Ultraäänikäsittelyllä valmistetut puskuriliuokset

Lyysipuskureita voidaan valmistaa tehokkaasti ja nopeasti kudosten ultraäänihomogenisaattoreilla. Koska ultraäänilaitteet ovat ihanteellisia välineitä sekoittamiseen, liuottamiseen ja dispergointiin, ne mahdollistavat lyysipuskurien luotettavan ja käyttäjäystävällisen valmistuksen.

Lyysipuskurien valmistus ultraäänellä

Kudosten ultraäänihomogenisaattorit ovat yleisiä välineitä solujen hajotukseen, lyysiin ja uuttoon, joten niitä on saatavilla useimmissa laboratorioissa. Anturityyppisten ultraäänilaitteiden toinen käyttökohde on lyysipuskurien valmistus.

Lyysipuskuri on liuos, jota käytetään solujen avaamiseen (lyysiin) ja niiden sisällön vapauttamiseen myöhempää analyysiä varten. Lyysipuskurin tarkka koostumus voi vaihdella lysoitavien solujen tyypin ja myöhemmän käyttökohteen mukaan. Tyypillinen lyysipuskuri sisältää kuitenkin esimerkiksi detergenttejä, suoloja ja proteaasi-inhibiittoreita. Puskuroivia suoloja (esim. Tris-HCl) ja ionisia suoloja (esim. NaCl) käytetään yleisesti lysaatin pH:n ja osmolaarisuuden säätelyyn.
Lyysipuskurin valmistamiseksi komponentit sekoitetaan keskenään sopivissa pitoisuuksissa ja sopivassa pH:ssa. Seosta yleensä sekoitetaan tai ravistetaan, kunnes komponentit ovat liuenneet ja liuos on homogeeninen.
Ultraäänihomogenointi on menetelmä, jolla voidaan edistää hyvän lyysipuskurin valmistusta parantamalla komponenttien sekoittumista ja liukenemista. Tässä menetelmässä seokseen kohdistetaan ultraääniaaltoja – tavallisesti taajuusalueella 20–30 kHz – jolloin syntyy kavitaatiokuplia, jotka luhistuvat ja tuottavat voimakasta paikallista energiaa. Tämä aiheuttaa mekaanista leikkausta ja komponenttien sekoittumista.
Ultraäänihomogenointi voi auttaa hajottamaan komponenttien mahdolliset paakut tai aggregaatit ja varmistamaan, että liuos sekoittuu tasaisesti. Näin parannettu lyysipuskuri voi siten tehostaa solujen hajotusta ja lisätä uutetun materiaalin saantoa. Lisäksi ultraäänihomogenointi voi lyhentää lyysipuskurin valmistukseen tarvittavaa aikaa perinteiseen sekoittamiseen tai ravistamiseen verrattuna.
Kaiken kaikkiaan ultraäänihomogenointi on tehokas väline lyysipuskurien valmistuksen laadun ja tehokkuuden parantamiseen.

Lyysipuskurin valmistusohje ultraäänikäsittelyä varten

Tämä on yleinen ohje lyysipuskurin valmistamiseen anturityyppisellä ultraäänilaitteella:
 
Tarvikkeet:

• Valittu detergentti tai valitut detergentit (esim. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Valittu suola tai valitut suolat (esim. NaCl, KCl)
• Proteaasi-inhibiittorit (esim. PMSF, aprotiniini, leupeptiini)
• Ultraäänilaite
• Sekoitin
• Deionisoitu vesi
• pH-mittari tai pH-liuskat

 
 
Vaiheittaiset ohjeet:

1. Määritä lyysipuskurin koostumus lysoitavien solujen tai kudoksen sekä lysaatin myöhempien käyttökohteiden perusteella. Valmista detergenttien, suolojen ja proteaasi-inhibiittorien kantaliuokset haluttuina pitoisuuksina.
2. Lisää detergenttien, suolojen ja proteaasi-inhibiittorien kantaliuokset dekantterilasiin tai pulloon.
3. Lisää deionisoitua vettä, kunnes puskurin tilavuus on halutun suuruinen.
4. Sekoita komponentit sekoittimella esisekoitetun liuoksen saamiseksi.
5. Mittaa puskurin pH pH-mittarilla tai pH-liuskoilla ja säädä pH:ta tarvittaessa pienillä määrillä happoa tai emästä.
6. Homogenoi esisekoitettu liuos anturityyppisellä ultraäänilaitteella erittäin homogeenisen liuoksen saamiseksi. Käsittele liuosta tätä varten ultraäänellä muutaman sekunnin ajan, kunnes liuos on sekoittunut perusteellisesti ja mahdolliset paakut tai aggregaatit ovat hajonneet. Ultraäänikäsittelyn kesto ja teho voidaan optimoida käytettävän lyysipuskurin ja ultraäänilaitteen perusteella.
7. Mittaa puskurin pH uudelleen ultraäänikäsittelyn jälkeen ja säädä sitä tarvittaessa.
8. Suodata puskuri 0,2 mikrometrin suodattimen läpi poistaaksesi mahdolliset jäänteet tai aggregaatit, joita on saattanut muodostua ultraäänikäsittelyn aikana.
9. Lyysipuskuri on nyt käyttövalmis.

 
Huomautus: Lyysipuskurin tarkka koostumus ja pH voivat vaihdella lysoitavien solujen tai kudoksen sekä myöhempien käyttökohteiden mukaan. Yllä oleva valmistusohje on yleisohje, ja sitä voi olla tarpeen optimoida tiettyjä käyttökohteita varten.
 
Ultraäänihomogenisaattoreita käytetään yleisesti solujen hajotukseen ja solunsisäisten molekyylien uuttoon. Siksi monissa lyysisovelluksissa käytetään anturityyppistä ultraäänikäsittelyä lyysipuskurin valmistuksen lisäksi myös solujen mekaaniseen hajotukseen ja uuttoon.
Tämä tekee kudosten ultraäänihomogenisaattoreista monipuolisia laboratoriovälineitä ja selittää ultraäänilaitteiden laajan käytön mikrobiologiassa, bioteknologiassa ja biotieteissä.

Laboratorion ultraäänihomogenisaattorit

Hielscher Ultrasonics valmistaa ja toimittaa ultraäänihomogenisaattoreita ja antureita (sonotrodeja) erilaisille nimellistehoille ja näytetilavuuksille. Näin voimme tarjota näytteiden valmisteluun parhaiten soveltuvan ultraäänihajottimen. Keskitymme korkeimpaan laatuun, erinomaiseen käyttömukavuuteen ja luotettaviin ultraäänikäsittelyn tuloksiin. Kaikissa digitaalisissa ultraäänilaitteissa on älykäs ohjelmisto, ultraäänikäsittelyprotokollien ohjelmointi ja esiasetus, etäohjaus selaimella, lämpötilan säätö, näytteen valaistus sekä automaattinen tietojen tallennus sisäänrakennetulle SD-kortille.

Suunnittelu, valmistus ja konsultointi – Saksassa tuotettua laatua

Hielscherin ultraäänilaitteet tunnetaan korkeimmista laatu- ja suunnittelustandardeistaan. Kestävyys ja helppokäyttöisyys mahdollistavat ultraäänilaitteidemme sujuvan integroinnin teollisuuslaitoksiin. Hielscherin ultraäänilaitteet selviytyvät helposti ankarista olosuhteista ja vaativista ympäristöistä.

Hielscher Ultrasonics on ISO-sertifioitu yritys, joka painottaa erityisesti tehokkaita ultraäänilaitteita, joissa yhdistyvät uusinta tekniikkaa edustavat ratkaisut ja käyttäjäystävällisyys. Hielscherin ultraäänilaitteet ovat luonnollisesti CE-vaatimusten mukaisia ja täyttävät UL-, CSA- ja RoHs-vaatimukset.

Alla oleva taulukko antaa yleiskuvan erilaisista laboratorioiden ultraäänilaitteistamme: