Ultralydsapplikationer i MonkeyPox Virus

Ultralydbehandling er en vigtig behandlingsmetode til isolering af abekoppevirus (MPXV) fra analytiske prøver, til virus-DNA-fragmentering såvel som i fremstilling af abekoppevaccine. Til prøveforberedelse før diagnosticering og analyse (PCR, ELISA osv.) Ultralydbehandling anvendes til at lyse celler for at frigive abekoppevirus fra cellens indre og / eller for at fragmentere DNA. I vaccineproduktion spænder applikationerne fra viruspartikler / DNA-præparat, indkapsling i lægemiddelbærere og formulering af inokula.
Nedenfor kan du finde detaljerede oplysninger om ultralyd abekoppevirusprøveforberedelse samt ultralydassisteret MPXV-vaccineproduktion.

Hvad du finder på denne side:

• Ultralydslyse til ekstraktion af abekoppevirus
• Ultralydsfragmentering af abekoppevirus-DNA
• Ultralydsapplikationer i MPXV-vaccineproduktion

Ultralydslyse og DNA-fragmentering før polymerasekædereaktion (PCR)

En abekoppevirusinfektion påvises ved nukleinsyreamplifikationstest (NAAT) ved hjælp af realtids- eller konventionel polymerasekædereaktion (PCR) til påvisning af unikke sekvenser af viralt DNA. Prøven (f.eks. fra nasopharyngeal swap eller hudbiopsier) indeholder virussen i cellerne.
Til analyse skal virussen frigives fra cellerne, og det virale DNA skal fragmenteres til PCR.

Ultralyd lysis:

Ultralydscelleforstyrrelse / lysis er en pålidelig og effektiv metode til at isolere vira fra celleprøver og dermed en at foretrække teknik frem for kemiske midler, såsom lysozym, proteinase K og forskellige rengøringsmidler, der alternativt bruges til at opnå cellelyse og frigivelse af DNA.
Brugen af sådanne kemiske reagenser kræver imidlertid tidskrævende prøveforberedelse i flere trin før PCR-analyse for at forhindre hæmning af PCR-reaktionen. Da PCR-hæmmere påvirker effektiviteten af amplifikation, kan små variationer i mængden af inhibitorer, der ikke fjernes, føre til store variationer i PCR-produktamplifikationen (Diaco, 1995).
Fordelen ved ultralydbehandling til lysis er, at fuldstændig forstyrrelse af cellulære strukturer og frigivelse af DNA uden behov for lyserende reagenser og tidskrævende prøveforberedelse er ønskelig. (jf. Fykse et al., 2003)

Ultralyd DNA-fragmentering:

Ultralyd DNA-fragmentering er enkel og pålidelig, da den producerer DNA-fragmenter, der kan indstilles i længden (basepar, bp). Ved hjælp af ultralyd kan DNA effektivt fragmenteres til den målrettede DNA-længde. Præcis kontrol over ultralydsparametre og sofistikerede kølemuligheder forhindrer DNA-nedbrydning.
Læs mere om ultralyd DNA-fragmentering!

Ultralydsapplikationer i abekoppevirusvaccine

Vacciner, der bruges mod abekoppevirus, er i øjeblikket levende virusvacciner. Nyudviklede vacciner kan bruge andre platforme såsom DNA-baseret Den indeholder i øjeblikket en modificeret Vaccinia Ankara viurs, en svækket, ikke-replikerende orthopoxvirus. Den indeholder også Tris (tris-aminomethan) og natriumchlorid. Vaccinen kan også indeholde små mængder DNA og protein fra Chicken Embryo Fibroblast-cellerne, som bruges til at dyrke vaccinevirus, benzonase og antibiotikaforbindelser som gentamicin og ciprofloxacin.

Ultralydshomogenisering anvendes til fremstilling af levende svækkede virusvacciner, DNA-vacciner, multivalente DNA-cocktails, mRNA-vacciner, rekombinante proteinvacciner, viruslignende partikelvacciner osv.

Du kan finde mere dybdegående information om ultralydsapplikationer til forbedret vaccinefremstilling!

Protokol til ultralydsisolering af abekoppevirus

Forskerholdet fra Stittelaar (2005) brugte ultralydslyse til at frigive abekoppevirussen fra vækstværtscellekulturen såvel som fra celler opnået via halsbytte fra inficerede primater.

Forberedelse af abekoppevaccine:

Abekoppevirus blev dyrket på specifikke patogenfrie kyllingeembryofibroblastceller. Efter inkubation i 1 til 2 dage blev viruscellesuspensionen høstet ved en omgang fryseoptøning og derefter koncentreret ved centrifugering. Pelleten blev resuspenderet og udsat for flere runder af ultralydshomogenisering.

Abekoppevirusisolering fra vaccinerede makaker:

Prøver blev fryse-optøet tre gange og sonikeret i et ultralyd CupHorn. To fortyndinger (1:10 og 1:100) i transportmedium suppleret med 1% føtalt bovint serum blev brugt til at inokulere Vero-cellemonolag i plader med seks brønde. Efter 1 times inkubation ved 37 °C blev podevæsken fjernet og erstattet med dyrkningsmedium suppleret med 1 % føtalt bovint serum. Monolagene blev dyrket i 5 dage ved 37°C og farvet med en krystalviolet opløsning.
(jf. Stittelaar et al., 2005)

Ultralydapparater til virusanalyse og vaccineproduktion

Hielscher Ultrasonics brede produktportefølje tilbyder den ideelle ultralydsapparat til forskning og analytiske laboratorier samt til industriel vaccinefremstilling.
Hielscher Ultrasonics er specialiseret i design, fremstilling og distribution af højtydende ultralydapparater og sono-bioreaktorer til brug i forsknings- og analytiske laboratorier samt til implementering i industriel vaccineproduktion (f.eks. Vacciner, Api'er).
Sonikering kan anvendes på åbne beholdere, lukkede kontinuerligt omrørte reaktorer og kontinuerlige gennemstrømningsreaktorer. Alle dele af ultralydssystemerne, der kommer i kontakt med det flydende medium, er lavet af rustfrit stål, titanium eller glas. Autoklaverbare dele og sanitetsarmaturer sikrer produktionen under farmaceutiske tilstande.
Automatisk dataoptagelse: Intelligent software registrerer parametrene for sonikeringsprocessen automatisk på det integrerede SD-hukommelseskort. Den præcise styring af alle procesparametre sikrer Reproducerbarhed, standardisering af produktionenog letter opfyldelsen af sikkerhedsstandarder for lægemidler.
Hielscher Ultrasonics’ Ultralydsprocessorer er meget pålidelige og kan styres præcist. Alle industrielle ultralydapparater kan justeres til at levere hele spektret fra lavere til meget høje amplituder. Robustheden af Hielschers ultralydssystemer giver mulighed for 24/7 drift under tunge og krævende miljøer.

Nedenstående tabel giver dig en indikation af den omtrentlige behandlingskapacitet for vores ultralydapparater: