Hielscher Ultrasonics
Örömmel megvitatjuk a folyamatot.
Hívjon minket: +49 3328 437-420
Írjon nekünk: info@hielscher.com

Ultrahangos alkalmazások a majomhimlő vírusban

Az ultrahangos kezelés fontos feldolgozási módszer a majomhimlő vírus (MPXV) izolálására analitikai mintákból, vírus DNS fragmentációra, valamint majomhimlő vakcina gyártására. A minta előkészítéséhez a diagnosztika és elemzés előtt (PCR, ELISA stb.) ultrahangosítást használnak a sejtek lizálására annak érdekében, hogy felszabadítsák a majomhimlő vírust a sejt belsejéből és / vagy a DNS fragmentálására. A vakcinagyártásban az alkalmazások a vírusrészecske / DNS előkészítésétől, a gyógyszerhordozókba történő kapszulázástól és az inokulum formulázásától terjednek.
Az alábbiakban részletes információkat talál az ultrahangos majomhimlő vírus minta előkészítéséről, valamint az ultrahanggal segített MPXV vakcina előállításáról.

 

Mit talál ezen az oldalon:

Információkérés




Vegye figyelembe a Adatvédelem.




A nagy teljesítményű ultrahangos készülékek kritikus feldolgozási eszköz számos vakcina előállításában.

Ez a rendszer 2x 1kW ultrahangos készülékek folyamatos áramlású működés van telepítve egy vakcinagyártó létesítmény.

Ultrahangos lízis és DNS-fragmentáció polimeráz láncreakció (PCR) előtt

A majomhimlő vírusfertőzést nukleinsav-amplifikációs vizsgálattal (NAAT) mutatják ki, valós idejű vagy hagyományos polimeráz láncreakció (PCR) alkalmazásával, a vírus DNS egyedi szekvenciáinak kimutatására. A minta (pl. orrgaratcseréből vagy bőrbiopsziából) tartalmazza a vírust a sejtekben.
Az elemzéshez a vírust fel kell szabadítani a sejtekből, és a vírus DNS-t PCR-re kell töredezni.

Ultrahangos lízis:

Ultrasonicator UP200Ht mikrotip S26d2 biológiai minták ultrahangos líziséhezAz ultrahangos sejtzavar / lízis megbízható és hatékony módszer a vírusok izolálására a sejtmintákból, és ezáltal előnyösebb technika a vegyi anyagok, például lizozim, proteináz K és különböző mosószerek felett, amelyeket alternatívaként használnak a sejtlízis és a DNS felszabadítására.
Az ilyen kémiai reagensek használata azonban időigényes mintaelőkészítést igényel több lépésben a PCR-elemzés előtt, hogy megakadályozzák a PCR-reakció gátlását. Mivel a PCR-gátlók befolyásolják az amplifikáció hatékonyságát, a nem eltávolított inhibitorok mennyiségének kis változásai nagy eltérésekhez vezethetnek a PCR-termék amplifikációjában (Diaco, 1995).
A lízis ultrahangos kezelésének előnye, hogy kívánatos a sejtszerkezetek teljes megzavarása és a DNS felszabadulása anélkül, hogy lizáló reagensekre és időigényes mintaelőkészítésre lenne szükség. (vö. Fykse et al., 2003)

Ultrahangos DNS-töredezettség:

Az ultrahangos DNS-fragmentáció egyszerű és megbízható, mint a hosszú DNS-fragmensek (bázispárok, bp). Az ultrahang segítségével a DNS hatékonyan fragmentálható a megcélzott DNS-hosszra. Az ultrahangos paraméterek pontos ellenőrzése és a kifinomult hűtési lehetőségek megakadályozzák a DNS lebomlását.
További információ ultrahangos DNS-fragmentáció!

 

A videó bemutatja az ultrahangos mintaelőkészítő rendszert UIP400MTP, amely lehetővé teszi bármely standard többlyukú lemez megbízható mintaelőkészítését nagy intenzitású ultrahanggal. A UIP400MTP tipikus alkalmazásai közé tartozik a sejtlízis, a DNS, az RNS és a kromatin nyírása, valamint a fehérje extrakció.

Ultrahangos UIP400MTP több lyukú lemez ultrahangos kezeléshez

Videó indexképe

Információkérés




Vegye figyelembe a Adatvédelem.




Ultrahangos alkalmazások majomhimlő vírus vakcinában

Az ultrahangos kezelést vakcinák, például majomhimlő vakcinák előállítására használják. A majomhimlő vírus ellen használt vakcinák jelenleg élő vírus elleni vakcinák. Az újonnan kifejlesztett vakcinák más platformokat is használhatnak, például DNS-alapú Jelenleg módosított Vaccinia Ankara viurs-t, egy gyengített, nem replikálódó orthopoxvírust tartalmaz. Trisz-t (trisz-aminometánt) és nátrium-kloridot is tartalmaz. A vakcina kis mennyiségben tartalmazhat DNS-t és fehérjét a csirke embrió fibroblaszt sejtekből, amelyeket a vakcinavírus, a benzonáz és az antibiotikum vegyületek, például a gentamicin és a ciprofloxacin tenyésztésére használnak.

Az ultrahangos homogenizálást élő attenuált vírusvakcinák, DNS-vakcinák, többértékű DNS-koktélok, mRNS-vakcinák, rekombináns fehérje vakcinák, vírusszerű részecske-vakcinák stb. Előállítására használják.

Az ultrahang alkalmazása a vakcinagyártásban

  • vírusrészecskék és -ágensek diszperziója
  • Emulgeálás
  • vírusok inaktiválása
  • gyógyszerhordozó formuláció (NLC, SLN)
  • Beágyazás
  • hatóanyagok feloldása
  • Adjuvánsok előállítása
  • Gáztalanítás / levegőztetés

 

Részletesebb információkat találhat az ultrahangos alkalmazásokról a jobb vakcinagyártás érdekében!

Protokoll a majomhimlő vírus ultrahangos izolálására

Stittelaar (2005) kutatócsoportja ultrahangos lízist használt a majomhimlő vírus felszabadítására a növekedési gazdasejtkultúrából, valamint a fertőzött főemlősökből torokcsere útján nyert sejtekből.

Majomhimlő vakcina előkészítése:

A majomhimlő vírusokat specifikus kórokozóktól mentes csirke embrió fibroblaszt sejteken tenyésztették. 1–2 napos inkubálást követően a vírussejt-szuszpenziót egy fagyasztva kiolvasztott körrel gyűjtöttük be, majd centrifugálással sűrítettük. A pelletet újra szuszpendáltuk, és több ultrahangos homogenizálásnak vetettük alá.

Majomhimlő vírus izolálása vakcinázott makákókból:

A mintákat háromszor fagyasztottuk fel, és ultrahangos CupHornban ultrahanggal kezeltük. Két hígítást (1:10 és 1:100) alkalmaztunk szállítóközegben, 1% magzati szarvasmarhaszérummal kiegészítve a Vero sejt egyrétegű beoltására hatlyukú lemezeken. 1 órás, 37 °C-on végzett inkubálás után az inokulumot eltávolítottuk, és 1%-os magzati szarvasmarhaszérummal kiegészített táptalajjal helyettesítettük. Az egyrétegű rétegeket 5 napig tenyésztettük 37 °C-on, és kristályibolya-oldattal megfestettük.
(vö. Stittelaar et al., 2005)

Ebben a videóban egy 2 kilowattos ultrahangos rendszert mutatunk be inline működéshez egy tisztítható szekrényben. A Hielscher ultrahangos berendezéseket szállít szinte minden iparághoz, például a vegyiparhoz, a gyógyszeriparhoz, a kozmetikumokhoz, a petrolkémiai folyamatokhoz, valamint az oldószer alapú extrakciós folyamatokhoz. Ezt a tisztítható rozsdamentes acél szekrényt robbanásveszélyes területeken való működésre tervezték. Ebből a célból a lezárt szekrényt az ügyfél nitrogénnel vagy friss levegővel öblítheti, hogy megakadályozza a gyúlékony gázok vagy gőzök bejutását a szekrénybe.

2x 1000 wattos ultrahangos készülékek tisztítható szekrényben veszélyes területeken történő telepítéshez

Videó indexképe

Ultrahangos készülékek víruselemzéshez és vakcinagyártáshoz

A Hielscher Ultrasonics széles termékportfóliója ideális ultrahangos készüléket kínál kutatási és analitikai laboratóriumok, valamint ipari vakcinagyártás számára.
A Hielscher Ultrasonics nagy teljesítményű ultrahangos készülékek és szono-bioreaktorok tervezésére, gyártására és forgalmazására szakosodott, kutatási és analitikai laboratóriumokban való felhasználásra, valamint ipari vakcinagyártásban való megvalósításra (pl. Vakcinák, Api).
Az ultrahangos folyamatparaméterek pontos ellenőrzése a Hielscher Ultrasonics segítségével' intelligens szoftverSzonikálás alkalmazható nyitott edényekre, zárt folyamatosan kevert reaktorokra és folyamatos átfolyó reaktorokra. Az ultrahangos rendszerek minden része, amely érintkezik a folyékony közeggel, rozsdamentes acélból, titánból vagy üvegből készül. Az autoklávozható alkatrészek és szaniter szerelvények biztosítják a gyógyszerészeti minőségű állapotok.
Automatikus adatrögzítés: Az intelligens szoftver automatikusan rögzíti az ultrahangos folyamat paramétereit az integrált SD memóriakártyán. Az összes folyamatparaméter pontos szabályozása biztosítja a Reprodukálhatóság, a termelés szabványosítása, és elősegíti a gyógyszeripari termékek biztonsági szabványainak teljesítését.
Hielscher Ultrasonics’ Az ultrahangos processzorok rendkívül megbízhatóak és pontosan vezérelhetők. Minden ipari ultrahangos készülék beállítható, hogy a teljes tartományt az alacsonyabb és a nagyon magas amplitúdók között nyújtsa. A Hielscher ultrahangos rendszereinek robusztussága lehetővé teszi az 24/7 működését nagy teherbírású és igényes környezetben.

Az alábbi táblázat jelzi ultrahangos készülékeink hozzávetőleges feldolgozási kapacitását:

Kötegelt mennyiség Áramlási sebesség Ajánlott eszközök
Több lyukú / mikrotiter lemezek N/a UIP400MTP
1–500 ml 10–200 ml/perc UP100H
10 és 2000 ml között 20–400 ml/perc UP200Ht, UP400ST
0.1-től 20L-ig 0.2-től 4 liter/percig UIP2000hdT
10–100 liter 2–10 l/perc UIP4000hdt
N/a 10–100 l/perc UIP16000
N/a Nagyobb klaszter UIP16000

Kapcsolat! / Kérdezzen tőlünk!

További információ kérése

Kérjük, használja az alábbi űrlapot, hogy további információkat kérjen az ultrahangos processzorokról, alkalmazások és ár. Örömmel megvitatjuk Önnel a folyamatot, és kínálunk Önnek egy ultrahangos rendszert, amely megfelel az Ön igényeinek!









Kérjük, vegye figyelembe a Adatvédelem.




Az ultrahangos homogenizátorok megbízhatóak a DNS-nyíráshoz

Ultrahangos DNS-nyírás
A Jkwchui-ból adaptálva CC-BY-SA alatt.03



Irodalom / Hivatkozások

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Tények, amelyeket érdemes tudni

majomhimlő vírus

A majomhimlő (MPV, MPXV vagy hMPXV) a kettős szálú DNS-vírus faja, amely vírusos zoonózisos betegséget okoz. Ez a betegség majomhimlő-fertőzésként ismert, és emberekben és állatokban is előfordulhat. A Poxviridae családba tartozó Orthopoxvirus nemzetséghez tartozik. A majomhimlő vírus az egyik humán orthopoxvírus a variola (VARV), a tehénhimlő (CPX) és a vakcinia (VACV) vírusokkal együtt. Az orthopoxvírusokat nagy, tégla alakú vírusrészecskék jellemzik, amelyek körülbelül 200 000 bp kettős szálú DNS-genomot tartalmaznak.

ELISA-vizsgálat

Az ELISA az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot jelenti, és egy címkézett immunvizsgálat, amelyet az immunvizsgálatok arany standardjának tekintenek. Az ELISA egy immunológiai teszt, amelyet magas diagnosztikai érzékenysége miatt értékelnek, molekulák, köztük antitestek, antigének, fehérjék, glikoproteinek és hormonok kimutatására és mennyiségi meghatározására használják. Az ELISA elve antigén-antitest kölcsönhatáson alapul. Ezzel az antigén-antitest kölcsönhatással a specifikus antitestek kötődnek a cél antigénhez. Csak akkor, ha az interakció megtörténik, a szubsztrát kötődhet az enzimhez, és egy későbbi szubsztrát átalakulás figyelhető meg, ami pozitív eredményt jelent.


High performance ultrasonics! Hielscher's product range covers the full spectrum from the compact lab ultrasonicator over bench-top units to full-industrial ultrasonic systems.

Hielscher Ultrasonics gyárt nagy teljesítményű ultrahangos homogenizátorok labor hoz ipari méret.

Örömmel megvitatjuk a folyamatot.

Let's get in contact.