Hielscher Ultrasonics
Keskustelemme mielellämme prosessistasi.
Soita meille: +49 3328 437-420
Lähetä meille sähköpostia: info@hielscher.com

Protokolla SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivoinnille sonikaatiolla

Hielscher VialTweeter on ainutlaatuinen ultraääni-moninäytevalmistusyksikkö, jota käytetään koronaviruksen SARS-COV-2 inaktivointiin. VialTweeter mahdollistaa jopa 10 näytepullon valmistamisen samanaikaisesti ja on siten ihanteellinen yksikkö massanäytteiden käsittelyyn.

SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivointi VialTweeterillä

Kiinnitysaineen poistamisen jälkeen yksikerroksiset kerrokset pestiin kolme kertaa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ennen solujen kaavinta 1 ml: ksi MEM / 5% FBS: ksi ja sonikoidaan (3 × 10 sekuntia päällä, 10 sekuntia pois päältä 100%: n teholla ja amplitudilla) Hielscherin ultraääniprosessorilla UP200St ja VialTweeter liite. Supernatantit kirkastettiin sentrifugoimalla 3000 × g:ssa 10 minuutin ajan. 

Lue koko protokolla SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivoinnista Welch et al. (2020) alla:

Solut ja virus

Vero E6 -solut (Vero C1008; ATCC CRL-1586) viljeltiin modifioidussa Eagle's minimum essential -väliaineessa (MEM), jota täydennettiin 10% (v/v) sikiön vasikan seerumilla (FCS). Käytetty virus oli SARS-CoV-2-kanta hCOV-19/England/2/2020, jonka PHE eristi Ison-Britannian ensimmäisestä potilasklusterista 29.1.2020. Tämä virus saatiin kohdasta 1 ja sitä käytettiin inaktivointitutkimuksiin kohdassa 2 tai 3.
SARS-CoV-2-inaktivaatioon ja reagenssin sytotoksisuuden poistamiseen käytettävien reagenssien ja kemikaalien osalta katso tieteellinen raportti Welch et al. (2020).

Ultraääninäytteen valmistusyksikköä VialTweeteriä käytetään SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivointiin

Pesuaineiden aiheuttama viruksen inaktivointi – SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivointiprotokolla, Welch et ai., 2020

SARS-CoV-2-inaktivointi

Kaupallisten tuotteiden osalta virusvalmisteet (kudosviljelyneste, tiitterit vaihtelevat välillä 1 × 106 arvoon 1 × 108 PFU/ml) käsiteltiin kolmena kappaleena reagensseilla pitoisuuksina ja kosketusaikoina, joita suositellaan valmistajan käyttöohjeissa, jos sellaisia on saatavilla, tai testauslaboratorioiden erityisesti pyytäminä pitoisuuksina ja aikoina. Jos valmistaja ilmoitti pitoisuusalueen, testattiin alhaisin valmisteen ja näytteen suhde (eli pienin suositeltu testituotteen pitoisuus). Näytteenkuljetusputken reagenssit testattiin käyttämällä yhden kudosviljelynestetilavuuden suhdetta kymmeneen tilavuuteen reagenssia, ellei valmistaja ole määritellyt näytenesteen ja reagenssin tilavuussuhdetta. Pesuaineet, kiinnitysaineet ja liuottimet testattiin ilmoitetuilla pitoisuuksilla ilmoitettuina aikoina. Kaikki inaktivointivaiheet suoritettiin huoneenlämmössä (18–25 °C). Vaihtoehtoisten näytetyyppien testaamista varten virus lisättiin osoitettuun näytematriisiin suhteessa 1:9, minkä jälkeen sitä käsiteltiin testireagensseilla edellä kuvatulla tavalla. Kaikki kokeet sisälsivät kolminkertaisia kontrollinäytteitä, joissa oli vastaava määrä PBS:ää testireagenssin sijasta. Välittömästi vaaditun kosketusajan jälkeen käsiteltiin 1 ml käsiteltyä näytettä käyttäen asianmukaisesti valittua suodatusmatriisia. Reagenssin poisto inaktivointitestausta varten suoritettiin suuremmassa linkouskolonnimuodossa käyttämällä Pierce 4 ml: n pesuaineenpoistolinkokolonnia (Thermo Fisher) tai täyttämällä tyhjät Pierce 10 ml: n sentrifugipylväät (Thermo Fisher) SM2 Bio-helmillä, Sephacryl S-400HR: llä tai Sephadex LH-20: lla, jolloin saatiin 4 ml pakattuja helmiä / hartsia. Amicon-suodattimilla puhdistamista varten 2 × 500 μl:n näytteet puhdistettiin kahdella keskipakosuodattimella edellä kuvatulla menetelmällä ja yhdistettiin sitten yhteen. Formaldehydille ja formaldehydille glutaraldehydin poistolla käytettiin yhtä suodatinta, jonka näytetilavuus oli 1× 500μl, suspendoitiin uudelleen käsittelyn jälkeen 500 μl: ssa PBS: ssä ja lisättiin 400 ul MEM / 5% FBS: ään. Tartunnan saaneiden inaktivointiin VialTweeter ultraääniprosessorissa UP200STyksikerroksiset, 12,5 cm2 Vero E6 -solujen pullot (2.5 × 106 solut/pullo 2,5 ml:ssa MEM/5 % FBS) infektoitiin MOI 0,001:ssä ja inkuboitiin 37 °C:ssa/5 % CO:ssa2 24 tunnin ajan. Supernatantti poistettiin ja solut kiinnitettiin käyttämällä 5 ml formaldehydiä tai formaldehydiä ja glutaraldehydiä huoneenlämmössä 15 tai 60 minuutin ajan. Fiksatiivi poistettiin ja yksikerroksiset pestiin kolme kertaa PBS: llä ennen solujen kaavinta 1 ml: ksi MEM / 5% FBS ja sonikoitu (3 × 10 sekuntia päällä, 10 sekuntia pois päältä 100%: n teholla ja amplitudilla) käyttämällä UP200St: tä, jossa on VialTweeter-kiinnitys (Hielscherin ultraäänitekniikka). Supernatantit kirkastettiin sentrifugoimalla 3000 × g:ssa 10 minuutin ajan.

VialTweeter suljettujen injektiopullojen intensiiviseen sonikaatioon

VialTweeter suljettujen injektiopullojen voimakkaaseen sonikaatioon

Tietopyyntö







Erilaisia reagensseja on testattu SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivoimiseksi ultraääninäytteen valmisteluyksiköllä VialTweeter.

Yksityiskohdat reagenssista, jota käytetään SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivointiin ultraääni VialTweeterin kanssa protokollan mukaisesti Welch et ai. 2020

Koko protokolla, mukaan lukien Hielscher VialTweeterin käyttö, löytyy täältä:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Moninäytteen ultraäänilaite VialTweeter mahdollistaa jopa 10 injektiopullon samanaikaisen näytteen valmistuksen samoissa prosessiolosuhteissa. VialTweeter on vakiintunut ultraäänilaite, jota käytetään koronaviruksen SARS-CoV-2 inaktivointiin (Klikkaa suuremmaksi!)

VialTweeter ultraääniviruksen inaktivointiin

VialTweeterin edut yhdellä silmäyksellä

  • Jopa 10 injektiopullon sonikaatio samanaikaisesti
  • Ei ristikontaminaatiota
  • Ei näytteen menetystä
  • Automaattinen tietojen tallennus
  • Helppo ja turvallinen käyttää
VialTweeteriä käytetään myös

  • solujen hajoaminen
  • Viruksen hiukkasten häiriöt
  • Nukleiinihapon uuttaminen: DNA/RNA-eristys
  • DNA/RNA:n pirstoutuminen
  • Lysaatin liukeneminen
  • Hienostuneet ultraäänidismembraattorit ja solujen häiritsijät

    Moninäytteinen ultraäänilaite VialTweeter on vain yksi monista ultraääniratkaisuista näytteen valmistukseen biologisissa, biokemiallisissa ja kliinisissä laboratorioissa. Hielscher Ultrasonics tarjoaa ihanteellisen ultraääni dismembrator sovelluksellesi, esim. solulyysi, solujen uuttaminen, kudosten homogenisointi, lysaatin liuottaminen, liuottaminen, näytteen kaasunpoisto jne.
    Kerro meille, kuinka monta näytettä sinun on käsiteltävä tunnissa ja päivässä, jos haluat suoran tai epäsuoran sonikoinnin ja mikä on ultraääninäytteen käsittelyn kohde. Suosittelemme sinulle sopivinta ultraääniyksikköä päivittäiseen työrutiiniisi!
    Hielscher Ultrasonics' digitaaliset ultraääniprosessorit on varustettu älykkäällä ohjelmistolla, automaattisella tietojen tallennuksella, helpoilla esiasetusvaihtoehdoilla lämpötilan säätöön, sonikoinnin kestoon, syklin / pulssitilaan sekä näytteen valaistukseen ja selaimen kaukosäätimeen. Pyrimme tekemään ultraäänilaitteistamme mahdollisimman älykkäitä, jotta tutkimus- ja työrutiinistasi tulee mahdollisimman kätevä ja onnistunut.
    Klikkaa tästä löytääksesi lisää sovelluksia, mukaan lukien ultraääninäytteiden valmistuksen protokollat VialTweeterin kanssa!

    Ota yhteyttä! / Kysy meiltä!

    Kysy lisää

    Käytä alla olevaa lomaketta pyytääksesi lisätietoja ultraääniprosessoreista, sovelluksista ja hinnasta. Keskustelemme mielellämme prosessistasi kanssasi ja tarjoamme sinulle ultraäänijärjestelmän, joka täyttää vaatimuksesi!












    Ultraääni-korkean leikkauksen homogenisaattoreita käytetään laboratorio-, penkki-, pilotti- ja teollisessa käsittelyssä.

    Hielscher Ultrasonics valmistaa korkean suorituskyvyn ultraäänihomogenisaattoreita sekoitussovelluksiin, dispersioon, emulgointiin ja uuttamiseen laboratorio-, pilotti- ja teollisessa mittakaavassa.

    Kirjallisuus / Viitteet



    Faktoja, jotka kannattaa tietää

    Mitä ovat Vero-solut?

    Vero E6, joka tunnetaan myös nimellä Vero C1008 (ATCC-nro. CRL-1586) on kloonisolulinja Vero 76:sta ja sitä käytetään SARS-CoV- ja SARS-CoV-2-koronavirusten tutkimuksessa. Vero-solut ovat soluviljelmissä käytettyjen solujen linja. "Vero’ sukulinja eristettiin munuaisten epiteelisoluista, jotka oli uutettu afrikkalaisesta vihreästä apinasta (Chlorocebus sp.).
    Vero E6 -solut osoittavat jonkin verran kosketuksen estoa, joten ne soveltuvat hitaasti replikoituvien virusten levittämiseen. Vero E6 -solulinjoja käytetään yleisesti koronavirusten SARS-CoV ja SARS-CoV-2 sytopatologian tutkimiseen, koska Vero-soluissa (afrikkalaisissa vihreissä apinan munuaissoluissa) esiintyy runsaasti angiotensiiniä konvertoivan entsyymi 2 (ACE2) -reseptorien ilmentymiä. ACE2-reseptorit ovat SARS-CoV-2-koronaviruksen merkittävä telakointipaikka.
    Esimerkiksi Ogando et al. (2020) havaitsivat, että SARS-CoV-2 – verrattuna SARS-CoV: hen – tuotti korkeampia solunsisäisiä virus-RNA-tasoja, mutta hämmästyttävästi noin 50 kertaa vähemmän tarttuvia virusjälkeläisiä löydettiin viljelyalustasta. Lisäksi he totesivat, että kahden viruksen herkkyys kolmelle vakiintuneelle koronaviruksen replikaation estäjälle (remdesiviiri, alisporiviiri ja klorokiini) on hyvin samanlainen, mutta että SARS-CoV-2-infektio oli huomattavasti herkempi solujen esikäsittelylle pegyloidulla interferoni alfalla. Tärkeä ero näiden kahden viruksen välillä on se, että – kulkiessaan Vero E6 -soluissa – SARS-CoV-2 on ilmeisesti voimakkaan valintapaineen alla saadakseen adaptiivisia mutaatioita piikkiproteiinigeenissään. Nämä mutaatiot muuttavat tai poistavat oletetun "furiinin kaltaisen pilkkoutumiskohdan" alueella, joka yhdistää S1- ja S2-domeenit, ja johtavat hyvin näkyvään fenotyyppiseen muutokseen plakkimäärityksissä.

    Keskustelemme mielellämme prosessistasi.

    Otetaan yhteyttä.