Hielscher Ultra ääni tekniikka

BL21-solujen solulyysi ultraäänellä

BL21-solut ovat E. coli -kanta, jota käytetään laajalti tutkimuslaboratorioissa, bioteknologiassa ja teollisessa tuotannossa, koska ne voivat ilmaista proteiineja erittäin tehokkaasti. Ultraäänisolujen häiriöt, lyysi ja proteiinin uuttaminen ovat yleinen menetelmä BL21-solujen solusisustusten kohdennettujen proteiinien eristämiseksi ja keräämiseksi. Ultrasonication häiritsee solua kokonaan ja vapauttaa kaikki kiinnitetyt proteiinit, mikä tekee 100% proteiinista saatavilla.

BL21-solut proteiinien ilmentymiseen

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21-solu on kemiallisesti pätevä E. coli -bakteerikanta, joka soveltuu muuntumiseen ja korkean tason proteiinien ilmentymiseen käyttämällä T7 RNA -polymeraasi-IPTG-induktiojärjestelmää. BL21-solut mahdollistavat minkä tahansa T7-promoottorin hallinnassa olevan geenin korkean hyötyproteiinin ilmentymisen. E. coli -kanta BL21(DE3) on T7 RNA -polymeraasipohjainen proteiinintuotantokanta yhdistettynä T7-promoottoripohjaisiin ekspressionivektoreihin, ja sitä käytetään laajalti laboratorioissa ja teollisuudessa yhdistelmäproteiinien tuottamiseen. BL21(DE3)-valmisteessa yhdistelmäproteiinia koodaavan geenin ilmentymä transkriptoidaan kromosomikoodatulla T7 RNA -polymeraasilla (T7 RNAP), joka transkriptoi kahdeksan kertaa nopeammin kuin tavanomainen E. coli RNAP. Tämä tekee BL21(DE3) -kannasta erittäin tehokkaan ja muuttaa sen yhdeksi suositeltavimmista proteiinin ilmentymäsolujärjestelmistä.

Protokolla ultraäänilyysiin ja proteiinin uuttamiseen BL21-soluista

BL21- solujen solulyysi tehdään enimmäkseen ultrasonicationilla yhdessä natriumlauroyylisarkosinaatin (tunnetaan myös nimellä sarkosyyli) kanssa lyysipuskurina. Ultraäänisolujen häiriön ja proteiinin uuttamisen edut ovat ultraääniastianteiden luotettavuus, uusittavuus sekä yksinkertainen, turvallinen ja nopea toiminta. Alla oleva protokolla antaa vaiheittaisen suunnan ultraääni-BL21-solulyysille:

Probe-tyyppinen insonifioija UP200St lyysiä varten

Ultraäänisolujen hajotin UP200St mikrokärjellä S26d2 lyysiin ja proteiinin uuttamiseen

Informaatio pyyntö




Huomaa, että Tietosuojakäytäntö.


  • Esiliinaproteiinien poistamiseksi BL21-bakteeripelletit sekoitettiin 50 ml:aan jääkylmää natriumtris-EDTA (STE) puskuria (joka koostuu 10 mM Tris-HCL:stä, pH 8,0: sta, 1 mM EDTA: sta, 150 mM NaCl: stä täydennettynä 100 mM PMSF: llä).
  • Lisätään 500 ul lysostatsyymia (10 mg/ ml) ja soluja inkuboidaan jäällä 15 minuutin annoksen annoksen annoksen 15 minuutin annoksen annoksen ylle.
  • Sen jälkeen lisätään 500 ul DTT:tä ja 7 ml sarkosyyliä (10% (w/v), joka on valmistettu STE-puskurista).
  • On tärkeää pitää kaikki puhdistuspuskurit jääkylmänä ja pitää näytteet jäällä koko ajan. Kaikki puhdistusvaiheet on suoritettava kylmähuoneessa, jos mahdollista.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Ultraäänilyysiä ja proteiiniuuttoa varten näytteet äänittyvät VialTweeter MultiSample Ultrasonicator 4 x 30 sekunnin ajan 100% amplitudilla 2 minuutin välein jokaisen sonikoinnin välillä. Vaihtoehtoisesti anturityyppinen ultraäänihomogenointiaine, jossa on mikrokärki, esim. Uf200 ः t S26d2:lla (3 x 30 sek, 2 min. tauko ultraäänisyklien välillä, 80% amplitudi) voidaan käyttää.
  • Lisäpuhdistusvaiheita varten näytteet on säilytettävä jäällä tai vaihtoehtoisesti -80 °C:ssa jatkojalostukseen asti.

Ultraäänilyysi prescise lämpötilan säätö

Tarkka ja luotettava lämpötilansäätö on ratkaisevan tärkeää biologisia näytteitä käsiteltäessä. Korkeat lämpötilat käynnistävät näytteiden termisesti indusoidun proteiinin hajoamisen.
Kuten kaikki mekaaniset näytteenvalmistustekniikat, sonikaatio luo lämpöä. Näytteiden lämpötilaa voidaan kuitenkin hallita hyvin, kun käytetään VialTweeter- näytteitä. Esittelemme sinulle erilaisia vaihtoehtoja seurata ja hallita näytteiden lämpötilaa samalla, kun valmistelet niitä VialTweeter ja VialPress analyysia varten.

  1. Näytteen lämpötilan seuranta: VialTweeter-laitetta ohjaava ultraääniprosessori UP200St on varustettu älykkäällä ohjelmistolla ja kytkettävällä lämpötila-anturilla. Liitä lämpötila-anturi UP200St-näytteeseen ja aseta lämpötila-anturin kärki yhteen näyteputkista. Digitaalisen värillisen kosketusnäytön avulla voit asettaa UP200St-valikossa tietyn lämpötila-alueen näytteen sonikaatiota varten. Ultraäänilaite pysähtyy automaattisesti, kun enimmäislämpötila on saavutettu, ja pysähtyy, kunnes näytteen lämpötila laskee asetettuun lämpötilaan ∆. Sitten sonikaatio alkaa automaattisesti uudelleen. Tämä älykäs ominaisuus estää lämmön aiheuttaman hajoamisen.
  2. VialTweeter- lohko voidaan esijäähdytetty. Laita VialTweeter-lohko (vain sonotrode ilman anturia!) jääkaappiin tai pakastimeen esijäähdyttääkseen titaanilohkon, mikä auttaa lykkäämään näytteen lämpötilan nousua. Jos mahdollista, myös itse näyte voidaan esijäähdytyä.
  3. Jäähdytä sonikoinnin aikana kuivajäällä. Käytä matalaa lokeroa, joka on täytetty kuivalla jäällä, ja aseta VialTweeter jäälle, jotta lämpö haihtuu nopeasti.

Asiakkaat ympäri maailmaa käyttävät VialTweeteriä ja VialPressiä päivittäiseen näytteenvalmistustyöhönsä biologisissa, biokemiallisissa, lääketieteellisissä ja kliinisissä laboratorioissa. UP200St-prosessorin älykäs ohjelmisto ja lämpötilan säätö, lämpötila on luotettavasti ohjattu ja lämmön aiheuttama näytteen heikkeneminen vältetään. Ultraääninäytteiden valmistus VialTweeterillä ja VialPressillä tuottaa erittäin luotettavia ja toistettavissa olevia tuloksia!

Löydä optimaalinen ultraääni-hajotin lyysisovelluksellesi

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics on pitkäaikainen kokenut valmistaja korkean suorituskyvyn ultraäänisolujen hajottimia ja homogenisaattorit laboratorioihin, penkki-top ja teollisen mittakaavan järjestelmiä. Bakteerisoluviljelmäsi koko, tutkimus- tai tuotantotavoitteesi ja käsiteltävän solun tilavuus tunnissa tai päivässä ovat olennaisia tekijöitä oikean ultraäänisoluhäirikön löytämiseksi sovelluksellesi.
Hielscher Ultrasonics tarjoaa erilaisia ratkaisuja moninäytteiden (enintään 10 injektiopulloa VialTweeterillä) ja massanäytteiden samanaikaiseen sonikaatioon (ts. mikrotitterilevyt / ELISA-levyt UIP400MTP: llä) sekä klassinen anturityyppinen laboratorio ultraäänilaite, jonka teho on erilainen 50-400 wattia täysin teollisiin ultraääniprosessoritimiin, joissa on jopa 16 000wattia yksikköä kohti kaupallisten solujen häiriöihin ja proteiinin uuttamiseen suuressa tuotannossa. Kaikki Hielscher-ultraäänikoneet on rakennettu 24/7/365-käyttöä varten täydellä kuormalla. Kestävyys ja luotettavuus ovat ultraäänilaitteidemme ydinominaisuuksia.
Kaikki digitaaliset ultraäänihomygenisoijat on varustettu älykkäillä ohjelmistoilla, värillisellä kosketusnäytöllä ja automaattisella dataprotokollalla, jotka tekevät ultraäänilaitteesta kätevän työvälineen laboratorio- ja tuotantolaitoksissa.
Kerro meille, millaisia soluja, mikä tilavuus, millä taajuudella ja millä kohteella sinun on käsiteltävä biologisia näytteitäsi. Suosittelemme sinulle sopivinta ultraäänisolun hajotinta prosessivaatimuksiisi.

Alla olevassa taulukossa on viitteitä ultraäänijärjestelmiemme likimääräisen prosessointikapasiteetin osalta kompakteista kädessä pidettäviin homogenisaattoriin ja MultiSample Ultrasonicators -sovelluksista teollisiin ultraääniprosessoriin kaupallisiin sovelluksiin:

erätilavuus Virtausnopeus Suositeltavat laitteet
96-well / mikrotitterilevyt n.a UIP400MTP-työkalu
10 injektiopulloa à 0, 5 - 1, 5 mL n.a VialTweeter klo UP200St
0.01 –250 mL 5-100mL/min UP50H
0.01 –500mL 10 - 200 ml / min UP100H
10 - 2000 ml 20 - 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 - 20L 0.2 - 4 l / min UIP2000hdT
10 - 100 litraa 2 - 10 l / min UIP4000hdT
n.a 10 - 100 l / min UIP16000
n.a suuremmat klusterin UIP16000

Ota meihin yhteyttä! / Kysy meiltä!

Kysy lisä tietoja

Käytä alla olevaa lomaketta pyytääksesi lisätietoja ultraääniprosessoreista, sovelluksista ja hinnasta. Olemme iloisia voidessamme keskustella prosessista kanssasi ja tarjota sinulle ultraäänijärjestelmä, joka täyttää vaatimuksesi!









Huomaathan, että Tietosuojakäytäntö.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultraäänilaitteen Uf200 ः t 2mm mikrotip S26d2 pienten näytteiden sonikaatioon

Kirjallisuus / Referenssit



Tosiasiat, jotka kannattaa tietää

Escherichia Coli Bakteerit

Escherichia coli on bakteerityyppi, joka ei ole itiöitä muodostava, gram-negatiivinen ja jolle on ominaista sen suoran sauvan muoto. E.coli-bakteereja esiintyy ihmisten ja eläinten ympäristössä, elintarvikkeissa ja suolistossa. E. coli on yleensä motiili käyttämällä peritrichous flagellaa, mutta on myös ei-savuisia tyyppejä. E.coli ovat niin sanottuja faktatiivisesti anaerobisia kemoorganotrooppisia organismeja, mikä tarkoittaa, että ne kykenevät sekä hengitysteiden että fermentatiiviseen aineenvaihduntaan. Useimmat E.coli-tyypit ovat hyvänlaatuisia ja täyttävät hyödyllisiä toimintoja elimistössä, esimerkiksi haitallisten bakteerilajien kasvun estäminen, vitamiinien syntetisoiminen jne.
Niin sanottuun B-tyyppiseen Escherichia coli -bakteerisoluun kuuluvat erityiset E.coli-kannat, joita käytetään laajalti tutkimuksessa bakteriofaasiherkkyyden tai rajoitusten muutosjärjestelmien mekanismien tutkimiseen. Lisäksi E.coli-bakteereja arvostetaan luotettavana työhevosena proteiinien ilmentymiseen bioteknologian ja biotieteen laboratorioissa. Esimerkiksi E.coli-bakteeria käytetään yhdisteiden, kuten proteiinien ja oligosakkaridien, syntetisoimiseksi teollisessa mittakaavassa. Erityispiirteiden, kuten proteaasin puutteen, alhaisen asetaattituotannon korkeassa glukoosipitoisuudessa ja tehostetun läpäisevyyden vuoksi E. coli B -solut ovat useimmiten käytettyjä isäntäsoluja geneettisesti muunnettujen proteiinien tuotantoon.

Rekombinantti proteiini

Yhdistelmäproteiinit (rProt) ovat saamassa merkittävän merkityksen jakoputkilla, mukaan lukien kemianteollisuudessa, lääketeollisuudessa, kosmetiikassa, ihmis- ja eläinlääketieteessä, maataloudessa, elintarvikkeissa ja jätteenkäsittelyteollisuudessa.
Rekombinanttiproteiinin tuotanto edellyttää lausekejärjestelmän käyttöä. Yhdistelmä- DNA: n tuotantoon käytettävien solujärjestelmien ilmentymisenä voidaan käyttää sekä prokaryoottisia että eukaryoottisia soluja. Vaikka bakteerisoluja käytetään yleisimmin proteiinien ilmentymiseen esimerkiksi edullisten, helpon skaalautuvuuden ja yksinkertaisien mediaolosuhteiden vuoksi, nisäkäs-, hiiva-, levät-, hyönteis- ja soluvapaat järjestelmät ovat vakiintuneita vaihtoehtoja. Proteiinityyppi, toiminnallinen aktiivisuus sekä ilmaistun proteiinin vaadittu saanto vaikuttavat proteiinin ilmentymiseen käytettävän solujärjestelmän valintaan.
Rekombinanttiproteiinin ilmentämiseksi tietty solu on transfected DNA-vektorilla, joka sisältää yhdistelmä- DNA: n mallin. Tämän jälkeen mallin mukana transfected-solut sivistyvät. Solumekanismin seurauksena solut transnoivat ja kääntävät kiinnostavan proteiinin ja tuottavat siten kohdennettua proteiinia.
Koska ilmaistut proteiinit ovat kiinni solumatriisissa, solu on lysed (häiriintynyt ja rikki) proteiinien vapauttamiseksi. Myöhemmässä puhdistus vaiheessa proteiini erotetaan ja puhdistetaan.
Ensimmäinen hoidossa käytetty yhdistelmä- dna- proteiini oli ihmisinsuliinin yhdistelmähoito vuonna 1982. Nykyään maailmassa tuotetaan yli 170 yhdistelmäproteiinityyppiä lääketieteellisiin hoitoihin. Yleisesti käytettyjä rekombinanttiproteiineja, joita käytetään lääketieteessä, ovat esimerkiksi yhdistelmähormonit, interferonit, interleukinit, kasvutekijät, kasvaimen kuoliotekijät, veren hyytymistekijät, trombolyyttiset lääkkeet ja entsyymit merkittävien sairauksien, kuten diabeteksen, kääpiöiden, sydäninfarktin, kongestiivisen sydämen vajaatoiminnan, aivojen apopleksian, MULTIPPELIS-, neutropenian, trombosytopenian, anemian, hepatiitin, nivelreuman, astman, Crohnin taudin ja syöpähoitojen hoitoon. (vrt. Phuc V. Pham, in Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Korkean suorituskyvyn ultraääni! Hielscherin tuotevalikoima kattaa koko spektrin kompaktista laboratorion ultraäänikonesta penkki-top-yksiköihin täysteollinen ultraäänijärjestelmiin.