초음파로 준비된 완충액
용해 완충액은 초음파 조직 균질화기를 사용하여 효율적이고 신속하게 준비할 수 있습니다. 초음파기는 혼합, 용해 및 분산을위한 꿈의 도구이기 때문에 용해 완충액을 안정적이고 사용자 친화적으로 준비 할 수 있습니다.
Lysis Buffers의 초음파 준비
초음파 조직 균질화기는 세포 파괴, 용해 및 추출을 위한 일반적인 도구이므로 대부분의 실험실에서 사용할 수 있습니다. 프로브 형 초음파의 2 차 응용 분야는 용해 완충액을 준비하는 것입니다.
용해 완충액은 다운스트림 분석을 위해 개방(용해) 세포를 파괴하고 내용물을 방출하는 데 사용되는 용액입니다. lysis buffer의 구체적인 조성은 용해되는 세포의 유형과 다운스트림 응용 분야에 따라 달라질 수 있습니다. 그러나 일반적인 용해 완충액에는 세제, 염 및 프로테아제 억제제와 같은 성분이 포함되어 있습니다. 완충염(예: Tris-HCl) 및 이온염(예: NaCl)은 일반적으로 용해물의 pH와 삼투압을 조절하는 데 사용됩니다.
용해 완충액을 만들기 위해 성분을 적절한 농도와 pH로 함께 혼합합니다. 혼합물은 일반적으로 성분이 용해되고 용액이 균질해질 때까지 교반하거나 흔듭니다.
초음파 균질화는 구성 요소의 혼합 및 용해를 개선하여 우수한 용해 완충액을 만드는 데 사용할 수 있는 방법입니다. 이 방법에서는 초음파가 – 일반적으로 20 - 30 kHz 범위 – 혼합물에 적용되어 붕괴되고 강렬한 국부 에너지를 생성하는 캐비테이션 기포를 생성하여 구성 요소의 기계적 전단 및 혼합을 유발합니다.
초음파 균질화 공정은 구성 요소의 덩어리 또는 응집체를 분해하고 용액이 균일하게 혼합되도록 하는 데 도움이 될 수 있습니다. 결과적으로, 이러한 개선된 lysis buffer는 보다 효율적인 세포 파괴와 추출된 물질의 더 높은 수율로 이어질 수 있습니다. 또한 초음파 균질화는 기존의 교반 또는 진탕 방법에 비해 용해 완충액을 만드는 데 필요한 시간을 줄일 수 있습니다.
전반적으로, 초음파 균질화는 용해 완충액 준비의 품질과 효율성을 개선하기 위한 강력한 도구입니다.
초음파 실험실 균질화 기 UP200Ht 샘플 준비, 용해, 추출, DNA 단편화 및 용해를 위한 연구 실험실에서 인기가 있습니다.
초음파 용해 완충액 준비를 위한 프로토콜
이것은 프로브 형 초음파기를 사용하여 용해 버퍼를 만들기위한 일반적인 프로토콜입니다.
자료:
- 선택한 세제(예: Triton X-100, SDS, CHAPS)
- 선택한 소금(예: NaCl, KCl)
- 프로테아제 억제제(예: PMSF, 아프로티닌, 류펩틴)
- 초음파발생기
- 교 반기
- 탈이온수
- pH 측정기 또는 pH 스트립
단계별 지침:
- 용해할 세포 또는 조직과 용해물을 사용할 다운스트림 응용 분야에 따라 용해 완충액의 조성을 결정하십시오. 원하는 농도의 세제, 염 및 프로테아제 억제제의 원액을 준비합니다.
- 세제, 염분 및 프로테아제 억제제의 원액을 비커나 플라스크에 추가합니다.
- 탈이온수를 추가하여 원하는 완충액 양까지 부피를 높입니다.
- 사전 혼합 용액을 얻기 위해 교반기를 사용하여 구성 요소를 혼합합니다.
- pH 측정기 또는 pH 스트립을 사용하여 완충액의 pH를 측정하고 소량의 산 또는 염기로 필요에 따라 pH를 조정합니다.
- 프로브 형 초음파를 사용하여 프리 믹스 용액을 균질화하여 매우 균질 한 용액을 얻습니다. 따라서 용액이 완전히 혼합되고 덩어리 또는 응집체가 분해 될 때까지 몇 초 동안 용액을 초음파 처리합니다. 초음파 처리의 지속 시간과 힘은 사용 된 특정 용해 완충액 및 초음파기에 따라 최적화 할 수 있습니다.
- 초음파 처리 후 완충액의 pH를 다시 측정하고 필요에 따라 조정하십시오.
- 0.2 미크론 필터를 통해 완충액을 여과하여 초음파 처리 중에 형성되었을 수 있는 파편이나 응집체를 제거합니다.
- 이제 lysis 버퍼를 사용할 준비가 되었습니다.
참고: 용해 완충액의 정확한 조성 및 pH는 용해되는 세포 또는 조직과 다운스트림 응용 분야에 따라 달라질 수 있습니다. 위의 프로토콜은 일반적인 지침이며 특정 애플리케이션에 맞게 최적화해야 할 수 있습니다.
초음파 균질화기는 세포 파괴 및 세포 내 분자 추출에 일반적으로 사용됩니다. 따라서 많은 용해 응용 분야에서는 용해 완충액의 준비뿐만 아니라 기계적 세포 파괴 및 추출을 위해 프로브 형 초음파 처리를 사용합니다.
이것은 초음파 조직 균질화기를 실험실을위한 다목적 도구로 만들고 미생물학, 생명 공학 및 생명 과학에서 초음파기의 광범위한 사용을 설명합니다.
초음파 실험실 균질화기
Hielscher 초음파는 다양한 정격 전력 및 샘플 볼륨에서 초음파 균질화 기 및 프로브 (소노트로드)를 제조 및 공급합니다. 이를 통해 시료 전처리에 가장 적합한 초음파 교반기를 제공할 수 있습니다. 우리는 최고 품질, 뛰어난 사용자 편안함 및 신뢰할 수있는 초음파 처리 결과에 중점을 둡니다. 모든 디지털 초음파기는 스마트 소프트웨어, 초음파 처리 프로토콜의 프로그래밍 및 사전 설정, 브라우저 원격 제어, 온도 제어, 샘플 조명 및 내장 SD 카드의 자동 데이터 기록 기능을 갖추고 있습니다.
설계, 제조 및 컨설팅 – 독일에서 만든 품질
Hielscher 초음파는 최고의 품질과 디자인 표준으로 잘 알려져 있습니다. 견고 함과 쉬운 작동으로 초음파를 산업 시설에 원활하게 통합 할 수 있습니다. 거친 조건과 까다로운 환경은 Hielscher 초음파기로 쉽게 처리 할 수 있습니다.
Hielscher 초음파는 ISO 인증 회사이며 최첨단 기술과 사용자 친화성을 갖춘 고성능 초음파에 특히 중점을 둡니다. 물론, Hielscher 초음파는 CE를 준수하며 UL, CSA 및 RoHs의 요구 사항을 충족합니다.
아래 표는 다양한 실험실 초음파기에 대한 개요를 제공합니다.
| UP200St의 VialTweeter | 200와트 | 26kHz | 작은 바이알의 초음파(예: Eppendorf 1.5mL) |
| 업50H | 50와트 | 30kHz | 휴대용 또는 스탠드 장착형 실험실 균질화기 |
| 업100H | 100와트 | 30kHz | 휴대용 또는 스탠드 장착형 실험실 균질화기 |
| UP200HT | 200와트 | 26kHz | 휴대용 또는 스탠드 장착형 실험실 균질화기 |
| UP200세인트 | 200와트 | 26kHz | 스탠드 장착형 실험실 균질화기 |
| UP400ST | 400와트 | 24kHz | 스탠드 장착형 실험실 균질화기 |
| 소노스텝 | 200와트 | 26kHz | 실험실 반응기 결합, 초음파, 펌프, 교반기 및 용기 |
| GD미니2 | 200와트 | 26kHz | 오염 없는 플로우 셀(flow cell) |
| 컵혼 | 200와트 | 26kHz | 바이알과 비커를 위한 Intense Ultrasonic Bath |
| UIP400MTP | 400와트 | 24kHz | Multi-well plates / Microtiter plate를 위한 초음파 시스템 |
초음파 CupHorn 샘플의 멸균 균질화를위한 닫힌 튜브와 바이알의 강렬한 초음파 처리.
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초음파 실험실 균질화 기 UP400St 일반적으로 용해 완충액 준비 및 후속 세포 파괴에 사용됩니다.
문헌 / 참고문헌
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
