초음파 VialTweeter와 샘플 준비

초음파 샘플 준비

Ultrasonication is a common technique of sample treatment in order to get the sample ready for analyses such as polymers chain reaction (PCR), Western Blots, assays, molecular sequencing, chromatography etc. Ultrasonication is a technique widely used in laboratories to treat samples pre-analytically. A major advantage of sonication is that the working principle of ultrasound is based on purely mechanical forces. Ultrasonic lysis and cell disruption is achieved by sonomechanical shear forces, which gives ultrasonication the advantage that the solvents used for protein extraction can be used also during lysis. Ultrasonic cell disruptors such as the VialTweeter break the cell walls / membranes and promote mass transfer between cell interior and solvent. Thereby, the analyte (e.g. DNA, RNA, proteins, organelles etc.) are efficiently transferred from the cell matrix into the solvent. This means the steps of quenching and extraction overlap with the ultrasonic cell disruption process, which makes ultrasonic lysis very effective. Furthermore, ultrasonic sample preparation does not require detergents and other lysis reagents, which might alter and destruct the structure of the lysate and is known for the subsequent troubles with purification. Another lysis method, the enzymatic disruption requires long incubation times and delivers often non-reproducible results. Ultrasonic sample preparation overcomes common problems in sample preparation such as tissue homogenization, cell disruption, lysis, protein extraction and lysate solubilization. Since the intensity of the ultrasonic treatment can be exactly controlled and adjusted to the biological sample, degradation and sample loss are avoided. Automatically monitored and controlled sample temperature, pulse mode and sonication duration ensure optimum outcomes.

VialTweeter는 동일한 조건에서 여러 샘플을 동시에 준비해야 하는 실험실 작업에 특히 편리합니다. VialTweeter는 최대 10개의 바이알(예: 에펜도르프, 센트리구지, NUNC 튜브, 냉동 바이알)을 수용할 수 있는 초음파 블록 소노로드로 정밀하게 제어된 조건에서 초음파 처리됩니다. 초음파 에너지는 바이알의 벽을 통해 샘플 매체로 결합되기 때문에, 바이알은 치료 중에 폐쇄 유지됩니다. 따라서 샘플 손실 및 교차 오염은 완전히 피할 수 있습니다.

바이알트위터에 맞는 바이알과 튜브

VialTweeter는 Eppendorf, 원심분리기, 저온 바이알 및 다양한 NUNC 바이알 유형과 같은 10개의 일반적인 원내 또는 원형 튜브를 보유하는 데 적합하지만 요청 시 다른 유리병 및 튜브 크기로 구멍을 사용자 정의할 수 있습니다. VialTweeter를 수정할 수 있도록 어떤 종류의 테스트 튜브를 사용하려는지 알려주시기 바랍니다. 팔콘 튜브 및 기타 테스트 컨테이너, 비커 및 선박과 같은 더 큰 테스트 튜브의 경우 VialPress는 편리한 솔루션입니다.

바이알프레스를 곁들인 바이알트위터

10개의 튜브 구멍이 있는 VialTweeter 자체는 이미 독특하고 기능성이 뛰어난 초음파 장치이지만, VialPress 애드온은 VialTweeter를 더욱 다재다능하고 유연하게 작동할 수 있게 합니다. VialPress는 팔콘 튜브 또는 기타 소형 테스트 비커와 같은 더 큰 샘플 튜브를 VialTweeter 전면에 고정할 수 있는 클램프 온 바로 구성된 VialTweeter용 액세서리입니다. 왼쪽 그림은 블록에 10 Eppendorf 바이알을 들고 VialTweeter를 보여줍니다, VialPress는 초음파 처리를위해 전면에 하나의 더 큰 테스트 튜브를 고정하는 동안. VialPress는 강렬한 초음파 처리를 위해 최대 5 개의 더 큰 테스트 튜브를 보유 할 수 있습니다.

바이알트위터 샘플 준비 프로토콜

VialTweeter는 생물학적 샘플을 초음파 처리하는 데 널리 사용됩니다. 분석 하기 전에, 샘플생 화학 또는 생 물리 분석 및 분석, 예를 들어 리시스, 조직 균질화, 단백질 추출, DNA/RNA 전단, 탈가스 등을 위해 준비 해야 합니다. VialTweeter는 이러한 초음파 프로세스를 안정적으로 이행하고 재현 가능한 결과를 제공합니다. VialTweeter의 일반적인 적용은 포유류 (인간 및 동물) 조직뿐만 아니라 박테리아 세포 및 바이러스 성 입자의 용해 / 세포 중단입니다. 성공적으로 바이알노처 처리 된 생물학적 샘플은 인간의 폐 상피 세포, 혈액 투석 줄기 세포, 골수성 백혈병 세포를 포함, 대장균, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 탄트라시스, 프란세엘라 투라렌시스, 예르시니아 해충, 연쇄상 구균 표유전자, 콜로박터 초승달, 마이코플라즈마 폐렴, 진균균/진균결핵 복합체(MTBC) 및 기타 많은 세균성, 식물성 및 미생물 세포.
아래에서 VialTweeter가 포함된 몇 가지 선택한 프로토콜을 찾을 수 있습니다.

E.Coli Lysis 와 VialTweeter 용 인 비보 글루타티온 결정

균주 MG1655의 대장균 박테리아는 0.5의 A600에 도달할 때까지 총 200ml의 모PS 최소 배지에서 성장하였다. 배양은 스트레스 치료를 위해 50ml 배양으로 분할되었습니다. 0.79mM 알리신, 1mM 디아미드 또는 디메틸 설산화물(대조군)을 가진 15분 의 배양 후, 세포는 4°C에서 4,000g에서 10분 동안 수확하였다. 세포는 KPE 버퍼의 700μl에서 펠릿의 재주중단 전에 KPE 버퍼로 두 번 세척하였다. 탈단백질화를 위해, 300μl의 10% (w/v) 설포살리실산은 초음파에 의한 세포의 중단 이전에 첨가되었다(3 x 1 분; 바이알트위터 초음파 처리기). 중신자는 원심분리 후 수집하였다(30분, 13,000g, 4°C). 설포살리실산 농도는 KPE 버퍼 3부의 첨가에 의해 1%로 감소하였다. 상기와 같이 총 글루타티온 및 GSSG의 측정이 수행되었다. 세포글루타티온 농도는 6.7×10-15리터의 대장균 세포의 부피와 A600 0.5의 세포 밀도(1×108세포 ml-1 배양에 해당)를 기준으로 계산하였다. GSH 농도는 총 글루타티온으로부터 2[GSSG]의 빼기에 의해 계산되었다. (뮐러 외 2016)

흑연 용광로 원자 흡수 분광법 전에 바이알 트위터와 세포 용해

바실러스 서브틸리스(trpC2)는 항생제 스트레스 15분에 노출된 후 세포가 3,320xg에서 수확되었고, 100mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5로 5회 세척하고, 10mM Tris, pH 7.5로 리월, 10mM Tris, pH 7.5로 리텐시처리되어 하이트윗 기구에서 초음파처리에 의해 중단되었다. (웬젤 외 2014)

질량 분석 전에 바이알 트위터 샘플 준비

인간 CD34􏰀 혈안이줄기/전조세포의 리오필화된 세포 펠릿은 8M 우레아의 10μ􏰇􏰇93제제용 200μl)에서 재장매되었다. 100mM 암모늄 탄산수소탄산염과 용액은 60%의 진폭으로 Hielscher VialTweeter와 초음파 처리에 의해 지원되며, 얼음에 중간 냉각을 통해 3회 동안 60%의 사이클과 20대의 지속 시간을 제공합니다. (아몬 외 2019)

바이알프레스를 사용한 샘플 준비 프로토콜

신선한 양상추(Lactuca sativa)는 0.5M HEPES 버퍼(pH 8, KOH 조정)에서 200, 100, 50 또는 20mL 완충액의 비율로 균질화되었다. 플랜트 질량대 완충액 부피의 비율은 총 균주 부피를 3.5m~12mL 사이로 유지하기 위해 다양하였다. 플랜트 질량대 완충액 부피의 비율은 3.5ml에서 12mL 사이의 총 균질화 부피를 유지하기 위해 다양하여 프로브와 균일화를 가능하게 하였다. 그런 다음 200xt VialPress (Hielscher 초음파 GmbH, 독일)가 장착된 VIalTweeter가 장착된 UP200St를 사용하여 간접 초음파를 3분(80% 펄스 및 100% 전력)에 사용했습니다. 이 장치를 사용하면 오염을 피했습니다. (2019년 로튼 외)

VialTweeter와 초음파 처리 중 신뢰할 수 있는 온도 제어

온도는 생물학적 시료의 치료에 특히 중요한 중요한 공정-영향을 미치는 인자입니다. 모든 기계적 샘플 준비 기술로 초음파 처리는 열을 생성합니다. 그러나 VialTweeter를 사용할 때 샘플의 온도를 잘 제어할 수 있습니다. 분석을 위해 VialTweeter 및 VialPress로 준비하는 동안 샘플의 온도를 모니터링하고 제어할 수 있는 다양한 옵션을 제공합니다.

1. 샘플 온도 모니터링: VialTweeter를 구동하는 초음파 프로세서 UP200St에는 지능형 소프트웨어와 플러그형 온도 센서가 장착되어 있습니다. 온도 센서를 UP200St에 연결하고 온도 센서의 끝을 샘플 튜브 중 하나에 삽입합니다. 디지털 컬러 터치 디스플레이를 통해 UP200St의 메뉴에서 시료 초음파 처리를 위한 특정 온도 범위로 설정할 수 있습니다. 초음파 는 최대 온도에 도달하면 자동으로 멈추고 샘플 온도가 세트 온도의 낮은 값까지 내려갈 때까지 ∆. 그런 다음 초음파 처리가 자동으로 다시 시작됩니다. 이 스마트 기능은 열로 인한 저하를 방지합니다.
2. 바이알트위터 블록을 미리 냉각할 수 있습니다. 비알트위터 블록을 냉장고 나 냉동실에 넣어 티타늄 블록을 미리 냉각하여 샘플의 온도 상승을 연기합니다. 가능하면 샘플 자체도 미리 냉각될 수 있습니다.
3. 음향 중에 식히려면 드라이 아이스를 사용하십시오. 드라이 아이스로 채워진 얕은 트레이를 사용하여 VialTweeter를 드라이 아이스에 배치하여 열이 빠르게 사라질 수 있도록 합니다.

전 세계 고객은 생물학적, 생화학, 의료 및 임상 실험실에서 매일 샘플 준비 작업을 위해 VialTweeter및 VialPress를 사용합니다. UP200St 프로세서의 지능형 소프트웨어 및 온도 제어는 온도가 안정적으로 제어되고 열에 의한 시료 분해를 피합니다. VialTweeter 및 VialPress를 이용한 초음파 샘플 준비는 매우 신뢰할 수 있고 재현 가능한 결과를 제공합니다!

바이알트위터의 기술 적 정보

VialTweeter는 블록 내구멍에 최대 10개의 바이알을 보관할 수 있는 티타늄으로 만든 블록 소노로드입니다. 또한 VialPress를 사용하여 최대 5개의 더 큰 테스트 튜브를 VialTweeter 전면에 고정할 수 있습니다. VialTweeter는 초음파 에너지가 각 삽입 된 유리병에 균일하게 분산되어 안정적이고 균일한 초음파 처리 결과를 보장하도록 설계되었습니다. 작은 피벗은 VialTweeter를 고르지 않게 조정하여 고르지 않은 지면으로 조정하고 테스트 튜브를 수직으로 정렬합니다.

바이알 트위터의 장점

• 최대 10 개의 바이알을 동시에 강하게 초음파 처리
• 샘플에 용기 벽을 통해 높은 초음파 강도에서 간접 초음파 처리
• 간접 초음파 처리는 교차 오염 및 샘플 손실을 방지합니다.
• 조정 가능하고 제어 가능한 초음파 처리 진폭으로 인한 재현 가능한 결과
• VialPress를 사용하면 더 큰 튜브를 초음파 처리 할 수 있습니다.
• 20~100% 조정 가능한 진폭
• 가변 펄스 모드 0 ~ 100 %
• 오토 클레이브 가능

바이알트위터는 UP200St, 200 와트 강력한 초음파 프로세서. UP200St에는 진폭, 초음파 처리 시간, 맥동 및 온도와 같은 모든 중요한 초음파 공정 파라미터를 정밀하게 제어할 수 있는 지능형 소프트웨어가 장착되어 있습니다. 이것은 VialTweeter생물학과 생화학 실험실에서 성공적인 재현 가능한 프로세스 결과를 위한 믿을 수 있는 공구로 만듭니다.
진폭은 20~100% 사이로 조절할 수 있으며, 이를 통해 초음파 강도를 시료에 맞게 조정할 수 있습니다. 예를 들어, DNA와 RNA의 전단 및 단편화는 너무 작은 DNA 단편의 생산을 방지하기 위해 온화한 진폭을 필요로하며, 마우스 뇌의 조직 균질화는 고강도 초음파 처리가 필요합니다. UP200St 프로세서에서 스마트하고 직관적인 메뉴를 통해 이상적인 진폭, 초음파 처리 강도 및 지속 시간을 선택하십시오. 메뉴와 설정은 컬러 터치 디스플레이를 통해 쉽게 액세스하고 작동할 수 있습니다. 설정에서 진폭, 맥동 / 사이클 모드, 초음파 처리 기간, 총 에너지 입력 및 온도 제한과 같은 초음파 처리 매개 변수를 미리 설정할 수 있습니다. 연구 및 생산에서 시험 및 테스트 결과의 반복성이 중요합니다. 즉, 공정 조건 및 초음파 프로토콜의 정확한 기록은 완전히 중요합니다. 자동 데이터 프로토콜은 모든 초음파 처리 데이터를 통합 SD 카드의 CSV 파일에 기록하므로 다양한 초음파 처리 실행을 쉽게 확인하고 비교할 수 있습니다. 모든 초음파 공정 데이터는 CSV 파일로 쉽게 액세스하고 공유할 수 있습니다.
Hielscher 초음파는 연구 작업을 용이하게하고 개선하기 위해 고급 기술을 제공하기 위해 노력합니다!