Ultralyd applikationer i MonkeyPox Virus

Ultralydbehandling er en vigtig behandlingsmetode til isolering af monkeypox virus (MPXV) fra analytiske prøver, til virus DNA fragmentering samt i monkeypox vaccine fremstilling. Til prøveforberedelse før diagnostik og analyse (PCR, ELISA osv.) ultralydbehandling bruges til at lyse celler for at frigive monkeypox-viruset fra cellens indre og / eller til fragment DNA. I vaccineproduktion spænder applikationerne fra viruspartikel / DNA-præparat, indkapsling i lægemiddelbærere og formulering af inokula.
Nedenfor kan du finde detaljerede oplysninger om ultralyd monkeypox virus prøve forberedelse samt ultralyd assisteret MPXV vaccine produktion.

 

Hvad du finder på denne side:

Anmodning om oplysninger




Bemærk vores Fortrolighedspolitik.


Højtydende ultralydapparater er et kritisk behandlingsværktøj i produktionen af mange vacciner.

Dette system med 2x 1kW ultralydapparater til kontinuerlig flowdrift er installeret i et vaccineproduktionsanlæg.

Ultralydslyse og DNA-fragmentering før polymerasekædereaktion (PCR)

En monkeypoxvirusinfektion påvises ved nukleinsyreamplifikationstest (NAAT) ved anvendelse af realtids- eller konventionel polymerasekædereaktion (PCR) til påvisning af unikke sekvenser af viralt DNA. Prøven (f.eks. fra nasopharyngeal swap eller hudbiopsier) indeholder virus i celler.
Til analyse skal virussen frigives fra cellerne, og det virale DNA skal fragmenteres til PCR.

Ultralyd lysis:

Ultralydsenhed UP200Ht med mikrotip S26d2 til ultralyd lysis af biologiske prøverUltralydcelleforstyrrelse / lysis er en pålidelig og effektiv metode til at isolere vira fra celleprøver og derved en foretrukken teknik frem for kemiske agenser, såsom lysozym, proteinase K og forskellige vaskemidler, der alternativt bruges til at opnå cellelyse og frigivelse af DNA.
Anvendelsen af sådanne kemiske reagenser kræver imidlertid tidskrævende prøveforberedelse i flere trin før PCR-analyse for at forhindre hæmning af PCR-reaktionen. Da PCR-hæmmere påvirker effektiviteten af amplifikation, kan små variationer af mængden af hæmmere, der ikke fjernes, føre til store variationer i PCR-produktforstærkningen (Diaco, 1995).
Fordelen ved ultralydbehandling til lysis er, at fuldstændig forstyrrelse af cellulære strukturer og frigivelse af DNA uden behov for lysering af reagenser og tidskrævende prøveforberedelse er ønskelige. (jf. Fykse et al., 2003)

Ultralyd DNA-fragmentering:

Ultralyd DNA-fragmentering er enkel og pålidelig, ligesom det producerer DNA-fragmenter, der kan indstilles i længden (basepar, bp). Ved hjælp af ultralyd kan DNA effektivt fragmenteres til den målrettede DNA-længde. Præcis kontrol over ultralydsparametre og sofistikerede kølemuligheder forhindrer DNA-nedbrydning.
Læs mere om ultralyd DNA-fragmentering!

 

Videoen viser ultralydsprøveforberedelsessystemet UIP400MTP, som giver mulighed for pålidelig prøveforberedelse af alle standard multi-brøndplader ved hjælp af højintensiv ultralyd. Typiske anvendelser af UIP400MTP omfatter celle lysis, DNA, RNA, og kromatin klipning samt proteinudvinding.

Ultralydsdronning UIP400MTP til multi-well plade sonikering

Anmodning om oplysninger




Bemærk vores Fortrolighedspolitik.


Ultralyd applikationer i Monkeypox Virus Vaccine

Ultralydbehandling bruges til at producere vacciner såsom monkeypox vacciner. Vacciner, der anvendes mod monkeypox-virus, er i øjeblikket levende virusvacciner. Nyudviklede vacciner kan bruge andre platforme såsom DNA-baserede Den indeholder i øjeblikket en modificeret Vaccinia Ankara viurs, en svækket, ikke-replikerende orthopoxvirus. Det indeholder også Tris (tris-aminomethan) og natriumchlorid. Vaccinen kan også indeholde små mængder DNA og protein fra Chicken Embryo Fibroblast-cellerne, som bruges til at dyrke vaccinevirus, benzonase og antibiotikaforbindelser som gentamicin og ciprofloxacin.

Ultralydhomogenisering anvendes til fremstilling af levende svækkede virusvacciner, DNA-vacciner, multivalente DNA-cocktails, mRNA-vacciner, rekombinante proteinvacciner, viruslignende partikelvacciner mv.

Anvendelserne af ultralyd i vaccineproduktion spænder fra

  • spredning af viruspartikler og -agenser
  • emulgering
  • inaktivering af vira
  • lægemiddelbærerformulering (NLC, SLN)
  • indkapsling
  • opløsning af agenser
  • forberedelse af adjuvanser
  • Afgasning / Af-Aeration

 

Du kan finde mere dybdegående information om ultralydsapplikationer til forbedret vaccinefremstilling!

Protokol til ultralydsisolering af Monkeypox Virus

Forskerholdet i Stittelaar (2005) brugte ultralydslyse til at frigive monkeypox-viruset fra vækstværtscellekulturen såvel som fra celler opnået via halsbytte fra inficerede primater.

Monkeypox Vaccine Forberedelse:

Monkeypox-vira blev dyrket på specifikke patogenfrie kyllingembryfofoblastceller. Efter inkubation i 1 til 2 dage blev viruscellesuspensionen høstet ved en runde fryseoptøning og derefter koncentreret ved centrifugering. Pelleten blev resuspended og udsat for flere runder af ultralyd homogenisering.

Monkeypox Virus Isolation fra vaccinerede makakker:

Prøver blev fryse-optøet tre gange og sonikeret i en ultralyd CupHorn. To fortyndinger (1:10 og 1:100) i transportmedium suppleret med 1% føtalt kvægserum blev anvendt til at inokulere Vero-cellemonolag i plader med seks brønde. Efter 1 time inkubation ved 37 °C blev inokulaen fjernet og erstattet med dyrkningsmedium suppleret med 1 % føtalt kvægserum. Monolagene blev dyrket i 5 dage ved 37 ° C og farvet med en krystalviolet opløsning.
(jf. Stittelaar et al., 2005)

I denne video viser vi dig et 2 kilowatt ultralydssystem til inline-drift i et renseligt skab. Hielscher leverer ultralydsudstyr til næsten alle industrier, såsom den kemiske industri, farmaceutiske, kosmetiske, petrokemiske processer samt til opløsningsmiddelbaserede ekstraktionsprocesser. Dette renselige skab i rustfrit stål er designet til drift i farlige områder. Til dette formål kan det forseglede skab renses af kunden med nitrogen eller frisk luft for at forhindre brandfarlige gasser eller dampe i at komme ind i kabinettet.

2x 1000 watt ultralydapparater i renseligt skab til installation i farlige områder

Ultralydapparater til virusanalyse og vaccineproduktion

Hielscher Ultrasonics brede produktportefølje tilbyder den ideelle ultralydsapparat til forskning og analytiske laboratorier samt til industriel vaccinefremstilling.
Hielscher Ultrasonics er specialiseret i design, fremstilling og distribution af højtydende ultralydapparater og sono-bioreaktorer til brug i forsknings- og analytiske laboratorier samt til implementering i industriel vaccineproduktion (f.eks. vacciner, Api'er).
Præcis kontrol over ultralydprocesparametrene ved Hielscher Ultrasonics' intelligent softwareSonikering kan anvendes på åbne beholdere, lukkede kontinuerligt omrørte reaktorer og kontinuerlige gennemstrømningsreaktorer. Alle dele af ultralydssystemerne, der kommer i kontakt med det flydende medium, er lavet af rustfrit stål, titanium eller glas. Autoklaverbare dele og sanitetsarmaturer sikrer produktionen under farmaceutiske betingelser.
Automatisk dataoptagelse: Intelligent software registrerer parametrene for sonikering processen automatisk på den integrerede SD-hukommelseskort. Den præcise styring af alle procesparametre sikrer, at Reproducerbarhed, standardisering af produktionen, og letter opfyldelsen af sikkerhedsstandarder for farmaceutiske produkter.
Hielscher Ultralyd’ ultralydsprocessorer er meget pålidelige og kan styres præcist. Alle industrielle ultralydapparater kan justeres for at levere hele spektret fra lavere til meget høje amplituder. Robustheden af Hielscher's ultralydssystemer giver mulighed for 24/7 drift under tunge og i krævende miljøer.

Tabellen nedenfor giver dig en indikation af den omtrentlige forarbejdningskapacitet hos vores ultralydapparater:

Batch Volumen Strømningshastighed Anbefalede enheder
multi-well / microtiter plader Nielsen UIP400MTP
1 til 500 ml 10 til 200 ml / min UP100H
10 til 2000 ml 20 til 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 til 20L 0.2 til 4L / min UIP2000hdT
10 til 100 l 2 til 10 l / min UIP4000hdT
Nielsen 10 til 100 l / min UIP16000
Nielsen større klynge af UIP16000

Kontakt os! / Spørg Os!

Bed om mere information

Brug venligst nedenstående formular til at anmode om yderligere oplysninger om ultralydsprocessorer, programmer og pris. Vi vil være glade for at diskutere din proces med dig og tilbyde dig et ultralydssystem, der opfylder dine krav!









Bemærk venligst, at vores Fortrolighedspolitik.


Ultralydhomogenisatorer er pålidelige til DNA-forskydning

Ultralyd DNA Shearing
Tilpasset fra Jkwchui under CC-BY-SA.03



Litteratur / Referencer

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Fakta Værd at vide

Monkeypox Virus

Monkeypox (MPV, MPXV eller hMPXV) er en art af dobbeltstrenget DNA-virus, som forårsager en viral zoonotisk sygdom. Denne sygdom er kendt som monkeypox infektion og kan forekomme hos mennesker og dyr. Det tilhører slægten Orthopoxvirus i familien Poxviridae. Monkeypox virus er en af de humane orthopoxvirus sammen med variola (VARV), cowpox (CPX) og vaccinia (VACV) vira. Orthopoxvirus er kendetegnet ved store murstenformede viruspartikler, der indeholder et dobbeltstrenget DNA-genom på ca. 200.000 bp.

ELISA-analyse

ELISA står for Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay og er et mærket immunassay, der betragtes som guldstandarden for immunoassays. ELISA er en immunologisk test, værdsat for sin høje diagnostiske følsomhed, bruges til at detektere og kvantificere molekyler, herunder antistoffer, antigener, proteiner, glycoproteiner og hormoner. Princippet om ELISA er baseret på en antigen-antistofinteraktion. Ved denne antigen-antistofinteraktion binder de specifikke antistoffer sig til dets målantigen. Først når interaktionen finder sted, kan substratet binde sig til enzymet, og en efterfølgende substratkonvertering kan observeres, hvilket betyder, at der opnås et positivt resultat.


Højtydende ultralyd! Hielschers produktsortiment dækker hele spektret fra den kompakte lab ultralydsprocessor over bench-top enheder til fuldindustrielle ultralydssystemer.

Hielscher Ultrasonics fremstiller højtydende ultralyd homogenisatorer fra Lab til industriel størrelse.