Drosophila melanogaster -näytteiden ultraäänilyysi

Drosophila melanogasteria käytetään laajalti laboratorioissa malliorganismina. Siksi drosophila melanogaster -näytteiden esianalystiset valmistevaiheet, kuten lyysi, solujen häiriöt, proteiiniuutto ja DNA-kalvon talteenotto, on suoritettava usein. Ultraääni dismembrataattorit ovat luotettavia ja tehokkaita, ja niitä voidaan käyttää erilaisten tehtävien suorittamiseen, kuten lyysi, proteiinin uuttaminen tai DNA-pirstoutuminen helposti säätämällä vain ultraääniprosessin parametreja. Ultraäänihomogenisoijat ovat siten joustavia työkaluja, joilla on laaja valikoima sovelluksia.

Ultraäänilyysi ja proteiinin uuttaminen

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Lyysi, soluliukoisuus, kudosten homogenisointi ja proteiinin uuttaminen ovat tyypillisiä tehtäviä ultraäänihämmentiaineille biologisissa laboratorioissa. Ultraäänihämmentit ja soluhäiritsimet soveltuvat hyvin eläinkudosten, hyönteisten (esim. Drosophila melanogaster, C. elegans) tai kasvinäytteiden homogenointiin. Ultrasonication myöhemmät sovellukset ovat solususpensiointien ja pellettien lyysi sekä solunsisäisten proteiinien uuttaminen.
Ultraäänilyysi ja proteiinin uuttaminen ovat erittäin luotettavia ja toistettavissa olevia prosesseja, jotka voidaan suorittaa vakiintuneiden protokollien perusteella. Koska ultraääniprosessin voimakkuutta voidaan säätää tarkasti sonikaatioparametrien, kuten amplitudi, sykli / pulssitila, lämpötila ja näytetilavuus, avulla, kun todistetut protokollat voidaan toistaa samalla tuloksella yhä uudelleen.

Ultraääninäytteiden valmistelun edut

  • erittäin tehokas
  • Säädettävissä tiettyyn näytemateriaaliin
  • Sopii mihin tahansa äänenvoimakkuudelle
  • Muu kuin lämpökäsittely
  • toistettavia tuloksia
  • Yksinkertainen ja turvallinen

Ultraääni-DNA: n ja RNA: n pirstoutuminen

Solulyysin ja proteiiniuutteen jälkeen yleinen tarvittava vaihe näytteenvalmistissa on DNA: n, RNA: n ja kromatiinin leikkauksen ja pirstoumisen, esimerkiksi ennen kromatiinin immunoprecipitaatiota (ChIP). DNA: n ja RNA: n pirstoutuminen voidaan saavuttaa luotettavasti rikkomalla kovalenttiset sidokset, jotka pitävät DNA: n yhdessä fyysisten voimien avulla. Käyttämällä fyysistä sioitusta, kuten sonikaatiota, ensin DNA-säikeet rikkoutuvat, sitten DNA pirstoutetaan pienemmiksi paloiksi.
Ultraääni-DNA:n pirstoutuminen on luotettavaa ja tehokasta DNA:n takomiseksi kohdistettuun pituuteen, esimerkiksi 500 peruspariin. Ultraääni-DNA-fragmentaation tärkeimmät edut ovat ultraääniprosessiparametrien tarkka hallinta ja voimakkuus. Ultraääniprosessin parametreja voidaan säätää säätämällä sonikaatiointensiteettiä, syklejä ja aikaa tarkasti. Tämä mahdollistaa haluttujen DNA-kokojen luomisen ja kohdennetun DNA-pituuden luotettavan tuottamisen ja jäljentämisen. Ultraääni-DNA-vaaitus on myös ihanteellinen luomaan suuria molekyylipainoisia DNA-sirpaleita.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

ultraäänilaitteen Uf200 ः t 2mm mikrotip S26d2 drosophila-näytteiden sonikaatioon

Informaatio pyyntö




Huomaa, että Tietosuojakäytäntö.


Drosophila melanogasterin ultraäänilyysiprotokollat

Alta löydät erilaisia protokollia drosophila-näytteiden ultraäänellä avustetusta lyosista, proteiiniuutosta ja DNA: sta tai kromatiinin pirstoutumisesta.

Ultraäänilyysi immunoprecipitation (CLIP) -määrityksen ristiinlinkittämiseen

CLIP-määritys suoritettiin aiemmin ilmoitetulla muutoksella. Noin 20 mg munasarjoja 0– 1 päivän vanhoista villityyppisistä naaraista oli UV-ristikytketty (3 × 2000 μJ/cm2), homogenoitu jäälle 1 ml:n RCB-puskurissa (50 mM HEPES pH 7,4, 200 mM NaCl, 2,5 mM MgCl2, 0,1% Triton X-100, 250 mM sakkaroosi, 1 mM DTT, 1× EDTA-vapaat täydelliset proteaasinestäjät, 1 mM PMSF) täydennettynä 300 U RNAseOUT: lla ja sijoitettu jäälle 30 minuutiksi. Homogenaatti äänitettiin jäällä, 80%: n teholla, viisi kertaa 20 sekunnissa purskeissa 60 sekunnin levolla Hielscher Ultrasonic Processorin käytön välillä UP100H (100 W, 30 kHz) ja sentrifugoitu (16000 × g 5 minuutin 4 °C:ssa). Liukoinen uute esikehitettiin 20 μl:n proteiini- G- dynabeemeilla 20 minuutin ajan 4 °C: ssa. Kun näytteet immunoblotointia ja RNA- syötteen kvantifiointia varten oli otettu (1%), HP1: lle tehtiin immunoprecipitoitu anti- HP19A9- vasta- aine 450 μl: n esisekoitettua uutetta inkuboituna 4 tunnin ajan 50 μl: n proteiini- G- dynabeadilla. Immunoprecipitaatit pestiin 4 kertaa RCB: llä. Immunoprecipitoitujen RNA: iden eleksioimiseksi pelletoidut mätisät keitettiin 100 μl: ssa UltraPure DEPC - käsiteltyä vettä 5 minuutin ajan. Puhdistettua RNA:ta käytettiin mallina cDNA:n syntetisoimiseksi oligo dT:n, satunnaisten heksaajien ja SuperScript-käänteiskoksin transkriptio III:n avulla valmistajan protokollan mukaisesti.
(Cassale ym. 2019)

Ultraäänilyysi kromatiinin immunoprecipitaatiomääritykseen

Kromatiinin immunoprecipitaatio suoritettiin Menetin kuvatun menetelmän mukaisesti pienin muutoksin. Noin 20 mg munasarjoja 0– 1 päivän vanhoista luonnonvaraisten naaraista homogenoitiin 1 ml: aan NEB- puskuria (10 mM HEPES- Na pH: ssa 8, 0, 10 mM NaCl, 0, 1 mM EGTA- Na pH 8: ssa, 0,5 mM EDTA-Na pH 8, 1 mM DTT, 0,5% NP-40, 0,5 mM Spermidiini, 0,15 mM Spermine, 1× EDTA-vapaa Complete Protease Inhibitors) homogenisaattorilla / upotussidottimilla 1 min (3000 rpm). Homogenaatti siirrettiin esikyllästetylle lasi douncelle ja 15 täyttä lyöntiä levitettiin tiukalla surkimuksen kanssa. Vapaita ytimiä sentrifugoitiin 6000xg:ssä 10 minuutin ajan 4 °C:ssa. Ytimiä sisältävät pelletit sekoitettiin 1 ml:aan NEB:tä ja sentrifugoitiin 20000 × g:ssa 20 minuutin ajan sakkaroosigradientilla (0,65 ml 1,6 M sakkaroosia NEB:ssä, 0,35 ml 0,8 M sakkaroosia NEB:ssä). Pelletti sekoitettiin 1 ml:aan NEB:tä ja formaldehydiä 1 prosentin lopulliseen pitoisuuteen. Ytimet ristiinliitettiin 10 minuutin ajan huoneenlämmössä ja sammutettiin lisäämällä 1/10 vol 1,375 M glysiiniä. Ytimet kerättiin sentrifugoimalla 6000 × g 5 minuutin ajan. Ytimet pestiin kahdesti 1 ml:ssa NEB:tä ja se sekoitettiin 1 ml:aan lyysipuskuria (15 mM HEPES-Na pH:ssa 7,6, 140 mM NaCl, 0, 5 mM EGTA, 1 mM EDTA pH 8: ssa, 1% Triton X- 100, 0, 5 mM DTT, 0, 1% Na Deoksicholate, 0, 1% SDS, 0, 5% N- lauroylsarcosine ja 1× EDTA- vapaat täydelliset proteaasinestäjät). Ytimet äänitettiin Hielscher Ultrasonic -prosessorilla UP100H (100 W, 30 kHz) kuusi kertaa 20 s päällä ja 1 min jäällä. Äänitetyt ytimet sentrifugoitiin 13000 × g 4 minuutin ajan 4 °C:ssa. Suurin osa äänitetystä kromatiinista oli pituudeltaan 500–1000 perusparia (bp). Kutakin immunoprecipitaatiota varten inkuboitiin 15 μg kromatiinia 10 μg: n hp19A9 monoklonaalisen vasta- aineen läsnäollessa (3 h 4 °C: ssa pyörivässä pyörässä). Tämän jälkeen dynabeads- proteiini G: tä lisättiin 50 μl ja inkubointia jatkettiin yön yli 4 °C: ssa. Supernatantit hävitettiin ja näytteet pestiin kahdesti Lysis Bufferissa (kukin pesu 15 min 4 °C:ssa) ja kahdesti TE-puskurissa (1 mM EDTA, 10 mM TrisHCl pH 8:ssa). Kromatiini eluoitui hennistä kahdessa vaiheessa; ensin 100 μl eluaatiopuskuria 1 (10 mM EDTA, 1% SDS, 50 mM TrisHCl pH 8: ssa) 65 °C: ssa 15 minuutin syklin aikana, minkä jälkeen supernatantti sentrifugoidaan ja talteenotto. Beads-materiaali uutettiin uudelleen 100 μl:ssa TE +0,67% SDS:ää. Yhdistettyä eluaattia (200 μl) inkuboitiin yön yli 65 °C:ssa ristiinlinkkien kääntämiseksi ja sitä hoidettiin 50 μg/ml RNaseA:lla 15 minuutin 65 °C:ssa ja 500 μg/ml Proteinase K:lla 3 tunnin 65 °C:ssa. Näytteet olivat fenoli–kloroformiuutetta ja etanolia. DNA:ta sekoitettiin 25 μl:aan vettä. Molekyylianalyysien maksimoimiseksi DNA:lla immunoprecipitoituna ehdokasgeenit vahvistuivat pareittain optimoidun duplex-PCR-protokollan avulla käyttämällä kahta eri pohjamaalisarjaa, joilla oli samanlaiset sulamislämpötilat yhdessä reaktiossa.
(Casale ym. 2019)

UP200St TD_CupHorn näytteiden epäsuoraa sonikaatiota varten

UP200St TD_CupHorn näytteiden, kuten DNA:n ja kromatiinin, epäsuoraan sonikaatioon

Korkean suorituskyvyn ultraäänisolujen häiritsijät biologisiin näytteisiin

Hielscher Ultrasonics on pitkäaikainen kumppanisi solujen häiriön, lyysin, proteiiniuuton, DNA: n, RNA: n ja kromatiinin pirstoumisen sekä muiden esianalyyttisten näytteenvalmistusvaiheiden korkean suorituskyvyn ultraäänialysaattoreiden suhteen. Hielscher tarjoaa kattavan valikoiman ultraäänilaboratorion homogenisoijia ja näytteiden valmistusyksiköitä, ja siinä on ihanteellinen ultraäänilaite biologiseen sovellukseesi ja vaatimuksiin.
Probe-tyyppinen insonifioija UP200St lyysiä vartenKlassinen anturityyppinen ultraäänilaite, jossa on mikrokärki, kuten UP200St (200W; ks. kuva vasemmalla) tai jokin ultraääninäytteiden valmistusyksiköistä VialTweeter tai UP200St_TD_CupHorn VialHolderin kanssa ovat suosikkimalleja tutkimus- ja analyysilaboratorioissa. Klassinen ultraäänianturi on ihanteellinen, kun valmistetaan vähemmän näytteitä on lysoitu, uutettava tai pirstouduttava. Näytevalmisteyksiköt VialTweeter ja UP200St_TD_CupHorn mahdollistavat enintään 10 tai 5 injektiopullon samanaikaisen sonikoinnin.
Jos on käsiteltävä suuria näytelukuja (esim. 96-metrilevyjä, mikrotitterilevyjä jne.), UIP400MTP-työkalu on ihanteellinen sonikaatioasetus. UIP400MTP toimii kuin suurempi cuphorn, joka on täynnä vettä ja jossa on tarpeeksi tilaa mikro-well-levyille. UIP400MTP tarjoaa 400 watin tehokkaalla ultraääniprosessorilla toimineen UIP400MTP:n erittäin yhtenäisen ja intensiivisen monikuoppalevyjen sonikoinnin solujen, lyseonäytteiden, liuotuspellettien, uuteproteiinien tai leikkaus-DNA:n häiritsemiseksi.

Tarkka ohjaus älykkään ohjelmiston avulla

Hielscher teollisuuden jalostajat HDT sarja voi olla mukava ja käyttäjäystävällinen toimivat selaimella kaukosäätimellä.Kaikki Hielscher-sonikaatioratkaisut 200 watista ylöspäin on varustettu digitaalisella värikosketusnäytöllä ja älykkäällä ohjelmistolla. Älykkään dataprotokollan avulla kaikki ultraääniprosessiparametrit tallennetaan automaattisesti CSV-tiedostona sisäänrakennetulle SD-kortille heti, kun ultraäänilaite käyntiin. Tämä tekee tutkimuksesta ja protokollasta paljon helpompaa. Sonikaatiokokeiden tai näytteen valmistelun jälkeen voit yksinkertaisesti tarkistaa jokaisen sonikaatioajon sonikaatioparametrit ja verrata niitä.
Intuitiivisen valikon kautta voidaan asettaa useita parametreja ennen sonikaatiota: Esimerkiksi näytteen lämpötilan ohjaamiseksi ja sen lämpöhajoamisen estämiseksi voidaan asettaa näytteen lämpötilan yläraja. Ultraääniyksikön mukana toimitetaan kytkettävä lämpötila-anturi antaa ultraääniprosessorille palautetta todellisesta sonikaatiolämpötilasta. Kun ylempi lämpötilaraja on saavutettu, ultraäänilaite pysähtyy, kunnes setin alaraja ∆T saavutetaan ja alkaa sitten automaattisesti äänitellä uudelleen.
Jos sonikaatio tietyllä energiapanolla on tarpeen, voit esiasettaa sonikaatioajon lopullisen ultraäänienergian. Tietenkin ultraäänipulssi- ja pyöräilytila voidaan asettaa myös yksilöllisesti.
Jos haluat käyttää onnistuneimpia sonikaatioparametrejasi uudelleen, voit tallentaa erilaisia sonikaatiotiloja (esim. sonikaatioaika, voimakkuus, syklitila jne.) esiasetetut tilat, jotta ne ovat helppoja ja nopeasti käyntiä uudelleen.
Käyttömukavuuden lisäämiseksi kaikkia digitaalisia ultraääniyksiköitä voidaan käyttää selaimen kauko-ohjaimella missä tahansa yleisessä selaimessa (esimerkiksi InternetExplorer, Safari, Chrome jne.). Lan-yhteys on yksinkertainen plug-n-play-asennus, eikä se vaadi lisäohjelmiston asennusta.
Me Hielscherillä tiedämme, että biologisten näytteiden onnistunut sonikaatio vaatii tarkkuutta ja toistettavuutta. Siksi suunnittelimme ultraäänilaitteet älylaitteiksi kaikilla ominaisuuksilla, jotka mahdollistavat tehokkaan, luotettavan, toistettavan ja kätevän näytteenvalmistus.

Ota yhteyttä nyt ja kerro meille biologisista näytteistäsi ja tarvittavista valmisteluvaiheista. Ehdotamme sinulle sopivinta ultraääninäytteiden valmistelulaitetta ja autamme sinua lisätietojen, kuten protokollien ja suositusten, kanssa.

Alla oleva taulukko antaa sinulle viitteitä ultraäänijärjestelmiemme likimääräisen prosessointikapasiteetin ultraäänimikrovihjeistä ja klassisista ultraäänihomogenoijista MultiSample-ultraääniaineiin lukuisten näytteiden kätevää ja luotettavaa valmistelua varten:

erätilavuus Virtausnopeus Suositeltavat laitteet
96-well / mikrotitterilevyt n.a UIP400MTP-työkalu
10 injektiopulloa à 0, 5 - 1, 5 mL n.a VialTweeter klo UP200St
CupHorn epäsuoraan sonikaatioon, esim. n.a UP200St_TD_CupHorn
0.01 –250 mL 5-100mL/min UP50H
0.01 –500mL 10 - 200 ml / min UP100H
0.02–1L 20 - 400 ml / min Uf200 ः t / UP200St
10 - 2000 ml 20 - 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.25-5L 0.05 – 1L/min UIP500hdT

Ota meihin yhteyttä! / Kysy meiltä!

Kysy lisä tietoja

Käytä alla olevaa lomaketta pyytääksesi lisätietoja ultraääniprosessoreista, sovelluksista ja hinnasta. Olemme iloisia voidessamme keskustella prosessista kanssasi ja tarjota sinulle ultraäänijärjestelmä, joka täyttää vaatimuksesi!









Huomaathan, että Tietosuojakäytäntö.


The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Ultraääni moninäytevalmisteyksikkö VialTweeter mahdollistaa jopa 10 injektiopullon samanaikaisen sonikoinnin. VialPress-puristinlaitteella voidaan painaa jopa 4 lisäputkea eteen voimakasta sonikaatiota varten.

Kirjallisuus / Referenssit



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Korkean suorituskyvyn ultraääni! Hielscherin tuotevalikoima kattaa koko spektrin kompaktista laboratorion ultraäänikonesta penkki-top-yksiköihin täysteollinen ultraäänijärjestelmiin.


Tosiasiat, jotka kannattaa tietää

Metabolomiikka

Metabolomiikka on tutkimus pienistä molekyyleistä, joita kutsutaan metaboliitteiksi, joita esiintyy soluissa, biofluideissa, kudoksissa tai organismeissä. Nämä pienet molekyylit ja niiden vuorovaikutukset biologisessa järjestelmässä on tiivistetty sateenvarjotermin "metabolome" alle ja tutkimuskenttää kutsutaan metabolomiikaksi. Metabolomitutkimus liittyy läheisesti nopeasti kehittyvään täsmälääketieteen alaan. Metabolomin ja sen suhteen ymmärtäminen erilaisiin sairauksiin auttaa kehittämään sairauksien ehkäisy- ja kliinisen hoidon strategioita samalla kun yksilöllinen vaihtelevuus ympäristössä, elintavoissa, genetiikassa ja molekyylifenotyypissä. Metaboliittimolekyylien vapauttamiseksi soluista ultrasonicationia käytetään usein biologisissa laboratorioissa esianalysoituneen näytteen valmistamiseen, kuten solujen häiriöihin, lyysiin ja proteiinien, lipidien ja muiden molekyylien uuttamiseen.