Hielscher Ultra ääni tekniikka

SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivoinnin protokolla sonikaatiolla

Hielscher VialTweeter on ainutlaatuinen ultraääni moninäytevalmisteyksikkö, jota käytetään koronaviruksen SARS-COV-2 inaktivointiin. VialTweeter mahdollistaa enintään 10 näytepullon samanaikaisen valmistannin ja on siten ihanteellinen yksikkö massanäytteiden käsittelyyn.

SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivointi injektiopullon kanssa

Kun kiinnitysaine oli poistettu, monokerrokset pestiin kolme kertaa fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ennen kennojen kaavinta 1mL MEM / 5% FBS: ään ja sonicated (3 × 10 sekuntia päälle, 10 sekuntia pois 100% teholla ja amplitudilla) Hielscherin ultraääniprosessorilla UP200St vialtweeterillä Liite. Supernatants selvitettiin sentrifugoimalla 3000 × g 10 minuuttia. 

Lue koko protokolla täältä SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivoinnista Welch et al. (2020) alla:

Solut ja virus

Vero E6 -kennot (Vero C1008; ATCC CRL-1586) viljeltiin modifioituna Eaglen välttämättömänä vähimmäisaatelina (MEM), jota täydennettiin 10% (v/v) sikiön vasikan seerumilla (FCS). Virusta käytettiin SARS-CoV-2-kanta hCOV-19/England/2/2020, jonka PHE eristi Yhdistyneen kuningaskunnan ensimmäisestä potilasklusterista 29.1.2020. Tämä virus saatiin kohdasta 1 ja sitä käytettiin inaktivointitutkimuksiin kohdassa 2 tai 3.
SARS-CoV-2-inaktivoinnissa käytettävien reagenssien ja kemikaalien sekä reagenssin sytotoksisuutta poistamisen osalta ks.

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Viruksen inaktivointi pesuaineilla – SARS-CoV-2 Koronaviruksen inaktivointiprotokolla Welch ym.

SARS-CoV-2 Inaktivointi

Kaupallisille tuotteille virusvalmisteet (kudosviljelmän neste, titterit 1.10×106 –1 × 108 PFU/ml) on käsitelty kolmesti reagenssien kanssa pitoisuuksina ja valmistajan käyttöohjeissa suositeltuina kosketusaikoina, jos niitä on saatavilla, tai testauslaboratorioiden nimenomaisesti pyytämien pitoisuuksien ja aikojen osalta. Jos valmistaja on antanut useita pitoisuuksia, testattiin pienin tuotteen suhde näytteeseen (eli pienin suositeltu testituotteen pitoisuus). Näytekuljetusputken reagenssit testattiin käyttäen yhden tilavuuden kudosviljelmänesteen suhdetta kymmeneen reagenssitilavuuteen, ellei valmistaja ole määrittänyt näytenesteen tilavuussuhdetta reagenssiin. Pesuaineet, kiinnitysaineet ja liuottimista testattiin ilmoitetuilla pitoisuuksilla ilmoitettujen aikojen ajan. Kaikki inaktivointivaiheet suoritettiin huoneenlämmössä (18 – 25 °C). Vaihtoehtoisten näytetyyppien testaamiseksi virus piikitettiin ilmoitettuun näytematriisiin suhteessa 1:9 ja hoidettiin sitten testireagenssilla edellä kuvatulla tavalla. Kaikki kokeet sisälsivät kolmilisiittisia kontrolli mock-käsiteltyjä näytteitä, joissa oli vastaava määrä PBS:ää testireagenssin sijaan. Välittömästi vaaditun kosketusajan jälkeen 1 ml käsiteltyä näytettä jalostettiin asianmukaisesti valitulla suodatusmatriisissa. Reagenssin poisto inaktivointitestausta varten suoritettiin suuremmassa spin column -muodossa Pierce 4mL -pesuaineen poistopyörityspylväillä (Thermo Fisher) tai täyttämällä tyhjät Pierce 10mL -kapasiteettisentrifugipylväät (Thermo Fisher) SM2 Bio-Beads-, Sephacryl S-400HR- tai Sephadex LH-20 -pylväillä, jotta 4mL pakatut beads/resin. Puhdistusta varten Amicon-suodattimilla 2 × 500 μl:n näytteitä puhdistettiin kahdella keskipakosuodattimella aiemmin kuvatulla menetelmällä ja koottiin yhteen. Formaldehydissä ja formaldehydissä, joissa on glutaraldehydin poisto, käytettiin yhtä suodatinta, jonka näytemäärä oli 1× 500 μl, joka sekoitettiin käsittelyn jälkeen 500 μl:n PBS: ssä ja lisättiin 400ul MEM/ 5% FBS: ään. Tartunnan saaneiden inaktivointiin VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STyksikerroksinen, 12,5 cm2 Vero E6 -kennojen pullot (2,5 × 106 2,5 ml:n MEM/5%:n FBS-tartunnat) infektoituivat MOI 0,001:ssä ja inkuboituivat 37°C/5% CO:ssa2 24 tunnin ajan. Supernatantti poistettiin ja solut kiinnitettiin käyttämällä 5 ml formaldehydiä tai formaldehydiä ja glutraldehydiä huoneenlämmössä 15 tai 60 minuutin lämmössä. Kiinnitysaine poistettiin, ja monokerrokset pestiin kolme kertaa PBS: llä ennen kennojen raaputtamista 1mL MEM / 5% FBS: ään ja äänitettiin (3 × 10 sekuntia päälle, 10 sekuntia pois 100% teholla ja amplitudilla) KÄYTTÄMÄLLÄ UP200St VialTweeter-lisälaitetta (Hielscher Ultrasound Technology). Supernatants selvitettiin sentrifugoimalla 3000 × g 10 minuuttia.

VialTweeter varten Intense Sonication suljetut injektio pullot

VialTweeter suljettujen injektiopullojen intensiiviseen sonikaatioon

Informaatio pyyntö




Huomaa, että Tietosuojakäytäntö.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Yksityiskohtaiset tiedot REAGENssista, jota käytetään SARS-CoV-2-koronaviruksen inaktivointiin ultraääni-VialTweeterillä Welch ym.

Koko protokolla, mukaan lukien Hielscher VialTweeter - protokolla, löytyy täältä:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

InjektiopulloNweeter ultraääniviruksen inaktivointiin

VialTweeterin edut yhdellä silmäyksellä

  • Enintään 10 injektiopullon sonikaatio samanaikaisesti
  • Ei ristikontaminaatiota
  • Ei näytteen häviämistä
  • Automaattinen tietojen tallennus
  • Helppo ja turvallinen käyttää
VialTweeter-nähtäintä käytetään myös

  • Solun hajoaminen
  • Virushiukkasten häiriöt
  • Nukleiinihapon uuttaminen: DNA/RNA-eristäminen
  • DNA/RNA-pirstoutuminen
  • Lysaattiliukoisuus
  • Hienostuneet ultraääni dismembrataattorit ja solun hajottajat

    Moninäyteinen ultraäänilaite VialTweeter on vain yksi monista ultraääniratkaisuista näytteiden valmistamiseksi biologisissa, biokemiallisissa ja kliinisissä laboratorioissa. Hielscher Ultrasonics tarjoaa ihanteellisen ultraääni dismemebraattorin sovellukseesi, esimerkiksi solulyysi, solujen uuttaminen, kudosten homogenisointi, lysaattiliukoisuus, liuotus, näytteen kaasunpoisto jne.
    Kerro meille, kuinka monta näytettä sinun on käsiteltävä tunnissa ja päivässä, jos haluat suoran tai epäsuoran sonikoinnin ja mikä on ultraääninäytehoidon kohde. Suosittelemme sinulle sopivinta ultraääniyksikköä päivittäiseen työrutiiniisi!
    Hielscher Ultrasonicsin digitaaliset ultraääniprosessorit on varustettu älykkäällä ohjelmistolla, automaattisella tietojen tallennuksen avulla, helpoilla esiasetusvaihtoehdoilla lämpötilan säätöön, sonikoinnin kestoon, syklin / pulssin tilaan sekä näytteen valaistukseen ja selaimen kaukosäätimeen. Pyrimme tekemään ultraäänilaitteistamme mahdollisimman älykkäitä, jotta tutkimus- ja työrutiinistasi tulee mahdollisimman kätevää ja menestyksekästä.
    Klikkaa tästä, löytääksesi lisää sovelluksia, mukaan lukien ultraääninäytteiden valmisteluprotokollat VialTweeterillä!

    Ota meihin yhteyttä! / Kysy meiltä!

    Kysy lisä tietoja

    Käytä alla olevaa lomaketta pyytääksesi lisätietoja ultraääniprosessoreista, sovelluksista ja hinnasta. Olemme iloisia voidessamme keskustella prosessista kanssasi ja tarjota sinulle ultraäänijärjestelmä, joka täyttää vaatimuksesi!









    Huomaathan, että Tietosuojakäytäntö.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics valmistaa korkean suorituskyvyn ultraäänihomygenisoijia sovellusten sekoittamiseen, dispersiointiin, emulgointiin ja uuttamiseen laboratoriossa, pilotissa ja teollisessa mittakaavassa.

    Kirjallisuus / Referenssit



    Tosiasiat, jotka kannattaa tietää

    Mitä Vero Cells on?

    Vero E6, tunnetaan myös nimellä Vero C1008 (ATCC-nro. CRL-1586) on Vero 76:n kloonisolulinja, jota käytetään SARS-CoV- ja SARS-CoV-2-koronavirusten tutkimuksessa. Vero-solut ovat soluviljelmissä käytettävien solujen linja. 'Vero’ eristettiin afrikkalaisesta vihreästä apinasta (Chlorocebus sp.) uutetuista munuaisten epiteelisoluista.
    Vero E6 -soluissa on jonkin verran kontaktin estoa, joten ne soveltuvat hitaasti replikoituvia virusten leviämiseen. Vero E6 - solulinjoja käytetään yleisesti koronavirusten SARS- CoV ja SARS- CoV- 2 sytopatologian tutkimiseen, koska Vero- soluilla (afrikanvihreät apinan munuaissolut) on runsaasti angiotensiinia muuntavia entsyymi 2 ( ACE2) - reseptoreita. ACE2-reseptorit ovat merkittävä telakointipaikka SARS-CoV-2-koronavirukselle.
    Esimerkiksi Ogando et al. (2020) totesi, että SARS-CoV-2 – verrattuna SARS-CoV:hen – solunsisäisen virus- RNA: n pitoisuudet olivat korkeammat, mutta viljelmäainesta saatiin silmiinpistävästi noin 50- kertainen määrä vähemmän tarttuvia viruksen jälkeläisiä. Lisäksi ne totesivat, että näiden kahden viruksen herkkyys kolmelle vakiintuneelle koronaviruksen replikaation estäjälle (Remdesivir, Alisporivir ja klorokiini) on hyvin samankaltainen, mutta sars- CoV- 2- infektio oli huomattavasti herkempi pegyloidulla interferoni alfalla olevien solujen esikäsittelylle. Merkittävä ero näiden kahden viruksen välillä on se, että – ohikulkemisen jälkeen Vero E6 -soluissa – SARS-CoV-2:lla on ilmeisesti kova valintapaine hankkia adaptiivisia mutaatioita piikkiproteiinigeeniinsä. Nämä mutaatiot muuttavat tai poistavat oletuksen "furiinin kaltaisen pilkkomispaikan" alueella, joka yhdistää S1- ja S2-verkkotunnukset, ja johtavat hyvin merkittävään fenotyyppiseen muutokseen plakkimäärityksissä.