Ultradźwiękowe przygotowanie surowicy bogatopłytkowej

• Osocze bogatopłytkowe (PRP) to osocze krwi wzbogacone w płytki krwi, stosowane w zabiegach medycznych i estetycznych.
• Liza ultradźwiękowa i kondycjonowanie są bardzo skuteczną metodą przygotowania osocza bogatopłytkowego.
• Hielscher Ultrasonics oferuje różne systemy ultradźwiękowe dostosowane do wymagań obróbki krwi (np. do przygotowania wewnątrz i na zewnątrz pomieszczenia czystego).

Surowica bogatopłytkowa

Sonikacja jest niezawodną i prostą metodą lizy płytek krwi w autologicznej surowicy krwi w celu uwolnienia czynników wzrostu. Frakcje pochodzące z płytek krwi – znane również jako autologiczna surowica kondycjonowana (ACS) – są stosowane do naprawy tkanek lub w zabiegach estetycznych. Aby uzyskać optymalne wyniki, PRP jest wzbogacane przed wstrzyknięciem.
W celu przygotowania osocza wzbogaconego w czynniki wzrostu komórek sonikacja jest bardzo skuteczną i wydajną metodą lizy błon komórkowych oraz uwalniania z płytek krwi niemal wszystkich czynników wzrostu komórek. Dzięki lizie ultradźwiękowej i kondycjonowaniu można wykorzystać nawet krew z dodatkiem antykoagulantu.
Kondycjonowanie PRP za pomocą sonikacji jest wygodnym i opłacalnym sposobem uzyskiwania skoncentrowanych czynników wzrostu.

Liza ultradźwiękowa osocza bogatopłytkowego (PRP)

Efekty lizy ultradźwiękowej

Obróbka ultradźwiękowa surowicy krwi prowadzi do jednorodnej lizy płytek krwi w celu uwolnienia zawartych w nich czynników wzrostu (czynnika wzrostu AB (PDGF-AB), czynnika wzrostu AA (PDGF-AA), czynnika wzrostu BB (PDGF-BB), czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), transformującego czynnika wzrostu β (TGF-β), naskórkowego czynnika wzrostu (EGF), insulinopodobnego czynnika wzrostu (IGF), czynnika wzrostu komórek nabłonkowych ECGF i czynnika wzrostu fibroblastów (FGF)). Płytki krwi i ich ziarnistości alfa są rozbijane przez sonikację z wykorzystaniem zjawiska kawitacji akustycznej. Wykorzystanie kawitacji ultradźwiękowej do lizy płytek krwi zmniejsza możliwy negatywny wpływ metody wielokrotnego zamrażania i rozmrażania na aktywność czynników wzrostu.

Protokół ultradźwiękowego przygotowania PRP

Probówkę zawierającą około 16mL świeżo pobranej próbki krwi autologicznej delikatnie odwraca się 8–10 razy, aby dobrze wymieszać krew z antykoagulantami. Następnie próbkę odwirowuje się przy 1800 g przez 20 min w temperaturze pokojowej. Po odwirowaniu płytki krwi i komórki jednojądrzaste tworzą białawą warstwę w dolnej części warstwy osocza, zwaną osoczem bogatopłytkowym (PRP). Górna warstwa jest nazywana osoczem ubogopłytkowym (PPP). Komórki jednojądrzaste można usunąć lub pozostawić w próbce. Często pozostawia się je w próbce PRP, aby uniknąć dodatkowych etapów, które wiążą się z ryzykiem zanieczyszczenia.
Uwaga: Obróbka ultradźwiękowa autologicznego PRP musi być prowadzona w warunkach sterylnych.
PRP i PPP są rozdzielane i zbierane. Do PPP dodaje się 1,5mL 10% roztworu chlorku wapnia, natomiast do PRP dodaje się 0,5mL 5% etanolu. Obie zawiesiny delikatnie miesza się i pozostawia na 5 min w temperaturze pokojowej. Na koniec do zawiesiny PRP dodaje się 1mL PPP i pozostawia do utworzenia skrzepu fibrynowego.
Obróbka ultradźwiękowa: Ponieważ powstały żel płytkowy stanowi rezerwuar uwolnionych czynników wzrostu, żel fibrynowy musi zostać rozbity, aby uwolnić dostępne czynniki wzrostu. Parametry lizy ultradźwiękowej i uwalniania czynników wzrostu są następujące: Próbkę w probówce należy poddać sonikacji za pomocą urządzenia UP200Ht lub UP200St (200W, 26kHz) z sonotrodą S26d2. Aby uniknąć przegrzania próbki krwi, sonikację można przeprowadzać w cyklach pulsacyjnych (np. 10 s pracy, 30 s przerwy). Próbkę należy umieścić na lodzie w celu chłodzenia, aby optymalnie utrzymywać temperaturę w zakresie 2–5°C. Po sonikacji próbkę odwirowuje się przy 16 000 g przez 5 min w temperaturze pokojowej. Supernatant zbiera się i można go przechowywać w temperaturze -70°C.
Stężenie płytek krwi we frakcji PRP uzyskanej metodą wykorzystującą sonikację było 1,7–4,5 razy wyższe w porównaniu ze średnią liczbą płytek krwi w krwi pełnej podawaną w literaturze.

PRP łączono z terapią komórkami macierzystymi pochodzącymi z tkanki tłuszczowej (autologiczne komórki macierzyste uwolnione ultradźwiękowo z tkanki tłuszczowej, zmieszane z PRP i wstrzyknięte z powrotem do tkanki pacjenta w celu jej naprawy).

Urządzenia ultradźwiękowe

Hielscher Ultrasonics jest ekspertem w dziedzinie zaawansowanej i niezawodnej technologii ultradźwiękowej. Nasze urządzenia ultradźwiękowe są stosowane na całym świecie do lizy, ekstrakcji i przygotowania próbek – metodami bezpośrednimi i pośrednimi. Nadające się do autoklawowania oraz jednorazowe akcesoria zapewniają wolną od zanieczyszczeń obróbkę autologicznych próbek krwi. Większość naszych systemów można stosować do lizy ultradźwiękowej komórek macierzystych i PRP, co sprawia, że nasze urządzenia ultradźwiękowe są jeszcze bardziej efektywne ekonomicznie.
Poniższa tabela przedstawia nasze urządzenia ultradźwiękowe odpowiednie do przygotowania osocza bogatopłytkowego oraz zalecane dla każdego z nich objętości próbek. Dostępne są również większe sonikatory i systemy dostosowane do indywidualnych potrzeb.

Skontaktuj się z nami już dziś! Chętnie pomożemy Ci znaleźć optymalne urządzenie ultradźwiękowe!