Ultradźwiękowe przygotowanie surowicy bogatopłytkowej
- Osocze bogatopłytkowe (PRP) to osocze krwi wzbogacone płytkami krwi, które jest wykorzystywane do zabiegów medycznych i estetycznych.
- Ultradźwiękowa liza i kondycjonowanie to bardzo skuteczna metoda przygotowania osocza bogatopłytkowego.
- Hielscher Ultrasonics oferuje różne systemy ultradźwiękowe dopasowane do wymagań leczenia krwią (np. do wewnętrznego i zewnętrznego przygotowania czystego pomieszczenia).
surowica bogatopłytkowa
Sonikacja jest niezawodną i łatwą metodą lizowania płytek krwi w autologicznej surowicy krwi w celu uwolnienia czynników wzrostu. Frakcje pochodzące z płytek krwi – znana również jako autologiczna surowica kondycjonowana (ACS) – są stosowane do naprawy tkanek lub zabiegów estetycznych. Aby uzyskać optymalne wyniki, PRP jest wzbogacane przed wstrzyknięciem.
W celu przygotowania wzbogaconego osocza z czynnikami wzrostu komórek, sonikacja jest bardzo skuteczną i wydajną metodą lizy błon komórkowych i uwalniania prawie wszystkich czynników wzrostu komórek z płytek krwi. Dzięki ultradźwiękowej lizie i kondycjonowaniu można stosować nawet antykoagulowaną krew.
Kondycjonowanie PRP za pomocą sonikacji jest wygodnym i opłacalnym sposobem na uzyskanie skoncentrowanych czynników wzrostu.
Ultradźwiękowa liza osocza bogatopłytkowego (PRP)
Efekty lizy ultradźwiękowej
Ultradźwiękowa obróbka surowicy krwi powoduje jednorodną lizę płytek krwi w celu uwolnienia uwięzionych czynników wzrostu (czynnik wzrostu AB (PDGF-AB), czynnik wzrostu AA (PDGF-AA), czynnik wzrostu BB (PDGF-BB), czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), transformujący czynnik wzrostu β (TGF-β), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF), insulinopodobny czynnik wzrostu (IGF), czynnik wzrostu komórek nabłonkowych ECGF i fibroblastyczny czynnik wzrostu (FGF)). Płytki krwi i ich granulki alfa są rozbijane przez sonikację, wykorzystując zjawisko kawitacja akustyczna. Zastosowanie kawitacji ultradźwiękowej do lizy płytek krwi zmniejsza możliwy negatywny wpływ powtarzanej metody zamrażania-rozmrażania na aktywność czynnika wzrostu.
Protokół ultradźwiękowego przygotowania PRP
Około 16 ml świeżo pobranej próbki krwi autologicznej jest delikatnie odwracane 8-10 razy w probówce, aby krew i antykoagulanty zostały dobrze wymieszane. Następnie próbka jest odwirowywana z prędkością 1800 g przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Po odwirowaniu płytki krwi i komórki jednojądrzaste tworzą białawą warstwę na dnie warstwy osocza, która jest znana jako osocze bogatopłytkowe (PRP). Górna warstwa znana jest jako osocze ubogopłytkowe (PPP). Komórki jednojądrzaste mogą zostać usunięte lub pozostać w próbce. Często komórki jednojądrzaste pozostają w próbce PRP, aby uniknąć dodatkowych etapów, które niosą ze sobą ryzyko zanieczyszczenia.
Uwaga: Ultradźwiękowa obróbka autologicznego PRP musi być przeprowadzana w sterylnych warunkach.
PRP i PPP są oddzielane i zbierane. Do PPP dodaje się 1,5 ml 10% roztworu chlorku wapnia, a do PRP 0,5 ml 5% etanolu. Obie zawiesiny są delikatnie mieszane i odstawiane na 5 minut w temperaturze pokojowej. Na koniec do zawiesiny PRP dodaje się 1 ml PPP i odstawia do momentu utworzenia się skrzepu fibryny.
Obróbka ultradźwiękowa: Ponieważ utworzony żel płytkowy działa jako rezerwuar dla uwolnionych czynników wzrostu, żel fibrynowy musi zostać przerwany w celu uwolnienia dostępnych czynników wzrostu. Parametry ultradźwiękowej lizy i uwalniania czynników wzrostu są następujące: Sonikacja z UP200Ht lub UP200St (200 W, 26 kHz) sonotrodą S26d2 próbkę w probówce. Aby uniknąć przegrzania próbki krwi, sonikacja może być wykonywana w cyklach pulsacyjnych (np. 10 sek. włączona, 30 sek. wyłączona). Próbkę należy umieścić na lodzie w celu schłodzenia, tak aby temperatura była optymalnie utrzymywana między 2 – 5°C. Po sonikacji próbka jest odwirowywana przy 16000 g przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Supernatant jest zbierany i może być przechowywany w temperaturze -70°C.
Stężenie płytek krwi we frakcji PRP wzrosło o 1,7 – 4,5-krotnie w metodzie sonikacji w porównaniu ze średnią liczbą płytek krwi w pełnej krwi w literaturze.
PRP połączono z terapią komórkami macierzystymi pochodzącymi z tkanki tłuszczowej (ultradźwiękowo uwalniane autologiczne komórki macierzyste z tkanki tłuszczowej, zmieszane z PRP i wstrzyknięte z powrotem do tkanki pacjenta w celu naprawy).
Sprzęt ultradźwiękowy
Hielscher Ultrasonics jest ekspertem w dziedzinie zaawansowanej i niezawodnej technologii ultradźwiękowej. Nasze urządzenia ultradźwiękowe są używane na całym świecie do lizy, ekstrakcji i przygotowania próbek – przez bezpośrednie i pośrednie. Sterylizacja w autoklawie jak również jednorazowy akcesoria zapewniają wolne od zanieczyszczeń obróbka autologicznych próbek krwi. Większość naszych systemów może być wykorzystywana do ultradźwiękowej lizy komórki macierzyste i PRP, co sprawia, że nasze urządzenia ultradźwiękowe są jeszcze bardziej wydajne pod względem ekonomicznym.
W poniższej tabeli wymieniono nasze urządzenia ultradźwiękowe, które są odpowiednie do przygotowania osocza bogatopłytkowego, oraz ich zalecaną objętość próbki. Dostępne są również większe ultrasonografy i niestandardowe systemy.
| Urządzenie | Moc [W] | Freq. [kHz] | Typ | Objętość [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | samodzielny | 0.5 | – | 1.5 |
| UP50H | 50 | 30 | Ręczny lub stacjonarny | 0.01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | Ręczny lub stacjonarny | 0.01 | – | Processor ultradźwiękowe 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | Ręczny lub stacjonarny | 0.1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | standmounted | 0.1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | standmounted | 5.0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | samodzielny | 30 | – | Processor ultradźwiękowe 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | Komora przepływowa wolna od zanieczyszczeń | |||
Skontaktuj się z nami już dziś! Chętnie pomożemy w znalezieniu optymalnego urządzenia ultradźwiękowego!
Skontaktuj się z nami!? Zapytaj nas!
GDmini2 z przetwornikiem UP200St-TD (200 W)
Literatura/Referencje
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): Platelet lysate gel and endothelial progenitors stimulate microvascular network formation in vitro: tissue engineering implications. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Platelet-Rich Plasma (PRP) for Acute Muscle Injury: A Systematic Review. PLOS ONE Volume 9, Issue 2, 2014.
Fakty, które warto znać
Osocze bogatopłytkowe
Osocze bogatopłytkowe zawiera czynnik wzrostu AB (PDGF-AB), płytkowy czynnik wzrostu AA (PDGF-AA), płytkowy czynnik wzrostu BB (PDGF-BB), czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), transformujący czynnik wzrostu β (TGF-β), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF), insulinopodobny czynnik wzrostu (IGF), czynnik wzrostu komórek nabłonkowych ECGF i fibroblastyczny czynnik wzrostu (FGF), które są ważnymi stymulatorami wzrostu i odnowy komórek.
Autologiczna kondycjonowana surowica (ACS)
Autologiczne kondycjonowane osocze (ACP) to osocze bogatopłytkowe, które jest ekstrahowane z autologicznej krwi i stosowane do wspomagania regeneracji w różnych schorzeniach ortopedycznych i zabiegach chirurgicznych. Kondycjonowana surowica jest przygotowywana poprzez oddzielenie osocza od innych składników krwi (takich jak erytrocyty) i zagęszczenie go. ACP to osocze bogatopłytkowe (PRP). PRP to ogólny termin określający rodzaj osocza, które zawiera znacznie wyższe stężenie trombocytów w porównaniu z krwią pełną. Jest ono ekstrahowane z krwi pełnej. Główne składniki ACP obejmują trombocyty (płytki krwi) i kilka czynników wzrostu, które odgrywają ważną rolę w procesie gojenia. W przeciwieństwie do innych preparatów osocza bogatopłytkowego, ACP wyróżnia się niskim stężeniem białych krwinek, takich jak granulocyty obojętnochłonne, które mogą być szkodliwe dla procesu gojenia, gdy występują w wysokich stężeniach.
zastrzyki z osocza bogatopłytkowego
Osocze bogatopłytkowe jest stosowane jako zastrzyk w medycynie regeneracyjnej, a także w zabiegach kosmetycznych. Zastosowanie PRP obiecuje znaczne przyspieszenie gojenia i regeneracji mięśni. Ponadto jest z powodzeniem stosowane w leczeniu stanów zapalnych, zapalenia stawów, bólu, ran, wolno gojących się ran otwartych i poważnych oparzeń skóry. PRP zawiera wysoki poziom czynników wzrostu, które stymulują i chronią komórki gojące, dzięki czemu uszkodzona tkanka jest naprawiana.
W przypadku zabiegów kosmetycznych wykazano, że PRP skutecznie stymuluje wzrost włosów, odnowę skóry (znany również jako zabieg wampirzy).
Płytkowe czynniki wzrostu (PDGF)
Termin płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF) odnosi się do czynników PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C i PDGF-D. Jest to sieć sygnalizacyjna składająca się z czterech ligandów (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C i PDGF-D) oraz dwóch receptorów, PDGFR-alfa i PDGFR-beta.
Czynniki wzrostu lub białka regulują wzrost i podział komórek. Jako główny mitogen występujący w surowicy ssaków, który jest uwalniany z płytek krwi podczas tworzenia skrzepów, odgrywa istotną rolę w tworzeniu naczyń krwionośnych (angiogenezie), czyli wzroście naczyń krwionośnych z już istniejącej tkanki naczyń krwionośnych.