바이알트위터 소닉레이터로 샘플 준비하기
분석 전 시료 준비에는 조직 균질화, 용해, 단백질, DNA, RNA, 세포 소기관 및 기타 세포 내 물질 추출, 용해 및 가스 제거와 같은 다양한 사전 분석 과정이 필요할 수 있습니다. 바이알트위터는 정확히 동일한 조건에서 여러 개의 샘플 튜브를 동시에 준비할 수 있는 독특한 초음파 처리기입니다. 밀폐된 시험관을 간접적으로 초음파 처리하기 때문에 교차 오염과 시료 손실을 방지할 수 있습니다.
초음파 시료 전처리
초음파는 고분자 연쇄 반응 (PCR), 웨스턴 블롯, 분석, 분자 시퀀싱, 크로마토 그래피 등과 같은 분석을 위해 샘플을 준비하기위한 샘플 처리의 일반적인 기술입니다. 초음파는 샘플을 사전 분석적으로 처리하기 위해 실험실에서 널리 사용되는 기술입니다. 초음파 처리의 주요 장점은 초음파의 작동 원리가 순전히 기계적 힘을 기반으로한다는 것입니다. 초음파 용해 및 세포 파괴는 초음파 역학적 전단력에 의해 달성되며, 이는 초음파에 단백질 추출에 사용되는 용매가 용해 중에도 사용될 수 있다는 이점을 제공합니다. VialTwitterter와 같은 초음파 세포 교란기는 세포벽/멤브레인을 파괴하고 세포 내부와 용매 간의 질량 전달을 촉진합니다. 따라서 분석물(예: DNA, RNA, 단백질, 소기관 등)이 세포 매트릭스에서 용매로 효율적으로 전달됩니다. 이는 담금질 및 추출 단계가 초음파 세포 파괴 과정과 겹친다는 것을 의미하며, 이는 초음파 용해를 매우 효과적으로 만듭니다. 또한, 초음파 시료 준비에는 세제 및 기타 용해 시약이 필요하지 않으며, 이는 용해물의 구조를 변경하고 파괴할 수 있으며 정제에 따른 후속 문제로 알려져 있습니다. 또 다른 용해 방법인 효소 파괴는 긴 배양 시간이 필요하고 종종 재현할 수 없는 결과를 제공합니다. 초음파 시료 전처리는 조직 균질화, 세포 파괴, 용해, 단백질 추출 및 용해물 용해와 같은 시료 전처리의 일반적인 문제를 극복합니다. 초음파 처리의 강도를 정확하게 제어하고 생물학적 샘플에 맞게 조정할 수 있기 때문에 성능 저하 및 샘플 손실을 피할 수 있습니다. 자동으로 모니터링 및 제어되는 시료 온도, 펄스 모드 및 초음파 처리 기간은 최적의 결과를 보장합니다.
VialTweeter는 동일한 조건에서 여러 샘플을 동시에 준비해야 하는 실험실 작업에 특히 편리합니다. VialTwitterer는 최대 10개의 바이알(예: Eppendorf, 원심분리기, NUNC 튜브, 크라이오 바이알)을 담을 수 있는 초음파 블록 sonotrode이며 정밀하게 제어된 조건에서 강하게 초음파 처리합니다. 초음파 에너지가 바이알의 벽을 통해 샘플 매체로 결합되기 때문에 바이알은 처리 중에 닫힌 상태를 유지합니다. 따라서 시료 손실 및 교차 오염을 완전히 방지할 수 있습니다.
VialTweeter에 맞는 바이알 및 튜브
VialTwitterer는 Eppendorf, 원심분리기, cryo-vials 및 다양한 NUNC 바이알 유형과 같은 10개의 일반적인 원뿔형 또는 둥근 바닥 튜브를 담는 데 적합하지만, 구멍은 요청 시 다른 바이알 및 튜브 크기로 사용자 지정할 수 있습니다. 그에 따라 VialTweeter를 수정할 수 있도록 어떤 종류의 시험관을 사용하고 싶은지 알려주십시오. Falcon 튜브 및 기타 테스트 용기, 비커 및 용기와 같은 대형 테스트관의 경우 VialPress는 편리한 솔루션입니다.
특정 시험관 크기(예: Falcon 튜브)에 맞게 맞춤화된 VialTweeter 모델 VT26dxx에 대해 자세히 알아보십시오!
VialPress를 사용한 VialTweeter
10개의 튜브 구멍이 있는 VialTweeter 자체는 이미 독특하고 기능이 뛰어난 초음파 장치이지만 VialPress 애드온은 VialTweeter를 훨씬 더 다재다능하고 유연하게 작동하게 만듭니다. VialPress는 Falcon 튜브 또는 기타 중소형 테스트 비커와 같은 대형 샘플 튜브를 VialTweeter 전면에 고정할 수 있는 클램프 온 바로 구성된 VialTwitter용 액세서리입니다. 왼쪽 사진은 블록에 10개의 Eppendorf 바이알을 들고 있는 VialTwitterer를 보여주며, VialPress는 초음파 처리를 위해 하나의 더 큰 시험관을 전면에 고정합니다. VialPress는 강렬한 초음파 처리를 위해 최대 5 개의 더 큰 시험관을 보유 할 수 있습니다.
VialTweeter 시료 전처리 프로토콜
VialTwitterer는 생물학적 샘플을 초음파 처리하는 데 널리 사용됩니다. 분석 전에 생화학적 또는 생물물리학적 분석 및 분석을 위해 시료를 준비해야 합니다(예: 용해, 조직 균질화, 단백질 추출, DNA/RNA 전단, 탈기 등). VialTwitter는 이러한 초음파 프로세스를 안정적으로 수행하고 재현 가능한 결과를 제공합니다. VialTweeter의 일반적인 응용 분야는 포유류(인간 및 동물) 조직, 박테리아 세포 및 바이러스 입자의 용해/세포 파괴입니다. 성공적으로 VialTweeter 처리된 생물학적 샘플에는 인간 폐 상피 세포, 조혈 줄기 세포, 골수성 백혈병 세포, 대장균, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 탄저균, 프란치셀라 툴라렌시스, 예르시니아 페스티스, 연쇄상구균 화농유전자, 카울로박터 크레센투스, 마이코플라스마 폐렴균(Mycoplasma pneumoniae), 마이코박테리아, 마이코박테리아 결핵 복합체(MTBC) 및 기타 많은 박테리아, 식물 및 미생물 세포를 포함하고 있습니다.
아래에서 VialTweeter를 특징으로 하는 몇 가지 선택된 프로토콜을 찾을 수 있습니다.
VialTwitterer는 교차 오염이나 시료 손실 없이 1.0, 1.5 및 2.0mL Eppendorf 튜브를 고강도로 초음파 처리합니다.
- 조직 균질화(tissue homogenization)
- 세포 파괴 & 세포
- 단백질 추출
- DNA/RNA 전단
- Cell Pellet 용해화
- 병원균 검출
- 탈기
- 체외 진단
- 분석 전 처리(예: 미량 미네랄 추출, 토양 샘플 준비)
- 프로테오믹스(Proteomics)
생체 내 글루타치온 측정을 위한 VialTweeter를 사용한 대장균 용해
MG1655 균주의 대장균 박테리아를 0.5의 A600에 도달할 때까지 총 200ml의 MOPS 최소 배지에서 성장시켰다. 배양액을 스트레스 치료를 위해 50ml 배양액으로 분리하였다. 0.79mM 알리신, 1mM 디아미드 또는 디메틸 설폭사이드(대조군)로 15분 배양한 후 세포를 4,000g에서 4°C에서 10분 동안 수거했습니다. 세포를 KPE 완충액 700μl에 펠릿을 재현탁시키기 전에 KPE 완충액으로 2회 세척하였다. 탈단백질화를 위해, 초음파에 의한 세포의 파괴 전에 10%(w/v) 설포살리실산 300μl를 첨가하였다(3 x 1 min; VialTweeter 초음파). 원심분리(30분, 13,000g, 4°C) 후 상층액을 수집했습니다. 설포살리실산 농도는 3 부피의 KPE 완충액을 첨가하여 1%로 감소시켰다. 총 글루타치온 및 GSSG의 측정은 상기한 바와 같이 수행하였다. 세포 글루타치온 농도는 6.7×10-15 리터의 대장균 세포의 부피와 A600 0.5의 세포 밀도(1×108 세포 ml-1 배양에 해당)를 기준으로 계산되었습니다. GSH 농도는 총 글루타치온에서 2[GSSG]를 빼서 계산했습니다. (Müller 외. 2016)
VialTwitter를 사용한 알파-시누클레인 피브릴 단편화
VialTweeter 초음파 발생기는 알파 시누클레인 피브릴 및 리본의 안정적이고 효율적인 단편화에 널리 사용됩니다. VialTweeter를 사용한 알파-시누클레인 단편화에 대한 자세한 설명, 프로토콜 및 참조를 찾으려면 여기를 클릭하십시오!
Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrometry 전에 VialTwitter를 사용한 세포 용해
Bacillus subtilis 168 (trpC2)을 15 분의 항생제 스트레스에 노출시킨 후, 세포를 3,320 x g에서 수확하고, 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7.5로 5 번 세척하고, 10 mM Tris, pH 7.5에 재현탁하고, Hielscher VialTweeter 기기에서 초음파로 파괴했다. (Wenzel 외. 2014)
질량분석법 전 VialTweeter 시료 전처리
인간 CD34 기혈 줄기 / 전구 세포의 동결 건조 된 세포 펠릿을 100 mM 탄산수소 암모늄에 8 M 요소의 10μ (펩타이드 희석 시리즈를위한 벌크 HEK293 제제를위한 200μl)에 재현탁 하 고 60 %의 진폭으로 Hielscher VialTweeter로 초음파 처리하여 용해하고 얼음에서 중간 냉각으로 3 회 동안 20 초의 지속 시간을 유지했습니다. (Amon 외, 2019)
VialPress를 사용한 시료 전처리 프로토콜
신선한 양상추(Lactuca sativa)를 1g 식물(신선 중량)에 200, 100, 50 또는 20mL 완충 용액의 비율로 0.5M HEPES 완충액(pH 8, KOH 조정)에서 균질화했습니다. 완충 용액 부피에 대한 식물 질량의 비율은 총 균질화 부피를 3.5 및 12mL 사이로 유지하기 위해 다양했습니다. 완충 용액 부피에 대한 식물 질량의 비율은 총 균질화 부피를 3.5mL에서 12mL 사이로 유지하기 위해 변경되어 프로브로 균질화가 가능했습니다. 균질화 된 다음 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Germany)가 장착 된 VialTweeter가있는 UP200St를 사용하여 3 분 동안 (80 % 펄스 및 100 % 전력) 간접 초음파를 실시했습니다. 이 장치를 사용하면 오염을 피할 수 있습니다. (Laughton 외. 2019)
초음파 프로세서에 10개의 Eppendorf 바이알이 있는 VialTweeter UP200세인트
VialTweeter를 사용한 초음파 처리 중 안정적인 온도 제어
온도는 생물학적 시료 처리에 특히 중요한 공정에 영향을 미치는 중요한 요소입니다. 모든 기계적 샘플 준비 기술과 마찬가지로 초음파 처리는 열을 생성합니다. 그러나 VialTweeter를 사용할 때 샘플의 온도를 잘 제어할 수 있습니다. 분석을 위해 VialTweeter 및 VialPress로 시료를 준비하는 동안 시료의 온도를 모니터링하고 제어할 수 있는 다양한 옵션을 제공합니다.
- 시료 온도 모니터링 : VialTweeter를 구동하는 초음파 프로세서 UP200St에는 지능형 소프트웨어와 플러그형 온도 센서가 장착되어 있습니다. 온도 센서를 UP200St에 연결하고 온도 센서의 끝을 샘플 튜브 중 하나에 삽입합니다. 디지털 컬러 터치 디스플레이를 통해 UP200St의 메뉴에서 샘플 초음파 처리에 대한 특정 온도 범위를 설정할 수 있습니다. 초음파기는 최대 온도에 도달하면 자동으로 중지되고 샘플 온도가 설정 온도 ∆의 낮은 값으로 내려갈 때까지 일시 중지됩니다. 그런 다음 초음파 처리가 자동으로 다시 시작됩니다. 이 스마트 기능은 열로 인한 성능 저하를 방지합니다.
- VialTweeter 블록은 사전 냉각할 수 있습니다. VialTweeter 블록(변환기가 없는 sonotrode만 해당)을 냉장고나 냉동고에 넣어 티타늄 블록을 사전 냉각하면 샘플의 온도 상승을 연기하는 데 도움이 됩니다. 가능한 경우 샘플 자체도 사전 냉각할 수 있습니다.
- 초음파 처리 중에 식히기 위해 드라이 아이스를 사용하십시오. 드라이 아이스를 채운 얕은 트레이를 사용하고 열이 빠르게 발산될 수 있도록 VialTweeter를 드라이 아이스 위에 놓습니다.
전 세계 고객들은 생물학, 생화학, 의료 및 임상 실험실에서 매일 시료 전처리 작업을 위해 VialTweeter 및 VialPress를 사용합니다. UP200St 프로세서의 지능형 소프트웨어 및 온도 제어, 온도가 안정적으로 제어되고 열로 인한 샘플 저하가 방지됩니다. VialTweeter 및 VialPress를 사용한 초음파 시료 전처리는 매우 신뢰할 수 있고 재현성 있는 결과를 제공합니다!
VialTweeter의 기술적 세부 사항
VialTwitterter는 티타늄으로 만든 블록 소노트로드로, 블록 내 구멍에 최대 10개의 바이알을 담을 수 있습니다. 또한 VialPress를 사용하여 최대 5개의 더 큰 시험관을 VialTweeter 전면에 고정할 수 있습니다. VialTweeter는 초음파 에너지가 삽입 된 각 바이알에 균일하게 분배되어 신뢰할 수 있고 균일 한 초음파 처리 결과를 보장하도록 설계되었습니다. 작은 피벗은 VialTweeter sonotrode를 고르지 않은지면으로 조정하고 시험관을 수직으로 정렬합니다.
VialTwitterter의 장점 한 눈에 보기
- 최대 10 개의 바이알을 동시에 강렬한 초음파 처리
- 높은 초음파 강도에서 혈관 벽을 통해 샘플로 간접 초음파 처리
- 간접 초음파 처리는 교차 오염 및 샘플 손실을 방지합니다.
- 조정 가능하고 제어 가능한 초음파 처리 진폭으로 인한 재현 가능한 결과
- VialPress를 사용하면 더 큰 튜브를 초음파 처리 할 수 있습니다
- 20%에서 100%까지 조정 가능한 진폭
- 0%에서 100%까지 조정 가능한 펄스 모드
- 오토클레이브 가능
VialTwitterer는 UP200세인트, 200 와트의 강력한 초음파 프로세서. UP200St에는 진폭, 초음파 처리 시간, 맥동 및 온도와 같은 모든 중요한 초음파 공정 매개 변수를 정밀하게 제어 할 수있는 지능형 소프트웨어가 장착되어 있습니다. 따라서 VialTwitter는 생물학 및 생화학 실험실에서 성공적으로 재현 가능한 프로세스 결과를 위한 신뢰할 수 있는 도구입니다.
진폭은 20~100% 사이에서 조정할 수 있으므로 시료에 맞게 초음파 강도를 조정할 수 있습니다. 예를 들어, DNA와 RNA의 전단 및 단편화에는 너무 작은 DNA 단편 생성을 방지하기 위해 더 약한 진폭이 필요하고, 마우스 뇌의 조직 균질화에는 고강도 초음파 처리가 필요합니다. UP200St 프로세서의 스마트하고 직관적인 메뉴를 통해 이상적인 진폭, 초음파 처리 강도 및 지속 시간을 선택합니다. 메뉴와 설정은 컬러 터치 디스플레이를 통해 쉽게 액세스하고 조작할 수 있습니다. 설정에서 진폭, 맥동, 사이클 모드, 초음파 처리 시간, 총 에너지 입력 및 온도 제한과 같은 초음파 처리 매개 변수를 미리 설정할 수 있습니다. 연구 및 생산에서는 시험 및 테스트 결과의 반복성이 매우 중요합니다. 이는 공정 조건과 초음파 처리 프로토콜의 정확한 기록이 매우 중요하다는 것을 의미합니다. 자동 데이터 프로토콜링은 모든 초음파 처리 데이터를 통합 SD 카드의 CSV 파일에 기록하므로 다양한 초음파 처리를 쉽게 확인하고 비교할 수 있습니다. 모든 초음파 공정 데이터는 CSV 파일로 쉽게 액세스하고 공유할 수 있습니다.
Hielscher 초음파는 연구 작업을 촉진하고 향상시킬 수있는 첨단 기술을 제공하기 위해 노력합니다!
간접 초음파 처리를위한 VialPress가 있는 VialTwitter.
연구 및 과학에서의 초음파 VialTweeter
VialTwitterer는 200W의 강력한 초음파 프로세서로, 여러 Eppendorf 바이알 또는 유사한 시험관의 초음파 시료 동시 전처리에 적합합니다. 따라서 VialTwitterter는 연구 및 생명 과학을 위한 생물학 및 생화학 실험실에서 자주 사용됩니다. 아래에서 초음파 프로세서 VialTweeter를 특징으로하는 과학 기사를 찾을 수 있습니다. 이 기사는 초음파 시료 균질화, 세포 파괴 및 용해, DNA 전단 및 단편화, 단백질 및 생체 활성 화합물 추출, 코로나바이러스 SARS-CoV-2의 비활성화와 같은 다양한 응용 분야를 다룹니다. 특정 응용 분야 및 관련 과학적 참고 문헌을 찾고 계시다면 당사에 문의하십시오.
- FactSheet VialTweeter VT26dxx – Customized VialTweeter Sonicator for Single Test Tubes or Vials
- FactSheet VialTweeter – Sonicator for Simultaneous Sample Preparation
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초음파 처리 : Hielscher는 타당성 및 최적화에서 상업 생산에 이르기까지 지원합니다!