Ultralydbehandling er en vigtig behandlingsmetode til isolering af monkeypox virus (MPXV) fra analytiske prøver, til virus DNA fragmentering samt i monkeypox vaccine fremstilling. Til prøveforberedelse før diagnostik og analyse (PCR, ELISA osv.) ultralydbehandling bruges til at lyse celler for at frigive monkeypox-viruset fra cellens indre og / eller til fragment DNA. I vaccineproduktion spænder applikationerne fra viruspartikel / DNA-præparat, indkapsling i lægemiddelbærere og formulering af inokula.
Nedenfor kan du finde detaljerede oplysninger om ultralyd monkeypox virus prøve forberedelse samt ultralyd assisteret MPXV vaccine produktion.

Hvad du finder på denne side:

• Ultralydslyse til Monkeypox Virus Extraction
• Ultralydsfragmentering af Monkeypox Virus DNA
• Ultralyd applikationer i MPXV vaccine produktion

Ultralydslyse og DNA-fragmentering før polymerasekædereaktion (PCR)

En monkeypoxvirusinfektion påvises ved nukleinsyreamplifikationstest (NAAT) ved anvendelse af realtids- eller konventionel polymerasekædereaktion (PCR) til påvisning af unikke sekvenser af viralt DNA. Prøven (f.eks. fra nasopharyngeal swap eller hudbiopsier) indeholder virus i celler.
Til analyse skal virussen frigives fra cellerne, og det virale DNA skal fragmenteres til PCR.

Ultralyd lysis:

Ultralydcelleforstyrrelse / lysis er en pålidelig og effektiv metode til at isolere vira fra celleprøver og derved en foretrukken teknik frem for kemiske agenser, såsom lysozym, proteinase K og forskellige vaskemidler, der alternativt bruges til at opnå cellelyse og frigivelse af DNA.
Anvendelsen af sådanne kemiske reagenser kræver imidlertid tidskrævende prøveforberedelse i flere trin før PCR-analyse for at forhindre hæmning af PCR-reaktionen. Da PCR-hæmmere påvirker effektiviteten af amplifikation, kan små variationer af mængden af hæmmere, der ikke fjernes, føre til store variationer i PCR-produktforstærkningen (Diaco, 1995).
Fordelen ved ultralydbehandling til lysis er, at fuldstændig forstyrrelse af cellulære strukturer og frigivelse af DNA uden behov for lysering af reagenser og tidskrævende prøveforberedelse er ønskelige. (jf. Fykse et al., 2003)

Ultralyd DNA-fragmentering:

Ultralyd DNA-fragmentering er enkel og pålidelig, ligesom det producerer DNA-fragmenter, der kan indstilles i længden (basepar, bp). Ved hjælp af ultralyd kan DNA effektivt fragmenteres til den målrettede DNA-længde. Præcis kontrol over ultralydsparametre og sofistikerede kølemuligheder forhindrer DNA-nedbrydning.
Læs mere om ultralyd DNA-fragmentering!

Ultralyd applikationer i Monkeypox Virus Vaccine

Vacciner, der anvendes mod monkeypox-virus, er i øjeblikket levende virusvacciner. Nyudviklede vacciner kan bruge andre platforme såsom DNA-baserede Den indeholder i øjeblikket en modificeret Vaccinia Ankara viurs, en svækket, ikke-replikerende orthopoxvirus. Det indeholder også Tris (tris-aminomethan) og natriumchlorid. Vaccinen kan også indeholde små mængder DNA og protein fra Chicken Embryo Fibroblast-cellerne, som bruges til at dyrke vaccinevirus, benzonase og antibiotikaforbindelser som gentamicin og ciprofloxacin.

Ultralydhomogenisering anvendes til fremstilling af levende svækkede virusvacciner, DNA-vacciner, multivalente DNA-cocktails, mRNA-vacciner, rekombinante proteinvacciner, viruslignende partikelvacciner mv.

Du kan finde mere dybdegående information om ultralydsapplikationer til forbedret vaccinefremstilling!

Protokol til ultralydsisolering af Monkeypox Virus

Forskerholdet i Stittelaar (2005) brugte ultralydslyse til at frigive monkeypox-viruset fra vækstværtscellekulturen såvel som fra celler opnået via halsbytte fra inficerede primater.

Monkeypox Vaccine Forberedelse:

Monkeypox-vira blev dyrket på specifikke patogenfrie kyllingembryfofoblastceller. Efter inkubation i 1 til 2 dage blev viruscellesuspensionen høstet ved en runde fryseoptøning og derefter koncentreret ved centrifugering. Pelleten blev resuspended og udsat for flere runder af ultralyd homogenisering.

Monkeypox Virus Isolation fra vaccinerede makakker:

Prøver blev fryse-optøet tre gange og sonikeret i en ultralyd CupHorn. To fortyndinger (1:10 og 1:100) i transportmedium suppleret med 1% føtalt kvægserum blev anvendt til at inokulere Vero-cellemonolag i plader med seks brønde. Efter 1 time inkubation ved 37 °C blev inokulaen fjernet og erstattet med dyrkningsmedium suppleret med 1 % føtalt kvægserum. Monolagene blev dyrket i 5 dage ved 37 ° C og farvet med en krystalviolet opløsning.
(jf. Stittelaar et al., 2005)

Ultralydapparater til virusanalyse og vaccineproduktion

Hielscher Ultrasonics brede produktportefølje tilbyder den ideelle ultralydsapparat til forskning og analytiske laboratorier samt til industriel vaccinefremstilling.
Hielscher Ultrasonics er specialiseret i design, fremstilling og distribution af højtydende ultralydapparater og sono-bioreaktorer til brug i forsknings- og analytiske laboratorier samt til implementering i industriel vaccineproduktion (f.eks. vacciner, Api'er).
Sonikering kan anvendes på åbne beholdere, lukkede kontinuerligt omrørte reaktorer og kontinuerlige gennemstrømningsreaktorer. Alle dele af ultralydssystemerne, der kommer i kontakt med det flydende medium, er lavet af rustfrit stål, titanium eller glas. Autoklaverbare dele og sanitetsarmaturer sikrer produktionen under farmaceutiske betingelser.
Automatisk dataoptagelse: Intelligent software registrerer parametrene for sonikering processen automatisk på den integrerede SD-hukommelseskort. Den præcise styring af alle procesparametre sikrer, at Reproducerbarhed, standardisering af produktionen, og letter opfyldelsen af sikkerhedsstandarder for farmaceutiske produkter.
Hielscher Ultralyd’ ultralydsprocessorer er meget pålidelige og kan styres præcist. Alle industrielle ultralydapparater kan justeres for at levere hele spektret fra lavere til meget høje amplituder. Robustheden af Hielscher's ultralydssystemer giver mulighed for 24/7 drift under tunge og i krævende miljøer.

Tabellen nedenfor giver dig en indikation af den omtrentlige forarbejdningskapacitet hos vores ultralydapparater: