Antistofeluering ved sonikering ved hjælp af sonikering med høj kapacitet

Affinitetskromatografi er en kraftfuld teknik til proteinrensning, som kræver Ultralydassisteret ikke-specifik eluering er en pålidelig prøveforberedelsesteknik til opnåelse af antistoffer fra affinitetskromatografi. Den effektive og reproducerbare eluering af målantistoffer bundet til affinitetsmatricer forbedres signifikant ved sonikering. Den høje gennemstrømning plade-sonikator UIP400MTP er optimalt egnet til at eluere høje prøvenumre i 96-brønd, mikrotiter og multiwell plader og letter antistof opsving i affinitetskromatografi.

Hvordan letter sonikering eluering?

Ved hjælp af ultralydintensiveret ikke-specifik eluering kan laboratoriearbejdere og forskere effektivt genvinde rensede antistoffer fra affinitetskromatografikolonner. Disse oprensede antistoffer køres gennem downstream-applikationer inden for forskellige områder, såsom immunologi, bioteknologi og medicinsk diagnostik.

Eluering er et prøveforberedelsestrin, der almindeligvis anvendes til affinitetskromatografi: Affinitetskromatografi udnytter de meget specifikke interaktioner mellem et målmolekyle (såsom et antistof) og en ligand immobiliseret på en kromatografimatrix. Dette muliggør selektiv oprensning af målmolekylet fra en kompleks blanding under anvendelse af molekylers specifikke bindingsaffinitet, f.eks. antistoffer.
Specifik binding af antistoffer: Antistoffer renses ofte ved hjælp af affinitetskromatografi, hvor de selektivt binder til en ligand immobiliseret på kromatografiharpiksen. Dette kan være et antigen, et protein A / G eller ethvert andet molekyle, der interagerer specifikt med antistoffet af interesse.
Eluering: Efter binding af målantistoffet til matrixen involverer det næste trin eluering (eller udvaskning) af det bundne antistof fra harpiksen. Dette elueringstrin involverer typisk forstyrrelse af den specifikke binding mellem antistoffet og liganden. Dette trin kan aktiveres ved sonikering.
Ultralydsonde UP50H er en laboratoriehomogenisator, der ofte bruges som celleforstyrrende, dispergeringsmiddel og emulgator i laboratorier.Ultralydassisteret ikke-specifik eluering: I modsætning til specifikke elueringsmetoder, der kun forstyrrer antistof-ligand-interaktionen, forstyrrer ikke-specifikke elueringsmetoder alle interaktioner på harpiksen, inklusive uspecifikke. Dette kan være fordelagtigt, når man beskæftiger sig med stærkt bundne forurenende stoffer, der kan forstyrre rensningsprocessen. Her kommer sonikering i spil! Ultralydbølger bruges til at generere kavitationsbobler i elueringsbufferen. Når disse bobler kollapser nær harpiksmatrixen, producerer de intense lokaliserede forskydningskræfter og mikrostreaming. Denne mekaniske forstyrrelse hjælper med at bryde de ikke-specifikke interaktioner mellem antistoffet og liganden, hvilket letter elueringen af det bundne antistof fra matrixen.

96-brøndplader og andre multiwellplader behandles bedst ved hjælp af sonikatoren UIP400MTP. Dette ultralydssystem er ideelt til lysis, DNA-fragmentering og celleopløselighed, der behandler prøver i høj gennemstrømning.

Sonikator med høj kapacitet UIP400MTP letter eluering af antistoffer og proteiner

Anmodning om oplysninger




Bemærk vores Fortrolighedspolitik.


 

Denne vejledning forklarer, hvilken type sonikator der er bedst til dine prøveforberedelsesopgaver såsom lysis, celleforstyrrelse, proteinisolering, DNA- og RNA-fragmentering i laboratorier, analyse og forskning. Vælg den ideelle sonikator type til din ansøgning, prøve volumen, prøve nummer og gennemstrømning. Hielscher Ultrasonics har den ideelle ultralyd homogenisator til dig!

Sådan finder du den perfekte sonikator til celleforstyrrelse og proteinekstraktion inden for videnskab og analyse

Videominiaturebillede

 

Fordelene ved ultralydeluering ved hjælp af sonikering

Ultralydeluering giver flere fordele, især i forbindelse med proteinrensningsteknikker såsom affinitetskromatografi.
For eksempel udmærker sonikering alternative metoder med hensyn til proteinintegritet, genopretning, renhed, alsidighed og effektivitet. Disse fordele gør ultralydeluering til et foretrukket valg til proteinrensningsprocesser, især i applikationer, hvor opretholdelse af proteinstruktur og aktivitet er afgørende. Derudover skiller ultralydeluering sig ud for sin enkelhed, effektivitet, alsidighed og kompatibilitet med en bred vifte af proteiner og affinitetsmatricer. Anvendelse af ultralydbølger til at forstyrre proteinmatrixinteraktioner tilbyder ultralydeluering en blid og hurtig metode til proteinrensning, hvilket sikrer høje genopretningshastigheder og bevarer proteinintegritet til downstream-applikationer.

Blidere på proteinstruktur: Eluering med lav pH-værdi involverer anvendelse af sure buffere til at forstyrre bindingen mellem målproteinet (f.eks. antistoffer) og affinitetsmatrixen. Imidlertid kan eksponering for lav pH denaturere proteiner, hvilket potentielt kompromitterer deres struktur og biologiske aktivitet. I modsætning hertil er ultralydeluering primært afhængig af mekanisk forstyrrelse snarere end kemisk denaturering, hvilket gør det blidere på proteinstrukturen. Dette er især fordelagtigt ved rensning af sarte proteiner eller antistoffer, der er følsomme over for pH-ændringer.

  • Reduceret risiko for aggregering: Eluering med lav pH-værdi kan øge risikoen for proteinaggregering på grund af proteinudfoldelse og eksponering af hydrofobe områder. Aggregering kan føre til tab af proteinaktivitet og vanskeligheder i downstream-forarbejdning. Ultralydeluering minimerer til sammenligning risikoen for aggregering ved at anvende mekaniske kræfter til at forstyrre interaktioner mellem proteinet og affinitetsmatrixen uden signifikant at ændre proteinets oprindelige konformation.
  • Forbedret genvinding og renhed: Ultralydeluering kan opnå højere genopretningshastigheder og renhedsniveauer sammenlignet med alternative elueringsmetoder. Den mekaniske forstyrrelse, der leveres af ultralydbehandling, frigiver effektivt bundne proteiner fra affinitetsmatrixen, samtidig med at ikke-specifikke interaktioner minimeres. Dette resulterer i forbedret genvinding af målproteinet med reduceret kontaminering fra ikke-specifikt bundne molekyler, hvilket bidrager til højere renhed af den eluerede fraktion.
  • Behandling med høj kapacitet: Hielscher Ultrasonics tilbyder forskellige sonikatorer til ultralydassisteret proteinrensning, eluering og biopanorering. Microtiter plade-sonicator UIP400MTP giver mulighed for massebehandling af prøver i 96-brønd og andre multiwell plader. VialTweeter er ideel til problemfri, samtidig sonikering af op til 10 rør såsom Eppendorf hætteglas under de samme betingelser. CupHorn er en alsidig sonikator ideel til flere rør, små bægerglas og andre fartøjer. Og selvfølgelig er de klassiske sonde-type sonikatorer med mikrotips et veletableret laboratorieværktøj til prøveforberedelse. Hielscher Ultrasonics produktsortiment har den ideelle sonikator til din eksperimentopsætning og din prøvestørrelse.
  • Alsidighed og kompatibilitet: Ultralydeluering er kompatibel med en bred vifte af proteiner og affinitetsmatricer, der tilbyder alsidighed i rensningsapplikationer. I modsætning hertil er eluering med lav pH-værdi muligvis ikke egnet til visse proteiner, der er følsomme over for sure forhold, eller til affinitetsmatricer, der er tilbøjelige til nedbrydning eller udvaskning ved lav pH. Ultralydeluering giver et blidt og universelt anvendeligt alternativ, der kan skræddersys til specifikke rensningsbehov uden at gå på kompromis med proteinintegritet eller matrixstabilitet.
  • Tid og effektivitet: Ultralydeluering kræver typisk kortere elueringstider sammenlignet med andre elueringsmetoder. Den hurtige og effektive frigivelse af bundne proteiner, der lettes ved ultralydbehandling, reducerer behandlingstiden og øger den samlede rensningseffektivitet, hvilket gør det til en attraktiv mulighed for applikationer med høj kapacitet, eller når der kræves tidsfølsomme resultater.
96-brønds plade Sonicator UIP400MTP til cellelyse, DNA-ekstraktion, DNA-fragmentering, celleopløselighed og proteinoprensning.

96-brønd plade sonikator UIP400MTP til sonikering af multiwellplader, PCR- og ELISA-plader

 

VialTweeter på ultralyd processor UP200ST

VialTweeter sonikator til samtidig sonikering af 10 prøver, fx at forstyrre celler og ekstrahere proteiner

Ultralydassisteret biopanning

Biopanning er en kritisk teknik inden for antistofoprensning, især når der skal opnås meget specifikke antistoffer til forskning eller medicinsk diagnostik. Biopanning er den proces, hvor antistoffer isoleres fra en blanding af antistoffer, det såkaldte antistofbibliotek.

Hvordan virker ultralyd biopanning arbejde?

Det starter med et bibliotek af antistoffer, en blanding af forskellige antistoffer. Hvert antistof er kendetegnet ved sin egen unikke form og specificitet. Til analyse og terapi skal specifikke antistoffer, der genkender et bestemt mål, såsom en virus eller kræftcelle, isoleres. Ved hjælp af biopanning kan disse specifikke antistoffer isoleres. Ultralydbehandling hjælper med at lette biopanningprocessen, hvilket gør antistofrensningen mere effektiv.

Startende med et bibliotek af antistoffer vises antistofferne typisk på overfladen af en bakteriofag, gærcelle eller andet displaysystem. Dette bibliotek repræsenterer en bred vifte af antistoffer.
I det første trin udsættes dette bibliotek for dit målmolekyle. Antistofferne, der binder til målet, klæber fast, mens de andre vaskes væk. For at fjerne de ubundne antistoffer vaskes prøverne flere gange med en bufferopløsning.

Nu har vi prøver, der kun indeholder bundne antistoffer. Dette betyder dog, at antistofferne stadig er knyttet til deres displaysystem. For at frigøre dem skal antistof-ligandinteraktionen brydes. Dette trin er kendt som eluering. Prøver kan elueres ved hjælp af en opløsning, der forstyrrer bindingen, f.eks. ved hjælp af en specifik elueringsbuffer, en kaotropisk, sænkning af pH-værdien, påføring af varme osv. Disse elueringsteknikker ødelægger antistof-ligandbindingen, men kan også forringe antistofferne selv. Derfor bruges sonikering som alternativ teknik til forsigtigt at fjerne antistofferne fra deres mål.

Efter afslutning af elueringstrinnet opnår vi rensede antistoffer, klar til brug i forskning, diagnostik eller terapi.

Biopanning er en kraftfuld teknik i antistofrensning og ultralydeluering letter og intensiverer effektiviteten – hvilket resulterer i stærkt rensede, ubeskadigede antistoffer. Ultralydbiopanning gør det muligt for forskere at isolere meget specifikke antistoffer fra komplekse prøver, hvilket åbner døre til en bred vifte af applikationer.

Sonikatorer til antistofoprensning

Hielscher sonikatorer er veletablerede værktøjer, der anvendes i de bedste forskningsfaciliteter verden over. Værdsat for deres state-of-the-art design og overlegen ydeevne, Hielscher sonikatorer betragtes som uundværlige lab værktøjer inden for bioteknologi og molekylærbiologi. Hielscher Ultrasonics tilbyder sonikatorer til enkeltprøve samt high-throughput prøve forberedelse, som letter effektiv oprensning af antistoffer og eluering af målbundne molekyler, og muliggør effektiv biopanning til at isolere specifikke antistoffer med præcision og hastighed.
I forbindelse med antistofoprensning udmærker Hielscher-sonikatorer sig ved at lette vaske- og elueringstrinnene ved effektivt at fjerne ubundne antistoffer, samtidig med at integriteten af målbundne komplekser bevares. Deres præcise kontrol og skalerbarhed giver mulighed for skræddersyede behandlingsbetingelser, hvilket sikrer optimale rensningsresultater på tværs af en lang række prøvemængder og kompleksiteter.
Hielscher-sonikatorer repræsenterer den teknologiske innovation inden for ultralydsbehandling, der tilbyder uovertruffen kapacitet til antistofrensning, eluering og biopanorering. Med deres præcision, pålidelighed og brugervenlighed tilbyder de forskellige ultralydssystemer optimal effektivitet og alsidighed til biofarmaceutisk forskning, diagnostik og terapi.
Kontakt os nu for at lære mere om Hielscher sonikatorer til antistofrensning, eluering og biopanering! Vores erfarne tekniske personale er glade for at diskutere din antistofrelaterede applikation!

Hvorfor Hielscher Ultrasonics?

  • høj effektivitet
  • Den nyeste teknologi
  • pålidelighed & robusthed
  • Justerbar, præcis processtyring
  • parti & Inline
  • for enhver volumen
  • intelligent software
  • smarte funktioner (f.eks. programmerbar, dataprotokol, fjernbetjening)
  • Nem og sikker at betjene
  • Lav vedligeholdelse
  • CIP (clean-in-place)

Anmodning om oplysninger




Bemærk vores Fortrolighedspolitik.


Design, fremstilling og rådgivning – Kvalitet fremstillet i Tyskland

Hielscher ultralydapparater er kendt for deres højeste kvalitet og design standarder. Robusthed og nem betjening muliggør en jævn integration af vores ultralydapparater i industrielle faciliteter. Hårde forhold og krævende miljøer håndteres let af Hielscher ultralydapparater.

Hielscher Ultrasonics er et ISO-certificeret firma og lægger særlig vægt på højtydende ultralydapparater med state-of-the-art teknologi og brugervenlighed. Selvfølgelig er Hielscher ultralydapparater CE-kompatible og opfylder kravene i UL, CSA og RoHs.

Kontakt os! / Spørg Os!

Bed om mere information

Brug venligst nedenstående formular til at anmode om yderligere oplysninger om ultralydsprocessorer, applikationer og pris. Vi vil være glade for at diskutere din proces med dig og tilbyde dig et ultralydssystem, der opfylder dine krav!









Bemærk venligst, at vores Fortrolighedspolitik.


Videoen viser ultralydsprøveforberedelsessystemet UIP400MTP, som giver mulighed for pålidelig prøveforberedelse af alle standard multi-brøndplader ved hjælp af højintensiv ultralyd. Typiske anvendelser af UIP400MTP omfatter celle lysis, DNA, RNA, og kromatin klipning samt proteinudvinding.

Ultralydsdronning UIP400MTP til multi-well plade sonikering

Videominiaturebillede

Sammenligning af ultralydeluering vs traditionelle elueringsteknikker

  1. Eluering af gradient: Ved gradienteluering reduceres bindingsstyrken mellem målproteinet og affinitetsmatrixen gradvist ved at ændre elueringsbufferens sammensætning. Dette kan indebære ændring af faktorer som pH, saltkoncentration eller koncentrationen af konkurrerende ligander. Gradienteluering giver mulighed for finjustering af elueringsbetingelser for selektivt at frigive målproteinet, samtidig med at ikke-specifik binding minimeres.
    Fordele ved ultralydeluering: Ultralydeluering giver en hurtigere og ensartet frigivelse af bundne proteiner sammenlignet med gradienteluering. Mens gradienteluering kræver omhyggelig optimering og overvågning af elueringsbetingelser, giver ultralydeluering en enklere og mere effektiv metode til proteingenvinding.
  2. Konkurrencedygtig eluering: Ved kompetitiv eluering indføres en høj koncentration af en konkurrerende ligand i elueringsbufferen for at forstyrre bindingen mellem målproteinet og affinitetsmatrixen. Den konkurrerende ligand konkurrerer med målproteinet om bindingssteder på matrixen og derved fortrænger proteinet og frigiver det i eluatet.
    Fordele ved ultralydeluering: Ultralydeluering tilbyder et blidere og mere alsidigt alternativ til konkurrencedygtig eluering. Konkurrencedygtig eluering kan kræve anvendelse af høje koncentrationer af kaotropiske midler (dvs. et co-opløst stof, der forstyrrer hydrogenbindingsnetværket mellem vandmolekyler og reducerer stabiliteten af proteinernes oprindelige tilstand ved at svække den hydrofobe virkning) eller barske kemikalier, som kan påvirke proteinstabilitet og aktivitet. I modsætning hertil giver ultralydeluering mekanisk forstyrrelse uden behov for yderligere kemiske agenser, bevarer proteinintegritet og sikrer høje genopretningshastigheder.
  3. Temperaturinduceret eluering: Temperaturinduceret eluering indebærer ændring af elueringsbufferens temperatur for at forstyrre bindingen mellem målproteinet og affinitetsmatrixen. Dette kan opnås ved enten at øge eller sænke temperaturen afhængigt af den specifikke proteinmatrixinteraktion.
    Fordele ved ultralydeluering: Ultralydeluering tilbyder en hurtigere og kontrolleret metode til proteineluering sammenlignet med temperaturinducerede metoder. Mens temperaturinduceret eluering kan kræve præcis kontrol af temperaturgradienter og længere ligevægtstider, giver ultralydeluering øjeblikkelig mekanisk forstyrrelse, hvilket resulterer i kortere elueringstider og forbedret effektivitet.
  4. Enzymatisk eluering: Enzymatisk eluering anvender specifikke enzymer, der spalter bindingerne mellem målproteinet og affinitetsmatrixen og frigiver proteinet i eluatet. Denne metode er især nyttig til proteiner, der er tæt bundet til matrixen, eller til applikationer, der kræver præcis kontrol over elueringsbetingelser.
    Fordele ved ultralydeluering: Ultralydeluering tilbyder et ikke-enzymatisk og kemikaliefrit alternativ til enzymatisk eluering. Mens enzymatisk eluering kan kræve optimering af enzymkoncentration, inkubationstid og pH-betingelser, giver ultralydeluering en ligetil og universelt anvendelig metode til proteingenvinding uden behov for yderligere reagenser eller specialudstyr.
Sonikator til forberedelse af prøver med høj kapacitet! Den UIP400MTP plade sonikator letter lysis, proteinekstraktion, DNA-fragmentering og celleopløselighed af biologiske prøver i 96-brøndplader.

Plade sonikator UIP400MTP til alle 96-brønd plader, mikrotiter plader og multi-brønd plader.



Litteratur / Referencer


Højtydende ultralyd! Hielscher produktsortimentet dækker hele spektret fra den kompakte lab ultralydsapparat over bænk-top enheder til fuld-industrielle ultralydssystemer.

Hielscher Ultrasonics fremstiller højtydende ultralyd homogenisatorer fra Lab til industriel størrelse.


Vi vil være glade for at diskutere din proces.

Lad os komme i kontakt.