Platelet Rich Serum의 초음파 준비
- 혈소판 풍부 혈장(PRP)은 혈소판이 풍부한 혈장으로, 의료 및 건강 치료에 사용됩니다.
- 초음파 용해 및 컨디셔닝은 혈소판이 풍부한 혈장을 준비하는 매우 효과적인 방법입니다.
- Hielscher 초음파는 혈액 치료의 요구 사항에 맞는 다양한 초음파 시스템을 제공합니다 (예 : 클린 룸의 내부 및 외부 준비).
혈소판 리치 세럼
초음파 처리는 성장 인자를 방출하기 위해 자가 혈액 혈청의 혈소판을 용해시키는 신뢰할 수 있고 쉬운 방법입니다. 혈소판 유래 분획 – 자가 컨디셔닝 세럼(ACS)이라고도 합니다. – 조직 수리 또는 미용 치료에 사용됩니다. 최적의 결과를 얻기 위해 PRP는 주입 전에 농축됩니다.
세포 성장 인자로 농축 된 혈장을 준비하기 위해, 초음파 처리는 세포막을 용해하고 혈소판에서 거의 완전한 세포 성장 인자를 방출하는 매우 효과적이고 효율적인 방법입니다. 초음파 용해 및 컨디셔닝을 통해 항응고 혈액도 사용할 수 있습니다.
초음파 처리를 통한 PRP의 컨디셔닝은 농축 된 성장 인자를 수득하는 편리하고 비용 효율적인 방법입니다.
혈소판 풍부 혈장(PRP)의 초음파 용해
Ultrasonic Lysis 효과
혈청의 초음파 처리는 갇힌 성장 인자(성장 인자 AB(PDGF-AB), 성장 인자 AA(PDGF-AA), 성장 인자 BB(PDGF-BB), 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 형질전환 성장 인자 β(TGF-β), 표피 성장 인자(EGF), 인슐린 유사 성장 인자(IGF), 상피 세포 성장 인자 ECGF 및 섬유아세포 성장 인자(FGF))를 방출하기 위해 혈소판을 균일하게 용해합니다. 혈소판과 그들의 알파 과립은 초음파 처리에 의해 파괴됩니다. 음향 캐비테이션. 혈소판 용해를 위해 초음파 캐비테이션을 사용하면 반복적인 동결-해동 방법의 성장 인자 활성에 대한 가능한 부정적인 영향을 줄일 수 있습니다.
초음파 PRP 준비를 위한 프로토콜
약 16mL의 신선하게 채취한 자가 혈액 샘플을 튜브에서 8-10회 부드럽게 뒤집어 혈액과 항응고제가 잘 혼합되도록 합니다. 그 후, 샘플을 1800g에서 실온에서 20분 동안 원심분리합니다. 원심분리 후 혈소판과 단핵 세포는 혈소판 풍부 혈장(PRP)으로 알려진 원형질층 바닥에 희끄무레한 층을 형성합니다. 상층부는 혈소판 불량 혈장(PPP)으로 알려져 있습니다. 단핵 세포는 제거되거나 샘플에 남아 있을 수 있습니다. 종종 단핵 전지는 오염 위험이 있는 추가 단계를 피하기 위해 PRP 샘플에 남아 있습니다.
참고: 자가 PRP의 초음파 치료는 멸균 상태에서 수행해야 합니다.
PRP와 PPP는 분리되어 수집됩니다. PPP에는 1.5mL 10% 염화칼슘 용액이 첨가되고 PRP 0.5mL 5% 에탄올이 첨가됩니다. 두 서스펜션 모두 부드럽게 교반되고 실온에서 5분 동안 방치됩니다. 마지막으로, 1mL PPP를 PRP 현탁액에 첨가하고 섬유소 응고가 형성될 때까지 그대로 두십시오.
초음파 처리: 형성된 혈소판 겔은 방출된 성장 인자의 저장소 역할을 하기 때문에 사용 가능한 성장 인자를 방출하기 위해서는 피브린 겔을 파괴해야 합니다. 초음파 용해 및 성장 인자 방출에 대한 매개 변수는 다음과 같습니다. 를 사용한 초음파 처리 UP200HT 또는 UP200세인트 (200W, 26kHz) sonotrode S26d2와 튜브의 샘플. 혈액 샘플의 과열을 방지하기 위해 초음파 처리는 펄스주기(예: 10초 켜기, 30초 끄기)로 수행 할 수 있습니다. 온도가 2 사이로 최적으로 유지되도록 샘플을 냉각을 위해 얼음 위에 놓아야 합니다. – 5°섭씨. 초음파 처리 후, 샘플은 실온에서 5 분 동안 16000g에서 원심 분리됩니다. 상층액은 수집되어 -70°C에서 보관할 수 있습니다.
PRP 분획물의 혈소판 농도는 1.7 농축되었다 – 4.5 전혈에서 문헌 평균 혈소판 수와 비교할 때 초음파 처리 방법에서.
PRP는 지방 유래 줄기 세포 치료제(지방 조직에서 초음파로 방출된 자가 줄기 세포, mixed with PRP, and injected back into the patient’s tissue for repair).
초음파 장비
Hielscher 초음파는 정교하고 신뢰할 수있는 초음파 기술의 전문가입니다. 당사의 초음파 장치는 용해, 추출 및 시료 준비를 위해 전 세계적으로 사용됩니다. – 직접 및 간접으로. 오토클레이브 가능 뿐만 아니라 일회용 부속품은 다음을 보장합니다. 오염 없음 자가 혈액 샘플의 처리. 우리의 체계의 대부분은 초음파 용해를 위해 사용될 수 있습니다. 줄기 세포 그리고 PRP는 우리의 초음파 장치를 경제적으로 훨씬 더 효율적으로 만듭니다.
아래 표에는 혈소판이 풍부한 혈장 준비에 적합한 초음파 장치와 권장 시료량이 각각 나열되어 있습니다. 더 큰 초음파발생기와 맞춤형 시스템도 사용할 수 있습니다.
| 장치 | 전력 [W] | 주파수 [kHz] | 형 | 부피 [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 바이알트위터 | 200 | 26 | 독립형(stand-alone) | 0.5 | – | 1.5 |
| 업50H | 50 | 30 | 핸드헬드 또는 스탠드마운트형 | 0.01 | – | 250 |
| 업100H | 100 | 30 | 핸드헬드 또는 스탠드마운트형 | 0.01 | – | 500 |
| UP200HT | 200 | 26 | 핸드헬드 또는 스탠드마운트형 | 0.1 | – | 1000 |
| UP200세인트 | 200 | 26 | 스탠드 마운트 | 0.1 | – | 1000 |
| UP400ST | 400 | 24 | 스탠드 마운트 | 5.0 | – | 2000 |
| UP200ST-소노스텝 | 200 | 26 | 독립형(stand-alone) | 30 | – | 500 |
| GD미니2 | 200 | 26 | 오염 없는 플로우 셀(flow cell) | |||
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문헌/참고문헌
- 포르투나토, T. M.; 벨트라미, Ch.; 에마누엘리, C.; 드 뱅크, PA :; Pula, G. (2016): 혈소판 용해물 겔 및 내피 전구 세포가 시험관 내에서 미세혈관 네트워크 형성을 자극합니다: 조직 공학적 함의. Sci. Rep. 6, 2016.
- 하미드, M.S.A.; 유소프, 아슈릴; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): 급성 근육 손상에 대한 혈소판 풍부 혈장(PRP): 체계적 검토. PLOS ONE 9권 2호, 2014년.
알아 둘 만한 가치가 있는 사실
혈소판 풍부 혈장
혈소판 풍부 혈장에는 세포 성장과 재생에 중요한 자극제인 성장 인자 AB(PDGF-AB), 혈소판 유래 성장 인자 AA(PDGF-AA), 혈소판 유래 성장 인자 BB(PDGF-BB), 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 형질전환성장 인자 β(TGF-β), 표피 성장 인자(EGF), 인슐린 유사 성장 인자(IGF), 상피세포 성장 인자 ECGF 및 섬유아세포 성장 인자(FGF)가 포함되어 있습니다.
자가 컨디셔닝 세럼(ACS)
자가 조건 혈장(ACP)은 자가 혈액에서 추출한 혈소판이 풍부한 혈장으로, 다양한 정형외과 질환 및 수술 절차에서 재생을 지원하는 데 사용됩니다. 컨디셔닝 세럼은 혈장을 다른 혈액 성분(예: 적혈구)에서 분리하고 농축하여 제조합니다. ACP는 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)입니다. PRP는 전혈에 비해 훨씬 더 높은 농도의 혈소판을 포함하는 혈장 유형의 총칭입니다. 그것은 전혈에서 추출됩니다. ACP의 주요 구성 요소에는 혈소판(혈소판)과 치유 과정에서 중요한 역할을 하는 여러 성장 인자가 포함됩니다. 다른 혈소판이 풍부한 혈장 제제와 달리 ACP는 호중구 과립구와 같은 백혈구의 농도가 낮다는 점에서 구별되며, 고농도로 존재할 경우 치유 과정에 해로울 수 있습니다.
혈소판이 풍부한 혈장 주입
혈소판이 풍부한 혈장은 재생 의학과 미용 시술에서 주사로 사용됩니다. PRP의 적용은 근육 치유 및 근육 회복의 상당한 가속화를 약속합니다. 또한 염증, 관절염, 통증, 상처, 느린 치유 열린 상처 및 심각한 피부 화상을 치료하는 데 성공적으로 사용됩니다. PRP는 높은 수준의 성장 인자를 함유하고 있어 손상된 조직이 복구되는 치유 세포를 자극하고 보호합니다.
미용 트리트먼트의 경우 PRP는 모발 성장, 피부 재생(뱀파이어 트리트먼트라고도 함)을 자극하는 데 효과적인 것으로 나타났습니다.
혈소판 유래 성장 인자(PDGF)
혈소판 유래 성장 인자(PDGF)라는 용어는 PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C 및 PDGF-D 인자를 지칭한다. 4개의 리간드(PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C 및 PDGF-D)와 2개의 수용체인 PDGFR-알파 및 PDGFR-베타로 구성된 신호 네트워크입니다.
성장 인자 또는 단백질은 세포의 성장과 분열을 조절합니다. 포유류 혈청에서 발견되는 주요 유사분열체는 혈전 형성 시 혈소판에서 방출되는 유사분열체(mitogen)로서, 이미 존재하는 혈관 조직에서 혈관이 성장하는 혈관 형성(혈관 신생)에 중요한 역할을 합니다.