Hielscher ultrahang technológia

A SARS-CoV-2 Coronavírus inaktiváláshoz való protokoll szonikálással

A Hielscher VialTweeter egy egyedülálló ultrahangos többminta-előkészítő egység, amelyet a SARS-COV-2 coronavírus inaktiválására használnak. A VialTweeter lehetővé teszi, hogy készítsen akár 10 minta injekciós üveg egyszerre, és ezáltal az ideális egység a tömeges minta feldolgozás.

A SARS-CoV-2 Coronavírus inaktiválása a VialTweeterrel

Eltávolítása után a fixáló, monolayers mossuk háromszor foszfát-pufferes sóoldattal (PBS), mielőtt kaparás sejtek 1mL MEM/5% FBS és sonicated (3 × 10 másodperc be, 10 másodperc le 100% teljesítmény és amplitúdó) a Hielscher ultrahangos processzor UP200St a VialTweeter Mellékletet. A felülúszókat 3000 × g-on 10 mins-en centrifugálással tisztázták. 

Olvassa el a teljes protokoll itt a SARS-CoV-2 coronavirus inaktiválása Welch et al. (2020) az alábbi:

Sejtek és vírus

Vero E6 sejtek (Vero C1008; ATCC CRL-1586) módosított Eagle minimális esszenciális táptalajában (MEM) tenyésztették, kiegészítve 10% (v/v) magzati borjú szérummal (FCS). A használt vírus a SARS-CoV-2 hCOV-19/England/2/2020 törzs volt, amelyet a PHE izolált az egyesült királyságbeli első betegcsoportból 29/01/2020-án. Ezt a vírust az 1.
A SARS-CoV-2 inaktiválásához használt reagensek és vegyi anyagok, valamint a reagens citotoxicitás eltávolítása tekintetében lásd welch et al. (2020) tudományos jelentését.

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Vírusinaktiválás mosó- és tisztítószerekkel – SARS-CoV-2 Coronavírus inaktiválási protokoll által Welch és mtsai.

SARS-CoV-2 inaktiválás

Kereskedelmi termékek, víruskészítmények (szövettenyészeti folyadék, 1 × 10-től terjedő titerek6 1 × 10-hez8 PFU/ml) három példányban, koncentrációban reagensekkel és a gyártó használati utasításában ajánlott érintkezési idővel kezelték, amennyiben rendelkezésre állnak, vagy a vizsgáló laboratóriumok által kifejezetten kért koncentrációk és időpontok tekintetében. Amennyiben a gyártó koncentrációtartományt adott meg, a termék és a minta legalacsonyabb arányát (azaz a vizsgált termék legalacsonyabb ajánlott koncentrációját) vizsgálták. A mintaszállító cső reagenseit egy térfogattérfogatú szövettenyészeti folyadék és tíz térfogatnyi reagens alkalmazásával vizsgálták, kivéve, ha a gyártó a mintafolyadék és a reagens térfogatarányát határozta meg. A mosószereket, rögzítőszereket és oldószereket a jelzett koncentrációkban tesztelték a jelzett időpontokban. Minden inaktiválási lépést szobahőmérsékleten (18–25°C) hajtottak végre. Az alternatív mintatípusok vizsgálatához a vírust 1:9 arányban a jelzett mintamátrixba szúrták, majd a fentiek szerint vizsgálati reagensekkel kezelték. Minden kísérlet három példányban kontrollált mintával kezelt mintákat tartalmazott, amelyek a vizsgálati reagens helyett azonos térfogatú PBS-t tartalmaztak. Közvetlenül a szükséges érintkezési idő után 1 mL kezelt mintát dolgoztak fel a megfelelően kiválasztott szűrőmátrix segítségével. Az inaktiválási vizsgálathoz használt reagenseltávolítást nagyobb spin oszlopformátumban végezték pierce 4mL mosószer eltávolító spin oszlopok (Thermo Fisher) használatával, vagy üres Pierce 10mL kapacitású centrifugaoszlopok (Thermo Fisher) sm2 biogyöngyökkel, Sephacryl S-400HR vagy Sephadex LH-20-mal, hogy 4 mL-es csomagolt gyöngyöket/gyantákat adjanak. Amicon szűrőkkel történő tisztításhoz 2 × 500 μl mintát tisztítottak meg két centrifugális szűrővel a korábban leírt módszerrel, majd összevontuk. A glutáraldehid eltávolításával történő formaldehid és formaldehid esetében egy szűrőt használtak 1× 500 μl mintatérfogattal, 500 μl PBS-ben történő feldolgozás után újraszuszpendálták, és hozzáadták 400ul MEM/5% FBS-hez. A fertőzöttek inaktiválásához VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STmonorétegek, 12,5 cm2 Vero E6 sejtek (2,5 × 106 2,5 mL MEM/5% FBS-ben) fertőzöttek voltak a MOI 0,001-nél, és 37°C/5% CO-n inkubáltak2 24 órán keresztül. A felülúszót eltávolították, és a sejteket 5 mL formaldehid, vagy formaldehid és glutáraldehid segítségével rögzítették szobahőmérsékleten 15 vagy 60 min. A fixáló eltávolították, és monolayers mosott háromszor PBS előtt kaparás sejtek 1mL MEM / 5% FBS és sonicated (3 × 10 másodperc be, 10 másodperc le 100%- teljesítmény és amplitúdó) egy UP200St a VialTweeter mellékletet (Hielscher Ultrahang technológia). A felülúszókat 3000 × g-on 10 mins-en centrifugálással tisztázták.

A VialTweeter a zárt injekciós üveg intenzív Sonication

VialTweeter az intenzív szonikálás a zárt vials

Információkérés




Jegyezzük fel Adatvédelmi irányelvek.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Részletek a reagens használt SARS-CoV-2 coronavírus inaktiválása az ultrahangos VialTweeter szerint a protokoll welch et al. 2020

A teljes protokoll, beleértve a használatát Hielscher VialTweeter megtalálható itt:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter ultrahangos vírus inaktiválásához

Előnyei a VialTweeter első pillantásra

  • Akár 10 injekciós üveg egyidejű szonikálása
  • Nincs keresztszennyeződés
  • Nincs mintaveszteség
  • Automatikus adatrögzítés
  • Könnyen kezelhető és biztonságos
A VialTweeter is használják

  • Sejt lysis
  • Vírusos részecskezavar
  • Nukleinsav extrakció: DNS/RNS izolálás
  • DNS/RNS töredezettség
  • Lysate oldódás
  • Kifinomult ultrahangos dismembrators és cella diszruptorok

    A többminta-ultrasonicator VialTweeter csak egy a sok ultrahangos megoldások minta előkészítése biológiai, biokémiai és klinikai laboratóriumokban. Hielscher Ultrasonics kínál az ideális ultrahangos dismembrator az alkalmazás, pl. sejt lízis, sejt extrakció, szövethomogenizáció, lysate oldódás, oldódás, minta gáztalanítás stb.
    Tudassa velünk, hogy hány mintát kell feldolgozni óránként és nap, ha inkább a közvetlen vagy közvetett szonikálás, és mi a cél az ultrahangos minta kezelés. Javasoljuk, hogy a legmegfelelőbb ultrahangos egység a napi munka rutin!
    Hielscher Ultrasonics digitális ultrahangos processzorok fel vannak szerelve intelligens szoftver, automatikus adatfelvétel, könnyű előzetes beállítási lehetőségek hőmérséklet-szabályozás, szonikálás időtartama, ciklus / impulzus mód, valamint a minta megvilágítás és a böngésző távirányító. Arra törekszünk, hogy ultrahangos készülékeinket a lehető legintelligensebbé tegyük, hogy a kutatási és munkahelyi rutinja a lehető legkényelmesebb és legsikeresebb legyen.
    Kattintson ide, hogy további alkalmazások, beleértve protokollok ultrahangos minta előkészítése a VialTweeter!

    Lépjen kapcsolatba velünk! / Kérdezz minket!

    Kérjen bővebb információt

    Kérjük, használja az alábbi űrlapot, hogy kérjen további információkat ultrahangos processzorok, alkalmazások és az ár. Örömmel megvitatjuk önnel a folyamatot, és olyan ultrahangos rendszert kínálunk Önnek, amely megfelel az Ön igényeinek!









    Kérjük, vegye figyelembe Adatvédelmi irányelvek.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics gyárt nagy teljesítményű ultrahangos homogenizátorok keverésalkalmazások, diszperziós, emulgeálás és extrakciós laboratóriumi, kísérleti és ipari méretű.

    Irodalom / Referenciák



    Tudni érdemes

    Mik azok a Vero-sejtek?

    Vero E6, más néven Vero C1008 (ATCC No. CRL-1586) a Vero 76 klónsejtvonala, és a SARS-CoV és a SARS-CoV-2 coronavírusok kutatásában használják. A Vero sejtek a sejtkultúrákban használt sejtek vonalai. A 'Vero’ leszármazást egy afrikai zöld majomból (Chlorocebus sp.) kivont vese hámsejtekből izolálták.
    A Vero E6 sejtek érintkezési gátlást mutatnak, ezért alkalmasak a lassan szaporodó vírusok szaporítására. A Vero E6 sejtvonalakat gyakran használják a SARS-CoV és A SARS-CoV-2 coronavírusok citopatológiájának vizsgálatára, mivel a Vero sejtek (afrikai zöld majom vesesejtek) az angiotenzin-konvertáló enzim 2 (ACE2) receptorok bőséges expresszióját mutatják. Az ACE2 receptorok a SARS-CoV-2 coronavírus egyik fő dokkolóhelye.
    Ogando és munkatársai (2020) például megállapították, hogy a SARS-CoV-2 – a SARS-CoV-hoz képest – magasabb intracelluláris vírus RNS-szintet generált, de feltűnően körülbelül 50-szer kevesebb fertőző vírusutódot nyertek ki a táptalajból. Megállapították továbbá, hogy a két vírus érzékenysége a coronavírus replikáció három megállapított inhibitorára (Remdesivir, Alisporivir és klorokine) nagyon hasonló, de a SARS-CoV- 2 fertőzés lényegesen érzékenyebb volt a pegylated interferon alfa- sejtek előkezelésére. A két vírus közötti jelentős különbség az a tény, hogy – a Vero E6 cellákban való áthaladáskor – SARS-CoV-2 látszólag erős kiválasztási nyomás alatt szerezni adaptív mutációk a tüske fehérje gén. Ezek a mutációk megváltoztatják vagy törlik a feltételezett "furin-szerű dekoltázs helyet" az S1 és S2 domaineket összekötő régióban, és a plakkvizsgálatok nagyon feltűnő fenotípusos változását eredményezik.