Bufferopløsninger forberedt med ultralydbehandling

Lysisbuffere kan fremstilles effektivt og hurtigt ved hjælp af ultralydsvævshomogenisatorer. Da ultralydapparater er et drømmeværktøj til blanding, opløsning og dispergering, giver de mulighed for en pålidelig og brugervenlig forberedelse af lysisbuffere.

Ultralydsforberedelse af lysisbuffere

Ultralydsvævshomogenisatorer er et almindeligt værktøj til celleforstyrrelse, lysis og ekstraktion, derfor tilgængeligt i de fleste laboratorier. En sekundær anvendelse af sonde-type ultralydapparater er fremstilling af lysisbuffere.

Lysisbuffer er en opløsning, der bruges til at bryde (lyse) celler op og frigive deres indhold til downstream-analyse. Den specifikke sammensætning af lysisbuffer kan variere afhængigt af typen af celler, der lyseres, og den efterfølgende anvendelse. En typisk lysebuffer indeholder dog komponenter som rengøringsmidler, salte og proteasehæmmere. Buffersalte (f.eks. Tris-HCl) og ionsalte (f.eks. NaCl) bruges almindeligvis til at regulere lysatets pH og osmolaritet.
For at lave en lysbuffer blandes komponenterne sammen i de passende koncentrationer og pH. Blandingen omrøres eller rystes normalt, indtil komponenterne er opløst, og opløsningen er homogen.
Ultralydshomogenisering er en metode, der kan bruges til at hjælpe med at lave en god lysisbuffer ved at forbedre blandingen og opløsningen af komponenterne. I denne metode er ultralydsbølger – normalt i området 20 til 30 kHz – påføres blandingen, hvilket skaber kavitationsbobler, der kollapser og genererer intens lokal energi, hvilket fører til mekanisk forskydning og blanding af komponenterne.
Ultralydshomogeniseringsprocessen kan hjælpe med at bryde eventuelle klumper eller aggregater af komponenterne fra hinanden og sikre, at opløsningen blandes ensartet. Som følge heraf kan en sådan forbedret lysisbuffer føre til mere effektiv celleforstyrrelse og højere udbytte af ekstraheret materiale. Derudover kan ultralydshomogenisering reducere den tid, der kræves for at fremstille en lysisbuffer sammenlignet med traditionelle omrørings- eller rystemetoder.
Samlet set er ultralydshomogenisering et kraftfuldt værktøj til at forbedre kvaliteten og effektiviteten af lysisbufferpræparatet.

Protokol til forberedelse af ultralydslysbuffer

Dette er en generel protokol til fremstilling af en lysisbuffer ved hjælp af en ultralydsapparat af sondetype:
 
Materialer:

• Vaskemiddel(er) efter eget valg (f.eks. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Salt(er) efter eget valg (f.eks. NaCl, KCl)
• Proteasehæmmere (f.eks. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultralydsapparat
• Omrører
• Deioniseret vand
• pH-måler eller pH-strimler

 
 
Trin-for-trin instruktioner:

1. Bestem sammensætningen af lysisbufferen baseret på de celler eller væv, du vil lysere, og de downstream-applikationer, du vil bruge lysatet til. Forbered stamopløsningerne af rengøringsmidler, salte og proteasehæmmere i de ønskede koncentrationer.
2. Tilsæt stamopløsningerne af rengøringsmidler, salte og proteasehæmmere til et bægerglas eller en kolbe.
3. Tilsæt deioniseret vand for at bringe volumen op til den ønskede mængde buffer.
4. Bland komponenterne ved hjælp af en omrører for at få en forblandingsopløsning.
5. Mål bufferens pH ved hjælp af en pH-måler eller pH-strimler, og juster pH-værdien efter behov med små mængder syre eller base.
6. Brug sonde-type ultralydsapparat til at homogenisere forblandingsopløsningen, så der opnås en meget homogen opløsning. Derfor sonikeres opløsningen i nogle få sekunder, indtil opløsningen er grundigt blandet, og eventuelle klumper eller aggregater er nedbrudt. Varigheden og effekten af sonikering kan optimeres baseret på den specifikke lysisbuffer og ultralydsapparat, der anvendes.
7. Efter ultralydbehandling måles bufferens pH igen og justeres efter behov.
8. Filtrer bufferen gennem et 0,2 mikron filter for at fjerne snavs eller aggregater, der kan være dannet under sonikering.
9. Lysebufferen er nu klar til brug.

 
Bemærk: Den nøjagtige sammensætning og pH af lyseringsbufferen kan variere afhængigt af de celler eller væv, der lyseres, og de efterfølgende applikationer. Ovenstående protokol er en generel retningslinje og skal muligvis optimeres til specifikke applikationer.
 
Ultralydshomogenisatorer anvendes almindeligvis til celleforstyrrelse og ekstraktion af intracellulære molekyler. Derfor bruger mange lysisapplikationer sonde-type sonikering ikke kun til fremstilling af lysisbufferen, men også til den mekaniske celleforstyrrelse og ekstraktion.
Dette gør ultralydsvævshomogenisatorer til et alsidigt værktøj til laboratorier og forklarer den brede anvendelse af ultralydsapparater inden for mikrobiologi, bioteknologi og biovidenskab.

Ultralyd Lab homogenisatorer

Hielscher Ultrasonics fremstiller og leverer ultralydshomogenisatorer og sonder (sonotroder) ved forskellige effektværdier og prøvevolumener. Dette giver os mulighed for at tilbyde dig den bedst egnede ultralydsforstyrrer til din prøveforberedelse. Vi fokuserer på højeste kvalitet, enestående brugerkomfort og pålidelige sonikeringsresultater. Alle digitale ultralydapparater har smart software, programmering og forudindstilling af sonikeringsprotokoller, browserfjernbetjening, temperaturkontrol, prøvebelysning samt automatisk dataoptagelse på et indbygget SD-kort.

Design, produktion og rådgivning – Kvalitet fremstillet i Tyskland

Hielscher ultralydapparater er kendt for deres højeste kvalitet og designstandarder. Robusthed og nem betjening muliggør en jævn integration af vores ultralydapparater i industrielle faciliteter. Hårde forhold og krævende miljøer håndteres let af Hielscher ultralydsapparater.

Hielscher Ultrasonics er et ISO-certificeret firma og lægger særlig vægt på højtydende ultralydapparater med avanceret teknologi og brugervenlighed. Selvfølgelig er Hielscher ultralydapparater CE-kompatible og opfylder kravene i UL, CSA og RoHs.

Nedenstående tabel giver dig et overblik over vores forskellige laboratorieultralydapparater: