Hielscher Ultralydsteknologi

Ultralyd prøve Prep til ELISA Assays

Analyser såsom ELISA anvendes i vid udstrækning til in vitro-diagnostik, sygdomsrelateret proteindetektion og kvalitetskontrol (f.eks. overvågning af fødevareallergener). Ultralyd prøvepræparat er en hurtig, pålidelig og reproducerbar teknik til lyse celle og isolere intracellulære proteiner, DNA, RNA og organeller. Hielscher Ultrasonics tilbyder forskellige ultralydsløsninger til bekvem forberedelse af enkeltprøver, flere hætteglas samt til mikrotiterplader og 96-brøndplader.

Elisa – Enzym-linked immunosorbent analyse

ELISA står for enzym-forbundet immunosorbent analyse og er en udbredt biokemisk analyse teknik af kategorien ligand-bindende analyser. I ELISA tilsættes en flydende prøve til en stationær fast fase med særlige bindingsegenskaber. Normalt påføres den stationære faste fase som belægning på en brøndplade eller ELISA-plade. Derefter tilsættes, inkuberes og vaskes forskellige flydende reagenser sekventielt, så der endelig sker en optisk ændring (f.eks. farveudvikling ved hjælp af produktet af en enzymatisk reaktion) i den endelige væske i brønden. Den optiske ændring gør det muligt at måle analysandens mængde ved hjælp af en såkaldt kvantitativ “læsning". Til kvantitativ aflæsning anvendes et spektrofotometer, fluorometer eller et luminometer til at detektere og måle intensiteten af det transmitterede lys. Detektionens følsomhed påvirkes af forstærkningen af signalet under de analytiske reaktioner. Da enzymreaktioner er godt undersøgt og pålidelige forstærkningsprocesser, bruges enzymer til at skabe signalet. Enzymerne er knyttet til detektionsreagenserne i faste proportioner for at muliggøre nøjagtig kvantificering, hvilket også forklarer navnet "enzymrelateret" immunosorbentanalyse.
Da ELISA-analyser udføres i mikrotiterplader / 96-brøndsplader, er det kendt som pladebaseret analyseteknik og anvendes fx i klinisk in vitro-diagnostik, forskning, lægemiddeludvikling osv.
ELISA-teknikken anvendes ofte som et diagnostisk værktøj inden for medicin, biotek, plantepatologi og er også en vigtig kvalitetskontrolmåling i flere brancher.

Komplet VialTweeter opsætning: VialTweeter sonotrode ved ultralyds-processor UP200St

Ultralydprøveforberedelsesenheden VialTweeter anvendes til cellelys og proteinekstraktion, før ELISA-analyser

Anmodning om oplysninger




Bemærk vores Fortrolighedspolitik.


Ultralyd prøve Prep før ELISA

Før ELISA-analysen kan udføres, kræver prøverne trin til forberedelse af sådanne cellelys og ekstraktion af intracellulære proteiner, DNA, RNA osv. Fordelen ved ultralydcellelysis og proteinisolering er dens høje effektivitet, pålidelighed og reproducerbarhed. Alle disse faktorer er vigtige for at opnå diagnostik og forskningsresultater af høj kvalitet

Fordele ved Ultrasonic Lysis før ELISA

  • Ensartet prøvebehandling
  • Komplet lysis
  • Komplet proteinekstraktion (f.eks. antistoffer, DNA)
  • Optimal tilpasning til celletype
  • For enhver stikprøvestørrelse
  • reproducerbar
  • Temperaturstyret
  • Automatisk dataprotokol på SD-kort

Protokol for pre-ELISA ultralydcellelysis

Probe-typen insonifier UP200St til lyse

  • For cellekulturer: Før ultralydcellelyse, centrifugeceller i 5 minutter ved 270 x g i en mikrocentrifuge. Fjern supernatanten ved aspiration og resuspenderede celler i 30 – 100 μL RIPA-buffer. Derefter inkuberes cellepilpellet på is i 30 min.
  • Nu er celleprøven klar til ultralydslysis:
    Brug en ultralydsmaskine af sondetypen (f.eks. Uf200 ः t med S26d2-sonde) eller en ultralyds multiprøveanordning (f.eks.
    Til sonde-type sonikering af en enkelt prøve, placere cellerne i 1,5 ml mikrocentrifuge rør.
  • Forudindstille din ultralydsvarighed, totale energiindgang, cyklustilstand og/eller temperaturgrænser i ultralydsmaskinens digitale menu. Dette sikrer meget pålidelig sonikering og repeterbarhed.
  • Indskift sonotrode og tænd ultralydsenheden. Flyt forsigtigt mikrospidsen af ultralydsonden gennem prøven for at sonikere prøven ensartet.
    For de fleste celler, ultralyd lysis vil blive afsluttet efter 2 -4 cyklusser af 10 sek sonikering.
  • Efter sonikering fjernes sonotroden fra prøven. Prøverne skal inkuberes på is i 5 min. Derefter centrifuge på 10.000 x g i 20 min at pellet snavs. Overfør supernatanterne til et nyt mikrocentrifugerør. Anlæmmer analytterne, og opbevar ved -20°C.
  • Ultralydssonotrode kan rengøres ved at tørre det ordentligt med alkohol eller soniker i et bægerglas fyldt med alkohol, f.eks. Alle ultralydssonder fremstillet af titanium er autoclavable.

For vævshomogenater:

  • Skyl vævet med iskold PBS (0,01 M, pH=7,4) for at fjerne overskydende hæmolyseblod grundigt.
  • Væv (nyre, hjerte, lunge, milt osv.) vejes og bøvser det i små stykker, som homogeniseres i PBS. Mængden af PBS, der kræves, er relateret til vævets vægt. Som tommelfingerregel kræver 1 g væv ca. 9 ml PBS. Det anbefales at tilføje nogle proteasehæmmer til PBS. (RIPA eller hypotonisk lysis buffer indeholdende protease og fosfatasehæmmer cocktail kan anvendes alternativt.)
  • Afhængigt af vævsstørrelsen kan en kort vortexbehandling (ca. 1-2 min. i 15 sek. pulser) være nyttig til forbehandling af vævet.
  • Monter en mikrospids, fx S26d2, på din ultralydsmaskine. Prøverøret anbringes med vævet i et isbad.
  • Sonikere prøven med din ultralydsudent, fx UP200St (80% amplitude) i 1 min. i pulstilstand (15 sek. på, 15sek pause). Hold prøven i isbadet.
  • Homogenaterne centrifugeres derefter for at opnå specifikke puljer (cykliske, nukleare, mitokondrielle eller lysosomale) for at berige proteinet til analyse. Ved centrifugering prøven i 5 minutter ved 5000×g, supernatant hentes.
Den sonotrode MTP-24-8-96 har otte ultralyd sonder til sonikering af brønde af microtiter plader.

Den sonotrode MTP-24-8-96 har otte ultralyd sonder til sonikering af brønde af microtiter plader.

Pålidelig temperaturkontrol under sonikering

Temperatur er en afgørende procesfaktor, der er særlig vigtig for behandlingen af biologiske prøver, f.eks. Som alle mekaniske prøve forberedelse teknikker, sonikering skaber varme. Men, temperaturen af prøverne kan være godt kontrolleret, når du bruger Hielscher Ultrasonics enheder. Vi præsenterer dig forskellige muligheder for at overvåge og styre temperaturen af dine prøver, mens du forbereder dem med en sonde-type ultralydsværktøj eller VialTweeter pre-analytisk.

  1. Overvågning af prøvetemperaturen: Alle Hielscher digitale ultralydsprocessorer er udstyret med en intelligent software og en justerbar temperatursensor. Sæt temperatursensoren i ultralydsenheden (f.eks. Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP), og sæt spidsen af temperaturføleren i et af prøverørene. Via digital farvet touch-display kan du i menuen på ultralydsprocessoren angive et specifikt temperaturområde til din prøvesonication. Ultralydsonicatoren stopper automatisk, når max temperaturen er nået, og holder pause, indtil prøvetemperaturen er nede på den lavere værdi af den indstillede temperatur ∆. Så starter sonikeringen automatisk igen. Denne smarte funktion forhindrer varmeinduceret nedbrydning.
  2. Med hensyn til ultralyd multi-prøve enhed VialTweeter, titanium blok, som holder prøven rør, kan forkøles. Sæt VialTweeter-blokken (kun sonotrode uden transducer!) i køleskabet eller fryseren for at forkøle titaniumblokken hjælper med at udskyde temperaturstigningen i prøven. Hvis det er muligt, kan selve prøven også afkøles på forhånd.
  3. Brug et isbad eller tøris til afkøling under sonikering. Placer prøverøret(e) under sonikering i et isbad. Brug en lavvandet bakke fyldt med tøris til VialTweeteren, og anslænk VialTweeteren på tørisen, så varmen hurtigt kan spredes.

Kunder over hele verden bruger Hielscher sonde-ultrasonicators samt multi-prøve sonikering enheder VialTweeter og UIP400MTP for deres daglige prøve forberedelse arbejde i biologiske, biokemiske, medicinske og kliniske laboratorier. Den intelligente software og temperaturkontrol af Hielscher processorer, temperatur er pålideligt kontrolleret og varme-induceret prøve nedbrydning undgås. Ultralyd prøve forberedelse med Hielscher ultralydsløsninger leverer meget pålidelige og reproducerbare resultater!

Kontakt os! / Spørg Os!

Bed om mere information

Brug venligst nedenstående formular til at anmode om yderligere oplysninger om ultralydsprocessorer, programmer og pris. Vi vil være glade for at diskutere din proces med dig og tilbyde dig et ultralydssystem, der opfylder dine krav!









Bemærk venligst, at vores Fortrolighedspolitik.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics fremstiller højtydende ultralydhomogenisatorer til blanding af applikationer, dispersion, emulgering og udvinding på laboratorium, pilot og industriel skala.

Litteratur / Referencer



Fakta Værd at vide

Typer af ELISA

Der findes flere typer ELISA, som udmærker sig ved deres funktionsprincip. De er kendt som direkte ELISA, indirekte ELISA, sandwich ELISA, konkurrencedygtig ELISA og omvendt ELISA. Nedenfor præsenterer vi dig en oversigt over de forskellige ELISA typer og deres vigtigste karakteristika og forskelle.
ELISA kan køres i et kvalitativt eller kvantitativt format. Kvalitative resultater giver et simpelt positivt eller negativt resultat, mens prøvens optiske massetæthed (OD) i kvantitativ ELISA sammenlignes med en standardkurve, som typisk er en seriel fortynding af en kendt koncentrationsopløsning af målmolekylet.

Direkte ELISA

Den direkte ELISA er den mest enkle analyseform af Elisa, hvor der kun anvendes et enzymmærket primært antistof, og der ikke kræves sekundære antistoffer. Det enzymmærkede primære antistof binder sig direkte til målet, dvs. Den bufferede antigenopløsning tilsættes til hver brønd af en mikrotiterplade (normalt 96-brøndplader, ELISA-plader), hvor klæber til plastoverfladen gennem opladningsinteraktioner. Når enzymet, der er knyttet til det primære antistof, reagerer med dets substrat, giver det et synligt signal, der kan måles via spektrofotometer, fluorometer eller luminometer.

Indirekte ELISA

Til den indirekte ELISA-test kræves både et primært antistof og et sekundært antistof. I modsætning til den direkte ELISA er det ikke det primære antistof, men det sekundære antistof imidlertid mærket med et enzym. Antigenet er immobiliseret til brønden plade og bundet af det primære antistof. Efterfølgende binder det enzymmærkede sekundære antistof sig til det primære antistof. Endelig reagerer enzymet, der er knyttet til det sekundære antistof, med sit substrat for at frembringe et synligt signal, der kan detekteres.

Sandwich ELISA

Mens antigenet i direkte og indirekte ELISA-test er immobiliseret og belagt til overfladen af brøndpladen, immobiliseres antistoffet i elisa-sandwichen til ELISA-pladens plastoverflade. De immobiliserede antistoffer i sandwich ELISA er kendt som fange antistoffer. Ud over opsamlingsantistofferne kræves der også såkaldte detektionsantistoffer i sandwich.« Detektionsantistoffer omfatter et ikke-mærket primært detektionsantistof og et enzymmærket sekundært detektionsantistof.
Stepwise, den modgift af interesse binder sig til fange antistof immobiliseret til pladen. Derefter binder det primære detektionsantistof sig til antigenet. Derefter binder det sekundære detektionsantistof sig til det primære detektionsantistof. I det sidste reaktionstrin reagerer enzymet med sit underlag for at frembringe et synligt signal, der kan detekteres optisk.

Konkurrencedygtig ELISA

Konkurrencedygtig ELISA, også kendt som hæmning ELISA, er den mest komplekse ELISA type, fordi det indebærer brug af en inhibitor antigen. Hver af de tre formater, direkte, indirekte og sandwich ELISA, kan tilpasses det konkurrencedygtige ELISA-format. I konkurrencedygtig ELISA konkurrerer hæmningsantigen og interesseantigen om binding til det primære antistof.
For konkurrencedygtige ELISA inkuberes ikke-mærket antistof ved tilstedeværelse af antigen, dvs. Disse bundne antistof/antigenkomplekser tilsættes derefter til en antigenbelagt brønd.
Pladen vaskes, så ubundne antistoffer fjernes. Konkurrencedygtige ELISA har sit navn på grund af det faktum, at jo mere antigen er i prøven, jo mere antigen-antistof komplekser dannes. Det betyder, at der er mindre ubundne antistoffer til rådighed til at binde sig til antigenet i brønden, og antigener skal konkurrere om et tilgængeligt antistof. Et sekundært antistof, der matcher det primære antistof, tilsættes. Dette andet antistof er forbundet med enzymet. Når underlaget tilsættes, producerer de resterende enzymer et kromogene eller fluorescerende signal.
På dette tidspunkt stoppes reaktionen for at undgå den eventuelle mætning af signalet.
Nogle konkurrencedygtige ELISA kits omfatter et enzym-forbundet antigen i stedet for et enzym-forbundet antistof. Det mærkede antigen konkurrerer om primære antistofbindingssteder med prøveantigenet (ikke-mærket). Jo mindre antigen i prøven, jo mere mærket antigen bevares i brønden, og jo stærkere signalet.

Omvendt ELISA

Omvendt ELISA bruger ikke brøndplader, men efterlader antigenerene suspenderet i testvæsken. Den omvendte ELISA-test måler mængden af bundet antistof via antigen. Det blev udviklet specielt til at opdage og undersøge West Nile virus kuvert protein, og hvordan det er i stand til at finde virus-specifikke antistoffer.

Enzymatisk markør, der anvendes til ELISA

Nedenstående liste viser de mest almindelige enzymatiske markører, der anvendes i ELISA-analyser, som gør det muligt at måle analyseresultaterne ved afslutningen.

  • OPD (o-phenylenediamin dihydrochlorid) bliver rav for at detektere HRP (Peberrodsperoxidase), som ofte bruges til som konjugeret protein.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetramethylbenzidin) bliver blå, når detekteres HRP og bliver gul efter tilsætning af svovlsyre eller fosforsyre.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-ethylbenzothiazolin-6-sulkalsyre]-diammonium salt) bliver grøn, når detekteres HRP.
  • PNPP (p-Nitrophenyl Phosphat, Disodium Salt) bliver gul, når detektere alkalisk fosfatase.