Alfa-synukleiinin pirstoutuminen VialTweeter Sonicatorin avulla
α-synukleiinifibrillit ja -nauhat pirstoutuvat tieteellisessä tutkimuksessa pienempien fibrillikatkelmien tai jopa yksittäisten proteiinimolekyylien tuottamiseksi, joita voidaan helpommin analysoida erilaisilla kokeellisilla tekniikoilla. VialTweeter Sonicator on yksi yleisimmin käytetyistä ultraäänilaitteista tehokkaaseen ja luotettavaan alfa-synukleiinipirstoutumiseen.
α-synukleiini tutkimuksessa
Alfa-synukleiinifibrillit ovat proteiiniaggregaatteja, jotka liittyvät voimakkaasti neurodegeneratiivisiin häiriöihin, kuten Parkinsonin tautiin ja tiettyihin dementian muotoihin, mukaan lukien Lewyn kappaleiden dementia. Alfasynukleiinifibrilleihin keskittyvä tutkimus pyrkii ymmärtämään niiden roolia taudin etenemisessä ja kehittämään mahdollisia terapeuttisia interventioita. Hajottamalla alfasynukleiinifibrillit pienemmiksi palasiksi tutkijat voivat tutkia niiden erityisiä rakenteellisia piirteitä. Esimerkiksi alfasynukleiinifibrillien pirstoutuminen antaa tutkijoille mahdollisuuden tutkia niiden vuorovaikutusta muiden molekyylien, kuten proteiinien, lipidien tai pienten molekyylien, kanssa. Tuottamalla pienempiä fragmentteja voidaan tutkia tehokkaammin sitoutumiskohtia ja affiniteettia näihin vuorovaikutuksessa oleviin kumppaneihin. Pienemmissä α-Syn-fribrilleissä ja nauhoissa voi myös esiintyä muuttunutta toksisuutta ja biokemiallisia vaikutuksia. Siksi luotettava ja tehokas pirstoutumistekniikka, joka tuottaa toistettavia tuloksia nopealla ja yksinkertaisella näytteenkäsittelyllä, on ratkaisevan tärkeä.
Ultraääni alfa-syn pirstoutuminen: VialTweeter-sonikaattori on vakiintunut ultraääninäytteen valmistelujärjestelmä, joka sonikoi jopa 10 injektiopulloa samanaikaisesti täsmälleen samoissa olosuhteissa. Ohjelmoitavat asetukset mahdollistavat samojen kokeiden yksinkertaisen ja nopean uudelleensuorittamisen, mikä antaa erittäin luotettavia ja toistettavia tuloksia alfasynukleiinifibrillien pirstoutumisessa.
VialTweeter Sonicator useiden alfa-synukleiininäytteiden samanaikaiseen ultraäänipirstoutumiseen.
α-synukleiininäytteen valmistus sonikaattorilla
Yksi lähestymistapa alfa-synukleiinifibrillien tutkimiseen sisältää niiden uuttamisen ja pirstoutumisen tekniikoilla, kuten sonikaatiolla. Sonikaatio on prosessi, joka käyttää korkean intensiteetin, matalataajuisia ultraääniaaltoja proteiiniaggregaattien häiritsemiseksi ja hajottamiseksi, mikä johtaa pienempien fibrillien tai yksittäisten proteiinimolekyylien vapautumiseen. Sonikaattori VialTweeter on yleisesti käytetty laite α-synukleiiniin liittyvissä tutkimuksissa tähän tarkoitukseen.
Lukuisat tutkimukset kuvaavat alfa-synukleiinifibrillien sonikoinnin tarkkoja näytteenvalmistusprotokollia, joissa käytetään Hielscher VialTweeteriä tehokkaaseen ja luotettavaan α-synukleiinifibrillipirstoutumiseen. Pirstomalla fibrillit ultraäänellä tutkijat voivat analysoida tuloksena olevia tuotteita ja tutkia niiden rakennetta, myrkyllisyyttä ja vuorovaikutusta muiden molekyylien kanssa. Tämä tutkimus tarjoaa tärkeää tietoa neurodegeneraation taustalla olevista mekanismeista ja mahdollisesti tunnistaa uusia terapeuttisia kohteita. VialTweeter-sonikaattoria käyttävät vakiintuneet α-synukleiini-sonikaatioprotokollat mahdollistavat luotettavat ja toistettavat tulokset.
Ylemmät kuvat: fragmentoimattomat alfasynukleiinifibrillit
α-synukleiinifibrillien ultraäänipirstoutuminen – protokollat
Koska lukuisat tutkijat käyttävät VialTweeter-sonikaattoria ensisijaisena pirstoutumistekniikkana yhtenäisten α-synukleiinifibrillifragmenttien tuottamiseksi, vakiintuneet protokollat ovat helposti saatavilla. Alta löydät muutamia esimerkillisiä pirstoutumisprotokollia.
ClearTau-siementen valmistus: ClearTau-fibrillit laimennettiin 10 μM: iin dH2O: ssa ja sonikoitiin 70%: n amplitudilla 50 sekunnin ajan 1 s ON 1 s OFF -syklin sisäisellä putkella käyttämällä sonikaattoria UP200St VialTweeterillä. Siemenille oli tunnusomaista elektronimikroskopia.
ThS-fluoresenssin mittaus: ClearTau-fibrillit laimennettiin 2,5 μM: iin dH2O: ssa ja sonikoitiin 70%: n amplitudilla 50 sekunnin ajan 1 s ON 1 s OFF -syklin sisäputkessa käyttäen UP200St: tä VialTweeterin kanssa. Kontrollina käytettiin 2,5 μM täyspitkää Tau 4R2N -monomeeriä. 100 μl:n reaktioon lisättiin 100 μl ThS:ää (10 μM), jolloin lopullinen proteiinipitoisuus oli 1,25 μM. Yhden pisteen ThS-fluoresenssi mitattiin käyttämällä 96 hyvin kirkasta pohjalevyä, jotka oli asetettu FLUOstar Omega -mikrolevylukijaan, viritys 445 nm: ssä ja emissio 485 nm: ssä.
(vrt. Limorenko et al., 2023)
Yhtenäinen α-synukleiinipituus sonikaatiolla: α-syn-fibrillien ja nauhojen pituuden heterogeenisyyttä pienennettiin sonikaatiolla 20 minuutin ajan jäällä 2 ml: n Eppendorf-putkissa VialTweeter-laitteessa, joka oli asetettu 75%: n amplitudiin, 0,5 s pulssiin.
(vrt. Bousset et al., 2013)
Ihmisen rekombinanttimonomeerisen WT:n tai S129A a-Synin ja niiden tuottamien fibrillaaristen polymorfien sekä a-Syn 1–110:n laadunvalvonta suoritettiin. Tämän jälkeen fibrillaariset polymorfit pirstoutuivat sonikaatiolla 20 minuutin ajan VialTweeter-ultraäänilaitteen 2 ml: n Eppendorf-putkissa fibrillaaristen hiukkasten tuottamiseksi, joiden keskikoko oli 42–52 nm ja jotka soveltuvat endosytoosiin.
(vrt. Shrivastava et al., 2020)
Viiden fibrillaarisen α-Syn-polymorfin karakterisointi. (A) Esitetään negatiivisesti värjättyjen α-Syn-fibrillaaristen polymorfien fibrillien, nauhojen, fibrillit-91:n, fibrillit-65:n ja fibrillit-110:n lähetyselektronimikrografiat ennen (ylempi kaista) ja pirstoutumisen jälkeen VialTweeterillä (alempi kaista). B) Hajanaisten fibrillaaristen polymorfien pituusjakauma esitetään. Niiden fibrillaarikokoonpanojen lukumäärä (n), joista histogrammit johdettiin, ilmoitetaan.
α-Syn-fibrillit pirstoutuivat sonikaatiolla 20 minuutin ajan 2 ml: n Eppendorf-putkissa VialTweeterissä fibrillaaristen hiukkasten tuottamiseksi, joiden keskimääräinen koko oli 42–52 nm TEM-analyysillä arvioituna.
(vrt. Negrini et al., 2022)
Uudelleen suspendoidut fibrillit91 (PBS: ssä) pirstoutuivat ennen soluviljelmien lisäämistä sonikaatiolla 20 minuutin ajan 2 ml: n Eppendorf-putkissa käyttäen Vial Tweeter -sonikaattoria, alistettiin, salama jäädytettiin nestemäisessä typessä ja säilytettiin, kunnes käyttö oli -80 ̊ C: ssa.
(vrt. Vajhøj et al., 2021)
Sonicator UIP400MTP alfa-synukleiinifibrillipirstoutumiseen monikuoppalevyissä.
VialTweeter ja laboratoriosonikaattorit α-syn-pirstoutumiseen
Hielscher Ultrasonics on maailmanlaajuisesti tunnustettu johtavaksi huippuluokan ultraäänilaitteiden valmistajaksi. Luotettu ja vakiintunut suuriin tutkimuslaboratorioihin maailmanlaajuisesti, ultraäänilaitteemme tarjoavat vertaansa vailla olevaa laatua ja suorituskykyä kriittisiin kokeisiisi.
Hielscher VialTweeterin ja minkä tahansa muun Hielscher-sonikaattorin avulla koet vertaansa vailla olevan käyttömukavuuden, koska ne on suunniteltu harkitusti toistettaviin tuloksiin, helppokäyttöisyyteen ja saumattomaan käyttöön. Automaattisten tietojen tallennusominaisuuksien avulla voit keskittyä tutkimukseesi, kun ultraäänilaitteemme tallentavat huolellisesti tärkeitä tietoja toistettavuuden ja tarkkuuden varmistamiseksi.
Saavuta johdonmukaisia ja toistettavia tuloksia luottavaisin mielin!
Ultraäänilaitteemme on suunniteltu ja valmistettu Saksassa. Saksalainen tarkkuus ja korkein tekninen laatu takaavat luotettavan ja tarkan näytteen valmistelun, kuten alfasynukleiinifibrillipirstoutumisen joka kerta. Ei enää huolta epäjohdonmukaisista tuloksista - ultraäänitekniikkamme varmistaa, että tutkimuksesi pysyy tieteellisen kehityksen eturintamassa.
Mutta se ei ole kaikki! Sitoutumisemme erinomaisuuteen ulottuu tuotteidemme ulkopuolelle. Olemme ylpeitä poikkeuksellisesta asiakaspalvelustamme, joka tarjoaa asiantuntevaa tukea vastaamaan mahdollisiin kysymyksiisi tai huolenaiheisiisi. Omistettu tiimimme on täällä auttamassa sinua tutkimusmatkasi jokaisessa vaiheessa varmistaen, että saat kaiken irti ultraäänilaitteistamme.
Valitse innovaatio, luotettavuus ja poikkeuksellinen käyttökokemus - valitse laboratoriosonikaattorimme, kuten VialTweeter alfa-synukleiinifibrillien pirstoutumiseen. Hyödy jo vakiintuneista protokollista ja liity johtavien tutkijoiden joukkoon, jotka luottavat teknologiaamme kriittisissä tutkimuksissaan. Nosta tutkimustasi ja tutki dementian ja neurodegeneratiivisten sairauksien tutkimuksen uusia rajoja huipputeknisillä ultraäänilaitteillamme.
- korkea hyötysuhde
- Uusinta teknologiaa
- luotettavuus & rotevuus
- toistettavuus
- säädettävä, tarkka prosessinohjaus
- mille tahansa tilavuudelle
- Älykäs ohjelmisto
- älykkäät ominaisuudet (esim. ohjelmoitava, dataprotokolla, kaukosäädin)
- Helppo ja turvallinen käyttää
- vähän huoltoa vaativa
- CIP (puhdas paikan päällä)
Suunnittelu, valmistus ja konsultointi – Laatu valmistettu Saksassa
Hielscher-ultraääniastiat ovat tunnettuja korkeimmista laatu- ja suunnittelustandardeistaan. Kestävyys ja helppokäyttöisyys mahdollistavat ultraäänilaitteidemme sujuvan integroinnin teollisuuslaitoksiin. Hielscher-ultraäänilaitteet käsittelevät helposti karkeita olosuhteita ja vaativia ympäristöjä.
Hielscher Ultrasonics on ISO-sertifioitu yritys ja painottaa erityisesti korkean suorituskyvyn ultraäänilaitteita, joissa on huipputeknologia ja käyttäjäystävällisyys. Tietenkin Hielscher-sonikaattorit ovat CE-yhteensopivia ja täyttävät UL: n, CSA: n ja RoHs: n vaatimukset.
Alla oleva taulukko antaa sinulle viitteitä laboratoriokokoisten ultraäänilaitteiden likimääräisestä käsittelykapasiteetista:
| Suositellut laitteet | Erän tilavuus | Virtausnopeus |
|---|---|---|
| UIP400MTP | monikuoppa-? mikrotiitterilevyt | n.a. |
| Ultraääni CupHorn | CupHorn injektiopulloille tai dekantterilasille | n.a. |
| GDmini2 | ultraääni mikrovirtausreaktori | n.a. |
| VialTweeter | 0.5 - 1.5 ml | n.a. |
| UP100H | 1 - 500 ml | 10 - 200 ml? min |
| UP200Ht, UP400St | 10 - 2000ml | 20–400 ml/min |
Ota yhteyttä!? Kysy meiltä!
The VialTweeter käytetään yleisesti alfasynukleiinifibriilin fragmentoimiseen esianalyyttisen näytteenvalmistuksen vaiheena
Kirjallisuus? Viitteet
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Usein Kysytyt Kysymykset
Onko alfa-synukleini amyloidi?
Yes, alpha-synuclein can form amyloid-like fibrils. It is a key component of Lewy bodies, the pathological hallmark of Parkinson’s disease and other synucleinopathies. Its aggregation follows a nucleation-dependent polymerization process similar to classical amyloids.
Mitä eroa on amyloidi-beetalla ja alfa-synukleiinilla?
Amyloid-beta (Aβ) and alpha-synuclein (α-syn) are distinct proteins that form pathological aggregates in neurodegenerative diseases. Aβ, derived from the amyloid precursor protein (APP), is primarily associated with Alzheimer’s disease and forms extracellular plaques. In contrast, α-syn is a presynaptic neuronal protein that aggregates intracellularly in Parkinson’s disease and related disorders. While both exhibit β-sheet-rich amyloid structures, they differ in their sequences, aggregation pathways, and disease-specific pathology.
Millainen proteiini on amyloidi?
Amyloidi on väärin laskostunut fibrillaarinen proteiini, joka omaksuu ristikkäisen β-levyrakenteen ja aggregoituu liukenemattomiksi fibrilleiksi. Nämä proteiinit ovat tyypillisesti peräisin normaaliliukoisista esiasteista, jotka käyvät läpi konformaatiomuutoksia, jotka johtavat itsejärjestäytymiseen ja laskeumaan. Amyloidit liittyvät erilaisiin hermostoa rappeuttaviin ja systeemisiin sairauksiin, joissa niiden aggregaatio edistää solumyrkyllisyyttä ja kudosvaurioita. Opi kuinka 96-kuoppainen levysonikaattori auttaa UIP400MTP muodostamaan nopeasti standardoituja amyloidifibrillejä tutkimustarkoituksiin!
Mitä sairauksia amyloidit aiheuttavat?
Amyloidit ovat osallisina lukuisissa sairauksissa, joita kutsutaan yhteisesti amyloidooseisiksi. Nämä sisältävät:
- Neurodegeneratiiviset sairaudet: Alzheimer’s disease (Aβ), Parkinson’s disease (α-syn), Huntington’s disease (mutant huntingtin), and prion diseases (PrPSc). (Lue lisää sonikaatioavusteisesta PMCA:sta korkean suorituskyvyn prionien havaitsemisessa!)
- Systeemiset amyloidoosit: Kevytketjuinen (AL) amyloidoosi, transtyretiini (ATTR) amyloidoosi ja sekundaarinen (AA) amyloidoosi.
- Paikalliset amyloidoosit: Saarekkeen amyloidipolypeptidi (IAPP) tyypin 2 diabeteksessa.
Jokaiselle amyloidiin liittyvälle sairaudelle on ominaista proteiinien virheellinen laskostuminen, aggregaatio ja laskeuma, mikä johtaa solujen toimintahäiriöihin ja toksisuuteen.
Hielscher Ultrasonics valmistaa korkean suorituskyvyn ultraäänihomogenisaattoreita laboratorio jotta Teollisuuden koko.