Hielscher Ultra ääni tekniikka

Drosophila melanogaster -näytteiden ultraäänilyysi

Drosophila melanogaster is widely used in laboratories as model organism. Therefore, pre-analytical preparation steps such as lysis, cell disruption, protein extraction and DNA shearing of Drosophila melanogaster samples must be frequently carried out. Ultrasonic dismembrators are reliable and efficient and can used to perform various tasks such as lysis, protein extraction or DNA fragmentation at ease by only adjusting ultrasonic process parameters. Ultrasonic homogenizers are thereby flexible tools with a broad range of applications.

Ultraäänilyysi ja proteiinin uuttaminen

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Lyysi, soluliukoisuus, kudosten homogenisointi ja proteiinin uuttaminen ovat tyypillisiä tehtäviä ultraäänihämmentiaineille biologisissa laboratorioissa. Ultraäänihämmentit ja soluhäiritsimet soveltuvat hyvin eläinkudosten, hyönteisten (esim. Drosophila melanogaster, C. elegans) tai kasvinäytteiden homogenointiin. Ultrasonication myöhemmät sovellukset ovat solususpensiointien ja pellettien lyysi sekä solunsisäisten proteiinien uuttaminen.
Ultraäänilyysi ja proteiinin uuttaminen ovat erittäin luotettavia ja toistettavissa olevia prosesseja, jotka voidaan suorittaa vakiintuneiden protokollien perusteella. Koska ultraääniprosessin voimakkuutta voidaan säätää tarkasti sonikaatioparametrien, kuten amplitudi, sykli / pulssitila, lämpötila ja näytetilavuus, avulla, kun todistetut protokollat voidaan toistaa samalla tuloksella yhä uudelleen.

Ultraääninäytteiden valmistelun edut

  • erittäin tehokas
  • Säädettävissä tiettyyn näytemateriaaliin
  • Sopii mihin tahansa äänenvoimakkuudelle
  • Muu kuin lämpökäsittely
  • toistettavia tuloksia
  • Yksinkertainen ja turvallinen

Ultraääni-DNA: n ja RNA: n pirstoutuminen

After cell lysis and protein extraction, a common required step in sample preparation is the shearing and fragmentation of DNA, RNA, and chromatin, e.g. before chromatin immunoprecipitation (ChIP). DNA and RNA fragmentation can be reliably achieved by breaking the covalent bonds that hold the DNA together by physical forces. Using physical shearing such as sonication, at first the DNA strands are broken, then the DNA is fragmented into smaller pieces.
Ultraääni-DNA:n pirstoutuminen on luotettavaa ja tehokasta DNA:n takomiseksi kohdistettuun pituuteen, esimerkiksi 500 peruspariin. Ultraääni-DNA-fragmentaation tärkeimmät edut ovat ultraääniprosessiparametrien tarkka hallinta ja voimakkuus. Ultraääniprosessin parametreja voidaan säätää säätämällä sonikaatiointensiteettiä, syklejä ja aikaa tarkasti. Tämä mahdollistaa haluttujen DNA-kokojen luomisen ja kohdennetun DNA-pituuden luotettavan tuottamisen ja jäljentämisen. Ultraääni-DNA-vaaitus on myös ihanteellinen luomaan suuria molekyylipainoisia DNA-sirpaleita.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

ultraäänilaitteen Uf200 ः t with 2mm microtip S26d2 for the sonication of Drosophila samples

Informaatio pyyntö




Huomaa, että Tietosuojakäytäntö.


Drosophila melanogasterin ultraäänilyysiprotokollat

Alta löydät erilaisia protokollia drosophila-näytteiden ultraäänellä avustetusta lyosista, proteiiniuutosta ja DNA: sta tai kromatiinin pirstoutumisesta.

Ultraäänilyysi immunoprecipitation (CLIP) -määrityksen ristiinlinkittämiseen

CLIP assay was performed as previously reported with some modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were UV crosslinked (3 × 2000 μJ/cm2), homogenized on ice in 1 mL RCB buffer (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 2.5 mM MgCl2, 0.1% Triton X-100, 250 mM sucrose, 1 mM DTT, 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors, 1 mM PMSF) supplemented with 300 U RNAseOUT and placed on ice for 30 min. The homogenate was sonicated on ice, at 80% power, five times in 20 s bursts with a 60 s rest in between using the Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 W, 30 kHz) ja sentrifugoitu (16000 × g 5 minuutin 4 °C:ssa). Liukoinen uute esikehitettiin 20 μl:n proteiini- G- dynabeemeilla 20 minuutin ajan 4 °C: ssa. Kun näytteet immunoblotointia ja RNA- syötteen kvantifiointia varten oli otettu (1%), HP1: lle tehtiin immunoprecipitoitu anti- HP19A9- vasta- aine 450 μl: n esisekoitettua uutetta inkuboituna 4 tunnin ajan 50 μl: n proteiini- G- dynabeadilla. Immunoprecipitaatit pestiin 4 kertaa RCB: llä. Immunoprecipitoitujen RNA: iden eleksioimiseksi pelletoidut mätisät keitettiin 100 μl: ssa UltraPure DEPC - käsiteltyä vettä 5 minuutin ajan. Puhdistettua RNA:ta käytettiin mallina cDNA:n syntetisoimiseksi oligo dT:n, satunnaisten heksaajien ja SuperScript-käänteiskoksin transkriptio III:n avulla valmistajan protokollan mukaisesti.
(Cassale ym. 2019)

Ultraäänilyysi kromatiinin immunoprecipitaatiomääritykseen

Chromatin immunoprecipitation was performed according to the method described by Menet with minor modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were homogenized in 1 mL of NEB buffer (10 mM HEPES-Na at pH 8.0, 10 mM NaCl, 0.1 mM EGTA-Na at pH 8, 0.5 mM EDTA-Na at pH 8, 1 mM DTT, 0.5% NP-40, 0.5 mM Spermidine, 0.15 mM Spermine, 1× EDTA- free Complete Protease Inhibitors) with a homogenizer / immersion disperser 1 min (at 3000 rpm). The homogenate was transferred to a pre-chilled glass dounce and 15 full strokes were applied with a tight pestle. Free nuclei were then centrifuged at 6000xg for 10 min at 4°C. The nuclei-containing pellets were resuspended in 1 mL of NEB and centrifuged at 20000 × g for 20 min on sucrose gradient (0.65 mL of 1.6 M sucrose in NEB, 0.35 mL of 0.8 M sucrose in NEB). The pellet was resuspended in 1 mL of NEB and formaldehyde to a final concentration of 1%. Nuclei were cross-linked for 10 min at room temperature and quenched by adding 1/10 vol of 1.375 M glycine. The nuclei were collected by centrifugation at 6000 × g for 5 min. Nuclei were washed twice in 1 mL of NEB and resuspended in 1 mL of Lysis Buffer (15 mM HEPES-Na at pH 7.6, 140 mM NaCl, 0.5 mM EGTA, 1 mM EDTA at pH 8, 1% Triton X-100, 0.5 mM DTT, 0.1% Na Deoxycholate, 0.1% SDS, 0.5% N-lauroylsarcosine and 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors). Nuclei were sonicated using a Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 W, 30 kHz) kuusi kertaa 20 s päällä ja 1 min jäällä. Äänitetyt ytimet sentrifugoitiin 13000 × g 4 minuutin ajan 4 °C:ssa. Suurin osa äänitetystä kromatiinista oli pituudeltaan 500–1000 perusparia (bp). Kutakin immunoprecipitaatiota varten inkuboitiin 15 μg kromatiinia 10 μg: n hp19A9 monoklonaalisen vasta- aineen läsnäollessa (3 h 4 °C: ssa pyörivässä pyörässä). Tämän jälkeen dynabeads- proteiini G: tä lisättiin 50 μl ja inkubointia jatkettiin yön yli 4 °C: ssa. Supernatantit hävitettiin ja näytteet pestiin kahdesti Lysis Bufferissa (kukin pesu 15 min 4 °C:ssa) ja kahdesti TE-puskurissa (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl pH 8:ssa). Kromatiini eluoitui hennistä kahdessa vaiheessa; ensin 100 μl eluaatiopuskuria 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl pH 8: ssa) 65 °C: ssa 15 minuutin syklin aikana, minkä jälkeen supernatantti sentrifugoidaan ja talteenotto. Beads-materiaali uutettiin uudelleen 100 μl:ssa TE +0,67% SDS:ää. Yhdistettyä eluaattia (200 μl) inkuboitiin yön yli 65 °C:ssa ristiinlinkkien kääntämiseksi ja sitä hoidettiin 50 μg/ml RNaseA:lla 15 minuutin 65 °C:ssa ja 500 μg/ml Proteinase K:lla 3 tunnin 65 °C:ssa. Näytteet olivat fenoli–kloroformiuutetta ja etanolia. DNA:ta sekoitettiin 25 μl:aan vettä. Molekyylianalyysien maksimoimiseksi DNA:lla immunoprecipitoituna ehdokasgeenit vahvistuivat pareittain optimoidun duplex-PCR-protokollan avulla käyttämällä kahta eri pohjamaalisarjaa, joilla oli samanlaiset sulamislämpötilat yhdessä reaktiossa.
(Casale ym. 2019)

UP200St TD_CupHorn näytteiden epäsuoraa sonikaatiota varten

UP200St TD_CupHorn näytteiden, kuten DNA:n ja kromatiinin, epäsuoraan sonikaatioon

Korkean suorituskyvyn ultraäänisolujen häiritsijät biologisiin näytteisiin

Hielscher Ultrasonics on pitkäaikainen kumppanisi solujen häiriön, lyysin, proteiiniuuton, DNA: n, RNA: n ja kromatiinin pirstoumisen sekä muiden esianalyyttisten näytteenvalmistusvaiheiden korkean suorituskyvyn ultraäänialysaattoreiden suhteen. Hielscher tarjoaa kattavan valikoiman ultraäänilaboratorion homogenisoijia ja näytteiden valmistusyksiköitä, ja siinä on ihanteellinen ultraäänilaite biologiseen sovellukseesi ja vaatimuksiin.
Probe-tyyppinen insonifioija UP200St lyysiä vartenKlassinen anturityyppinen ultraäänilaite, jossa on mikrokärki, kuten UP200St (200W; ks. kuva vasemmalla) tai jokin ultraääninäytteiden valmistusyksiköistä VialTweeter tai UP200St_TD_CupHorn VialHolderin kanssa ovat suosikkimalleja tutkimus- ja analyysilaboratorioissa. Klassinen ultraäänianturi on ihanteellinen, kun valmistetaan vähemmän näytteitä on lysoitu, uutettava tai pirstouduttava. Näytevalmisteyksiköt VialTweeter ja UP200St_TD_CupHorn mahdollistavat enintään 10 tai 5 injektiopullon samanaikaisen sonikoinnin.
Jos on käsiteltävä suuria näytelukuja (esim. 96-metrilevyjä, mikrotitterilevyjä jne.), UIP400MTP-työkalu on ihanteellinen sonikaatioasetus. UIP400MTP toimii kuin suurempi cuphorn, joka on täynnä vettä ja jossa on tarpeeksi tilaa mikro-well-levyille. UIP400MTP tarjoaa 400 watin tehokkaalla ultraääniprosessorilla toimineen UIP400MTP:n erittäin yhtenäisen ja intensiivisen monikuoppalevyjen sonikoinnin solujen, lyseonäytteiden, liuotuspellettien, uuteproteiinien tai leikkaus-DNA:n häiritsemiseksi.

Tarkka ohjaus älykkään ohjelmiston avulla

Hielscher teollisuuden jalostajat HDT sarja voi olla mukava ja käyttäjäystävällinen toimivat selaimella kaukosäätimellä.Kaikki Hielscher-sonikaatioratkaisut 200 watista ylöspäin on varustettu digitaalisella värikosketusnäytöllä ja älykkäällä ohjelmistolla. Älykkään dataprotokollan avulla kaikki ultraääniprosessiparametrit tallennetaan automaattisesti CSV-tiedostona sisäänrakennetulle SD-kortille heti, kun ultraäänilaite käyntiin. Tämä tekee tutkimuksesta ja protokollasta paljon helpompaa. Sonikaatiokokeiden tai näytteen valmistelun jälkeen voit yksinkertaisesti tarkistaa jokaisen sonikaatioajon sonikaatioparametrit ja verrata niitä.
Via the intuitive menu, numerous parameter can be preset before sonication: For instance, to control the temperature in the sample and to prevent its thermal degradation, an upper limit of sample temperature can be set. A pluggable temperature sensor, which comes with the ultrasonic unit, gives the ultrasonic processor feedback on the actual sonication temperature. When the upper temperature limit is reached, the ultrasonic device pauses until the lower limit of the set ∆T is reached and starts then automatically sonicating again.
Jos sonikaatio tietyllä energiapanolla on tarpeen, voit esiasettaa sonikaatioajon lopullisen ultraäänienergian. Tietenkin ultraäänipulssi- ja pyöräilytila voidaan asettaa myös yksilöllisesti.
Jos haluat käyttää onnistuneimpia sonikaatioparametrejasi uudelleen, voit tallentaa erilaisia sonikaatiotiloja (esim. sonikaatioaika, voimakkuus, syklitila jne.) esiasetetut tilat, jotta ne ovat helppoja ja nopeasti käyntiä uudelleen.
Käyttömukavuuden lisäämiseksi kaikkia digitaalisia ultraääniyksiköitä voidaan käyttää selaimen kauko-ohjaimella missä tahansa yleisessä selaimessa (esimerkiksi InternetExplorer, Safari, Chrome jne.). Lan-yhteys on yksinkertainen plug-n-play-asennus, eikä se vaadi lisäohjelmiston asennusta.
Me Hielscherillä tiedämme, että biologisten näytteiden onnistunut sonikaatio vaatii tarkkuutta ja toistettavuutta. Siksi suunnittelimme ultraäänilaitteet älylaitteiksi kaikilla ominaisuuksilla, jotka mahdollistavat tehokkaan, luotettavan, toistettavan ja kätevän näytteenvalmistus.

Ota yhteyttä nyt ja kerro meille biologisista näytteistäsi ja tarvittavista valmisteluvaiheista. Ehdotamme sinulle sopivinta ultraääninäytteiden valmistelulaitetta ja autamme sinua lisätietojen, kuten protokollien ja suositusten, kanssa.

The table below gives you an indication of the approximate processing capacity of our ultrasonic systems from ultrasonic micro-tips and classic ultrasonic homogenizers to MultiSample ultrasonicators for the convenient, reliable preparation of numerous samples:

erätilavuus Virtausnopeus Suositeltavat laitteet
96-well / mikrotitterilevyt n.a UIP400MTP-työkalu
10 injektiopulloa à 0, 5 - 1, 5 mL n.a VialTweeter klo UP200St
CupHorn epäsuoraan sonikaatioon, esim. n.a UP200St_TD_CupHorn
0.01 –250 mL 5-100mL/min UP50H
0.01 –500mL 10 - 200 ml / min UP100H
0.02–1L 20 - 400 ml / min Uf200 ः t / UP200St
10 - 2000 ml 20 - 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.25-5L 0.05 – 1L/min UIP500hdT

Ota meihin yhteyttä! / Kysy meiltä!

Kysy lisä tietoja

Käytä alla olevaa lomaketta pyytääksesi lisätietoja ultraääniprosessoreista, sovelluksista ja hinnasta. Olemme iloisia voidessamme keskustella prosessista kanssasi ja tarjota sinulle ultraäänijärjestelmä, joka täyttää vaatimuksesi!









Huomaathan, että Tietosuojakäytäntö.


The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Ultraääni moninäytevalmisteyksikkö VialTweeter mahdollistaa jopa 10 injektiopullon samanaikaisen sonikoinnin. VialPress-puristinlaitteella voidaan painaa jopa 4 lisäputkea eteen voimakasta sonikaatiota varten.

Kirjallisuus / Referenssit



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Korkean suorituskyvyn ultraääni! Hielscherin tuotevalikoima kattaa koko spektrin kompaktista laboratorion ultraäänikonesta penkki-top-yksiköihin täysteollinen ultraäänijärjestelmiin.


Tosiasiat, jotka kannattaa tietää

Metabolomiikka

Metabolomics is the study of small molecules, known as metabolites, present within cells, biofluids, tissues or organisms. These small molecules and their interactions within a biological system are summarized under the umbrella term “metabolome” and the research field is called metabolomics. The metabolome research is closely connected with the rapidly emerging field of precision medicine. The understanding of the metabolome and its relation to various diseases helps to develop disease prevention and clinical care strategies whilst individual variability in environment, lifestyle, genetics, and molecular phenotype. In order to release metabolite molecules from cells, ultrasonication is frequently used in biological laboratories for pre-analytical sample preparation such as cell disruption, lysis and the extraction of proteins, lipids and other molecules.