Hielscher ultrahang technológia

Cell legyeződés a BL21 sejtek hozzákeverésével

A BL21 sejtek az E. coli törzse, amelyet széles körben használnak a kutatólaboratóriumokban, a biotechnológiában és az ipari termelésben, mivel képesek a fehérjék et rendkívül hatékonyan kifejezni. Ultrahangos sejtzavar, legyeske és fehérje extrakció a közös módszer, hogy izolálja és összegyűjti a célzott fehérjék a celluláris belsejében BL21 sejtek. Hozzákeverésével megzavarja a sejt teljesen, és mentesít minden csapdába esett fehérjék, így 100% a fehérje elérhető.

BL21 sejtek fehérjeexpresszióhoz

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsA BL21 sejt egy kémiailag kompetens E. coli baktériumtörzs, amely t7 RNS-polimeráz-IPTG indukciós rendszer alkalmazásával történő transzformációra és magas fehérjeexpresszióra alkalmas. A BL21 sejtek lehetővé teszik a T7 promóter ellenőrzése alatt álló bármely gén nagy hatásfokú fehérjeexpresszióját. Az E. coli BL21(DE3) törzs egy T7 RNS-polimeráz alapú fehérjetermelő törzs T7 promoter-alapú expressziós vektorokkal kombinálva, és széles körben alkalmazzák laboratóriumokban és iparban rekombináns fehérjék előállítására. A BL21(DE3) -ben a rekombináns fehérjét kódoló gén expresszióját a kromoszóma szerint kódolt T7 RNS polimeráz (T7 RNAP) írja át, amely nyolcszor gyorsabban ír, mint a hagyományos E. coli RNAP. Ez teszi a törzs BL21(DE3) rendkívül hatékony, és kiderül, hogy az egyik legkedveltebb fehérje expressziós sejtrendszerek.

Protokoll ultrahangos lezisés és fehérje kivonása BL21 sejtek

Celllezis a BL21 sejtek többnyire végzett hozzákeverésével együtt nátrium-lauroyl szarkofozinát (más néven sarkosyl) a legyezőpuffer. Az ultrahangos sejtzavar és a fehérje kitermelés előnyei a megbízhatóságban, a reprodukálhatóságban, valamint az ultrahangos ítók egyszerű, biztonságos és gyors működésében rejlik. Az alábbi protokoll lépésről-lépésre irányt ad az ultrahangos BL21 sejtlúzsa számára:

Szonda típusú insonifier UP200St iízishez

Ultrahangos sejtdiszruptor UP200St mikrohegyű S26d2-vel lúdisés és fehérje extrakcióhoz

Információkérés




Jegyezzük fel Adatvédelmi irányelvek.


  • A gardedámfehérjék eltávolítása érdekében a BL21 bakteriális pelleteket újra szuszpendálták 50 ml jéghideg Nátrium-Tris-EDTA (STE) pufferben (10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl kiegészítve 100 mM PMSF-mel).
  • Hozzáadjuk az 500 ul lizzizimot (10 mg/ ml), és a sejteket jégen inkubáljuk 15 min.
  • Ezt követően 500 l DTT-t és 7 ml sarkosylt (10% (w/v) ste pufferben adnak hozzá.
  • Alapvető fontosságú, hogy minden tisztítópufferjéggel megmaradjon, és a mintákat minden alkalommal jégen tartsuk. Minden tisztítási lépést a hideg helyiségben kell elvégezni, ha lehetséges.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Az ultrahangos lazis és fehérje extrakció, a minták sonicated a VialTweeter MultiSample Ultrasonicator 4 x 30 mp 100% amplitúdóval, 2 perc intervallum között minden szonikálás. Alternatív megoldásként, egy szonda-típusú ultrahangos homogenizátor mikro-tip pl. Uf200 ः t S26d2 (3 x 30 mp, 2 perc. szünet között ultrahangos ciklusok, 80% amplitúdó) lehet használni.
  • A további tisztítási lépésekhez a mintákat jégen kell tartani, vagy további feldolgozásig -80 °C-on kell tárolni.

Ultrahangos lászózis prescise hőmérséklet-szabályozás alatt

A pontos és megbízható hőmérséklet-szabályozás kulcsfontosságú a biológiai minták kezelésekor. A magas hőmérséklet ekként termikusan indukált fehérjelebomlást indít el a mintákban.
Mint minden mechanikai minta előkészítési technikák, szonikálás hőt hoz létre. Bármennyire, a hőmérséklet -ból minták lehet jól ellenőr mikor használ a VialTweeter. Bemutatjuk Önnek a különböző lehetőségeket, hogy figyelemmel kíséri és szabályozza a hőmérsékleta a minták, miközben előkészíti őket a VialTweeter és VialPress elemzésre.

  1. A minta hőmérsékletének ellenőrzése: Az ultrahangos processzor UP200St, amely a VialTweetert hajtja, intelligens szoftverrel és dugaszolható hőmérséklet-érzékelővel rendelkezik. Csatlakoztassa a hőmérséklet-érzékelőt az UP200St készülékhez, és helyezze be a hőmérséklet-érzékelő csúcsát az egyik mintavevő csőbe. A digitális színű érintőképernyőn keresztül az UP200St menüjében megadhat egy adott hőmérséklet-tartományt a mintaszonikáláshoz. A ultrasonicator automatikusan leáll, amikor a max hőmérséklet elérése kor, és szünet, amíg a minta hőmérséklete le az alacsonyabb értéket a beállított hőmérséklet ∆. Ezután a szonikálás automatikusan újraindul. Ez az intelligens funkció megakadályozza a hő okozta lebomlást.
  2. A VialTweeter blokk lehet előre hűtött. Tedd a VialTweeter blokk (csak a összehegeszthetősége nélkül átalakító!) a hűtőbe vagy fagyasztóba, hogy előre kihűlni a titán blokk segít elhalasztani hőmérséklet-emelkedés a minta. Ha lehetséges, maga a minta is előhűthető.
  3. Használja szárazjég lehűlni alatt szonikálás. Használjon szárazjéggel töltött sekély tálcát, és helyezze a VialTweetert a jégre, hogy a hő gyorsan eloszlassa.

Az ügyfelek világszerte használja a VialTweeter és VialPress a napi minta előkészítése munka biológiai, biokémiai, orvosi és klinikai laboratóriumokban. Az UP200St processzor intelligens szoftver- és hőmérséklet-szabályozása, a hőmérséklet megbízhatóan szabályozott és a hő által kiváltott mintalebomlás elkerülhető. Ultrahangos minta előkészítése a VialTweeter és VialPress szállít rendkívül megbízható és reprodukálható eredményeket!

Keresse meg az optimális ultrahangos diszruptot a legyezőzéshez

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics régóta tapasztalt gyártója a nagy teljesítményű ultrahangos sejt diszruptorok és homogenizátorok laboratóriumok, pad-top és ipari méretű rendszerek. A bakteriális sejtkultúra mérete, a kutatási vagy termelési cél és a kötet a sejt feldolgozni óránként vagy nap elengedhetetlen tényező, hogy megtalálják a megfelelő ultrahangos sejt diszruptor az alkalmazás.
Hielscher Ultrasonics kínál különböző megoldásokat egyidejű szonikálás a több minta (akár 10 üveg a VialTweeter) és a tömeges minták (azaz, microtiter lemezek / ELISA lemezek a UIP400MTP), valamint a klasszikus szonda-típusú labor ultrasonicator különböző teljesítményszint 50-400 watt teljesen ipari ultrahangos processzorok akár 16,000watt egységenként a kereskedelmi sejt zavar és fehérje kitermelés nagy termelés. Minden Hielscher ultrasonicators épülnek a 24/7/365 teljes terhelés alatt. A robusztusság és a megbízhatóság ultrahangos készülékeink alapvető jellemzői.
Minden digitális ultrahangos homogenizátorok fel vannak szerelve intelligens szoftver, színes érintőképernyő és automatikus adat protokoll, amelyek az ultrahangos készülék egy kényelmes munkaeszköz a laborban és a termelési létesítményekben.
Tudassa velünk, milyen sejtek, milyen térfogatú, milyen gyakorisággal és milyen cél van, hogy feldolgozza a biológiai mintákat. Javasoljuk, hogy a legmegfelelőbb ultrahangos sejt diszruptor a folyamat követelményeinek.

Az alábbi táblázat jelzi ultrahangos rendszereink hozzávetőleges feldolgozási kapacitását a kompakt kézi homogenizátoroktól és a MultiSample ultrasonicators-tól az ipari ultrahangos processzorokig kereskedelmi alkalmazásokhoz:

Kötegelt mennyiség Áramlási sebesség Ajánlott eszközök
96-kút / mikrotiter lemezek na UIP400MTP
10 injekciós üveg à 0,5 és 1,5 mL között na VialTweeter a UP200St
00,01 és 250 mL között 5 és 100 mL/min között UP50H
00,01 és 500 mL között 10-200 ml / perc UP100H
10-2000 ml 20-400 ml / perc Uf200 ः t, UP400St
0.1-20L 02 - 4 L / perc UIP2000hdT
10-100 liter 2 - 10 l / perc UIP4000hdT
na 10 - 100 l / perc UIP16000
na nagyobb klaszter UIP16000

Lépjen kapcsolatba velünk! / Kérdezz minket!

Kérjen bővebb információt

Kérjük, használja az alábbi űrlapot, hogy kérjen további információkat ultrahangos processzorok, alkalmazások és az ár. Örömmel megvitatjuk önnel a folyamatot, és olyan ultrahangos rendszert kínálunk Önnek, amely megfelel az Ön igényeinek!









Kérjük, vegye figyelembe Adatvédelmi irányelvek.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultraszonizáló Uf200 ः t a 2mm mikrotip S26d2 a szonikálás a kis minták

Irodalom / Referenciák



Tudni érdemes

Escherichia Coli baktériumok

Escherichia coli egy baktérium típus, amely nem spóra-képző, Gram-negatív, és jellemzi a formáját egy egyenes rúd. E.coli baktériumok vannak jelen a környezetben, élelmiszerek, és a belek az emberek és állatok. Az E. coli általában perizsinus flagella használatával mozgékony, de vannak nem mozgékony típusok is. Az E.coli az úgynevezett anaerob anaerob kemoorganotroph organizmusok, ami azt jelenti, hogy képesek mind a légzőszervi, mind az erjedő anyagcserére. A legtöbb E.coli típus jóindulatú és hasznos funkciókat tölt be a szervezetben, pl. a káros baktériumfajok növekedésének elnyomása, a vitaminok szintézise stb.
Escherichia coli baktérium sejt az úgynevezett B típusú egy speciális kategóriája E.coli törzsek, amelyek széles körben használják a kutatásban, hogy vizsgálja mechanizmusok, mint a bakteriofág érzékenység vagy korlátozás-módosító rendszerek. Továbbá, E.coli baktériumok értékelik megbízható igásló fehérje expresszió a biotechnológia és az élettudományi laboratóriumokban. Például, E.coli használják szintetizálni vegyületek, mint a fehérjék és oligoszacharidok ipari méretekben. Mivel a sajátos ságok, mint a proteáz hiány, alacsony acetát termelés magas glükózszint, és fokozott permeabilitás, E. coli B sejtek ő leggyakrabban használt gazdasejtek előállítására genetikailag módosított fehérjék.

Rekombináns fehérje

A rekombináns fehérjék (rProt) egyre nagyobb jelentőséggel bírnak a sokrétű iparágakban, beleértve a vegyipargyártást, a gyógyszer- és kozmetikai, az emberi és állati orvoslást, a mezőgazdaságot, az élelmiszer- és hulladékkezelési iparágakat.
A rekombináns fehérje előállításához kifejezési rendszer szükséges. A rekombináns DNS előállítására szolgáló sejtrendszerek expresszálásaként mind a prokarióta, mind az eukarióta sejtek használhatók. Míg a bakteriális sejtek et a legszélesebb körben használják a fehérjeexpresszió miatt tényezők, mint például az alacsony költségű, könnyű skálázhatóság és egyszerű média feltételek, emlős, élesztő, algák, rovar-és sejt-mentes rendszerek létrehozott alternatívák. A fehérje típusa, funkcionális aktivitása, valamint a kifejezett fehérje szükséges hozama befolyásolja a fehérjeexpresszióhoz használt sejtrendszer kiválasztását.
A rekombináns fehérje kifejezéséhez egy adott sejtet át kell ültetni egy REkombináns DNS-sablont tartalmazó DNS-vektorral. A sablonnal átültetett sejteket ezután tenyésztik. A sejtmechanizmus következtében a sejtek átírják és lefordítják az érdeklődésre számot tartó fehérjét, ezáltal létrehozva a célzott fehérjét.
Mivel a kifejezett fehérjék csapdába estek a sejtmátrixban, a sejtet lúgolni kell (meg kell szakítani és meg kell törni), hogy felszabadítsa a fehérjéket. Egy későbbi tisztítási lépésben a fehérjét elválasztják és tisztítják.
A kezelés során használt első rekombináns fehérje a rekombináns humán inzulin volt 1982-ben. Ma, több mint 170 típusú rekombináns fehérje előállítása világszerte orvosi kezelések. A gyógyászatban használt, általánosan használt rekombináns fehérjék például a rekombináns hormonok, az interferonok, az interleukinok, a növekedési faktorok, tumor nekrózis tényezők, véralvadási tényezők, trombolitikus gyógyszerek, és enzimek kezelésére súlyos betegségek, mint a cukorbetegség, törpeség, szívinfarktus, pangásos szívelégtelenség, agyi apoplexia, sclerosis multiplex, neutropenia, thrombocytopenia, vérszegénység, hepatitis, reumatoid arthritis, asztma, Crohn-kór, és a rák (vö. Phuc V. Pham, omics technológiák és biotechnika, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Nagy teljesítményű ultrahangos! Hielscher termékpaletta kiterjed a teljes spektrumot a kompakt labor ultrasonicator több mint pad-top egységek teljes ipari ultrahangos rendszerek.