원숭이두창 바이러스의 초음파 응용
초음파는 분석 샘플에서 원숭이 수두 바이러스 (MPXV)를 분리, 바이러스 DNA 단편화 및 원숭이 수두 백신 제조를위한 중요한 처리 방법입니다. 진단 및 분석 (PCR, ELISA 등) 전 샘플 준비를 위해 초음파를 사용하여 세포 내부에서 원숭이 수두 바이러스를 방출하거나 DNA를 단편화하기 위해 세포를 용해합니다. 백신 생산에서 응용 분야는 바이러스 입자/DNA 준비, 약물 전달체의 캡슐화 및 접종물 공식화에 이르기까지 다양합니다.
아래에서 초음파 원숭이 두창 바이러스 샘플 준비 및 초음파 보조 MPXV 백신 생산에 대한 자세한 정보를 찾을 수 있습니다.
이 페이지에서 찾을 수 있는 내용:
연속 흐름 작동을위한 2x 1kW 초음파 발생기 시스템은 백신 생산 시설에 설치됩니다.
중합효소 연쇄 반응(PCR) 전 초음파 용해 및 DNA 단편화
원숭이두창 바이러스 감염은 바이러스 DNA의 고유한 염기서열을 검출하기 위해 실시간 또는 기존 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 사용하는 핵산 증폭 검사(NAAT)로 검출됩니다. 샘플(예: 비인두 스왑 또는 피부 생검)에는 세포 내 바이러스가 포함되어 있습니다.
분석을 위해 바이러스를 세포에서 방출해야 하며 PCR을 위해 바이러스 DNA를 단편화해야 합니다.
초음파 용해:
초음파 세포 파괴 / 용해는 세포 샘플에서 바이러스를 분리하는 신뢰할 수 있고 효율적인 방법이므로 세포 용해 및 DNA 방출을 달성하는 데 대안적으로 사용되는 라이소자임, proteinase K 및 기타 세제와 같은 화학 제제보다 바람직한 기술입니다.
그러나 이러한 화학 시약을 사용하려면 PCR 반응의 억제를 방지하기 위해 PCR 분석 전에 여러 단계에서 시간이 많이 소요되는 샘플 준비가 필요합니다. PCR inhibitors는 증폭의 효율성에 영향을 미치기 때문에, 제거되지 않은 inhibitor의 양이 작게 변동되어도 PCR 산물 증폭에서 큰 변동이 발생할 수 있습니다(Diaco, 1995).
용해를위한 초음파의 장점은 용해 시약과 시간이 많이 걸리는 샘플 준비없이 세포 구조의 완전한 파괴와 DNA의 방출이 바람직하다는 것입니다. (Fykse et al., 2003 참조)
초음파 DNA 단편화:
초음파 DNA 단편화는 길이 조절이 가능한 DNA 단편(염기쌍, bp)을 생성하므로 간단하고 신뢰할 수 있습니다. 초음파를 사용하여 DNA를 표적 DNA 길이로 효과적으로 단편화할 수 있습니다. 초음파 파라미터에 대한 정밀한 제어와 정교한 냉각 옵션은 DNA 분해를 방지합니다.
초음파 DNA 단편화에 대해 자세히 알아보십시오!
원숭이 수두 바이러스 백신의 초음파 응용
현재 원숭이두창 바이러스에 사용되는 백신은 생바이러스 백신입니다. 새로 개발된 백신은 DNA 기반 백신과 같은 다른 플랫폼을 사용할 수 있습니다. 현재 약독화되고 복제되지 않는 오르토폭스 바이러스인 변형된 Vaccinia Ankara viurs가 포함되어 있습니다. 또한 트리스(트리스-아미노메탄)와 염화나트륨을 함유하고 있습니다. 백신은 또한 백신 바이러스, 벤조나제 및 겐타마이신 및 시프로플록사신과 같은 항생제 화합물을 성장시키는 데 사용되는 닭 배아 섬유아세포 세포의 소량의 DNA와 단백질을 포함할 수 있습니다.
초음파 균질화는 약독화 생바이러스 백신, DNA 백신, 다가 DNA 칵테일, mRNA 백신, 재조합 단백질 백신, 바이러스 유사 입자 백신 등의 생산에 사용됩니다.
- 바이러스 입자 및 병원체의 분산
- 유화
- 바이러스의 비활성화
- 약물 전달체 제형(NLC, SLN)
- 캡슐화
- 대리인 해산
- 보조제의 제조
- 탈기 / 탈기
백신 제조 개선을 위한 초음파 응용 분야에 대한 자세한 정보를 찾을 수 있습니다!
원숭이 수두 바이러스의 초음파 분리를 위한 프로토콜
Stittelaar (2005)의 연구팀은 초음파 용해를 사용하여 감염된 영장류의 목구멍 교환을 통해 얻은 세포뿐만 아니라 성장 숙주 세포 배양에서 원숭이 두창 바이러스를 방출했습니다.
원숭이 수두 백신 준비:
원숭이두창 바이러스는 특정 병원체가 없는 닭 배아 섬유아세포 세포에서 성장했습니다. 1 내지 2일 동안 배양한 후, 바이러스-세포 현탁액을 1차례의 동결-해동으로 수거한 후 원심분리에 의해 농축하였다. 펠릿을 재현탁하고 여러 차례의 초음파 균질화를 거쳤습니다.
백신을 접종한 원숭이의 원숭이두창 바이러스 격리:
샘플을 3 회 동결 해동하고 초음파 CupHorn에서 초음파 처리했습니다. 1% 소 태아 혈청이 보충된 수송 배지에 두 개의 희석액(1:10 및 1:100)을 사용하여 6웰 플레이트에 Vero 세포 단층을 접종했습니다. 37°C에서 1시간 배양 후, 접종물을 제거하고 1% 소 태아 혈청이 보충된 배양 배지로 교체하였다. 단층을 37°C에서 5일 동안 배양하고 결정 보라색 용액으로 염색했습니다.
(Stittelaar et al., 2005 참조)
바이러스 분석 및 백신 생산을 위한 초음파기
Hielscher 초음파의 광범위한 제품 포트폴리오는 연구 및 분석 실험실뿐만 아니라 산업용 백신 제조에 이상적인 초음파를 제공합니다.
Hielscher 초음파는 연구 및 분석 실험실에서의 사용뿐만 아니라 산업용 백신 생산 (예 : 백신, 아피스).
초음파 처리는 열린 용기, 닫힌 연속 교반 반응기 및 연속 유동 반응기에 적용 할 수 있습니다. 액체 매체와 접촉하는 초음파 시스템의 모든 부품은 스테인레스 스틸, 티타늄 또는 유리로 만들어집니다. 오토클레이브 가능한 부품과 위생 피팅은 아래의 생산을 보장합니다. 제약 등급 조건.
자동 데이터 기록: 지능형 소프트웨어는 초음파 처리 과정의 매개 변수를 통합 SD 메모리 카드에 자동으로 기록합니다. 모든 공정 매개변수의 정확한 제어는 다음을 보장합니다. 재현성, 생산의 표준화, 의약품 안전 표준의 이행을 촉진합니다.
Hielscher Ultrasonics’ 초음파 프로세서는 신뢰성이 높으며 정밀하게 제어할 수 있습니다. 모든 산업용 초음파 발생기는 낮은 진폭에서 매우 높은 진폭까지 전체 범위를 제공하도록 조정할 수 있습니다. Hielscher의 초음파 시스템의 견고 함은 무거운 의무와 까다로운 환경에서 24/7 작동을 허용합니다.
아래 표는 초음파기의 대략적인 처리 용량을 나타냅니다.
| 배치 볼륨(Batch Volume) | 유량 | 권장 장치 |
|---|---|---|
| Multi-well / Microtiter 플레이트 | 해당 없음 | UIP400MTP |
| 1 내지 500mL | 10 내지 200mL/분 | 업100H |
| 10 내지 2000mL | 20 내지 400mL/분 | UP200HT, UP400ST |
| 0.1 내지 20L | 0.2 내지 4L/min | UIP2000hdT 님 |
| 10에서 100L | 2 내지 10L/min | UIP4000hdt 님 |
| 해당 없음 | 10 내지 100L/min | UIP16000 |
| 해당 없음 | 큰 | 의 클러스터 UIP16000 |
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초음파 DNA 전단
CC-BY-SA.03의 Jkwchui에서 발췌
문헌 / 참고문헌
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
알아 둘 만한 가치가 있는 사실
원숭이 수두 바이러스
원숭이두창(MPV, MPXV 또는 hMPXV)은 바이러스성 인수공통전염병을 일으키는 이중 가닥 DNA 바이러스의 일종입니다. 이 질병은 원숭이두창 감염으로 알려져 있으며 인간과 동물에서 발생할 수 있습니다. 그것은 Poxviridae 계통의 Orthopoxvirus 속에 속합니다. 원숭이두창 바이러스는 바리올라(VARV), 우두(CPX) 및 백시니아(VACV) 바이러스와 함께 인간 오르토폭스 바이러스 중 하나입니다. 오르토폭스바이러스는 약 200,000bp의 이중 가닥 DNA 게놈을 포함하는 큰 벽돌 모양의 바이러스 입자가 특징입니다.
ELISA 분석
ELISA는 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay의 약자로 면역분석법의 황금 표준으로 간주되는 표지된 면역분석법입니다. ELISA는 진단 민감도가 높아 항체, 항원, 단백질, 당단백질, 호르몬 등의 분자를 검출하고 정량화하는 데 사용되는 면역학적 검사입니다. ELISA의 원리는 항원-항체 상호작용을 기반으로 합니다. 이 항원-항체 상호작용에 의해 특이적 항체는 표적 항원에 결합합니다. 상호 작용이 일어날 때만 기질이 효소에 결합할 수 있고 후속 기질 전환이 관찰될 수 있으며, 이는 긍정적인 결과를 얻을 수 있음을 의미합니다.
