Minta előkészítése az ultrahangos VialTweeterrel

A minta előkészítése az elemzés előtt különböző preanalitikai folyamatokat igényelhet, mint például a szövetek homogenizálása, lízise, fehérjék, DNS, RNS, organellák és más intracelluláris anyagok kivonása, feloldás és gáztalanítás. A VialTweeter egy egyedülálló ultrahangos eszköz, amely egyszerre több mintacsövet készít pontosan azonos körülmények között. A zárt kémcsövek közvetett szonikálása miatt elkerülhető a keresztszennyeződés és a mintavesztés.

ultrahangos minta előkészítése

Az ultrahangos kezelés a mintakezelés általános technikája annak érdekében, hogy a minta készen álljon az elemzésekre, mint például polimerek láncreakció (PCR), Western Blots, vizsgálatok, molekuláris szekvenálás, kromatográfia stb. Az ultrahangos kezelés egy olyan technika, amelyet széles körben használnak laboratóriumokban a minták előzetes analitikus kezelésére. Az ultrahangos kezelés egyik fő előnye, hogy az ultrahang működési elve tisztán mechanikai erőkön alapul. Az ultrahangos lízist és a sejtek megzavarását sonomechanical nyíróerők érik el, ami ultrahangosítást biztosít azzal az előnnyel, hogy a fehérje extrakcióhoz használt oldószerek lízis közben is használhatók. Az ultrahangos sejtrombolók, mint például a VialTweeter, megtörik a sejtfalakat / membránokat, és elősegítik a sejt belseje és az oldószer közötti tömegátadást. Ezáltal az analit (pl. DNS, RNS, fehérjék, organellák stb.) hatékonyan átkerül a sejtmátrixból az oldószerbe. Ez azt jelenti, hogy a kioltás és az extrakció lépései átfedik az ultrahangos sejtbontási folyamatot, ami az ultrahangos lízist nagyon hatékonnyá teszi. Továbbá, ultrahangos minta előkészítése nem igényel mosószereket és más lízis reagenseket, amelyek megváltoztathatják és megsemmisíthetik a lizátum szerkezetét, és ismertek a későbbi tisztítási problémákról. Egy másik lízismódszer, az enzimatikus zavar hosszú inkubációs időt igényel, és gyakran nem reprodukálható eredményeket ad. Az ultrahangos mintaelőkészítés leküzdi a mintaelőkészítés gyakori problémáit, mint például a szövethomogenizáció, a sejtzavar, a lízis, a fehérje extrakció és a lizátum oldódása. Mivel az ultrahangos kezelés intenzitása pontosan szabályozható és beállítható a biológiai mintához, elkerülhető a lebomlás és a mintaveszteség. Az automatikusan ellenőrzött és szabályozott mintahőmérséklet, impulzus mód és szonikációs időtartam biztosítja az optimális eredményeket.
 

A VialTweeter különösen kényelmes olyan laboratóriumi munkákhoz, amelyek több minta egyidejű előkészítését igénylik azonos körülmények között. A VialTweeter egy ultrahangos blokk sonotrode, amely akár 10 injekciós üveget is képes tartani (pl. Eppendorf, centriguge, NUNC csövek, krio-fiolák), és intenzíven ultrahangosítja őket pontosan ellenőrzött körülmények között. Mivel az ultrahangos energia az injekciós üvegek falán keresztül kapcsolódik a mintaközeghez, az injekciós üvegek zárva maradnak a kezelés alatt. Ezáltal teljesen elkerülhető a mintavesztés és a keresztszennyeződés.

A VialTweeterhez illeszkedő injekciós üvegek és tubusok

A VialTweeter 10 gyakori kúpos vagy kerek fenekű cső, például Eppendorf, centrifuga, krio-fiolák és különböző NUNC injekciós üvegtípusok tárolására alkalmas, de a lyukak kérésre más injekciós üveg- és csőméretekhez is testreszabhatók. Kérjük, tudassa velünk, hogy milyen típusú kémcsöveket szeretne használni, hogy ennek megfelelően módosíthassuk VialTweeterét. Nagyobb kémcsövekhez, például Falcon csövekhez és egyéb teszttartályokhoz, főzőpoharakhoz és edényekhez a VialPress kényelmes megoldás.

A VialTweeter a VialPress segítségével

Míg maga a VialTweeter 10 csőlyukával már egyedülálló és rendkívül funkcionális ultrahangos eszköz, a VialPress kiegészítő még sokoldalúbbá és rugalmasabbá teszi a VialTweeter működését. A VialPress a VialTweeter tartozéka, amely egy rögzítőrúdból áll, amely lehetővé teszi nagyobb mintacsövek, például Falcon csövek vagy más kis és közepes méretű tesztpoharak rögzítését a VialTweeter elejére. A bal oldali képen a VialTweeter 10 Eppendorf injekciós üveget tart a blokkban, míg a VialPress egy nagyobb kémcsövet rögzít az elejére szonikáláshoz. A VialPress képes tartani akár 5 nagyobb kémcsövek intenzív szonikálás.

VialTweeter mintaelőkészítési protokollok

A VialTweeter-t széles körben használják biológiai minták ultrahangos kezelésére. Az elemzés előtt a mintákat elő kell készíteni biokémiai vagy biofizikai elemzésekhez és vizsgálatokhoz, pl. lízissel, szövethomogenizálással, fehérjeextrakcióval, DNS/RNS nyírással, gáztalanítással stb. A VialTweeter megbízhatóan teljesíti ezeket az ultrahangos folyamatokat, és reprodukálható eredményeket biztosít. A VialTweeter gyakori alkalmazása az emlősök (emberi és állati) szöveteinek, valamint a baktériumsejteknek és a vírusrészecskéknek a lízise/sejtzavarása. A sikeresen VialTweeterrel kezelt biológiai minták közé tartoznak az emberi tüdőhámsejtek, vérképző őssejtek, mieloid leukémia sejtek, Escherichia coli baktérium, Bacillus subtilis, Bacillus antracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mikobaktériumok / Mycobacterium tuberculosis komplex (MTBC) és sok más bakteriális, botanikai és mikrobiális sejt.
Az alábbiakban talál néhány kiválasztott protokollt, amelyek a VialTweetert tartalmazzák.

E.coli lízis VialTweeterrel az in vivo glutation meghatározásához

Az MG1655 törzsbe tartozó Escherichia coli baktériumokat MOPS minimális táptalajban tenyésztették 200 ml össztérfogatban, amíg el nem érték a 0,5-ös A600-at. A tenyészetet stresszkezelés céljából 50 ml-es tenyészetekre osztottuk. 15 perc 0,79 mM allicinnel, 1 mM diamiddal vagy dimetil-szulfoxiddal (kontroll) végzett inkubálás után a sejteket 4000 g-on 4 °C-on 10 percig gyűjtöttük. A sejteket kétszer átmostuk KPE pufferrel, mielőtt a pelleteket 700 μl KPE pufferben reszuszpendáltuk. A deproteinációhoz 300 μl 10% (tömeg / v) szulfoszalicilsavat adtunk hozzá a sejtek ultrahangos kezeléssel történő megszakítása előtt (3 x 1 perc; VialTweeter ultrahangos). A felülúszókat centrifugálás után gyűjtöttük össze (30 perc, 13 000 g, 4 °C). A szulfoszalicilsav koncentrációt 3 térfogatrész KPE puffer hozzáadásával 1%-ra csökkentettük. Az összes glutation és GSSG mérését a fent leírtak szerint végeztük. A celluláris glutation koncentrációkat 6,7×10-15 liter E. coli sejtek térfogata és 0,5 A600 sejtsűrűség (1×108 sejt ml-1 tenyészetnek felel meg) alapján számítottuk ki. A GSH-koncentrációkat úgy számították ki, hogy az összes glutationból kivonták a 2[GSSG]-t. (Müller et al. 2016)

Alfa-szinuklein rostriga fragmentáció a VialTweeterrel

A VialTweeter szonikátort széles körben használják az alfa-szinuklein fibrillumok és szalagok megbízható és hatékony töredezettségére. Kattintson ide, hogy részletes leírásokat, protokollokat és referenciákat találjon az alfa-szinuklein fragmentációhoz a VialTweeterrel!

Sejtlízis VialTweeterrel grafit kemence atomabszorpciós spektrometria előtt

A Bacillus subtilis 168-at (trpC2) 15 perc antibiotikum stressznek tettük ki, majd a sejteket 3,320 x g-on gyűjtöttük be, ötször mossuk 100 mM Tris / 1 mM EDTA-val, pH 7,5, reszuszpendáljuk 10 mM Tris-ben, pH 7,5-ben, és ultrahanggal megszakítjuk egy Hielscher VialTweeter műszerben. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeter mintaelőkészítés tömegspektrometria előtt

A humán CD34compliant vokális hematopoetikus ős / progenitor sejtek liofilizált sejtpelletjeit 10μspecifikációk ���l-ben (200μl ömlesztett HEK293 készítményhez a peptidhígítási sorozathoz) 8 M karbamidban szuszpendáltuk 100 mM ammónium-hidrogén-karbonátban, és a Hielscher VialTweeterrel ultrahanggal segítettük 60% amplitúdóval, 60% -os ciklussal és 20s időtartammal háromszor, jégen közbenső hűtéssel. (Amon et al. 2019)

Mintaelőkészítési protokollok a VialPress használatával

A friss salátát (Lactuca sativa) 0,5 M HEPES pufferben homogenizáltuk (pH 8, KOH beállítással) 1 g növény (friss tömeg) és 200, 100, 50 vagy 20 ml pufferoldat arányában. A növényi tömeg és a pufferoldat térfogatának arányát úgy változtattuk, hogy a homogenizátum teljes térfogata 3,5 és 12 ml között maradjon. A növényi tömeg és a pufferoldat térfogatának arányát úgy változtattuk, hogy a teljes homogenizátum térfogata 3,5 és 12 ml között maradjon, lehetővé téve a szondával történő homogenizálást. A homogenizátumok ezután közvetett ultrahangos kezelésen mentek keresztül UP200St VialTweeter felszerelt 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Németország) 3 percig (80% impulzus és 100% teljesítmény). A készülék használatával elkerülhető a szennyeződés. (Laughton et al. 2019)

Megbízható hőmérséklet-szabályozás ultrahangos kezelés során a VialTweeter segítségével

A hőmérséklet kulcsfontosságú folyamatbefolyásoló tényező, amely különösen fontos a biológiai minták kezelésében. Mint minden mechanikai minta-előkészítési technika, az szonikálás hőt hoz létre. A minták hőmérséklete azonban jól szabályozható a VialTweeter használatakor. Különböző lehetőségeket kínálunk a minták hőmérsékletének felügyeletére és szabályozására, miközben előkészítjük őket a VialTweeter és a VialPress segítségével az elemzéshez.

1. A minta hőmérsékletének ellenőrzése: Az UP200St ultrahangos processzor, amely a VialTweeter-t hajtja, intelligens szoftverrel és dugaszolható hőmérséklet-érzékelővel van felszerelve. Csatlakoztassa a hőmérséklet-érzékelőt az UP200St-hez, és helyezze be a hőmérséklet-érzékelő csúcsát az egyik mintacsőbe. Digitális színes érintőképernyőn keresztül beállíthatja a UP200St menüjében egy meghatározott hőmérsékleti tartományt a minta szonikálásához. Az ultrahangos készülék automatikusan leáll, amikor eléri a maximális hőmérsékletet, és szünetel, amíg a minta hőmérséklete a beállított hőmérséklet alacsonyabb értékére ∆. Ezután az ultrahangos kezelés automatikusan újraindul. Ez az intelligens funkció megakadályozza a hő okozta degradációt.
2. A VialTweeter blokk előhűthető. Helyezze a VialTweeter blokkot (csak a szonotródát jelátalakító nélkül!) a hűtőszekrénybe vagy a fagyasztóba, hogy előhűtse a titánblokkot, és segít elhalasztani a minta hőmérsékletének emelkedését. Ha lehetséges, maga a minta is előhűthető.
3. Használjon szárazjeget lehűlni az ultrahangos kezelés során. Használjon szárazjéggel töltött sekély tálcát, és helyezze a VialTweetert a szárazjégre, hogy a hő gyorsan eloszlasson.

Az ügyfelek világszerte használják a VialTweetert és a VialPress-t a napi minta-előkészítési munkájukhoz biológiai, biokémiai, orvosi és klinikai laboratóriumokban. Az UP200St processzor intelligens szoftvere és hőmérséklet-szabályozása, a hőmérséklet megbízhatóan szabályozható és elkerülhető a hő okozta mintalebomlás. Az ultrahangos mintaelőkészítés a VialTweeter és a VialPress segítségével rendkívül megbízható és reprodukálható eredményeket biztosít!

A VialTweeter műszaki adatai

A VialTweeter egy titánból készült blokk sonotrode, amely akár 10 injekciós üveget is képes tartani a blokkon belüli lyukakban. Ezenkívül akár 5 nagyobb kémcső is rögzíthető a VialTweeter elülső részéhez a VialPress segítségével. A VialTweeter úgy van kialakítva, hogy az ultrahangos energia egyenletesen oszlik el minden behelyezett injekciós üvegbe, hogy megbízható és egyenletes szonikációs eredményeket biztosítson. Egy kis csukló beállítja a VialTweeter sonotrode-ot egyenetlen talajra, és függőlegesen igazítja a kémcsöveket.

A VialTweeter előnyei röviden

• Intenzív ultrahangos kezelés akár 10 injekciós üveg egyidejűleg
• Közvetett ultrahangos kezelés nagy ultrahangos intenzitással az edényfalon keresztül a mintába
• A közvetett szonikálás elkerüli a keresztszennyeződést és a mintavesztést
• Reprodukálható eredmények az állítható és szabályozható ultrahangos amplitúdó miatt
• A VialPress lehetővé teszi a nagyobb csövek ultrahangos kezelését
• Állítható amplitúdó 20 és 100% között
• Állítható impulzus mód 0 és 100% között
• Autoklávozható

A VialTweetert a UP200St, egy 200 wattos erős ultrahangos processzor. Az UP200St intelligens szoftverrel van felszerelve, amely lehetővé teszi az összes fontos ultrahangos folyamatparaméter, például az amplitúdó, az ultrahangi idő, a pulzálás és a hőmérséklet pontos szabályozását. Ez teszi a VialTweetert megbízható eszközzé a sikeres reprodukálható folyamateredményekhez biológiai és biokémiai laboratóriumokban.
Az amplitúdó 20 és 100% között állítható be, és ezáltal lehetővé teszi az ultrahangos intenzitás beállítását a mintához. Például a DNS és az RNS nyírása és fragmentációja enyhébb amplitúdót igényel, hogy megakadályozza a túl kicsi DNS-fragmensek termelését, az egér agy szöveti homogenizálása nagy intenzitású szonikálást igényel. Válassza ki az ideális amplitúdót, szonikációs intenzitást és időtartamot az UP200St processzor intelligens és intuitív menüjében. A menü és a beállítások könnyen elérhetők és kezelhetők a színes érintőképernyőn keresztül. A beállításokban előre beállíthatja az ultrahangos paramétereket, például amplitúdót, pulzálást / ciklus üzemmódot, szonikációs időtartamot, teljes energiabevitelt és hőmérsékleti határokat. A kutatásban és a gyártásban döntő fontosságú a kísérletek és a vizsgálati eredmények megismételhetősége. Ez azt jelenti, hogy a folyamat körülményeinek pontos rögzítése és az ultrahangos protokollok rendkívül fontosak. Az automatikus adatprotokollálás az összes szonikációs adatot egy CSV fájlba írja egy integrált SD-kártyán, így könnyen ellenőrizheti és összehasonlíthatja a különböző szonikációs futásokat. Minden ultrahangos folyamatadat könnyen elérhető és megosztható CSV fájlként.
A Hielscher Ultrasonics arra törekszik, hogy fejlett technológiát biztosítson Önnek, hogy megkönnyítse és javítsa kutatási munkáját!