Näytteen valmistus ultraäänipullolla

Ultra ääni näytteen valmistelu

Ultrasonication is a common technique of sample treatment in order to get the sample ready for analyses such as polymers chain reaction (PCR), Western Blots, assays, molecular sequencing, chromatography etc. Ultrasonication is a technique widely used in laboratories to treat samples pre-analytically. A major advantage of sonication is that the working principle of ultrasound is based on purely mechanical forces. Ultrasonic lysis and cell disruption is achieved by sonomechanical shear forces, which gives ultrasonication the advantage that the solvents used for protein extraction can be used also during lysis. Ultrasonic cell disruptors such as the VialTweeter break the cell walls / membranes and promote mass transfer between cell interior and solvent. Thereby, the analyte (e.g. DNA, RNA, proteins, organelles etc.) are efficiently transferred from the cell matrix into the solvent. This means the steps of quenching and extraction overlap with the ultrasonic cell disruption process, which makes ultrasonic lysis very effective. Furthermore, ultrasonic sample preparation does not require detergents and other lysis reagents, which might alter and destruct the structure of the lysate and is known for the subsequent troubles with purification. Another lysis method, the enzymatic disruption requires long incubation times and delivers often non-reproducible results. Ultrasonic sample preparation overcomes common problems in sample preparation such as tissue homogenization, cell disruption, lysis, protein extraction and lysate solubilization. Since the intensity of the ultrasonic treatment can be exactly controlled and adjusted to the biological sample, degradation and sample loss are avoided. Automatically monitored and controlled sample temperature, pulse mode and sonication duration ensure optimum outcomes.

VialTweeter on erityisen kätevä laboratoriotyöhön, joka edellyttää useiden näytteiden samanaikaista valmistaminen samoissa olosuhteissa. VialTweeter on ultraäänilohkon sonotrodi, johon mahtuu jopa 10 injektiopulloa (esim. Eppendorf, centriguge, NUNC-putket, kryopullot) ja äänittää ne voimakkaasti tarkasti valvotuissa olosuhteissa. Koska ultraäänienergia on yhdistetty injektiopullojen seinien läpi näyteaineeseen, injektiopullot pidetään suljettuina hoidon aikana. Näin vältetään kokonaan näytteen häviäminen ja ristikontaminaatio.

Injektiopullot ja putket, jotka sopivat VialTweeteriin

VialTweeter soveltuu 10 tavalliseen kartiomaiseen tai pyöreäpohjaiseen putkeen, kuten Eppendorfiin, sentrifugiin, kryopulloihin ja erilaisiin NUNC- injektiopullotyyppeihin, mutta reiät voidaan räätälöidä pyynnöstä muihin injektiopullo- ja putkikokoihin. Kerro meille, millaisia koeputkia haluat käyttää, jotta voimme muokata VialTweeter-laitetta vastaavasti. Suuremmille koeputkille, kuten Falcon-putkille ja muille testiastioihin, nokka-astioihin ja astioihin, VialPress on kätevä ratkaisu.

VialTweeter ja VialPress

Vaikka VialTweeter itse 10 putkireiällään on jo ainutlaatuinen ja erittäin toimiva ultraäänilaite, VialPress-lisäosa tekee VialTweeteristä entistä monipuolisemman ja joustavamman. VialPress on lisävaruste VialTweeterille, joka koostuu kiinnityspalkista, jonka avulla voidaan kiinnittää suurempia näyteputkia, kuten Falcon-putkia tai muita pieniä tai keskikokoisia testinokkareita VialTweeter-etuosaan. Vasemmalla olevassa kuvassa VialTweeter pitää 10 Eppendorf-injektiopulloa lohkossa, kun taas VialPress kiinnittää yhden suuremman koeputken eteen sonikaatiota varten. VialPress pystyy pitämään jopa 5 suurempaa koeputkea voimakkaaseen sonikaatioon.

Injektiopullon näytteiden valmisteluprotokollat

VialTweeter-näytteitä käytetään laajalti biologisten näytteiden sonitimiseen. Ennen analysointia näytteet on valmistettava biokemiallisia tai biofyysisiä analyysejä ja määrityksiä varten, esimerkiksi lyysien, kudosten homogenisoinnin, proteiiniuuton, DNA/RNA-talteenoton, kaasunpoiston jne. VialTweeter täyttää nämä ultraääniprosessit luotettavasti ja tuottaa toistettavissa olevia tuloksia. VialTweeterin yleinen käyttö on nisäkäskudosten (ihmis- ja eläinkudosten) sekä bakteerisolujen ja virushiukkasten lyysi/soluhäiriöt. Menestyksekkäästi Injektiopullolla hoidetut biologiset näytteet sisältävät ihmisen keuhkojen epiteelisoluja, hematopoieettisia kantasoluja, myelooisia leukemiasoluja, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogeenit, Caulobacter puolikuu, Mykoplasma pneumoniae, mykobakteerit / Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) ja monet muut bakteeri-, kasvitieteelliset ja mikrobisolut.
Alta löydät muutamia valittuja protokollia, joissa on VialTweeter.

E.Coli Lysis injektiopullon kanssa in vivo -glutaatiomääritykseen

MG1655- kannan Escherichia coli - bakteereja kasvatettiin MOPS: n minimaalisessa väliaineessa 200 ml: n kokonaistilavuudesta, kunnes A600 oli 0, 5. Viljelmä jaettiin 50 ml: n viljelmiin stressinhoitoa varten. 15 minuutin inkuboinnin jälkeen 0,79 mM allisiinilla, 1 mM diamidilla tai dimetyylisulfoksidilla (kontrolli) solut korjattiin 4 000 g: ssa 4 °C: ssa 10 minuutin ajan. Solut pestiin kahdesti KPE-puskurilla ennen pellettien uudelleensuspensiota 700 μl:ssa KPE-puskuria. Deproteinaatioon lisättiin 300 μl 10% (w/v) sulfosalisyylihappoa ennen solujen häiriötä ultraäänellä (3 x 1 min; VialTweeter-ultraääni). Supernatants kerättiin sentrifugoinnin jälkeen (30 min, 13 000g, 4°C). Sulfosalisyylihappopitoisuudet laskivat 1%: iin, kun KPE- puskuria oli 3 tilavuusprosenttia. Glutaatioiden ja GSSG: n kokonaismittaukset tehtiin edellä kuvatulla tavalla. Solujen glutaatiopitoisuudet laskettiin 6×7×10–15 litran E. coli - solujen tilavuuden ja solutiheyden A600 0, 5 (vastaa 1×108 solua ml- 1 viljelmää) perusteella. GSH-pitoisuudet laskettiin vähentämällä 2[GSSG] glutaatioiden kokonaismäärästä. (Müller ym. 2016)

Solulyysi injektiopullon kanssa Ennen grafiittiuunin atomiabsorptiospektrometriaa

Bacillus subtilis 168 (trpC2) altistui 15 minuutin antibioottistressille, sen jälkeen solut korjattiin 3 320 x g:n nopeudella, pestiin viisi kertaa 100 mM Tris/1 mM EDTA:lla, pH 7,5, sekoitettiin uudelleen 10 mM Tris-, pH 7,5-, ja ultrasonaatio häiritsi sitä Hielscher VialTweeter -instrumentissa. (Wenzel ym. 2014)

Injektiopullon näytteiden valmistus ennen massaspektrometriaa

Ihmisen CD34􏰀 hematopoieettisten kanta-/kantasolujen kylmäkuivatut solupelletit sekoitettiin uudelleen 8 M:n peptidilaimennussarjaa varten 10 μ􏰇l:ssa (200 μl) ureaa 100 mM ammoniumvetykarbonaatissa ja lysoidaan sonikaatiolla Hielscher VialTweeterillä 60%: n amplitudilla, 60%: n syklillä ja 20-luvulla kolme kertaa välijäähdytyksellä. (Amon ym. 2019)

Näytteen valmisteluprotokollat VialPressin avulla

Tuore salaatti (Lactuca sativa) homogenoitiin 0, 5 M HEPES- puskurissa (pH 8, KOH- säädetty) suhteessa 1 g kasvia (tuorepaino) 200, 100, 50 tai 20 ml puskuriliuokseen. Kasvimassan ja puskuriliuoksen tilavuuden suhdetta vaihteli, jotta homogenaatin kokonaistilavuus olisi 3,5–12 ml. Kasvimassan ja puskuriliuoksen tilavuuden suhdetta vaihteli, jotta homogenaatin kokonaistilavuus olisi 3,5–12 ml, mikä mahdollisti homogenisoinnin anturin kanssa. Homogenaatit kävivät sitten läpi epäsuoran ultrasonication käyttäen UP200St kanssa VialTweeter varustettu 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Saksa) 3 min (80% pulssi ja 100% teho). Tämän laitteen käyttö vältti kontaminaation. (Laughton ym. 2019)

Luotettava lämpötilan säätö sonikoinnin aikana VialTweeter-pullolla

Lämpötila on ratkaiseva prosessiin vaikuttavana tekijänä, joka on erityisen tärkeä biologisten näytteiden hoidossa. Kuten kaikki mekaaniset näytteenvalmistustekniikat, sonikaatio luo lämpöä. Näytteiden lämpötilaa voidaan kuitenkin hallita hyvin, kun käytetään VialTweeter- näytteitä. Esittelemme sinulle erilaisia vaihtoehtoja seurata ja hallita näytteiden lämpötilaa samalla, kun valmistelet niitä VialTweeter ja VialPress analyysia varten.

1. Näytteen lämpötilan seuranta: VialTweeter-laitetta ohjaava ultraääniprosessori UP200St on varustettu älykkäällä ohjelmistolla ja kytkettävällä lämpötila-anturilla. Liitä lämpötila-anturi UP200St-näytteeseen ja aseta lämpötila-anturin kärki yhteen näyteputkista. Digitaalisen värillisen kosketusnäytön avulla voit asettaa UP200St-valikossa tietyn lämpötila-alueen näytteen sonikaatiota varten. Ultraäänilaite pysähtyy automaattisesti, kun enimmäislämpötila on saavutettu, ja pysähtyy, kunnes näytteen lämpötila laskee asetettuun lämpötilaan ∆. Sitten sonikaatio alkaa automaattisesti uudelleen. Tämä älykäs ominaisuus estää lämmön aiheuttaman hajoamisen.
2. VialTweeter- lohko voidaan esijäähdytetty. Laita VialTweeter-lohko (vain sonotrode ilman anturia!) jääkaappiin tai pakastimeen esijäähdyttääkseen titaanilohkon, mikä auttaa lykkäämään näytteen lämpötilan nousua. Jos mahdollista, myös itse näyte voidaan esijäähdytyä.
3. Jäähdytä sonikoinnin aikana kuivajäällä. Käytä matalaa lokeroa, joka on täytetty kuivalla jäällä, ja aseta VialTweeter kuivalle jäälle, jotta lämpö haihtuu nopeasti.

Asiakkaat ympäri maailmaa käyttävät VialTweeteriä ja VialPressiä päivittäiseen näytteenvalmistustyöhönsä biologisissa, biokemiallisissa, lääketieteellisissä ja kliinisissä laboratorioissa. UP200St-prosessorin älykäs ohjelmisto ja lämpötilan säätö, lämpötila on luotettavasti ohjattu ja lämmön aiheuttama näytteen heikkeneminen vältetään. Ultraääninäytteiden valmistus VialTweeterillä ja VialPressillä tuottaa erittäin luotettavia ja toistettavissa olevia tuloksia!

Injektiopullon tekniset yksityiskohdat

VialTweeter on titaanista valmistettu lohkosonotrodi, joka voi pitää jopa 10 injektiopulloa lohkon rei'issä. Lisäksi Jopa 5 suurempaa koeputkea voidaan kiinnittää VialTweeter-etuosaan VialPressillä. VialTweeter on suunniteltu siten, että ultrasonication-energia jakautuu tasaisesti jokaiseen lisättyyn injektiopulloon luotettavien ja yhdenmukaisten sonikaatiotulosten varmistamiseksi. Pieni kääntö säätää VialTweeter-sonotrodin epätasaiseen maahan ja kohdistaa koeputket pystysuoraan.

VialTweeterin edut yhdellä silmäyksellä

• Voimakas sonikointi jopa 10 injektiopulloon samanaikaisesti
• Epäsuora sonikointi korkealla Ultra ääni intensiteetillä alus seinän läpi näytteeseen
• Epäsuora sonikointi estää ristikontaminaation ja näytteen menetyksen
• Toistettavissa olevat tulokset säädettävän ja ohjattavissa olevan Ultra äänellä amplitudin ansiosta
• VialPress mahdollistaa suurempien putkien sonikaatti-
• Säädettävä amplitudi 20 -100%
• Säädettävä pulssitila 0-100%
• autoklavoitava

VialTweeter saa virtansa UP200St, 200 watin tehokas ultraääniprosessori. UP200St on varustettu älykkäällä ohjelmistolla, joka mahdollistaa kaikkien tärkeiden ultraääniprosessiparametrien, kuten amplitudi, sonikaatioaika, sykkiminen ja lämpötila, tarkan hallinnan. Tämä tekee VialTweeteristä luotettavan työkalun onnistumiseen toistettavissa prosessituloksissa biologisissa ja biokemiallisissa laboratorioissa.
Amplitudia voidaan säätää välillä 20 ja 100% ja mahdollistaa siten ultraääni-intensiteetin mukauttamisen näytteeseen. Esimerkiksi DNA:n ja RNA:n kudos ja sirpaloituminen vaatii lievempää amplitudia, jotta estetään liian pienten DNA-fragmenttien tuotanto, hiiren aivojen kudosten homogenisointi tarvitsee korkean intensiteetin sonikaatiota. Valitse ihanteellinen amplitudi, sonikaatiointensiteetti ja kesto UP200St-prosessorin älykkään ja intuitiivisen valikon kautta. Valikkoon ja asetuksiin pääsee helposti käsiksi ja sitä voidaan käyttää värillisillä kosketusnäytöillä. Asetuksissa voit asettaa etukäteen sonikaatioparametreja, kuten amplitudi, sykkimis- / syklitila, sonikaatiokesto, kokonaisenergian syöttö ja lämpötilarajat. Tutkimuksessa ja tuotannossa kokeiden ja testitulosten toistettavuus on ratkaisevan tärkeää. Tämä tarkoittaa, että prosessiolosuhteiden ja sonikaatioprotokollien tarkka kirjaaminen on erittäin tärkeää. Automaattinen dataprotokolla kirjoittaa kaikki sonikaatiotiedot CSV-tiedostoon integroidulla SD-kortilla, jotta voit helposti tarkistaa ja vertailla erilaisia sonikaatioajoja. Kaikkia ultraääniprosessitietoja voidaan helposti käyttää ja jakaa CSV-tiedostona.
Hielscher Ultrasonics pyrkii tarjoamaan sinulle kehittynyttä teknologiaa tutkimustyösi helpottamiseksi ja parantamiseksi!