Hielscher ultrahang technológia

Ultrahangos minta prep ELISA vizsgálatok

Az olyan vizsgálatokat, mint az ELISA, széles körben használják az in vitro diagnosztikában, a betegségekkel összefüggő fehérjekimutatásban és a minőség-ellenőrzésben (pl. az élelmiszer-allergének monitorozása). Az ultrahangos mintaelőkészítés gyors, megbízható és reprodukálható technika a sejtek lúgzítására és az intracelluláris fehérjék, DNS, RNS és organelles izolálására. A Hielscher Ultrasonics különböző ultrahangos megoldásokat kínál az egyes minták, több injekciós üvegek, valamint a mikrotiter lemezek és a 96-kútlemezek kényelmes elkészítéséhez.

Elisa – Enzim-kapcsolt immunszorbens vizsgálat

Az ELISA az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat rövidítése, és a ligandancika-kötő vizsgálatok kategóriájának széles körben használt biokémiai elemzési technikája. Az ELISA-ban folyékony mintát adnak egy álló szilárd fázishoz, speciális kötési tulajdonságokkal. Általában a helyhez kötött szilárd fázist bevonatként alkalmazzák egy kútlemezre vagy ELISA lemezre. Ezután különböző folyékony reagenseket egymás után adunk hozzá, inkubálunk és mosunk, hogy végül optikai változás következzen be (pl. színfejlődés enzimatikus reakció szorzatával) a kút ban lévő végső folyadékban. Az optikai változás lehetővé teszi a kiapáca mennyiségének mérését egy úgynevezett mennyiségi “olvasás". A kvantitatív leolvasáshoz spektrofotométert, fluorométert vagy luminométert használnak az átvitt fény intenzitásának kimutatására és mérésére. A detektálás érzékenységét befolyásolja a jel amplifikációja az analitikus reakciók során. Mivel az enzimreakciókjól kivannak vizsgálva és megbízható erősítési folyamatok, enzimeket használnak a jel létrehozásához. Az enzimek rögzített arányban kapcsolódnak a detektáló reagensekhez, hogy lehetővé tegyék a pontos számszerűsítést, ami megmagyarázza az "enzimhez kötött" immunsorbens vizsgálat nevét is.
Mivel az ELISA vizsgálatokat mikrotiter lemezeken / 96-kútlemezeken végzik, lemezalapú vizsgálati technikaként ismert, és pl. klinikai in vitro diagnosztikában, kutatásban, gyógyszerfejlesztésben stb.
Az ELISA technikát gyakran használják diagnosztikai eszközként az orvostudományban, a biotechnológiában, a növénypatológiában, és számos iparágban fontos minőség-ellenőrzési mérés.

Komplett VialTweeter beállítás: VialTweeter szonotróda át ultrahangos processzor UP200St

Az ultrahangos minta prep egység VialTweeter sejtlúzisra és fehérjeextrakcióra használják az ELISA-vizsgálatok előtt

Információkérés




Jegyezzük fel Adatvédelmi irányelvek.


Ultrahangos minta prep előtt ELISA

Az ELISA vizsgálat elvégzése előtt a minták olyan előkészítési lépéseket igényelnek, mint a sejtlazis és az intracelluláris fehérjék, DNS, RNS stb. Az ultrahangos sejtlúzió és a fehérje izoláció előnye a nagy hatékonyság, a megbízhatóság és a reprodukálhatóság. Mindezek a tényezők fontosak a magas színvonalú diagnosztika és kutatási eredmények

Az ultrahangos lezis előnyei az ELISA előtt

  • Homogén mintakezelés
  • Teljes lezis
  • Teljes fehérjeextrakció (pl. antitestek, DNS)
  • Optimális alkalmazkodás a sejttípushoz
  • Bármilyen mintamérethez
  • reprodukálható
  • Szabályozott hőmérséklet
  • Automatikus adatprotokoll-egyeztetés az SD-kártyán

Protokoll előtti ELISA ultrahangos cella legyező

Szonda típusú insonifier UP200St iízishez

  • Sejtkultúrák esetében: Mielőtt az ultrahangos sejtlis, centrifuga sejtek 5 mins 270 x g egy mikrocentrifuga. A felülúszót aspirációval távolítsuk el, és 30–100 μL RIPA pufferben szuszpendáljuk újra a sejteket. Ezután inkubáljuk a sejtpelletet jégen 30 min.
  • Most, a sejtminta készen áll ultrahangos lazis:
    Használjon szonda típusú ultrasonicator (pl. Uf200 ः t S26d2 szondával) vagy ultrahangos többmintás eszközzel (pl. VialTweeter akár 10 injekciós üveg egyidejű szonikálására vagy az UIP400MPT mikrotiter lemezekhez / 96-kútlemezekhez) a szükséges minták mennyiségétől függően.
    A szonda-típusú szonikálás egyetlen minta, helyezzük a sejteket 1,5 mL mikrocentrifuga csövek.
  • Előre állítsa be az ultrahangos időtartam, teljes energia-bevitel, ciklus mód és/vagy hőmérséklet korlátok a digitális menüben a ultrasonicator. Ez biztosítja a rendkívül megbízható szonikálás és ismételhetőség.
  • Állítsa be a összehegeszthetősége és kapcsolja be az ultrahangos készüléket. Óvatosan mozgassa az ultrahangos szonda mikrocsúcsát a mintán keresztül, hogy egységesen ultrahangozza a mintát.
    A legtöbb sejt, ultrahangos lánsítás után fejeződik be 2 -4 ciklus 10 sec szonikálás.
  • Szonikálás után távolítsa el a összehegeszthetősége a mintából. A mintákat 5 min-ig jégen kell inkubálni. Ezután centrifugáljon 10.000 x g-on 20 min-re, hogy pelletelje a törmeléket. Vigyük át a felülúszókat egy új mikrocentrifugacsőbe. Címkézze fel az ataltákat, és tárolja -20°C-on.
  • Az ultrahangos összehegeszthetősége lehet tisztítani töröljük megfelelően alkohollal vagy ultrahanggal egy főzőpohárban töltött alkohol, pl. 70% etanol. Minden titánból készült ultrahangos szonda autoklávban van.

Szövethomogenátok esetében:

  • Öblítsük le a szövetet jéghideg PBS-sel (0,01M, pH=7,4), hogy alaposan eltávolítsuk a felesleges hemolízis vért.
  • Mérjük meg a szövetet (vese, szív, tüdő, lép stb.), és macerizáljuk apró darabokra, amelyeket PBS-ben homogenizálnak. A szükséges PBS térfogata a szövet súlyához kapcsolódik. Általános szabály, hogy 1g szövet igényel kb. Javasoljuk, hogy adjunk néhány proteáz gátló a PBS. (RipA vagy hipotóniás lezis puffer tartalmazó proteáz és foszfatáz gátló koktél lehet használni alternatívaként.)
  • Attól függően, hogy a szövet mérete, egy rövid örvény kezelés (kb. 1-2 perc 15 mp. impulzusok) hasznos lehet, hogy előre kezelni a szövetet.
  • Szereljen fel egy mikrohegyet, pl. S26d2-t a ultrasonicator-ra. Helyezzük a mintavevő csövet a szövettel egy jégfürdőbe.
  • Ultrahangozza a mintát a ultrasonicator, pl. UP200St (80% amplitúdó) 1 percig. impulzus módban (15sec on, 15sec szünet). Tartsa a mintát a jégfürdőben.
  • A homogenizátumokat ezután centrifugálják, hogy specifikus medencéket (citosolikus, nukleáris, mitokondriális vagy lizoszómális) szerezzenek be, hogy a fehérjét elemzésre gazdagítsák. A minta 5 percig 5000×g-on történő centrifugálásával a felülúszót visszakéselik.
A összehegeszthetősége MTP-24-8-96 nyolc ultrahangos szondák a szonikálás a kutak a mikrotiter lemezek.

A összehegeszthetősége MTP-24-8-96 nyolc ultrahangos szondák a szonikálás a kutak a mikrotiter lemezek.

Megbízható hőmérséklet-szabályozás szonikálás közben

A hőmérséklet kulcsfontosságú folyamatbefolyásoló tényező, amely különösen fontos a biológiai minták kezelése szempontjából, például a fehérjék termikus lebomlásának megakadályozása érdekében. Mint minden mechanikai minta előkészítési technikák, szonikálás hőt hoz létre. Azonban, a hőmérséklet a minták is jól kontrollált, ha a Hielscher Ultrasonics készülékek. Bemutatjuk Önnek a különböző lehetőségeket, hogy figyelemmel kíséri és szabályozza a hőmérséklet a minták, miközben előkészíti őket a szonda-típusú ultrasonicator vagy a VialTweeter pre-analitikusan.

  1. A minta hőmérsékletének figyelése: Minden Hielscher digitális ultrahangos processzor intelligens szoftverrel és csatlakoztatható hőmérséklet-érzékelővel van felszerelve. Csatlakoztassa a hőmérséklet-érzékelőt az ultrahangos készülékhez (pl. Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) és helyezze be a hőmérséklet-érzékelő csúcsát az egyik mintavevő csőbe. A digitális színű érintőképernyőn keresztül az ultrahangos processzor menüjében meghatározott hőmérséklet-tartományt állíthat be a minta szonikáláshoz. A ultrasonicator automatikusan leáll, amikor a max hőmérséklet elérése kor, és szünet, amíg a minta hőmérséklete le az alacsonyabb értéket a beállított hőmérséklet ∆. Ezután a szonikálás automatikusan újraindul. Ez az intelligens funkció megakadályozza a hő okozta lebomlást.
  2. Ami az ultrahangos többminta-egység VialTweeter, a titán blokk, amelyek rendelkeznek a minta csövek, lehet előre lehűteni. Tedd a VialTweeter blokk (csak a összehegeszthetősége nélkül átalakító!) a hűtőbe vagy fagyasztóba, hogy előre kihűlni a titán blokk segít elhalasztani hőmérséklet-emelkedés a minta. Ha lehetséges, maga a minta is előhűthető.
  3. Használjon jégfürdőt vagy szárazjeget a szonikálás során. Helyezze a mintacsövet(eke)t a szonikálás során egy jégfürdőbe. A VialTweeter, használjon sekély tálca tele szárazjégés helyezze a VialTweeter a szárazjég, hogy a hő gyorsan eloszlatni.

Az ügyfelek világszerte használja a Hielscher szonda-ultrasonicators, valamint a többminta-szonikálás egységek VialTweeter és UIP400MTP a napi minta előkészítése munka biológiai, biokémiai, orvosi és klinikai laboratóriumokban. A Hielscher processzorok intelligens szoftver- és hőmérséklet-szabályozása, a hőmérséklet megbízhatóan szabályozott és a hő által kiváltott mintalebomlás elkerülhető. A Hielscher ultrahangos oldatokkal készült ultrahangos minta készítmény rendkívül megbízható és reprodukálható eredményeket ad!

Lépjen kapcsolatba velünk! / Kérdezz minket!

Kérjen bővebb információt

Kérjük, használja az alábbi űrlapot, hogy kérjen további információkat ultrahangos processzorok, alkalmazások és az ár. Örömmel megvitatjuk önnel a folyamatot, és olyan ultrahangos rendszert kínálunk Önnek, amely megfelel az Ön igényeinek!









Kérjük, vegye figyelembe Adatvédelmi irányelvek.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics gyárt nagy teljesítményű ultrahangos homogenizátorok keverésalkalmazások, diszperziós, emulgeálás és extrakciós laboratóriumi, kísérleti és ipari méretű.

Irodalom / Referenciák



Tudni érdemes

Az ELISA típusai

Az ELISA-nak számos típusa van, amelyeket működésük elve különböztet meg. Ezek az úgynevezett közvetlen ELISA, közvetett ELISA, szendvics ELISA, versenyképes ELISA, és fordított ELISA. Az alábbiakban áttekintjük a különböző ELISA típusokat, valamint azok főbb jellemzőit és különbségeit.
Az ELISA minőségi vagy mennyiségi formátumban is futtatható. A minőségi eredmények egyszerű pozitív vagy negatív eredményt adnak, míg a kvantitatív ELISA-ban a minta optikai sűrűségét (OD) egy standard görbével hasonlítják össze, amely jellemzően a célmolekula ismert koncentrációjú oldatának soros hígítása.

Közvetlen ELISA

A közvetlen ELISA az Elisa legegyszerűbb vizsgálati formája, ahol csak enzimmel jelölt elsődleges ellenanyagot használnak, és másodlagos antitestekre nincs szükség. Az enzimcímkével ellátott elsődleges antitest közvetlenül kötődik a célhoz, azaz antigénhez. A pufferelt antigénoldatot egy mikrotiter lemez minden vájatához (általában 96 kútlemez, ELISA-lemezek) adják hozzá, ahol töltési kölcsönhatások révén tapadódik a műanyag felülethez. Amikor az elsődleges antitesthez kapcsolt enzim reakcióba lép a szubsztrátumával, látható jelet bocsát ki, amely spektrofotométerrel, fluorométerrel vagy luminométerrel mérhető.

Közvetett ELISA

A közvetett ELISA-vizsgálathoz elsődleges antitestre és másodlagos antitestre is szükség van. A közvetlen ELISA-val ellentétben azonban nem az elsődleges antitestet, hanem a másodlagos antitestet egy enzimmel címkézik. Az antigént a kútlemezre kell rögzíteni, és az elsődleges antitest köti össze. Ezt követően az enzimmel jelölt másodlagos antitest kötődik az elsődleges antitesthez. Végül a másodlagos antitesthez kapcsolódó enzim reakcióba lép a szubsztrátumával, hogy látható, kimutatható jelet állítson elő.

Szendvics ELISA

A közvetlen és közvetett ELISA vizsgálatok során az antigént immobilizálják és a kútlemez felületére vonják, a szendvics ELISA-ban az antitestet az ELISA-lemez műanyag felületére kell rögzíteni. A szendvics ELISA-ban lévő immobilizált antitesteket capture antitesteknek nevezik. A befogási antitesteken kívül a szendvicsben ELISA-ban úgynevezett detektáló antitestekre is szükség van. A detektáló antitestek közé tartozik egy címkézetlen elsődleges detektáló antitest és egy enzimmel jelölt másodlagos detektáló antitest.
Lépésenként a fontos antigén a lemezhez rögzített rögzítő antitesthez kötődik. Ezután az elsődleges detektáló antitest kötődik az antigénhez. Ezt követően a másodlagos detektáló antitest az elsődleges detektáló antitesthez kötődik. A végső reakciólépésben az enzim reakcióba lép a szubsztrátumával, hogy optikailag észlelhető látható jelet állítson elő.

Versenyképes ELISA

A kompetitív ELISA, más néven gátlási ELISA a legösszetettebb ELISA típus, mivel gátló antigén t. A három formátum mindegyike – a közvetlen, a közvetett és a szendvics-ELISA – a versenyképes ELISA formátumhoz igazítható. A kompetitív ELISA-ban az inhibitor antigén és az antigén verseng az elsődleges antitesthez való kötődésért.
A kompetitív ELISA esetében a címkézetlen antitestet antigén, azaz minta jelenlétében inkubálják. Ezeket a kötött antitest/antigén komplexeket ezután egy antigénbevonatú kúthoz adják.
A lemezt megmossuk, hogy a kötetlen antitesteket eltávolítsák. A versenyképes ELISA-nak a neve annak a ténynek köszönhető, hogy minél több antigén van a mintában, annál antigén-antitest komplexek alakulnak ki. Ez azt jelenti, hogy kevesebb kötetlen antitestek állnak rendelkezésre, amelyek a kútban lévő antigénhez kötődnek, és az antigéneknek versenyezniük kell egy rendelkezésre álló antitestért. Egy másodlagos antitestet adnak hozzá, amely megfelel az elsődleges antitestnek. Ez a második antitest kapcsolódik az enzim. A szubsztrátum hozzáadásakor a megmaradt enzimek kromogén vagy fluoreszcens jelet hoznak.
Ezen a ponton a reakció leáll, hogy elkerülje a jel esetleges telítettsését.
Néhány versenyképes ELISA készlet enzimhez kötött antigént tartalmaz enzimhez kötött antitest helyett. A címkézett antigén versenyez az elsődleges antitest kötőhelyekkel a minta antigénnel (címkézetlen). Minél kevesebb antigén van a mintában, annál több címkézett antigén marad a kútban, és annál erősebb a jel.

Fordított ELISA

A fordított ELISA nem használ kútlemezeket, de az antigéneket felfüggeszti a vizsgálati folyadékban. A fordított ELISA vizsgálat az antigénen keresztül imitárolt antitest mennyiségét méri. Kifejezetten a nyugat-nílusi vírus borítékfehérje jának kimutatására és vizsgálatára fejlesztették ki, és arra, hogy hogyan képes vírusspecifikus antitesteket találni.

Enzimatikus marker használt ELISA

Az alábbi lista az ELISA-vizsgálatokban használt leggyakoribb enzimatikus markereket tartalmazza, amelyek lehetővé teszik a vizsgálat eredményeinek mérését a befejezéskor.

  • OPD (o-feniléndiamin-dihidroklorid) fordul borostyán kimutatására HRP (torma-peroxidáz), amely gyakran használják, mint a konjugált fehérje.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetramethylbenzidin) kékre vált, amikor hrp-t észlel, és kén- vagy foszforsav hozzáadása után sárgára vált.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-etil-benzotiazolin-6-szulfonsav]-diammónium só) zöldre vált a HRP kimutatásakor.
  • A pnpp (p-nitrofenil-foszfát, Dinátrium-só) sárgára vált a lúgfoszfatáz kimutatásakor.