Hielscher 초음파 기술

초음파에 의한 BL21 세포의 세포 리시스

BL21 세포는 단백질을 매우 효율적으로 표현하는 능력으로 인해 연구 실험실, 생명 공학 및 산업 생산에 널리 사용되는 대장균의 균주입니다. 초음파 세포 중단, 리시스 및 단백질 추출은 BL21 세포의 세포 내부에서 표적 단백질을 분리하고 수집하는 일반적인 방법입니다. 초음파는 세포를 완전히 방해하고 모든 갇힌 단백질을 방출하여 단백질의 100 %를 사용할 수 있습니다.

단백질 발현을 위한 BL21 세포

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 세포는 T7 RNA 폴리머라제-IPTG 유도 시스템을 이용하여 변형 및 고수준 단백질 발현에 적합한 화학적으로 유능한 대장균 균주이다. BL21 세포는 T7 프로모터의 통제하에 있는 임의의 유전자의 고효율 단백질 발현을 허용합니다. 대장균 균주 BL21(DE3)은 T7 RNA 폴리머라제 계 단백질 생산 균주와 T7 프로모터 기반 발현 벡터와 결합되어 재조합 단백질을 생산하기 위해 실험실 및 산업에서 널리 적용된다. BL21(DE3)에서, 재조합 단백질을 코딩하는 유전자의 발현은 기존의 대장균 RNAP보다 8배 빠른 크로모솜인 T7 RNA 폴리머라제(T7 RNAP)에 의해 전사된다. 이것은 변형 BL21 (DE3)를 높게 능률하게 하고 가장 바람직한 단백질 발현 세포 시스템 중 하나로 바뀝니다.

BL21 세포에서 초음파 용해 및 단백질 추출을위한 프로토콜

BL21 세포의 세포 용해는 주로 리시스 버퍼로서 나트륨 라우로일 사르코시나테(sarkosyl라고도 함)와 함께 초음파를 사용하여 수행됩니다. 초음파 세포 파괴 및 단백질 추출의 장점은 초음파 의 신뢰성, 재현성뿐만 아니라 간단하고 안전하며 신속한 작동에 있습니다. 아래 프로토콜은 초음파 BL21 세포 용해에 대한 단계별 방향을 제공합니다.

용해 용 probe-type insonifier UP200St

초음파 세포 파괴기 UP200St 용해 및 단백질 추출을 위한 마이크로 팁 S26d2

정보 요청




우리의 주의 개인 정보 정책.


  • 샤페론 단백질을 제거하기 위해 BL21 세균성 펠릿은 얼음 냉간 나트륨 트리스-EDTA(STE) 버퍼(10m Tris-HCL, pH 8.0, 1mM EDTA, 150mM NaCl10M PMSF로 보충됨)로 50ml의 얼음 냉간 나트륨 트리스-EDTA(STE)로 재장매되었다.
  • 는, 500 ul of lysozyme (10 mg/ ml)를 첨가하고 세포는 15 분 동안 얼음에 배양됩니다.
  • 그 후, DTT의 500 ul과 7 ml의 사르코실(STE 버퍼로 구성)이 추가됩니다.
  • 모든 정제 버퍼를 얼음으로 차갑게 유지하고 항상 얼음 에 샘플을 유지하는 것이 필수적입니다. 모든 정화 단계는 가능하면 차가운 방에서 수행해야합니다.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • 초음파 용해 및 단백질 추출을 위해 샘플은 바이알트위터 멀티샘플 초음파 처리기 각 초음파 처리 사이에 2 분 간격으로 100 % 진폭에서 4 x 30 초. 또는 마이크로 팁이 있는 프로브 형 초음파 균질화제(예: UP200Ht S26d2(3 x 30초, 초음파 주기 간 2분, 진폭 80%)를 사용하면 사용할 수 있습니다.
  • 추가 정화 단계를 위해 샘플을 얼음 위에 보관하거나 추가 처리가 있을 때까지 -80°C에 보관해야 합니다.

프리시체 온도 제어 하에 초음파 리시스

정밀하고 신뢰할 수 있는 온도 조절은 생물학적 샘플을 처리할 때 매우 중요합니다. 고온은 시료에서 열유발 단백질 분해를 시작합니다.
모든 기계적 샘플 준비 기술로 초음파 처리는 열을 생성합니다. 그러나 VialTweeter를 사용할 때 샘플의 온도를 잘 제어할 수 있습니다. 분석을 위해 VialTweeter 및 VialPress로 준비하는 동안 샘플의 온도를 모니터링하고 제어할 수 있는 다양한 옵션을 제공합니다.

  1. 샘플 온도 모니터링: VialTweeter를 구동하는 초음파 프로세서 UP200St에는 지능형 소프트웨어와 플러그형 온도 센서가 장착되어 있습니다. 온도 센서를 UP200St에 연결하고 온도 센서의 끝을 샘플 튜브 중 하나에 삽입합니다. 디지털 컬러 터치 디스플레이를 통해 UP200St의 메뉴에서 시료 초음파 처리를 위한 특정 온도 범위로 설정할 수 있습니다. 초음파 는 최대 온도에 도달하면 자동으로 멈추고 샘플 온도가 세트 온도의 낮은 값까지 내려갈 때까지 ∆. 그런 다음 초음파 처리가 자동으로 다시 시작됩니다. 이 스마트 기능은 열로 인한 저하를 방지합니다.
  2. 바이알트위터 블록을 미리 냉각할 수 있습니다. 비알트위터 블록을 냉장고 나 냉동실에 넣어 티타늄 블록을 미리 냉각하여 샘플의 온도 상승을 연기합니다. 가능하면 샘플 자체도 미리 냉각될 수 있습니다.
  3. 음향 중에 식히려면 드라이 아이스를 사용하십시오. 드라이 아이스로 채워진 얕은 트레이를 사용하여 VialTweeter를 얼음 위에 놓아 열이 빠르게 사라질 수 있도록 합니다.

전 세계 고객은 생물학적, 생화학, 의료 및 임상 실험실에서 매일 샘플 준비 작업을 위해 VialTweeter및 VialPress를 사용합니다. UP200St 프로세서의 지능형 소프트웨어 및 온도 제어는 온도가 안정적으로 제어되고 열에 의한 시료 분해를 피합니다. VialTweeter 및 VialPress를 이용한 초음파 샘플 준비는 매우 신뢰할 수 있고 재현 가능한 결과를 제공합니다!

리시스 애플리케이션을 위한 최적의 초음파 파괴기 찾기

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher 초음파는 실험실, 벤치 탑 및 산업 규모의 시스템을 위한 고성능 초음파 세포 파괴기 및 균질화제제조업체의 오랜 경험이 풍부한 제조업체입니다. 세균세포 배양 크기, 연구 또는 생산 목표 및 시간당 또는 일당 처리하는 세포의 양은 응용 분야에 적합한 초음파 세포 파괴기를 찾는 데 필수적인 요소입니다.
Hielscher 초음파는 다중 샘플 (VialTweeter와 최대 10 개의 바이알)과 질량 샘플 (즉,) 동시 초음파 처리를위한 다양한 솔루션을 제공합니다. UIP400MTP를 장착한 마이크로티터 플레이트/ELISA 플레이트뿐만 아니라 50~400와트의 다양한 전력 레벨을 가진 고전적인 프로브 형 실험실 초음파처리기, 대규모 생산시 상업용 세포 파괴 및 단백질 추출을 위해 단위당 최대 16,000와트의 완전 산업용 초음파 프로세서에 이르기까지 다양한 전력 레벨을 제공합니다. 모든 Hielscher 초음파 는 전체 부하에서 24/7/365 작업을 위해 제작되었습니다. 견고성과 신뢰성은 초음파 장치의 핵심 기능입니다.
모든 디지털 초음파 균질화에는 스마트 소프트웨어, 컬러 터치 디스플레이 및 자동 데이터 프로토콜이 장착되어 있어 초음파 장치를 실험실 및 생산 시설에서 편리한 작업 도구로 만듭니다.
생물학적 샘플을 처리해야 하는 빈도와 대상을 사용하여 어떤 종류의 세포, 어떤 부피, 어떤 표적을 알려주세요. 공정 요구 사항에 가장 적합한 초음파 세포 파괴장치를 추천합니다.

아래 표는 컴팩트한 휴대용 균질화 및 멀티샘플 초음파 처리기에서 상업용 애플리케이션을 위한 산업용 초음파 프로세서에 이르기까지 초음파 시스템의 대략적인 처리 능력을 나타냅니다.

일괄 볼륨 유량 권장 장치
96웰/마이크로티터 플레이트 N.A. UIP400MTP
10 바이알 à 0.5 ~ 1.5mL N.A. UP200St의 VialTweeter
0.01 ~ 250mL 5 ~100mL/분 UP50H
0.01 ~ 500mL 10 ~ 200mL / min UP100H
10 ~ 2000mL 20 ~ 400 mL / min UP200Ht, UP400St
0.1 ~ 20L 0.2 ~ 4L / min UIP2000hdT
10 ~ 100L 2 ~ 10L / min UIP4000hdT
N.A. 10 ~ 100L / min UIP16000
N.A. 더 큰 의 클러스터 UIP16000

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추가 정보 요청

초음파 프로세서, 응용 프로그램 및 가격에 대한 추가 정보를 요청하려면 아래 양식을 사용하십시오. 우리는 당신과 당신의 프로세스를 토론하고 당신에게 당신의 요구 사항을 충족하는 초음파 시스템을 제공 하게되어 기쁩니다!









주의 하시기 바랍니다 개인 정보 정책.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

초음파기 UP200Ht 작은 샘플의 초음파 처리를위한 2mm 마이크로 팁 S26d2와 함께

문학 / 참고 문헌



알만한 가치가있는 사실

에체리치아 콜리 균

대장균은 박테리아 유형으로, 비포자 형성, 그람 음성이며 직선 막대의 형태를 특징으로합니다. 대장균 박테리아는 인간과 동물의 환경, 음식 및 장에 존재합니다. 대장균은 일반적으로 음류 성 플래셀라를 사용하여 motile, 하지만 비 momotile 유형도 있다. 대장균은 소위 치료성 혐기성 케무어가노트로프 유기체이며, 이는 호흡기 및 발효 대사를 모두 할 수 있다는 것을 의미합니다. 대부분의 대장균 유형은 양성이며 인체에서 유용한 기능을 수행하며, 예를 들어 유해한 세균 종의 성장을 억제하고 비타민을 합성하는 등의 유용한 기능을 수행합니다.
소위 B 형의 대장균 박테리아 세포는 박테리아 감도 또는 제한 수정 시스템과 같은 메커니즘을 조사하기 위해 연구에서 널리 사용되는 대장균 균주의 특별한 범주입니다. 또한, 대장균 균은 생명 공학 및 생명 과학 실험실에서 단백질 발현에 대 한 신뢰할 수 있는 주력으로 평가. 예를 들어, E.coli는 산업 규모에 단백질 과 올리고당과 같은 화합물을 합성하는 데 사용됩니다. 프로테아제 결핍, 높은 수준의 포도당에서 의 낮은 아세테이트 생산 및 향상된 투과성과 같은 특정 특징으로 인해 대장균 B 세포는 유전자 조작 단백질의 생산을 위해 호스트 세포를 가장 자주 사용합니다.

재조합 단백질

재조합 단백질(rProt)은 화학 생산, 제약, 화장품, 인간 및 동물 의학, 농업, 식품 및 폐기물 처리 산업을 포함한 매니폴드 지점에서 상당한 중요성을 얻고 있다.
재조합 단백질의 생산은 발현 시스템의 사용을 요구한다. 재조합 DNA의 생산을 위한 세포 시스템을 발현하는 바와 같이, 원핵세포와 진핵세포 모두 사용될 수 있다. 세균 세포는 저렴한 비용, 쉬운 확장성 및 간단한 미디어 조건, 포유류, 효모, 조류, 곤충 및 세포없는 시스템과 같은 요인으로 인해 단백질 발현에 가장 널리 사용되는 반면 대안이 확립됩니다. 단백질 유형, 기능활성, 발현 단백질의 필수 수율은 단백질 발현에 사용되는 세포 시스템의 선택에 영향을 미친다.
재조합 단백질을 발현하기 위해서는, 특정 세포는 재조합 DNA의 템플릿을 포함하는 DNA 벡터로 전감염되어야 한다. 템플릿으로 감염된 세포가 배양됩니다. 세포 메커니즘의 결과로, 세포는 관심있는 단백질을 전사하고 번역하여 표적 단백질을 생산합니다.
발현 된 단백질은 세포 매트릭스에 갇혀 있기 때문에, 세포는 단백질을 방출하기 위하여 lysed (중단되고 깨진) 되어야 합니다. 후속 정화 단계에서 단백질은 분리되고 정제됩니다.
치료에 사용 된 첫 번째 재조합 단백질은 1982 년에 재조합 인간 인슐린이었다. 오늘날, 170가지 이상의 재조합 단백질이 전 세계적으로 의료 치료를 위해 생산되고 있습니다. 의학에서 일반적으로 사용되는 일반적으로 사용되는 재조합 단백질은 예를 들어 재조합 호르몬, 인터루콘, 성장 인자, 종양 괴사 인자, 혈액 응고 요인, 혈전용 약물 및 당뇨병, 왜소증, 심근 경색, 울혈성 심부전, 대뇌 아포플렉스, 다발성 경화증, 호중구 감소증, 혈전 세포피증, 빈혈증, 간염, 혈전, 혈청암, 혈전 및 혈전 성 병, 혈전 성병, 혈전 성병, 혈청병 및 혈청병 과 같은 주요 질병 치료용 효소. (2018년 오믹스 테크놀로지스 앤 바이오 엔지니어링)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

고성능 초음파! Hielscher의 제품 범위는 벤치 탑 유닛을 통해 소형 실험실 초음파 처리기에서 풀 산업 초음파 시스템에 이르기까지 전체 스펙트럼을 다룹니다.