Hielscher VialTweeter는 코로나바이러스 SARS-COV-2를 비활성화하는 데 사용되는 독특한 초음파 다중 샘플 준비 장치입니다. VialTweeter는 최대 10개의 샘플 바이알을 동시에 준비할 수 있게 해주며 대량 시료 처리를 위한 이상적인 단위입니다.

VialTweeter와 SARS-CoV-2 코로나바이러스의 불활성화

고착을 제거한 후, 단층은 1mL MEM/5% FBS로 세포를 긁어내고 히엘셔 초음파 프로세서를 사용하여 1mL MEM/5% FBS로 세포를 긁어내고 초음파 처리(3× 10초, 100% 출력 및 진폭으로 10초 끄기)로 인산염 완충식식식염(PBS)으로 세 번 세척하였다. UP200St 위드 바이알트위터 첨부 파일. 수퍼나일체는 10분 동안 3000g의 원심분리로 10분 간 ×. 

아래 의 Welch 외에 의해 SARS-CoV-2 코로나바이러스 비활성화에 대한 전체 프로토콜을 여기에서 읽어보십시오.

세포 및 바이러스

베로 E6 세포 (베로 C1008; ATCC CRL-1586은 10%(v/v) 태아 종아리 혈청(FCS)으로 보충된 수정된 이글의 최소 필수 매체(MEM)에서 배양되었다. 사용된 바이러스는 SARS-CoV-2 균주 hCOV-19/잉글랜드/2/2020, 29/01/2020에 영국에 있는 첫번째 참을성 있는 클러스터에서 PHE에 의해 격리되었습니다. 이 바이러스는 통로 1에서 얻어졌고 2 또는 3 통로에서 비활성화 연구에 사용되었습니다.
SARS-CoV-2 불활성화에 사용되는 시약 및 화학 물질뿐만 아니라 시약 세포 독성제거에 대한 과학적 보고서를 참조하십시오.(2020).

세제에 의한 바이러스 불활성화 – SarS-CoV-2 코로나바이러스 불활성화 프로토콜 웰치 외 2020

SARS-CoV-2 비활성화

상용 제품의 경우, 바이러스 제제(조직 배양액, 1× 10에 이르는 티터⁶ 1 × 10까지⁸ PFU/ml)는 제조업체의 사용 지침, 사용 가능 시, 또는 시험 실험실에서 특별히 요청한 농도 및 시간에 대해 시약으로 삼중시약으로 처리하였다. 제조업체가 농도 범위를 부여한 경우, 시료에 대한 제품의 가장 낮은 비율(즉, 테스트 제품의 가장 낮은 권장 농도)을 테스트했습니다. 시편 수송관 시약은 시약에 대한 시료 액의 부피 비율이 제조사에 의해 지정되지 않는 한 10부분량의 조직 배양액을 10부량의 시약을 사용하여 시험하였다. 세제, 고정제 및 용매는 표시된 시간에 대한 표시된 농도에서 테스트되었습니다. 모든 비활성화 단계는 주변 실온(18 ~ 25°C)에서 수행되었습니다. 대체 샘플 유형의 테스트를 위해 바이러스는 1:9의 비율로 표시된 샘플 매트릭스로 스파이크된 다음 위와 같이 테스트 시약으로 처리되었습니다. 모든 실험에는 테스트 시약 대신 PBS의 동등한 부피를 가진 삼중 대조군 모의 처리 샘플을 포함하였다. 필요한 접촉 시간 직후, 처리된 샘플의 1mL은 적절히 선택된 여과 매트릭스를 사용하여 처리되었다. 불활성화 테스트를 위한 시약 제거는 피어스 4mL 세제 제거 스핀 컬럼(Thermo Fisher)을 사용하여 더 큰 스핀 컬럼 형식으로 수행되거나, SM2 바이오 비즈, 세바크릴 S-400HR 또는 세바덱스 LH-20을 사용하여 빈 피어스 10mL 용량 원심분리기 컬럼(Thermo Fisher)을 채우고 4mL 포장 비드/리하이드를 제공하였다. Amicon 필터를 사용하여 정화를 위해, 2 × 500μl 샘플은 이전에 설명된 방법에 의해 2개의 원심 필터를 사용하여 정제한 다음 함께 풀을 하였다. 글루타랄데히드 제거를 사용한 포름알데히드와 포름알데히드의 경우, 1개의 필터를 1× 500μl 샘플 부피와 함께 사용되었고, 500μl PBS에서 처리한 후 재중단되고 400ul MEM/5% FBS에 추가되었습니다. 감염의 불활성화를 위해 단층층, 12.5 cm² 베로 E6 셀의 플라스크 (2.5 × 10⁶ 2.5mL MEM/5% FBS의 세포/플라스크는 MOI 0.001에 감염되어 37°C/5% CO에서 배양되었습니다.₂ 24 시간 동안. 수퍼나탄트제거, 5mL의 포름알데히드, 또는 포름알데히드 및 글루타랄데히드를 15분 또는 60분 동안 실온에서 사용하여 고정된 세포. 고정을 제거하고, 단층은 1mL MEM / 5 % FBS로 세포를 긁어 전에 PBS와 세 번 세척하고 초음파 (3 × 10 초, 100 % 전력 및 진폭에서 10 초 오프) VialTweeter 첨부 (Hielscher 초음파 기술)와 UP200St를 사용하여. 수퍼나일체는 10분 동안 3000g의 원심분리로 10분 간 ×.

Welch et al. 2020의 프로토콜에 따라 초음파 VialTweeter와 SARS-CoV-2 코로나바이러스 비활성화에 사용되는 시약의 세부 사항

Hielscher VialTweeter의 사용을 포함한 전체 프로토콜은 여기에서 찾을 수 있습니다.
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

정교한 초음파 디임브레이터 및 세포 파괴자

다중 시료 초음파 처리기 VialTweeter는 생물학, 생화학 및 임상 실험실에서 시료 준비를 위한 많은 초음파 솔루션 중 하나에 불과합니다. Hielscher 초음파는 세포 용해, 세포 추출, 조직 균질화, 용해성, 용해화, 용해, 용해, 용해, 샘플 탈기 등과 같은 응용 분야에 이상적인 초음파 분해제를 제공합니다.
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