Lysis buffere kan fremstilles effektivt og hurtigt ved hjælp af ultralyd væv homogenisatorer. Da ultralydapparater er et drømmeværktøj til blanding, opløsning og dispergering, giver de mulighed for en pålidelig og brugervenlig forberedelse af lysisbuffere.

Ultralyd forberedelse af lysis buffere

Ultralydvævshomogenisatorer er et almindeligt værktøj til celleforstyrrelser, lysis og ekstraktion, derfor tilgængelige i de fleste laboratorier. En sekundær anvendelse til sonde-type ultralydapparater er forberedelsen af lysisbuffere.

Lysisbuffer er en opløsning, der bruges til at bryde op (lyse) celler og frigive deres indhold til nedstrømsanalyse. Den specifikke sammensætning af lysisbuffer kan variere afhængigt af typen af celler, der lyseres, og downstream-applikationen. Imidlertid indeholder en typisk lysisbuffer komponenter såsom vaskemidler, salte og proteasehæmmere. Buffersalte (f.eks. Tris-HCI) og ioniske salte (f.eks. NaCl) anvendes almindeligvis til at regulere lysatets pH og osmolaritet.
For at fremstille en lysisbuffer blandes komponenterne sammen i passende koncentrationer og pH. Blandingen omrøres eller rystes normalt, indtil komponenterne er opløst, og opløsningen er homogen.
Ultralydhomogenisering er en metode, der kan bruges til at hjælpe med at skabe en god lysisbuffer ved at forbedre blanding og opløsning af komponenterne. I denne metode er ultralydbølger – normalt i området fra 20 til 30 kHz – påføres blandingen, hvilket skaber kavitationsbobler, der kollapser og genererer intens lokal energi, hvilket fører til mekanisk forskydning og blanding af komponenterne.
Ultralydhomogeniseringsprocessen kan bidrage til at bryde eventuelle klumper eller aggregater af komponenterne fra hinanden og sikre, at opløsningen blandes ensartet. Derfor kan en sådan forbedret lysisbuffer føre til mere effektiv celleforstyrrelse og højere udbytter af ekstraheret materiale. Derudover kan ultralydhomogenisering reducere den tid, der kræves for at fremstille en lysisbuffer sammenlignet med traditionelle omrørings- eller rystemetoder.
Samlet set er ultralydhomogenisering et kraftfuldt værktøj til forbedring af kvaliteten og effektiviteten af lysisbufferforberedelsen.

Protokol til ultralydlysis buffer forberedelse

Dette er en generel protokol til fremstilling af en lysisbuffer ved hjælp af en sonde-type ultralydator:
 
Materialer:

• Valg af vaskemiddel (f.eks. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Valg af salt (f.eks. NaCl, KCl)
• Proteasehæmmere (f.eks. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultrasonicator
• Omrører
• Deioniseret vand
• pH-meter eller pH-strimler

 
 
Trin-for-trin instruktioner:

1. Bestem sammensætningen af lysisbufferen baseret på de celler eller væv, du vil lysere, og de downstream-applikationer, du vil bruge lysatet til. Forbered stamopløsningerne af vaskemidler, salte og proteasehæmmere ved de ønskede koncentrationer.
2. Tilsæt stamopløsningerne af vaskemidler, salte og proteasehæmmere til et bægerglas eller kolbe.
3. Tilsæt deioniseret vand for at bringe volumenet op til den ønskede mængde buffer.
4. Bland komponenterne ved hjælp af en omrører for at få en forblandingsopløsning.
5. Bufferens pH-værdi måles ved hjælp af en pH-måler eller pH-strimler, og pH-værdien justeres efter behov med små mængder syre eller base.
6. Brug sonde-typen ultralydator til at homogenisere forblandingsopløsningen, således at der opnås en meget homogen opløsning. Soniker derfor opløsningen i et par sekunder, indtil opløsningen er grundigt blandet og eventuelle klumper eller aggregater er nedbrudt. Varigheden og effekten af sonikering kan optimeres baseret på den specifikke lysisbuffer og ultralydator, der anvendes.
7. Efter ultralydbehandling måles bufferens pH igen og justeres efter behov.
8. Filtrer bufferen gennem et 0,2 mikron filter for at fjerne eventuelle snavs eller aggregater, der kan have dannet sig under sonikering.
9. Lysisbufferen er nu klar til brug.

 
Bemærk: Den nøjagtige sammensætning og pH af lysisbufferen kan variere afhængigt af de celler eller væv, der lyseres, og downstream-applikationerne. Ovenstående protokol er en generel retningslinje og skal muligvis optimeres til specifikke applikationer.
 
Ultralydhomogenisatorer anvendes almindeligvis til celleforstyrrelse og ekstraktion af intracellulære molekyler. Derfor bruger mange lysisapplikationer sonde-type sonikering ikke kun til fremstilling af lysisbufferen, men også til mekanisk celleforstyrrelse og ekstraktion.
Dette gør ultralydvævshomogenisatorer til et alsidigt værktøj til laboratorier og forklarer den brede anvendelse af ultralydapparater inden for mikrobiologi, bioteknologi og biovidenskab.

ultralyd lab homogenisatorer

Hielscher Ultrasonics fremstiller og leverer ultralyd homogenisatorer og sonder (sonotroder) på forskellige effekt ratings og prøve volumener. Dette giver os mulighed for at tilbyde dig den mest egnede ultralydsforstyrrende til din prøveforberedelse. Vi fokuserer på højeste kvalitet, fremragende brugerkomfort og pålidelige sonikeringsresultater. Alle digitale ultralydapparater har smart software, programmering og forudindstilling af sonikeringsprotokoller, browser fjernbetjening, temperaturkontrol, prøvebelysning samt automatisk dataoptagelse på et indbygget SD-kort.

Design, fremstilling og rådgivning – Kvalitet fremstillet i Tyskland

Hielscher ultralydapparater er kendt for deres højeste kvalitet og design standarder. Robusthed og nem betjening muliggør en jævn integration af vores ultralydapparater i industrielle faciliteter. Hårde forhold og krævende miljøer håndteres let af Hielscher ultralydapparater.

Hielscher Ultrasonics er et ISO-certificeret firma og lægger særlig vægt på højtydende ultralydapparater med state-of-the-art teknologi og brugervenlighed. Selvfølgelig er Hielscher ultralydapparater CE-kompatible og opfylder kravene i UL, CSA og RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: