Pufferoldatok ultrahanggal elkészítve

A lízispufferek hatékonyan és gyorsan előállíthatók ultrahangos szövethomogenizátorokkal. Mivel az ultrahangos készülékek álom eszköz keverésre, feloldásra és diszpergálásra, lehetővé teszik a lízispufferek megbízható és felhasználóbarát előkészítését.

Lízispufferek ultrahangos előkészítése

Az ultrahangos szövethomogenizátorok a sejtek megzavarásának általános eszköze, lízis és extrakció, ezért a legtöbb laboratóriumban elérhető. A szonda típusú ultrahangos készülékek másodlagos alkalmazása a lízispufferek előállítása.

A lízispuffer egy olyan oldat, amelyet a nyitott (lizóz) sejtek feltörésére és tartalmuk felszabadítására használnak a downstream elemzéshez. A lízispuffer specifikus összetétele a lizálandó sejtek típusától és a későbbi alkalmazástól függően változhat. A tipikus lízispuffer azonban olyan összetevőket tartalmaz, mint a mosószerek, sók és proteázgátlók. A puffersókat (pl. Trisz-HCl) és az ionos sókat (pl. NaCl) általában a lizátum pH-jának és ozmolaritásának szabályozására használják.
A lízispuffer előállításához az összetevőket megfelelő koncentrációban és pH-értékben összekeverik. Az elegyet általában addig keverjük vagy rázzuk, amíg az összetevők fel nem oldódnak, és az oldat homogén.
Az ultrahangos homogenizálás olyan módszer, amely segíthet egy jó lízispuffer előállításában a komponensek keverésének és oldódásának javításával. Ebben a módszerben ultrahang hullámok – általában a 20 és 30 kHz közötti tartományban – alkalmazzák a keverékre, amely kavitációs buborékokat hoz létre, amelyek összeomlanak és intenzív helyi energiát generálnak, ami mechanikai nyíráshoz és az összetevők keveréséhez vezet.
Az ultrahangos homogenizálási folyamat segíthet szétválasztani az összetevők csomóit vagy aggregátumait, és biztosíthatja, hogy az oldat egyenletesen keveredjen. Következésképpen az ilyen továbbfejlesztett lízispuffer hatékonyabb sejtzavarhoz és az extrahált anyag nagyobb hozamához vezethet. Ezenkívül az ultrahangos homogenizálás csökkentheti a lízispuffer készítéséhez szükséges időt a hagyományos keverési vagy rázási módszerekhez képest.
Összességében, ultrahangos homogenizálás hatékony eszköz a lízis puffer előkészítésének minőségének és hatékonyságának javítására.

Protokoll ultrahangos lízis puffer előkészítéséhez

Ez egy általános protokoll lízis puffer készítéséhez szonda típusú ultrahangos készülékkel:
 
Anyagok:

• Választott mosószer(ek) (pl. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Választott só(k) (pl. NaCl, KCl)
• Proteázgátlók (pl. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultrahangos készülék
• Keverő
• Ionmentes víz
• pH-mérő vagy pH-csíkok

 
 
Lépésről lépésre:

1. Határozza meg a lízispuffer összetételét a lizálni kívánt sejtek vagy szövetek és a lizátumot használó későbbi alkalmazások alapján. Készítsük el a mosószerek, sók és proteázgátlók törzsoldatait a kívánt koncentrációban.
2. Töltsük a mosószerek, sók és proteázgátlók törzsoldatait főzőpohárba vagy lombikba.
3. Adjunk hozzá ionmentes vizet, hogy a térfogat a kívánt puffermennyiségre emelkedjen.
4. Keverjük össze a komponenseket keverővel, hogy előkeveréket kapjunk.
5. Mérjük meg a puffer pH-ját pH-mérővel vagy pH-csíkokkal, és szükség szerint állítsuk be a pH-t kis mennyiségű savval vagy lúggal.
6. Használja a szonda típusú ultrahangos készüléket az előkeverék oldat homogenizálásához, hogy nagyon homogén oldatot kapjunk. Ezért szonikálja az oldatot néhány másodpercig, amíg az oldatot alaposan összekeverik, és minden csomó vagy aggregátum lebomlik. Az ultrahangos kezelés időtartama és teljesítménye optimalizálható a specifikus lízispuffer és az alkalmazott ultrahangos készülék alapján.
7. Az ultrahangos kezelés után mérjük meg újra a puffer pH-ját, és szükség szerint állítsuk be.
8. Szűrjük át a puffert egy 0,2 mikronos szűrőn, hogy eltávolítsuk az ultrahangos kezelés során esetlegesen keletkező törmeléket vagy aggregátumokat.
9. A lízispuffer most már használatra kész.

 
Megjegyzés: A lízispuffer pontos összetétele és pH-ja a lizálandó sejtektől vagy szövetektől és a későbbi alkalmazásoktól függően változhat. A fenti protokoll általános irányelv, és előfordulhat, hogy speciális alkalmazásokhoz kell optimalizálni.
 
Az ultrahangos homogenizátorokat általában az intracelluláris molekulák sejtbontására és extrakciójára használják. Ezért sok lízis alkalmazás szonda típusú szondát használ nemcsak a lízispuffer előkészítéséhez, hanem a mechanikai sejtbontáshoz és extrakcióhoz is.
Ez teszi az ultrahangos szövethomogenizátorokat sokoldalú eszközzé a laboratóriumok számára, és magyarázza az ultrahangos készülékek széles körű használatát a mikrobiológiában, a biotechnológiában és az élettudományban.

Ultrahangos laboratóriumi homogenizátorok

A Hielscher Ultrasonics ultrahangos homogenizátorokat és szondákat (sonotrodes) gyárt és szállít különböző teljesítményfokozatokkal és mintamennyiségekkel. Ez lehetővé teszi számunkra, hogy a legmegfelelőbb ultrahangos zavarót kínáljuk Önnek a minta előkészítéséhez. A legmagasabb minőségre, a kiemelkedő felhasználói kényelemre és a megbízható szonikációs eredményekre összpontosítunk. Minden digitális ultrahangos készülék intelligens szoftverrel, ultrahangos protokollok programozásával és előzetes beállításával, böngésző távirányítóval, hőmérséklet-szabályozással, minta megvilágítással, valamint automatikus adatrögzítéssel rendelkezik a beépített SD-kártyán.

Tervezés, gyártás és tanácsadás – Németországban gyártott minőség

A Hielscher ultrahangos készülékek jól ismertek a legmagasabb minőségi és tervezési szabványokról. A robusztusság és a könnyű kezelhetőség lehetővé teszi ultrahangos készülékeink zökkenőmentes integrálását ipari létesítményekbe. A durva körülmények és az igényes környezetek könnyen kezelhetők Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics egy ISO tanúsítvánnyal rendelkező cég, és különös hangsúlyt fektet a nagy teljesítményű ultrasonicatorokra, amelyek a legmodernebb technológiát és felhasználóbarátságot mutatják. Természetesen a Hielscher ultrasonicators CE-kompatibilis és megfelel az UL, CSA és RoHs követelményeinek.

Az alábbi táblázat áttekintést nyújt a különböző laboratóriumi ultrahangos készülékeinkről: