원숭이 Pox 바이러스의 초음파 응용 프로그램

초음파는 분석 샘플에서 원숭이 두 바이러스 (MPXV)를 분리하기위한 중요한 처리 방법이며, 원숭이 백신 제조뿐만 아니라 바이러스 DNA 단편화를위한 것입니다. 진단 및 분석 전의 샘플 준비(PCR, ELISA 등)를 위해 초음파는 세포 내부로부터 원숭이 바이러스를 방출하고 및/또는 DNA를 단편화하기 위해 세포를 용해시키는데 사용된다. 백신 생산에서, 응용은 바이러스 입자/DNA 제제, 약물 담체에서의 캡슐화 및 접종 제형화로부터 다양하다.
아래에서 초음파 원숭이 두 바이러스 샘플 준비 및 초음파 보조 MPXV 백신 생산에 대한 자세한 정보를 찾을 수 있습니다.

 

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고성능 초음파 발생기는 많은 백신 생산에 중요한 가공 도구입니다.

연속 유량 작동을 위한 2x 1kW 초음파 발생기의 이 시스템은 백신 생산 시설에 설치됩니다.

중합 효소 연쇄 반응 (PCR) 전에 초음파 용해 및 DNA 단편화

원숭이두 바이러스 감염은 바이러스 DNA의 고유 한 서열을 검출하기 위해 실시간 또는 기존 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)을 사용하는 핵산 증폭 테스트 (NAAT)에 의해 검출됩니다. 샘플(예: 비인두 스왑 또는 피부 생검으로부터)은 세포에 바이러스를 함유한다.
분석을 위해, 바이러스는 세포로부터 방출되어야 하며, 바이러스 DNA는 PCR을 위해 단편화되어야 한다.

초음파 용해:

생물학적 시료의 초음파 용해용 마이크로팁 S26d2가 있는 초음파 처리기 UP200Ht초음파 세포 파괴 / 용해는 세포 샘플에서 바이러스를 분리하는 신뢰할 수 있고 효율적인 방법이며, 따라서 세포 용해 및 DNA의 방출을 달성하기 위해 대안으로 사용되는 리소자임, 프로테이나제 K 및 다른 세제와 같은 화학 약품보다 바람직한 기술입니다.
그러나 이러한 화학 시약의 사용은 PCR 반응의 억제를 방지하기 위해 PCR 분석 전에 여러 단계에서 시간이 많이 걸리는 샘플 준비가 필요합니다. PCR 억제제는 증폭 효율에 영향을 미치기 때문에, 제거되지 않은 억제제의 양의 작은 변형은 PCR 산물 증폭에 큰 변화를 일으킬 수 있다(Diaco, 1995).
용해를위한 초음파의 장점은 용해 시약 및 시간 소모적 인 샘플 준비가 필요없이 세포 구조의 완전한 파괴와 DNA의 방출이 바람직하다는 것입니다. (Fykse et al., 2003 참조)

초음파 DNA 단편화 :

초음파 DNA 단편화는 길이 조정 가능한 DNA 단편 (염기쌍, bp)을 생성하므로 간단하고 신뢰할 수 있습니다. 초음파를 사용하여, DNA는 표적화된 DNA 길이에 효과적으로 단편화될 수 있다. 초음파 매개 변수와 정교한 냉각 옵션을 정밀하게 제어하여 DNA 분해를 방지합니다.
초음파 DNA 단편화에 대해 자세히 읽어보십시오!

 

비디오는 고강도 초음파를 사용하여 모든 표준 멀티 웰 플레이트의 신뢰할 수있는 샘플 준비를 할 수있는 초음파 샘플 준비 시스템 UIP400MTP를 보여줍니다. UIP400MTP의 전형적인 응용 분야는 세포 용해, DNA, RNA 및 크로마틴 전단뿐만 아니라 단백질 추출을 포함한다.

멀티 웰 플레이트 초음파 처리를위한 초음파 처리기 UIP400MTP

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원숭이 두 바이러스 백신의 초음파 응용 프로그램

초음파는 원숭이 백신과 같은 백신을 생산하는 데 사용됩니다. 원숭이 바이러스에 대해 사용되는 백신은 현재 살아있는 바이러스 백신입니다. 새로 개발 된 백신은 DNA 기반과 같은 다른 플랫폼을 사용할 수 있습니다 현재 변형 된 Vaccinia Ankara viurs, 약독화되고 비 복제 orthopoxvirus가 포함되어 있습니다. 또한 트리스 (트리스 아미노 메탄)와 염화나트륨을 함유하고 있습니다. 백신은 또한 백신 바이러스, 벤조나제 및 젠타마이신 및 시프로플록사신과 같은 항생제 화합물을 성장시키는 데 사용되는 닭 배아 섬유아세포 세포로부터의 소량의 DNA 및 단백질을 함유할 수 있다.

초음파 균질화는 약독화 된 바이러스 백신, DNA 백신, 다가 DNA 칵테일, mRNA 백신, 재조합 단백질 백신, 바이러스 유사 입자 백신 등의 생산에 사용됩니다.

백신 생산에서 초음파의 응용 범위는

  • 바이러스 입자 및 작용제의 분산
  • 유화
  • 바이러스의 불활성화
  • 약물 담체 제형 (NLC, SLN)
  • 캡슐화
  • 작용제의 용해
  • 보조제의 제조
  • 탈가스 / 탈화

 

당신은 향상된 백신 제조를위한 초음파 응용 프로그램에 대한 자세한 정보를 찾을 수 있습니다!

원숭이 두의 바이러스의 초음파 격리를위한 프로토콜

Stittelaar (2005)의 연구팀은 초음파 용해를 사용하여 성장 숙주 세포 배양물뿐만 아니라 감염된 영장류의 목구멍 스왑을 통해 얻은 세포에서 원숭이두 바이러스를 방출했습니다.

원숭이 두 백신 준비 :

원숭이두 바이러스는 특이적-병원체-비함유 닭 배아 섬유아세포 세포 상에서 성장시켰다. 1 내지 2일 동안 인큐베이션한 후, 바이러스-세포 현탁액을 1라운드의 동결-해동에 의해 수확한 다음, 원심분리에 의해 농축시켰다. 펠렛을 재현탁시키고 초음파 균질화의 여러 라운드를 실시하였다.

예방 접종을받은 마카크에서 원숭이 두 바이러스 격리 :

샘플을 세 번 동결-해동시키고, 초음파 CupHorn에서 초음파 처리하였다. 1% 태아 소 혈청이 보충된 수송 배지에서 두 개의 희석액(1:10 및 1:100)을 사용하여 베로 세포 단층을 여섯 웰 플레이트에 접종하였다. 37°C에서 1시간 배양한 후, 접종물을 제거하고 1% 소 태아 혈청이 보충된 배지로 교체하였다. 단층을 37°C에서 5일 동안 배양하고 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하였다.
(Stittelaar et al., 2005 참조)

이 비디오에서는 제거 가능한 캐비닛에서 인라인 작동을위한 2 킬로와트 초음파 시스템을 보여줍니다. Hielscher는 화학 산업, 제약, 화장품, 석유 화학 공정뿐만 아니라 용매 기반 추출 공정과 같은 거의 모든 산업에 초음파 장비를 공급합니다. 이 제거 가능한 스테인레스 스틸 캐비닛은 위험 지역에서의 작동을 위해 설계되었습니다. 이를 위해 밀봉 된 캐비닛은 가연성 가스 또는 증기가 캐비닛에 들어 가지 않도록 질소 또는 신선한 공기로 고객이 제거 할 수 있습니다.

위험 지역에 설치하기위한 제거 가능한 캐비닛의 2x 1000 와트 초음파 발생기

바이러스 분석 및 백신 생산을위한 초음파 발생기

Hielscher 초음파의 광범위한 제품 포트폴리오는 연구 및 분석 실험실뿐만 아니라 산업 백신 제조에 이상적인 초음파 발생기를 제공합니다.
Hielscher 초음파는 연구 및 분석 실험실에서의 사용뿐만 아니라 산업 백신 생산 (예 : 백신, Api).
Hielscher 초음파에 의한 초음파 공정 파라미터에 대한 정밀한 제어' 지능형 소프트웨어초음파 처리는 개방 용기, 폐쇄 된 연속 교반 반응기 및 연속 유동 반응기에 적용될 수 있습니다. 액체 매체와 접촉하는 초음파 시스템의 모든 부분은 스테인레스 스틸, 티타늄 또는 유리로 만들어집니다. 오토클레이브 가능한 부품 및 위생 피팅은 아래 생산을 보장합니다. 제약 등급 조건.
자동 데이터 기록: 지능형 소프트웨어는 통합 된 SD 메모리 카드에 초음파 처리의 매개 변수를 자동으로 기록합니다. 모든 공정 파라미터를 정밀하게 제어하여 재현성, 생산의 표준화, 제약 제품 안전 표준의 이행을 용이하게합니다.
Hielscher 초음파’ 초음파 프로세서는 매우 신뢰할 수 있으며 정밀하게 제어 할 수 있습니다. 모든 산업용 초음파 발생기는 낮은 진폭에서 매우 높은 진폭까지 전체 범위를 제공하도록 조정할 수 있습니다. Hielscher의 초음파 시스템의 견고성은 무거운 의무와 까다로운 환경에서 24/7 작동을 허용합니다.

아래 표는 초음파 장비의 대략적인 처리 용량을 보여줍니다.

일괄 볼륨 유량 권장 장치
다중 웰/마이크로타이터 플레이트 n/a UIP400MTP
1 ~ 500mL 10 ~ 200mL / min UP100H
10 ~ 2000mL 20 ~ 400 mL / min UP200Ht, UP400St
0.1 ~ 20L 0.2 ~ 4L / min UIP2000hdT
10 ~ 100L 2 ~ 10L / min UIP4000hdT
n/a 10 ~ 100L / min UIP16000
n/a 더 큰 의 클러스터 UIP16000

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초음파 프로세서, 응용 프로그램 및 가격에 대한 추가 정보를 요청하려면 아래 양식을 사용하십시오. 우리는 당신과 당신의 프로세스를 토론하고 당신에게 당신의 요구 사항을 충족하는 초음파 시스템을 제공 하게되어 기쁩니다!









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초음파 균질 기는 DNA 전단에 신뢰할 수 있습니다.

초음파 DNA 절단
CC-BY-SA.03에서 Jkwchui에서 적응



문학 / 참고 문헌

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

알만한 가치가있는 사실

원숭이 바이러스

원숭이 두(MPV, MPXV 또는 hMPXV)는 이중 가닥 DNA 바이러스의 종으로, 바이러스성 동물성 질병을 일으킨다. 이 질병은 원숭이 감염으로 알려져 있으며 인간과 동물에서 발생할 수 있습니다. 그것은 Poxviridae 가족의 Orthopoxvirus 속에 속합니다. 원숭이두 바이러스는 바리올라 (VARV), 카우두 (CPX) 및 백시니아 (VACV) 바이러스와 함께 인간 오르토폭스 바이러스 중 하나입니다. 오르토폭스바이러스는 대략 200,000 bp의 이중 가닥 DNA 게놈을 포함하는 큰 벽돌 모양의 바이러스 입자를 특징으로 한다.

ELISA 분석

ELISA는 효소 결합 면역 흡착 분석의 약자이며 면역 분석의 황금 표준으로 간주되는 표지 된 면역 분석법입니다. ELISA는 높은 진단 감도로 평가되는 면역 학적 검사로 항체, 항원, 단백질, 당단백질 및 호르몬을 포함한 분자를 검출하고 정량화하는 데 사용됩니다. ELISA의 원리는 항원-항체 상호작용에 기초한다. 이러한 항원-항체 상호작용에 의해, 특이적 항체는 그의 표적 항원에 결합한다. 상호작용이 일어날 때에만 기질이 효소에 결합할 수 있고 후속 기질 전환이 관찰될 수 있으며, 이는 양성 결과가 얻어진다는 것을 의미한다.


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Hielscher 초음파는 고성능 초음파 균질화기를 제조합니다. 산업 규모.