Ultrahangos kezeléssel készített pufferoldatok

A lízispufferek ultrahangos szövethomogenizátorokkal hatékonyan és gyorsan elkészíthetők. Mivel az ultrahangos készülékek ideális eszközök a keveréshez, az oldáshoz és a diszpergáláshoz, lehetővé teszik a lízispufferek megbízható és felhasználóbarát elkészítését.

Lízispufferek ultrahangos előállítása

Az ultrahangos szövethomogenizátorok a sejtfeltárás, a lízis és az extrakció gyakran használt eszközei, ezért a legtöbb laboratóriumban rendelkezésre állnak. A szondás ultrahangos készülékek egyik másodlagos alkalmazása a lízispufferek előállítása.

A lízispuffer olyan oldat, amelyet a sejtek feltárására (lizálására) és tartalmuk felszabadítására használnak a további elemzésekhez. A lízispuffer konkrét összetétele a lizálandó sejtek típusától és a későbbi alkalmazástól függően változhat. Egy tipikus lízispuffer azonban olyan összetevőket tartalmaz, mint a detergensek, a sók és a proteázgátlók. A lizátum pH-jának és ozmolaritásának szabályozására általában pufferelő sókat (pl. Tris-HCl) és ionos sókat (pl. NaCl) használnak.
A lízispuffer elkészítéséhez az összetevőket a megfelelő koncentrációban és pH-n keverik össze. A keveréket általában addig keverik vagy rázatják, amíg az összetevők fel nem oldódnak, és az oldat homogénné nem válik.
Az ultrahangos homogenizálás olyan módszer, amely az összetevők keveredésének és oldódásának javításával segíthet jó minőségű lízispuffert készíteni. Ennél a módszernél ultrahanghullámokat – általában a 20 és 30 kHz közötti tartományban – juttatnak a keverékbe, ami kavitációs buborékokat hoz létre. Ezek összeomlanak, és intenzív helyi energiát hoznak létre, ami mechanikai nyírást és az összetevők keveredését eredményezi.
Az ultrahangos homogenizálási folyamat segíthet az összetevők esetleges csomóinak vagy aggregátumainak szétbontásában, és biztosíthatja az oldat egyenletes elkeveredését. Az így javított lízispuffer ezért hatékonyabb sejtfeltárást és az extrahált anyag nagyobb hozamát eredményezheti. Emellett az ultrahangos homogenizálás a hagyományos keverési vagy rázatási módszerekhez képest csökkentheti a lízispuffer elkészítéséhez szükséges időt.
Összességében az ultrahangos homogenizálás hatékony eszköz a lízispuffer-előállítás minőségének és hatékonyságának javítására.

Lízispuffer ultrahangos előállításának protokollja

Az alábbi általános protokoll lízispuffer szondás ultrahangos készülékkel történő előállítására szolgál:
 
Anyagok és eszközök:

• Választott detergens(ek) (pl. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Választott só(k) (pl. NaCl, KCl)
• Proteázgátlók (pl. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Ultrahangos készülék
• Keverő
• Ioncserélt víz
• pH-mérő vagy pH-tesztcsíkok

 
 
Útmutató lépésről lépésre:

1. Határozza meg a lízispuffer összetételét a lizálandó sejtek vagy szövet, valamint a lizátum későbbi felhasználási módjai alapján. Készítse el a detergensek, sók és proteázgátlók törzsoldatait a kívánt koncentrációkban.
2. Adja a detergensek, sók és proteázgátlók törzsoldatait egy főzőpohárba vagy lombikba.
3. Adjon hozzá ioncserélt vizet, hogy a puffer térfogata elérje a kívánt értéket.
4. Keverje össze az összetevőket keverővel, hogy előkevert oldatot kapjon.
5. Mérje meg a puffer pH-ját pH-mérővel vagy pH-tesztcsíkokkal, és szükség szerint állítsa be a pH-t kis mennyiségű savval vagy bázissal.
6. Homogenizálja az előkevert oldatot a szondás ultrahangos készülékkel, hogy nagyfokú homogenitású oldatot kapjon. Ehhez kezelje az oldatot ultrahanggal néhány másodpercig, amíg az oldat alaposan el nem keveredik, és az esetleges csomók vagy aggregátumok szét nem bomlanak. Az ultrahangos kezelés időtartama és teljesítménye az adott lízispuffer és az alkalmazott ultrahangos készülék alapján optimalizálható.
7. Az ultrahangos kezelés után mérje meg újra a puffer pH-ját, és szükség szerint állítsa be.
8. Szűrje át a puffert egy 0,2 mikronos szűrőn az ultrahangos kezelés során esetleg képződött törmelék vagy aggregátumok eltávolítására.
9. A lízispuffer most már használatra kész.

 
Megjegyzés: A lízispuffer pontos összetétele és pH-ja a lizálandó sejtektől vagy szövettől és a későbbi alkalmazásoktól függően változhat. A fenti protokoll általános útmutató, amelyet az egyes alkalmazásokhoz szükség lehet optimalizálni.
 
Az ultrahangos homogenizátorokat gyakran használják sejtfeltárásra és intracelluláris molekulák extrakciójára. Ezért számos lízisalkalmazásban nemcsak a lízispuffer elkészítéséhez, hanem a mechanikai sejtfeltáráshoz és az extrakcióhoz is szondás ultrahangos kezelést alkalmaznak.
Ez az ultrahangos szövethomogenizátorokat sokoldalú laboratóriumi eszközzé teszi, és magyarázza az ultrahangos készülékek széles körű használatát a mikrobiológiában, a biotechnológiában és az élettudományokban.

Ultrahangos laboratóriumi homogenizátorok

A Hielscher Ultrasonics különböző névleges teljesítményekhez és mintatérfogatokhoz gyárt és szállít ultrahangos homogenizátorokat és szondákat (szonotródákat). Ez lehetővé teszi számunkra, hogy a minta-előkészítéséhez legmegfelelőbb ultrahangos sejtfeltáró készüléket kínáljuk Önnek. A legmagasabb minőségre, a kiemelkedő használati kényelemre és az ultrahangos kezelés megbízható eredményeire összpontosítunk. Minden digitális ultrahangos készülék intelligens szoftverrel, az ultrahangos kezelési protokollok programozásának és előzetes beállításának lehetőségével, böngészőből történő távvezérléssel, hőmérséklet-szabályozással, mintamegvilágítással, valamint a beépített SD-kártyára történő automatikus adatrögzítéssel rendelkezik.

Tervezés, gyártás és tanácsadás – Németországban készült minőség

A Hielscher ultrahangos készülékei a legmagasabb minőségi és tervezési követelményszintjükről ismertek. Robusztusságuk és egyszerű kezelhetőségük lehetővé teszi ultrahangos készülékeink zökkenőmentes integrálását az ipari létesítményekbe. A Hielscher ultrahangos készülékei könnyedén megbirkóznak a zord körülményekkel és az igényes környezetekkel.

A Hielscher Ultrasonics ISO-tanúsítvánnyal rendelkező vállalat, amely különös hangsúlyt fektet a csúcstechnológiát és felhasználóbarát működést kínáló, nagy teljesítményű ultrahangos készülékekre. A Hielscher ultrahangos készülékei természetesen megfelelnek a CE előírásainak, valamint az UL, CSA és RoHs követelményeinek.

Az alábbi táblázat áttekintést ad különböző laboratóriumi ultrahangos készülékeinkről: