHz) con il sonotrodo S26d2 il campione nella provetta. Per evitare il surriscaldamento del campione di sangue, la sonicazione può essere eseguita in cicli ad impulsi (ad es. 10 sec. acceso, 30 sec. spento). Il campione deve essere posto su ghiaccio per il raffreddamento, in modo che la temperatura sia mantenuta in modo ottimale tra 2 e 3°C. – 5°C. Dopo la sonicazione, il campione viene centrifugato a 16000 g per 5 minuti a temperatura ambiente. Il surnatante viene raccolto e può essere conservato a -70°C.
La concentrazione di piastrine nella frazione PRP è stata arricchita dell'1,7 – 4,5 volte nel metodo sonicato rispetto alla conta piastrinica media della letteratura nel sangue intero.

Il PRP è stato combinato con la terapia con cellule staminali di derivazione adiposa (cellule staminali autologhe rilasciate ad ultrasuoni dal tessuto adiposomescolato con PRP e iniettato nuovamente nel tessuto del paziente per la riparazione).

Apparecchiature a ultrasuoni

Hielscher Ultrasonics è esperta di tecnologia a ultrasuoni sofisticata e affidabile. I nostri dispositivi a ultrasuoni sono utilizzati in tutto il mondo per la lisi, l'estrazione e la preparazione dei campioni. – da quelli diretti e indiretti. Autoclavabile così come monouso Gli accessori assicurano un senza contaminazione trattamento di campioni di sangue autologo. La maggior parte dei nostri sistemi può essere utilizzata per la lisi a ultrasuoni di cellule staminali e PRP, il che rende i nostri dispositivi a ultrasuoni ancora più efficienti dal punto di vista economico.
La tabella seguente elenca i nostri dispositivi a ultrasuoni, adatti alla preparazione del plasma ricco di piastrine, e il loro volume di campione consigliato, rispettivamente. Sono disponibili anche ultrasuonatori più grandi e sistemi personalizzati.

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