초음파는 분석 샘플에서 원숭이 두 바이러스 (MPXV)를 분리하기위한 중요한 처리 방법이며, 원숭이 백신 제조뿐만 아니라 바이러스 DNA 단편화를위한 것입니다. 진단 및 분석 전의 샘플 준비(PCR, ELISA 등)를 위해 초음파는 세포 내부로부터 원숭이 바이러스를 방출하고 및/또는 DNA를 단편화하기 위해 세포를 용해시키는데 사용된다. 백신 생산에서, 응용은 바이러스 입자/DNA 제제, 약물 담체에서의 캡슐화 및 접종 제형화로부터 다양하다.
아래에서 초음파 원숭이 두 바이러스 샘플 준비 및 초음파 보조 MPXV 백신 생산에 대한 자세한 정보를 찾을 수 있습니다.

이 페이지에서 찾을 수있는 내용 :

• 원숭이 두 바이러스 추출을위한 초음파 용해
• 원숭이 두 바이러스 DNA의 초음파 단편화
• MPXV 백신 생산에서의 초음파 응용 프로그램

중합 효소 연쇄 반응 (PCR) 전에 초음파 용해 및 DNA 단편화

원숭이두 바이러스 감염은 바이러스 DNA의 고유 한 서열을 검출하기 위해 실시간 또는 기존 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)을 사용하는 핵산 증폭 테스트 (NAAT)에 의해 검출됩니다. 샘플(예: 비인두 스왑 또는 피부 생검으로부터)은 세포에 바이러스를 함유한다.
분석을 위해, 바이러스는 세포로부터 방출되어야 하며, 바이러스 DNA는 PCR을 위해 단편화되어야 한다.

초음파 용해:

초음파 세포 파괴 / 용해는 세포 샘플에서 바이러스를 분리하는 신뢰할 수 있고 효율적인 방법이며, 따라서 세포 용해 및 DNA의 방출을 달성하기 위해 대안으로 사용되는 리소자임, 프로테이나제 K 및 다른 세제와 같은 화학 약품보다 바람직한 기술입니다.
그러나 이러한 화학 시약의 사용은 PCR 반응의 억제를 방지하기 위해 PCR 분석 전에 여러 단계에서 시간이 많이 걸리는 샘플 준비가 필요합니다. PCR 억제제는 증폭 효율에 영향을 미치기 때문에, 제거되지 않은 억제제의 양의 작은 변형은 PCR 산물 증폭에 큰 변화를 일으킬 수 있다(Diaco, 1995).
용해를위한 초음파의 장점은 용해 시약 및 시간 소모적 인 샘플 준비가 필요없이 세포 구조의 완전한 파괴와 DNA의 방출이 바람직하다는 것입니다. (Fykse et al., 2003 참조)

초음파 DNA 단편화 :

초음파 DNA 단편화는 길이 조정 가능한 DNA 단편 (염기쌍, bp)을 생성하므로 간단하고 신뢰할 수 있습니다. 초음파를 사용하여, DNA는 표적화된 DNA 길이에 효과적으로 단편화될 수 있다. 초음파 매개 변수와 정교한 냉각 옵션을 정밀하게 제어하여 DNA 분해를 방지합니다.
초음파 DNA 단편화에 대해 자세히 읽어보십시오!

원숭이 두 바이러스 백신의 초음파 응용 프로그램

원숭이 바이러스에 대해 사용되는 백신은 현재 살아있는 바이러스 백신입니다. 새로 개발 된 백신은 DNA 기반과 같은 다른 플랫폼을 사용할 수 있습니다 현재 변형 된 Vaccinia Ankara viurs, 약독화되고 비 복제 orthopoxvirus가 포함되어 있습니다. 또한 트리스 (트리스 아미노 메탄)와 염화나트륨을 함유하고 있습니다. 백신은 또한 백신 바이러스, 벤조나제 및 젠타마이신 및 시프로플록사신과 같은 항생제 화합물을 성장시키는 데 사용되는 닭 배아 섬유아세포 세포로부터의 소량의 DNA 및 단백질을 함유할 수 있다.

초음파 균질화는 약독화 된 바이러스 백신, DNA 백신, 다가 DNA 칵테일, mRNA 백신, 재조합 단백질 백신, 바이러스 유사 입자 백신 등의 생산에 사용됩니다.

당신은 향상된 백신 제조를위한 초음파 응용 프로그램에 대한 자세한 정보를 찾을 수 있습니다!

원숭이 두의 바이러스의 초음파 격리를위한 프로토콜

Stittelaar (2005)의 연구팀은 초음파 용해를 사용하여 성장 숙주 세포 배양물뿐만 아니라 감염된 영장류의 목구멍 스왑을 통해 얻은 세포에서 원숭이두 바이러스를 방출했습니다.

원숭이 두 백신 준비 :

원숭이두 바이러스는 특이적-병원체-비함유 닭 배아 섬유아세포 세포 상에서 성장시켰다. 1 내지 2일 동안 인큐베이션한 후, 바이러스-세포 현탁액을 1라운드의 동결-해동에 의해 수확한 다음, 원심분리에 의해 농축시켰다. 펠렛을 재현탁시키고 초음파 균질화의 여러 라운드를 실시하였다.

예방 접종을받은 마카크에서 원숭이 두 바이러스 격리 :

샘플을 세 번 동결-해동시키고, 초음파 CupHorn에서 초음파 처리하였다. 1% 태아 소 혈청이 보충된 수송 배지에서 두 개의 희석액(1:10 및 1:100)을 사용하여 베로 세포 단층을 여섯 웰 플레이트에 접종하였다. 37°C에서 1시간 배양한 후, 접종물을 제거하고 1% 소 태아 혈청이 보충된 배지로 교체하였다. 단층을 37°C에서 5일 동안 배양하고 크리스탈 바이올렛 용액으로 염색하였다.
(Stittelaar et al., 2005 참조)

바이러스 분석 및 백신 생산을위한 초음파 발생기

Hielscher 초음파의 광범위한 제품 포트폴리오는 연구 및 분석 실험실뿐만 아니라 산업 백신 제조에 이상적인 초음파 발생기를 제공합니다.
Hielscher 초음파는 연구 및 분석 실험실에서의 사용뿐만 아니라 산업 백신 생산 (예 : 백신, Api).
초음파 처리는 개방 용기, 폐쇄 된 연속 교반 반응기 및 연속 유동 반응기에 적용될 수 있습니다. 액체 매체와 접촉하는 초음파 시스템의 모든 부분은 스테인레스 스틸, 티타늄 또는 유리로 만들어집니다. 오토클레이브 가능한 부품 및 위생 피팅은 아래 생산을 보장합니다. 제약 등급 조건.
자동 데이터 기록: 지능형 소프트웨어는 통합 된 SD 메모리 카드에 초음파 처리의 매개 변수를 자동으로 기록합니다. 모든 공정 파라미터를 정밀하게 제어하여 재현성, 생산의 표준화, 제약 제품 안전 표준의 이행을 용이하게합니다.
Hielscher 초음파’ 초음파 프로세서는 매우 신뢰할 수 있으며 정밀하게 제어 할 수 있습니다. 모든 산업용 초음파 발생기는 낮은 진폭에서 매우 높은 진폭까지 전체 범위를 제공하도록 조정할 수 있습니다. Hielscher의 초음파 시스템의 견고성은 무거운 의무와 까다로운 환경에서 24/7 작동을 허용합니다.

아래 표는 초음파 장비의 대략적인 처리 용량을 보여줍니다.