Alfa-szinuklein fragmentáció a VialTweeter szonikátor segítségével

A α-szinuklein rostszálak és szalagok a tudományos kutatások során széttöredeznek, hogy kisebb rostszálakat vagy akár egyedi fehérjemolekulákat hozzanak létre, amelyek könnyebben elemezhetők különböző kísérleti technikákkal. A VialTweeter szonikátor az egyik leggyakrabban használt ultrahangos készülék a hatékony és megbízható alfa-szinuklein töredezettséghez.

α-szinuklein a kutatásban

Az alfa-szinuklein fibrillumok olyan fehérjeaggregátumok, amelyek erősen kapcsolódnak a neurodegeneratív rendellenességekhez, például a Parkinson-kórhoz és a demencia bizonyos formáihoz, beleértve a Lewy-testes demenciát is. Az alfa-szinuklein fibrillumokra összpontosító kutatások célja a betegség progressziójában betöltött szerepük megértése és a lehetséges terápiás beavatkozások kifejlesztése. Az alfa-szinuklein fibrillumok kisebb töredékekre bontásával a kutatók megvizsgálhatják sajátos szerkezeti jellemzőiket. Például az alfa-szinuklein fibrillumok fragmentálása lehetővé teszi a kutatók számára, hogy megvizsgálják kölcsönhatásaikat más molekulákkal, például fehérjékkel, lipidekkel vagy kis molekulákkal. Kisebb fragmentumok előállításával hatékonyabban vizsgálható a kötőhelyek és az affinitás ezekhez az interakciós partnerekhez. A kisebb α-Syn fribrillák és szalagok szintén megváltozott toxicitást és biokémiai hatásokat mutathatnak. Ezért döntő fontosságú a megbízható és hatékony fragmentációs technika, amely gyors és egyszerű mintakezelés esetén reprodukálható eredményeket produkál.
Ultrahangos alfa-syn töredezettség: A VialTweeter szonikátor a megalapozott ultrahangos mintaelőkészítő rendszer, amely akár 10 injekciós üveget is szoniál egyszerre, pontosan ugyanolyan körülmények között. A programozható beállítások lehetővé teszik ugyanazon kísérletek egyszerű és gyors újrafuttatását, ami rendkívül megbízható és reprodukálható eredményeket ad az alfa-szinuklein rostszál fragmentációjában.

α-szinuklein minta előkészítése szonikátorral

Az alfa-szinuklein fibrillumok tanulmányozásának egyik megközelítése magában foglalja azok extrakcióját és töredezettségét olyan technikákkal, mint az ultrahangos kezelés. A szonikálás olyan folyamat, amely nagy intenzitású, alacsony frekvenciájú ultrahanghullámokat használ a fehérje aggregátumok megzavarására és lebontására, ami kisebb fibrillumok vagy egyedi fehérjemolekulák felszabadulásához vezet. A VialTweeter szonikátor egy általánosan használt eszköz a α-szinukleinnel kapcsolatos kutatási tanulmányokban erre a célra.

Számos kutatási tanulmány leírja az alfa-szinuklein fibrillumok szonikálásának pontos mintaelőkészítési protokolljait, amelyek a Hielscher VialTweeter-t használják a hatékony és megbízható α-szinuklein fibrillális fragmentációhoz. A fibrillumok ultrahangos széttöredezésével a kutatók elemezhetik a kapott termékeket, és megvizsgálhatják azok szerkezetét, toxicitását és kölcsönhatását más molekulákkal. Ez a kutatás fontos betekintést nyújt a neurodegeneráció mögött álló mechanizmusokba, és potenciálisan új terápiás célpontokat azonosít. A jól bevált α-szinuklein szonikációs protokollok a VialTweeter szonikátor segítségével megbízható és reprodukálható eredményeket tesznek lehetővé.

Felső képek: töredezettetlen alfa-szinuklein fibrillumok
Alsó képek: Ultrahanggal töredezett alfa-szinuklein fibrillumok a VialTweeter szonikátorral
(tanulmány és képek: ©Dieriks et al., 2022)

A α-Synuclein fibrillumok ultrahangos töredezettsége – Protokollok

Mivel számos kutató használja a VialTweeter szonikátort preferált fragmentációs technikaként egységes α-szinuklein rostszál fragmensek előállítására, a megalapozott protokollok könnyen elérhetők. Az alábbiakban néhány példaértékű töredezettségi protokollt talál.
 

 
ClearTau vetőmag előkészítése: A ClearTau fibrillumokat 10 μM-re hígítottuk dH2O-ban, és 70% amplitúdóval ultrahanggal kezeltük 50 másodpercig, 1 s ON 1 s OFF ciklussal a csőben az UP200St szonikátor segítségével VialTweeterrel. A magokat elektronmikroszkóppal jellemeztük.
ThS fluoreszcencia mérés: A ClearTau fibrillumokat 2,5 μM-ra hígítottuk dH2O-ban, és 70% amplitúdóval ultrahanggal kezeltük 50 másodpercig, 1 s ON 1 s OFF ciklussal a csőben UP200St használatával VialTweeterrel. Kontrollként 2,5 μM teljes hosszúságú Tau 4R2N monomert használtunk. A 100 μl-es reakcióhoz 100 μl ThS-t (10 μM) adtunk, így a végső fehérjekoncentráció 1,25 μM volt. Az egyszeres pontszerű ThS fluoreszcenciát 96 jól tiszta fenéklemezen mértük, amelyeket FLUOstar Omega mikrolemez-olvasóban állítottunk fel, 445 nm-en gerjesztéssel és 485 nm-es emisszióval.
(vö. Limorenko et al., 2023)
 
Egyenletes α-szinuklein hosszúság szonikálással: A α-syn fibrillák és szalagok hosszheterogenitását 20 percig ultrahanggal csökkentették jégen 2 ml-es Eppendorf csövekben egy VialTweeterben, 75% amplitúdóval, 0,5 s impulzusokkal.
(vö. Bousset et al., 2013)
 
A humán rekombináns monomer WT vagy S129A a-Syn és az általuk generált fibrilláris polimorfok, valamint az a-Syn 1–110 minőségellenőrzését végeztük. Ezt követően a fibrilláris polimorfokat szonikálással töredezték 20 percig 2 ml-es Eppendorf csövekben a VialTweeter ultrasonicatorban, hogy fibrilláris részecskéket hozzanak létre, amelyek átlagos mérete 42–52 nm, amelyek alkalmasak endocitózisra.
(vö. Shrivastava et al., 2020)
 

Öt fibrilláris α-Syn polimorf jellemzése. (A) A negatív festésű α-Syn fibrilláris polimorf rostszálak, szalagok, rostszálak-91, fibrillák-65 és fibrillák-110 transzmissziós elektronmikroszkópos felvételei láthatók a VialTweeterrel történő fragmentáció előtt (felső sáv) és után (alsó sáv). (B) A fragmentált fibrilláris polimorfok hosszeloszlása látható. Azoknak a fibrilláris szerelvényeknek a száma (n) van feltüntetve, amelyekből a hisztogramok származtak.
(tanulmány és képek: Shrivastava et al., 2020)

 
A α-Syn fibrillákat 20 percig ultrahangos kezeléssel töredezték 2 ml-es Eppendorf csövekben egy VialTweeterben, hogy fibrilláris részecskéket generáljanak, amelyek átlagos mérete 42–52 nm a TEM-elemzés értékelése szerint.
(vö. Negrini et al., 2022)
 
A reszuszpendált fibrillákat91 (PBS-ben) széttöredezték, mielőtt a sejttenyészetekhez szonikálással 20 percig 2 ml Eppendorf csövekben adták volna hozzá az injekciós üveg magassugárzó szonikátorral, aliquotált, folyékony nitrogénben fagyasztva és felhasználásig -80 ° C-on tárolva.
(vö. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter és laboratóriumi szonikátorok α-syn töredezettséghez

A Hielscher Ultrasonics világszerte elismert vezető gyártója a legmodernebb ultrahangos készülékeknek. Megbízható és megalapozott a nagy kutatólaboratóriumokban világszerte, ultrahangos készülékeink páratlan minőséget és teljesítményt kínálnak a kritikus kísérletekhez.
A Hielscher VialTweeter és bármely más Hielscher sonicator páratlan felhasználói kényelmet fog tapasztalni, mivel átgondoltan tervezték őket a reprodukálható eredmények, a könnyű használat és a zökkenőmentes működés érdekében. Az automatikus adatrögzítési funkciókkal a kutatásra összpontosíthat, míg ultrahangos készülékeink aprólékosan rögzítik a kulcsfontosságú adatokat a reprodukálhatóság és a pontosság érdekében.
Érjen el következetes és reprodukálható eredményeket magabiztosan!
Ultrahangos készülékeinket Németországban tervezték és gyártották. Német precizitás és a legmagasabb mérnöki minőség a megbízható és pontos mintaelőkészítés biztosítása érdekében, mint például az alfa-szinuklein rostszál fragmentációja minden alkalommal. Nem kell többé aggódnia az inkonzisztens eredmények miatt - ultrahang technológiánk biztosítja, hogy kutatása a tudományos fejlődés élvonalában maradjon.
De ez még nem minden! A kiválóság iránti elkötelezettségünk túlmutat termékeinken. Büszkék vagyunk kivételes ügyfélszolgálatunkra, amely szakértői támogatást nyújt bármilyen kérdés vagy aggály megválaszolásához. Elkötelezett csapatunk itt van, hogy segítse Önt a kutatási út minden lépésében, biztosítva, hogy a legtöbbet hozza ki ultrahangos készülékeinkből.
Válassza ki az innovációt, a megbízhatóságot és a kivételes felhasználói élményt - válassza ki laboratóriumi szonikátorainkat, például a VialTweeter-t az alfa-szinuklein rostszál fragmentációjához. Használja ki a már kialakított protokollok előnyeit, és csatlakozzon a vezető kutatók sorához, akik kritikus tanulmányaikban bíznak technológiánkban. Emelje fel kutatását, és fedezze fel a demencia és a neurodegeneratív betegségek kutatásának új határait a legmodernebb ultrahangos készülékeinkkel.

Tervezés, gyártás és tanácsadás – Németországban gyártott minőség

A Hielscher ultrahangos készülékek jól ismertek a legmagasabb minőségi és tervezési szabványokról. A robusztusság és a könnyű kezelhetőség lehetővé teszi ultrahangos készülékeink zökkenőmentes integrálását ipari létesítményekbe. A durva körülmények és az igényes környezetek könnyen kezelhetők Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics egy ISO tanúsítvánnyal rendelkező cég, és különös hangsúlyt fektet a nagy teljesítményű ultrasonicatorokra, amelyek a legmodernebb technológiát és felhasználóbarátságot mutatják. Természetesen a Hielscher szonikátorok CE-kompatibilisek és megfelelnek az UL, CSA és RoHs követelményeinek.
 
Az alábbi táblázat jelzi laboratóriumi méretű ultrahangos készülékeink hozzávetőleges feldolgozási kapacitását: