Näytteen valmistelu ultraäänipullollaTweeter

Näytteen valmistelu ennen analyysiä voi vaatia erilaisia esianalyyttisiä prosesseja, kuten kudosten homogenointia, lyysiä, proteiinien, DNA: n, RNA: n, organellien ja muiden solunsisäisten aineiden uuttamista, liuottamista ja kaasunpoistoa. VialTweeter on ainutlaatuinen ultraäänilaite, joka valmistaa useita näyteputkia samanaikaisesti täsmälleen samoissa olosuhteissa. Suljettujen koeputkien epäsuoran sonikoinnin vuoksi vältetään ristikontaminaatio ja näytteen häviäminen.

ultraääninäytteen valmistus

Ultrasonication on yleinen näytteenkäsittelytekniikka, jotta näyte saadaan valmiiksi analyyseihin, kuten polymeeriketjureaktio (PCR), Western Blots, määritykset, molekyylisekvensointi, kromatografia jne. Ultrasonication on tekniikka, jota käytetään laajalti laboratorioissa näytteiden esianalyyttiseen käsittelyyn. Sonikoinnin suuri etu on, että ultraäänen toimintaperiaate perustuu puhtaasti mekaanisiin voimiin. Ultraäänilyysi ja solujen häiriöt saavutetaan sonomekaanisilla leikkausvoimilla, mikä antaa ultrasonicationille edun, että proteiiniuuttoon käytettyjä liuottimia voidaan käyttää myös lyysin aikana. Ultraäänisolujen häiritsijät, kuten VialTweeter, rikkovat soluseinät? kalvot ja edistävät massansiirtoa solun sisätilojen ja liuottimen välillä. Näin analyytti (esim. DNA, RNA, proteiinit, organellit jne.) siirretään tehokkaasti solumatriisista liuottimeen. Tämä tarkoittaa, että sammutus- ja uuttovaiheet ovat päällekkäisiä ultraäänisolujen häiriöprosessin kanssa, mikä tekee ultraäänilyysistä erittäin tehokkaan. Lisäksi ultraääninäytteen valmistus ei vaadi pesuaineita ja muita lyysireagensseja, jotka saattavat muuttaa ja tuhota lysaatin rakennetta ja tunnetaan myöhemmistä puhdistusongelmista. Toinen lyysimenetelmä, entsymaattinen häiriö, vaatii pitkiä inkubaatioaikoja ja tuottaa usein toistettavia tuloksia. Ultraääninäytteen valmistus voittaa yleiset ongelmat näytteenvalmistuksessa, kuten kudosten homogenisoinnissa, solujen häiriöissä, lyysissä, proteiinien uuttamisessa ja lysaatin liuottamisessa. Koska ultraäänikäsittelyn intensiteettiä voidaan tarkasti hallita ja säätää biologiseen näytteeseen, hajoaminen ja näytteen häviäminen vältetään. Automaattisesti valvottu ja ohjattu näytteen lämpötila, pulssitila ja sonikaatioaika takaavat optimaaliset tulokset.
 

VialTweeter on erityisen kätevä laboratoriotyöhön, joka vaatii useiden näytteiden samanaikaista valmistusta samoissa olosuhteissa. VialTweeter on ultraäänilohkon sonotrode, johon mahtuu jopa 10 injektiopulloa (esim. Eppendorf, sentrifugi, NUNC-putket, kryo-injektiopullot) ja sonikoi ne voimakkaasti tarkasti valvotuissa olosuhteissa. Koska ultraäänienergia on kytketty injektiopullojen seinämien läpi näyteväliaineeseen, injektiopullot pysyvät suljettuina hoidon aikana. Näin vältetään näytteiden häviäminen ja ristikontaminaatio kokonaan.

VialTweeteriin sopivat injektiopullot ja putket

VialTweeter sopii 10 tavalliseen kartiomaiseen tai pyöreäpohjaiseen putkeen, kuten Eppendorfiin, sentrifugiin, kryopulloihin ja erilaisiin NUNC-injektiopullotyyppeihin, mutta reiät voidaan räätälöidä pyynnöstä muihin injektiopullo- ja putkikokoihin. Kerro meille, millaisia koeputkia haluat käyttää, jotta voimme muokata VialTweeteriäsi vastaavasti. Suuremmille koeputkille, kuten Falcon-putkille ja muille testisäiliöille, dekantterilasille ja astioille, VialPress on kätevä ratkaisu.
Lue lisää VialTweeter-mallista VT26dxx, joka on räätälöity juuri sinun koeputkikokosi mukaan, esim.

VialTweeter VialPressin kanssa

Vaikka itse VialTweeter, jossa on 10 putkireikää, on jo ainutlaatuinen ja erittäin toimiva ultraäänilaite, VialPress-lisäosa tekee VialTweeteristä entistä monipuolisemman ja joustavamman. VialPress on VialTweeterin lisävaruste, joka koostuu kiinnitystangosta, jonka avulla voidaan kiinnittää suurempia näyteputkia, kuten Falcon-putkia tai muita pieniä ja keskisuuria testidekantterilasia VialTweeter-etuosaan. Vasemmalla olevassa kuvassa VialTweeter pitää lohkossa 10 Eppendorf-injektiopulloa, kun taas VialPress kiinnittää yhden suuremman koeputken eteen sonikaatiota varten. VialPress pystyy pitämään jopa 5 suurempaa koeputkea voimakasta sonikaatiota varten.

VialTweeter-näytteen valmistusprotokollat

VialTweeteriä käytetään laajalti biologisten näytteiden sonikointiin. Ennen analysointia näytteet on valmisteltava biokemiallisia tai biofysikaalisia analyysejä ja määrityksiä varten esimerkiksi lyysillä, kudosten homogenoinnilla, proteiinien uuttamisella, DNA:n/RNA:n leikkaamisella, kaasunpoistolla jne. VialTweeter täyttää nämä ultraääniprosessit luotettavasti ja tuottaa toistettavia tuloksia. VialTweeterin yleinen sovellus on nisäkkäiden (ihmisten ja eläinten) kudosten sekä bakteerisolujen ja virushiukkasten lyysi? solujen hajoaminen. Onnistuneesti VialTweeter-käsiteltyjä biologisia näytteitä ovat ihmisen keuhkojen epiteelisolut, hematopoieettiset kantasolut, myelooiset leukemiasolut, Kolibakteeri, Bacillus subtilis, Bacillus antrasis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter puolikuu, Mycoplasma pneumoniae, mykobakteerit? Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) ja monet muut bakteeri-, kasvi- ja mikrobisolut.
Alta löydät muutamia valittuja protokollia, joissa on VialTweeter.

E.Coli-lyysi VialTweeterillä glutationin määrittämiseen in vivo

MG1655-kannan Escherichia coli -bakteereja kasvatettiin MOPS-minimaalisessa elatusaineessa 200 ml:n kokonaistilavuudessa, kunnes A600 oli 0,5. Viljelmä jaettiin 50 ml:n viljelmiin stressin hoitoa varten. 15 minuutin inkuboinnin jälkeen 0,79 mM allisiinilla, 1 mM diamidilla tai dimetyylisulfoksidilla (kontrolli) soluja kerättiin 4 000 g:ssa 4 °C:ssa 10 minuutin ajan. Kennot pestiin kahdesti KPE-puskurilla ennen pellettien uudelleensuspensiota 700 μl:ssa KPE-puskuria. Proteiininpoistoa varten lisättiin 300 μl 10% (w? v) sulfosalisyylihappoa ennen solujen häiriöitä ultraäänellä (3 x 1 min; VialTweeter-ultraäänilaite). Supernatantit kerättiin sentrifugoinnin jälkeen (30 min, 13 000 g, 4 °C). Sulfosalisyylihappopitoisuudet pienennettiin 1%: iin lisäämällä 3 tilavuutta KPE-puskuria. Kokonaisglutationin ja GSSG:n mittaukset suoritettiin edellä kuvatulla tavalla. Solujen glutationipitoisuudet laskettiin 6,7×10–15 litran E. coli -solujen tilavuuden ja A600 0,5:n solutiheyden perusteella (vastaa 1×108 solua ml-1-viljelmää). GSH-pitoisuudet laskettiin vähentämällä 2[GSSG] glutationin kokonaismäärästä. (Müller ym. 2016)

Alfa-synukleiinifibrillipirstoutuminen VialTweeterillä

VialTweeter-sonikaattoria käytetään laajalti alfa-synukleiinifibrillien ja nauhojen luotettavaan ja tehokkaaseen pirstoutumiseen. Klikkaa tästä löytääksesi yksityiskohtaiset kuvaukset, protokollat ja viitteet alfa-synukleiinin pirstoutumisesta VialTweeterin avulla!

Solulyysi VialTweeterillä ennen grafiittiuunin atomiabsorptiospektrometriaa

Bacillus subtilis 168 (trpC2) altistettiin 15 minuutin antibioottistressille, sitten solut kerättiin 3 320 x g: lla, pestiin viisi kertaa 100 mM Tris? 1 mM EDTA: lla, pH 7,5, suspendoitiin uudelleen 10 mM Trisiin, pH 7,5 ja häirittiin ultraäänellä Hielscher VialTweeter -instrumentissa. (Wenzel ym. 2014)

VialTweeter-näytteen valmistelu ennen massaspektrometriaa

Ihmisen CD34konkreettisi��� hematopoieettisten kanta-/progenitorisolujen lyofilisoidut solupelletit suspendoitiin uudelleen 10μ:aan (200μl irtotavarana HEK293-valmisteessa peptidilaimennussarjaa varten) 8 M ureaa 100 mM ammoniumvetykarbonaatissa ja lysoitettiin sonikaatiolla Hielscher VialTweeterin kanssa 60%: n amplitudilla, sykli 60% ja kesto 20 s kolme kertaa välijäähdytyksellä jäällä. (Amon ym. 2019)

Näytteen valmistusprotokollat VialPressin avulla

Tuore salaatti (Lactuca sativa) homogenoitiin 0,5 M HEPES-puskurissa (pH 8, KOH-säädetty) suhteessa 1 g kasvia (tuorepaino) 200, 100, 50 tai 20 ml:aan puskuriliuosta. Kasvimassan ja puskuriliuoksen tilavuuden suhdetta vaihteli homogenaatin kokonaistilavuuden pitämiseksi 3,5–12 ml:n välillä. Kasvimassan suhdetta puskuriliuoksen tilavuuteen vaihdeltiin homogenaatin kokonaistilavuuden pitämiseksi välillä 3,5 - 12 ml, mikä mahdollisti homogenoinnin näytteenottimella. Homogenaatit läpikävivät sitten epäsuoran ultrasonication käyttämällä UP200St: tä VialTweeterillä, joka on varustettu 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Saksa) 3 minuutin ajan (80% pulssi ja 100% teho). Tämän laitteen käyttö vältti saastumisen. (Laughton ym. 2019)

Luotettava lämpötilan säätö sonikoinnin aikana VialTweeterillä

Lämpötila on ratkaiseva prosessiin vaikuttava tekijä, joka on erityisen tärkeä biologisten näytteiden käsittelyssä. Kuten kaikki mekaaniset näytteenvalmistustekniikat, sonikaatio luo lämpöä. Näytteiden lämpötilaa voidaan kuitenkin hallita hyvin VialTweeteriä käytettäessä. Esittelemme sinulle erilaisia vaihtoehtoja näytteiden lämpötilan seuraamiseksi ja säätämiseksi valmistellessasi niitä VialTweeterillä ja VialPressillä analysointia varten.

1. Näytteen lämpötilan seuranta: VialTweeteriä ohjaava ultraääniprosessori UP200St on varustettu älykkäällä ohjelmistolla ja kytkettävällä lämpötila-anturilla. Kytke lämpötila-anturi UP200St-laitteeseen ja aseta lämpötila-anturin kärki yhteen näyteputkista. Digitaalisen värillisen kosketusnäytön avulla voit asettaa UP200St: n valikossa tietyn lämpötila-alueen näytteen sonikaatiolle. Ultraäänilaite pysähtyy automaattisesti, kun maksimilämpötila saavutetaan, ja pysähtyy, kunnes näytteen lämpötila on laskenut asetetun lämpötilan ∆ alempaan arvoon. Sitten sonikaatio alkaa automaattisesti uudelleen. Tämä älykäs ominaisuus estää lämmön aiheuttaman hajoamisen.
2. VialTweeter-lohko voidaan esijäähdyttää. Laita VialTweeter-lohko (vain sonotrode ilman anturia!) jääkaappiin tai pakastimeen titaanilohkon esijäähdyttämiseksi, mikä auttaa lykkäämään näytteen lämpötilan nousua. Jos mahdollista, myös itse näyte voidaan esijäähdyttää.
3. Käytä kuivajäätä jäähtymään sonikoinnin aikana. Käytä matalaa alustaa, joka on täytetty kuivajäällä, ja aseta VialTweeter kuivajäälle, jotta lämpö haihtuu nopeasti.

Asiakkaat ympäri maailmaa käyttävät VialTweeteriä ja VialPressiä päivittäiseen näytteenvalmistustyöhönsä biologisissa, biokemiallisissa, lääketieteellisissä ja kliinisissä laboratorioissa. UP200St-prosessorin älykäs ohjelmisto ja lämpötilan säätö, lämpötilaa ohjataan luotettavasti ja lämmön aiheuttamaa näytteen hajoamista vältetään. Ultraääninäytteen valmistus VialTweeterillä ja VialPressillä tuottaa erittäin luotettavia ja toistettavia tuloksia!

VialTweeterin tekniset yksityiskohdat

VialTweeter on titaanista valmistettu lohkosonotrode, johon mahtuu jopa 10 injektiopulloa lohkon reikiin. Lisäksi jopa 5 suurempaa koeputkea voidaan kiinnittää VialTweeter-etuosaan VialPressin avulla. VialTweeter on suunniteltu siten, että ultrasonication-energia jakautuu tasaisesti jokaiseen asetettuun injektiopulloon luotettavien ja yhtenäisten sonikaatiotulosten varmistamiseksi. Pieni kääntö säätää VialTweeter-sonotrodin epätasaiseen maahan ja kohdistaa koeputket pystysuoraan.

VialTweeterin edut yhdellä silmäyksellä

• Jopa 10 injektiopullon voimakas sonikaatio samanaikaisesti
• Epäsuora sonikaatio korkealla ultraääniintensiteetillä astian seinämän läpi näytteeseen
• Epäsuora sonikaatio välttää ristikontaminaation ja näytteen häviämisen
• Toistettavat tulokset säädettävän ja hallittavan sonikaatioamplitudin ansiosta
• VialPressin avulla voit sonikoida suurempia putkia
• Säädettävä amplitudi 20 - 100%
• Säädettävä pulssitila välillä 0 - 100%
• Autoklaavissa

VialTweeter saa virtansa UP200St, 200 watin tehokas ultraääniprosessori. UP200St on varustettu älykkäällä ohjelmistolla, joka mahdollistaa kaikkien tärkeiden ultraääniprosessiparametrien, kuten amplitudin, sonikaatioajan, pulsaation ja lämpötilan, tarkan hallinnan. Tämä tekee VialTweeteristä luotettavan työkalun onnistuneisiin toistettaviin prosessituloksiin biologisissa ja biokemiallisissa laboratorioissa.
Amplitudia voidaan säätää välillä 20 - 100% ja mahdollistaa siten ultraääni-intensiteetin mukauttamisen näytteeseesi. Esimerkiksi DNA: n ja RNA: n leikkaaminen ja pirstoutuminen vaatii lievemmän amplitudin liian pienten DNA-fragmenttien tuotannon estämiseksi, hiiren aivojen kudoksen homogenisointi tarvitsee korkean intensiteetin sonikaatiota. Valitse ihanteellinen amplitudi, sonikaatiointensiteetti ja kesto UP200St-prosessorin älykkään ja intuitiivisen valikon kautta. Valikkoon ja asetuksiin pääsee helposti käsiksi ja niitä voi käyttää värillisellä kosketusnäytöllä. Asetuksissa voit asettaa sonikaatioparametrit, kuten amplitudi, pulsaatio? syklitila, sonikaatiokesto, kokonaisenergian syöttö ja lämpötilarajat. Tutkimuksessa ja tuotannossa kokeiden ja testitulosten toistettavuus on ratkaisevan tärkeää. Tämä tarkoittaa, että prosessiolosuhteiden ja sonikaatioprotokollien tarkka tallennus on täysin tärkeää. Automaattinen dataprotokolla kirjoittaa kaikki sonikaatiotiedot CSV-tiedostoon integroidulla SD-kortilla, jotta voit helposti tarkistaa ja verrata erilaisia sonikaatioajoja. Kaikki ultraääniprosessitiedot ovat helposti saatavilla ja jaettavissa CSV-tiedostona.
Hielscher Ultrasonics pyrkii tarjoamaan sinulle kehittynyttä teknologiaa tutkimustyön helpottamiseksi ja parantamiseksi!