Hielscher Ultralydsteknologi

Celle lysis af BL21 Celler ved ultralydbehandling

BL21 celler er en stamme af E. coli, der er meget udbredt i forskningslaboratorier, bioteknologi og industriel produktion på grund af deres evne til at udtrykke proteiner meget effektiv. Ultralydcelleforstyrrelser, lysis og proteinekstraktion er den almindelige metode til at isolere og indsamle de målrettede proteiner fra det cellulære indre af BL21 celler. Ultralydbehandling forstyrrer cellen fuldstændigt og frigiver alle indesluttede proteiner, hvilket gør 100% af proteinet til rådighed.

BL21 Celler til proteinudtryk

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 celle er en kemisk kompetent E. coli bakteriestamme egnet til transformation og højt niveau protein udtryk ved hjælp af en T7 RNA polymerase-IPTG induktionssystem. BL21 celler tillader højeffektiv proteinudtryk af ethvert gen, der er under kontrol af en T7 promotor. E. coli-stammen BL21(DE3) er en T7 RNA polymerasebaseret proteinproduktionsstamme kombineret med T7-promotorbaserede ekspressionsvektorer og anvendes i vid udstrækning i laboratorier og industrien til fremstilling af rekombinant proteiner. I BL21(DE3) transskriberes genet kodning af rekombinant protein af den kromosomerede T7 RNA-polymerase (T7 RNAP), som transskriberer otte gange hurtigere end konventionel E. coli RNAP. Dette gør belastningen BL21(DE3) yderst effektiv og gør dens til et af de mest foretrukne proteinudsetrykscellesystemer.

Protokol for ultralydslysis og proteinekstraktion fra BL21-celler

Cellelysis af BL21 celler udføres for det meste ved hjælp af ultralydbehandling i kombination med natriumlauroyel sarkosinat (også kendt som sarkosyl) som lysis buffer. Fordelene ved ultralydcelleforstyrrelser og proteinekstraktion ligger i ultralyds-, reproducerbarheden samt enkel, sikker og hurtig drift af ultralydsenheder. Nedenstående protokol giver en trin-for-trin retning for ultralyd BL21 celle lysis:

Probe-typen insonifier UP200St til lyse

Ultralydcelleforreddere UP200St med mikrospids S26d2 til lysis og proteinekstraktion

Anmodning om oplysninger




Bemærk vores Fortrolighedspolitik.


  • For at fjerne chaperonproteinerne blev BL21-bakterielle pellets resuspenderet i 50 ml iskold natriumtr.
  • Der tilsættes 500 ul lysozym (10 mg/ ml), og cellerne inkuberes på is i 15 min.
  • Derefter tilsættes 500 ul DTT og 7 ml sarkosyl (10% (w/v), der består i STE-buffer).
  • Det er vigtigt at holde alle rensningsbuffere iskolde og at vedligeholde prøverne på is hele tiden. Alle rensningstrin skal udføres i kølerummet, hvis det er muligt.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Til ultralydslys og proteinekstraktion er prøverne sonikeret i VialTweeter MultiSample Ultralyds-koordinator 4 x 30 sek. Alternativt kan en ultralydshomogenisator af sondetypen med mikrospids, f.eks. Uf200 ः t med S26d2 (3 x 30 sek., 2 min. pause mellem ultralydscyklusser, 80% amplitude) kan anvendes.
  • Ved yderligere rensningstrin skal prøverne opbevares på is eller alternativt opbevares ved -80°C indtil videre forarbejdning.

Ultralydlysis under Prescise Temperaturkontrol

Den præcise og pålidelige temperaturkontrol er afgørende ved håndtering af biologiske prøver. Høje temperaturer indleder termisk induceret proteinforringelse i prøver.
Som alle mekaniske prøve forberedelse teknikker, sonikering skaber varme. Prøverne kan dog kontrolleres godt, når vialTweeter anvendes. Vi præsenterer dig forskellige muligheder for at overvåge og kontrollere temperaturen af dine prøver, mens du forbereder dem med VialTweeter og VialPress til analyse.

  1. Overvågning af prøvetemperaturen: Ultralydprocessoren UP200St, som driver VialTweeter, er udstyret med en intelligent software og en justerbar temperatursensor. Sæt temperatursensoren i UP200St, og sæt spidsen af temperaturføleren i et af prøverørene. Via digital farvet touch-display kan du i menuen i UP200St angive et specifikt temperaturområde til din prøvesoning. Ultralydsonicatoren stopper automatisk, når max temperaturen er nået, og holder pause, indtil prøvetemperaturen er nede på den lavere værdi af den indstillede temperatur ∆. Så starter sonikeringen automatisk igen. Denne smarte funktion forhindrer varmeinduceret nedbrydning.
  2. VialTweeter-blokken kan afkøles på forhånd. Sæt VialTweeter-blokken (kun sonotrode uden transducer!) i køleskabet eller fryseren for at forkøle titaniumblokken hjælper med at udskyde temperaturstigningen i prøven. Hvis det er muligt, kan selve prøven også afkøles på forhånd.
  3. Brug tøris til afkøling under sonikering. Brug en lavvandet bakke fyldt med tøris og læg VialTweeter på isen, så varmen hurtigt kan spredes.

Kunder over hele verden bruger VialTweeter og VialPress til deres daglige prøveforberedelsesarbejde i biologiske, biokemiske, medicinske og kliniske laboratorier. Den intelligente software og temperaturkontrol af UP200St processor, temperaturen er pålideligt kontrolleret og varme-induceret prøve nedbrydning undgås. Ultralyd prøve forberedelse med VialTweeter og VialPress leverer meget pålidelige og reproducerbare resultater!

Find den optimale ultralyds disruptor til din Lysis-applikation

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics er mangeårig erfaren producent af højtydende ultralydscelleforstyrrende stoffer og homogenisatorer til laboratorier, bænk-top og industrielle skalasystemer. Din bakterielle cellekultur størrelse, din forskning eller produktion mål og mængden af celle til at behandle i timen eller dagen er afgørende faktorer for at finde den rigtige ultralydcelle disruptor til din ansøgning.
Hielscher Ultrasonics tilbyder forskellige løsninger til samtidig sonikering af multiprøver (op til 10 hætteglas med VialTweeter) og masseprøver (dvs. microtiter plader / ELISA plader med UIP400MTP), samt den klassiske sonde-type lab ultrasonicator med forskellige effektniveauer fra 50 til 400 watt til fuldt industrielle ultralyd processorer med op til 16.000watts per enhed til kommerciel celle forstyrrelser og protein ekstraktion i stor produktion. Alle Hielscher ultralydsenheder er bygget til 24/7/365 drift under fuld belastning. Robusthed og pålidelighed er centrale funktioner i vores ultralydsenheder.
Alle digitale ultralydhomogenisatorer er udstyret med smart software, farvet touch display og automatisk data protocolling, som gør ultralydsenheden til et praktisk arbejdsværktøj i laboratorie- og produktionsfaciliteter.
Lad os vide, hvilken slags celler, hvilket volumen, med hvilken frekvens og med hvilket mål du har til at behandle dine biologiske prøver. Vi vil anbefale dig den mest egnede ultralydscelle disruptor til dine proceskrav.

Tabellen nedenfor giver dig en indikation af den omtrentlige behandlingskapacitet af vores ultralydsystemer fra kompakte håndholdte homogenisatorer og MultiSample Ultrasonicators til industrielle ultralydsprocessorer til kommercielle applikationer:

Batch Volumen Strømningshastighed Anbefalede enheder
96-godt / microtiter plader na UIP400MTP
10 vials à 0,5 til 1,5 mL na VialTweeter på UP200St
00,01 til 250 mio. 5 til 100 ml/min. UP50H
00,01 til 500 ml 10 til 200 ml / min UP100H
10 til 2000 ml 20 til 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 til 20L 0.2 til 4L / min UIP2000hdT
10 til 100 l 2 til 10 l / min UIP4000hdT
na 10 til 100 l / min UIP16000
na større klynge af UIP16000

Kontakt os! / Spørg Os!

Bed om mere information

Brug venligst nedenstående formular til at anmode om yderligere oplysninger om ultralydsprocessorer, programmer og pris. Vi vil være glade for at diskutere din proces med dig og tilbyde dig et ultralydssystem, der opfylder dine krav!









Bemærk venligst, at vores Fortrolighedspolitik.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrasonicator Uf200 ः t med 2 mm mikrotip S26d2 til sonikering af små prøver

Litteratur / Referencer



Fakta Værd at vide

Escherichia Coli Bakterier

Escherichia coli er en bakterietype, der er ikke-sporedannende, Gram-negativ og er kendetegnet ved sin form af en lige stang. E.coli bakterier er til stede i miljøet, fødevarer, og tarme af mennesker og dyr. E. coli er normalt motile ved hjælp af peritrichous flagella, men der er ikke-tåtil typer, også. E.coli er såkaldte fakultets anaerob kemoorganotro organismer, hvilket betyder, at de er i stand til både respiratoriske og fermentative stofskifte. De fleste E.coli typer er godartede og opfylder nyttige funktioner i kroppen, fx undertrykke væksten af skadelige bakteriearter, syntetisere vitaminer osv..
Escherichia coli bakterier celle af den såkaldte B-type er en særlig kategori af E.coli stammer, som er meget udbredt i forskning for at undersøge mekanismer såsom bakteriofage følsomhed eller begrænsning-modifikation systemer. Desuden er E.coli bakterier værdsat som pålidelig arbejdshest for proteinudtryk i bioteknologi og life science laboratorier. For eksempel, E.coli bruges til at syntetisere forbindelser såsom proteiner og oligosaccharider på industriel skala. På grund af særlige træk såsom proteasemangel, lav acetatproduktion på et højt niveau af glukose og forbedret permeabilitet er E. coli B-celler de hyppigst anvendte værtsceller til produktion af gensplejsede proteiner.

Rekombinant protein

Rekombinant proteiner (rProt) får betydelig betydning i mangfoldige grene, herunder i den kemiske produktion, farmaceutiske, kosmetiske, human- og dyremedicin, landbrug, fødevarer samt affaldsbehandlingsindustrien.
Produktionen af rekombinant protein kræver brug af et ekspressionssystem. Som udtryk for cellesystemer til fremstilling af rekombinant DNA kan både prokaryote og eukaryote celler anvendes. Mens bakteriecelle er mest udbredt til proteinudtryk på grund af faktorer som lave omkostninger, let skalerbarhed og enkle medieforhold, er pattedyr, gær, alger, insekt- og cellefrie systemer etablerede alternativer. Proteintypen, funktionel aktivitet samt det krævede udbytte af udtrykt protein påvirker udvælgelsen af det cellesystem, der anvendes til proteinudtryk.
For at udtrykke rekombinant protein skal en bestemt celle transinteres med en DNA-vektor, der indeholder skabelonen for rekombinant DNA. Cellerne transfekteret med skabelonen dyrkes derefter. Som følge af den cellulære mekanisme transskriberer og oversætter cellerne det protein af interesse, hvorved det producerer det målrettede protein.
Da de udtrykte proteiner er fanget i den cellulære matrix, skal cellen lyses (forstyrres og brydes) for at frigive proteinerne. I et efterfølgende rensningstrin adskilles og renses proteinet.
Det første rekombinant protein, der blev anvendt til behandling, var rekombinant humant insulin i 1982. I dag produceres der mere end 170 typer rekombinant protein over hele verden til medicinske behandlinger. Almindeligt anvendte rekombinant proteiner, der anvendes i medicin, er f.eks. interferoner, interleukins, vækstfaktorer, tumornekrose faktorer, blodpropper faktorer, trombolytiske lægemidler, og enzymer til behandling af store sygdomme som diabetes, dværgvækst, myokardieinfarkt, kongestiv hjertesvigt, cerebral apopleksi, multipel sklerose, neutropeni, trombocytopeni, anæmi, hepatitis, leddegigt, astma, Crohns sygdom, og kræftbehandlinger. (jf. Phuc V. Pham, i Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Højtydende ultralyd! Hielschers produktsortiment dækker hele spektret fra den kompakte lab ultrasonicator over bench-top enheder til fuld-industrielle ultralydsystemer.