अल्ट्रासोनिक VialTweeter के साथ नमूना तैयारी
अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी
अल्ट्रासोनिकेशन नमूना उपचार की एक आम तकनीक है ताकि नमूना को पॉलिमर चेन रिएक्शन (पीसीआर), वेस्टर्न ब्लॉट्स, परख, आणविक अनुक्रमण, क्रोमेटोग्राफी आदि जैसे विश्लेषणों के लिए तैयार किया जा सके। अल्ट्रासोनिकेशन एक तकनीक है जो प्रयोगशालाओं में नमूनों के पूर्व-विश्लेषणात्मक रूप से इलाज के लिए व्यापक रूप से उपयोग की जाती है। सोनीशन का एक बड़ा लाभ यह है कि अल्ट्रासाउंड का कार्य सिद्धांत विशुद्ध रूप से यांत्रिक बलों पर आधारित है। अल्ट्रासोनिक लाइसिस और सेल व्यवधान सोनोमैकेनिकल कतरनी बलों द्वारा प्राप्त किया जाता है, जो अल्ट्रासोनिकेशन को लाभ देता है कि प्रोटीन निष्कर्षण के लिए उपयोग किए जाने वाले सॉल्वैंट्स का उपयोग लाइसिस के दौरान भी किया जा सकता है। अल्ट्रासोनिक सेल बाधित जैसे कि VialTweeter सेल की दीवारों/झिल्ली को तोड़ते हैं और सेल इंटीरियर और सॉल्वेंट के बीच बड़े पैमाने पर हस्तांतरण को बढ़ावा देते हैं। इस प्रकार, एनालिट (जैसे डीएनए, आरएनए, प्रोटीन, ऑर्गेनेल्स आदि) को सेल मैट्रिक्स से सॉल्वेंट में कुशलतापूर्वक स्थानांतरित किया जाता है। इसका मतलब अल्ट्रासोनिक सेल व्यवधान प्रक्रिया के साथ शमन और निष्कर्षण ओवरलैप के कदम हैं, जो अल्ट्रासोनिक लाइसिस को बहुत प्रभावी बनाता है। इसके अलावा, अल्ट्रासोनिक नमूना तैयार करने के लिए डिटर्जेंट और अन्य लाइसिस रिएजेंट्स की आवश्यकता नहीं होती है, जो लाइसेट की संरचना को बदल सकता है और विनाश कर सकता है और शुद्धिकरण के साथ बाद की परेशानियों के लिए जाना जाता है। एक और लाइसिस विधि, एंजाइमेटिक व्यवधान के लिए लंबे समय तक इनक्यूबेशन की आवश्यकता होती है और अक्सर गैर-प्रजनन योग्य परिणाम प्रदान करता है। अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी ऊतक समरूपता, सेल व्यवधान, लाइसिस, प्रोटीन निष्कर्षण और लाइसेट घुलनशीलता जैसे नमूना तैयारी में आम समस्याओं पर काबू पा देती है। चूंकि अल्ट्रासोनिक उपचार की तीव्रता को बिल्कुल नियंत्रित किया जा सकता है और जैविक नमूने में समायोजित किया जा सकता है, इसलिए गिरावट और नमूना हानि से बचा जाता है। स्वचालित रूप से निगरानी और नियंत्रित नमूना तापमान, पल्स मोड और सोनीशन अवधि इष्टतम परिणाम सुनिश्चित करते हैं।
VialTweeter प्रयोगशाला के काम के लिए विशेष रूप से सुविधाजनक है कि एक ही शर्तों के तहत कई नमूनों की एक साथ तैयारी की आवश्यकता है । VialTweeter एक अल्ट्रासोनिक ब्लॉक सोनोट्रॉड है जो 10 शीशियों (जैसे एपपेनडोर्फ, सेंट्रिगेज, नुएनसी ट्यूब, क्रायो-शीशियों) तक पकड़ सकता है और ठीक नियंत्रित परिस्थितियों में उन्हें तीव्रता से सोनिकेट करता है। चूंकि अल्ट्रासोनिक ऊर्जा को शीशियों की दीवारों के माध्यम से नमूना माध्यम में युग्मित किया जाता है, इसलिए उपचार के दौरान शीशियां बंद रहती हैं। जिससे सैंपल लॉस और क्रॉस संदूषण से पूरी तरह से बचा जा सकता है।
अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी इकाई VialTweeter: VialTweeter अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर पर सोनोट्रॉड UP200St
शीशियों और ट्यूबों फिटिंग VialTweeter
VialTweeter 10 आम शंकु या गोल-नीचे ट्यूब जैसे एपेंडोर्फ, अपकेंद्रित्र, क्रायो-शीशी और विभिन्न NUNC शीशी प्रकारों को पकड़ने के लिए अनुकूलित है, लेकिन छेद अनुरोध पर अन्य शीशी और ट्यूब आकार के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। कृपया हमें बताएं कि आप किस तरह की टेस्ट ट्यूब का उपयोग करना चाहते हैं ताकि हम तदनुसार आपके VialTweeter को संशोधित कर सकें। फाल्कन ट्यूब और अन्य परीक्षण कंटेनरों, बीकर्स और जहाजों जैसे बड़े परीक्षण ट्यूबों के लिए, VialPress एक सुविधाजनक समाधान है।
VialPress के साथ VialTweeter
जबकि VialTweeter अपने 10 ट्यूबों छेद के साथ ही पहले से ही एक अद्वितीय और अत्यधिक कार्यात्मक अल्ट्रासोनिक डिवाइस है, VialPress ऐड-ऑन VialTweeter को ऑपरेशन के लिए और भी बहुमुखी और लचीला बनाता है। VialPress VialTweeter के लिए एक सहायक है जिसमें क्लैंप-ऑन बार शामिल है जो बड़े नमूना ट्यूबों जैसे फाल्कन ट्यूब या अन्य छोटे से मध्य आकार के परीक्षण बीकर्स को VialTweeter के सामने उतारने की अनुमति देता है। बाईं ओर की तस्वीर में ब्लॉक में 10 एपेंडोर्फ शीशियों को पकड़े हुए VialTweeter को दिखाया गया है, जबकि VialPress सोनीफिकेशन के लिए सामने एक बड़ा टेस्ट ट्यूब फिक्सेट करता है । VialPress तीव्र सोनीफिकेशन के लिए 5 बड़े टेस्ट ट्यूब तक रखने में सक्षम है।
VialTweeter नमूना तैयारी प्रोटोकॉल
VialTweeter व्यापक रूप से जैविक नमूनों को सोनीकेट करने के लिए प्रयोग किया जाता है। विश्लेषण से पहले, नमूनों को जैव रासायनिक या जैव भौतिक विश्लेषणों और परखों के लिए तैयार किया जाना चाहिए, उदाहरण के लिए लाइसिस, ऊतक समरूपता, प्रोटीन निष्कर्षण, डीएनए/आरएनए कतरनी, डेगासिंग आदि । VialTweeter इन अल्ट्रासोनिक प्रक्रियाओं को मज़बूती से पूरा करता है और प्रजनन योग्य परिणाम प्रदान करता है। VialTweeter का एक आम आवेदन स्तनधारी (मानव और पशु) ऊतकों के साथ ही बैक्टीरिया कोशिकाओं और वायरल कणों के lysis/सेल व्यवधान है । सफलतापूर्वक VialTweeter-इलाज जैविक नमूनों में मानव फेफड़ों के एपिथेलियल कोशिकाएं, हीमेटोपोइटिक स्टेम सेल, माइलॉयड ल्यूकेमिया कोशिकाएं शामिल हैं, एस्चेरिचिया कोलाई, बेसिलस सुबटिलिस, बैसिलस एंथ्रेसिस, फ्रांसिसेला तुलेरेन्सिस, यरसिनिया पेस्टिस, स्ट्रेप्टोकोकस पायोजीन्स, कॉलोबैक्टर वर्धमान, माइकोप्लाज्मा निमोनिया, माइकोबैक्टीरिया/माइकोबैक्टीरियम तपेदिक परिसर (एमटीबीसी) और कई अन्य जीवाणु, वनस्पति और माइक्रोबियल कोशिकाएं ।
नीचे, आप VialTweeter की विशेषता वाले कुछ चयनित प्रोटोकॉल पा सकते हैं।
VialTweeter क्रॉस-संदूषण या नमूना हानि के बिना उच्च तीव्रता पर 1.0, 1.5 और 2.0 mL Eppendorf ट्यूबों को सोनिकेट करता है।
- ऊतक homogenization
- सेल व्यवधान & lysis
- प्रोटीन निष्कर्षण
- डीएनए/आरएनए कतरनी
- सेल पेलेट घुलनशीलता
- रोगजनक पता लगाना
- degassing
- इन-विट्रो डायग्नोस्टिक्स
- प्री-एनालिटिकल ट्रीटमेंट
- प्रोटिओमिक्स
ई. कोलाई Lysis में वीवो ग्लूटाथिएक दृढ़ संकल्प के लिए VialTweeter के साथ
तनाव MG1655 के Escherichia कोलाई बैक्टीरिया 0.5 के एक A600 तक पहुंच गया था जब तक 200 मिलीलीटर की कुल मात्रा में MOPS ंयूनतम माध्यम में उगाया गया। संस्कृति तनाव उपचार के लिए ५०-मिलीलीटर संस्कृतियों में विभाजित किया गया था । 0.79 m allicin, 1 mm diamide, या डाइमेथिल सल्फॉक्साइड (नियंत्रण) के साथ इनक्यूबेशन के 15 मिनट के बाद, कोशिकाओं को 10 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 4,000ग्राम पर काटा गया था। केपीई बफर के 700μl में छर्रों के पुनर्पियों से पहले केपीई बफर के साथ कोशिकाओं को दो बार धोया गया था। डेप्रेटिनेशन के लिए, अल्ट्रासोनिकेशन (3 x 1 मिनट) द्वारा कोशिकाओं के व्यवधान से पहले 10% (w/v) सल्फोसालिसिलिक एसिड के 300μl जोड़े गए थे; VialTweeter अल्ट्रासोनिकेटर)। अपकेंद्रित्र (30 मिनट, 13,000ग्राम, 4 डिग्री सेल्सियस) के बाद सुपरनेटेंट एकत्र किए गए थे। केपीई बफर के 3 वॉल्यूम के अलावा सल्फोसलिसिलिक एसिड सांद्रता को 1% तक कम कर दिया गया था। ऊपर वर्णित कुल ग्लूटाथिएक और जीएसएसजी के माप किए गए। सेलुलर ग्लूटाथिएक सांद्रता की गणना 6.7×10-15 लीटर की ई कोलाई कोशिकाओं की मात्रा और A600 0.5 (1×108 कोशिकाओं एमएल-1 संस्कृति के बराबर) के सेल घनत्व के आधार पर की गई थी। जीएसएच सांद्रता की गणना कुल ग्लूटाथिएक से 2 [जीएसएसजी] के घटाव द्वारा की गई थी। (Müller एट अल 2016)
ग्रेफाइट फर्नेस एटॉमिक अवशोषण स्पेक्ट्रोमेट्री से पहले VialTweeter के साथ सेल लाइसिस
बैसिलस सबटिलिस 168 (trpC2) एंटीबायोटिक तनाव के 15 मिनट के संपर्क में थे, फिर कोशिकाओं को 3,320 x ग्राम पर काटा गया, 100 एमएम ट्रिस/1 एमएम ईडीटीए, पीएच 7.5 के साथ पांच बार धोया गया, 10 एमएम ट्रिस, पीएच 7.5 में पुनः निलंबित किया गया और एक Hielscher VialTweeter उपकरण में अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा बाधित किया गया। (वेनज़ेल एट अल 2014)
मास स्पेक्ट्रोमेट्री से पहले VialTweeter नमूना तैयारी
मानव CD34 हेमेटोपोइटिक स्टेम/जनक कोशिकाओं के lyophilized सेल छर्रों 10μl (थोक HEK293 के लिए थोक HEK293 तैयारी के लिए पेप्टाइड कमजोर पड़ने श्रृंखला के लिए) में 8 एम यूरिया में फिर से निलंबित कर दिया गया 100 m m m अमोनियम हाइड्रोजन कार्बोनेट और lysed 60% के एक आयाम पर Hielscher VialTweeter के साथ सोनीएशन द्वारा सहायता प्राप्त, 60% का एक चक्र और बर्फ पर मध्यवर्ती शीतलन के साथ तीन बार के लिए 20s की अवधि। (अमोन एट अल 2019)
VialPress का उपयोग कर नमूना तैयारी प्रोटोकॉल
ताजा सलाद पत्ता (लैक्टुका सतीवा) को 1 ग्राम संयंत्र (ताजा वजन) से 200, 100, 50, या 20 एमएल बफर समाधान के अनुपात में 0.5 एम एचईपीई बफर (पीएच 8, कोह समायोजित) में समरूप बनाया गया था। 3.5 और 12 एमएल के बीच कुल समरूप मात्रा रखने के लिए पौधे द्रव्यमान से बफर समाधान मात्रा का अनुपात भिन्न था। संयंत्र द्रव्यमान से बफर समाधान की मात्रा का अनुपात 3.5 और 12 एमएल के बीच कुल समरूप मात्रा रखने के लिए भिन्न था, जिससे जांच के साथ समरूपता की अनुमति मिली। होमोजेनेट ने 3 मिनट (80% पल्स और 100% पावर) के लिए 200xt VialPress (Hielscher अल्ट्रासोनिक्स जीएमबीएच, जर्मनी) से लैस VialTweeter के साथ एक UP200St का उपयोग करके अप्रत्यक्ष अल्ट्रासोनिकेशन किया। इस डिवाइस का उपयोग करने से प्रदूषण से बचा गया। (लॉटन एट अल 2019)
अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर पर 10 Eppendorf शीशियों के साथ VialTweeter UP200St
VialTweeter के साथ सोनीशन के दौरान विश्वसनीय तापमान नियंत्रण
तापमान एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया को प्रभावित करने वाला कारक है जो जैविक नमूनों के उपचार के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। सभी यांत्रिक नमूना तैयारी तकनीकों के रूप में, सोनीशन गर्मी पैदा करता है। हालांकि, VialTweeter का उपयोग करते समय नमूनों के तापमान को अच्छी तरह से नियंत्रित किया जा सकता है। हम आपको विश्लेषण के लिए VialTweeter और VialPress के साथ तैयार करते हुए अपने नमूनों के तापमान की निगरानी और नियंत्रण के लिए विभिन्न विकल्प प्रस्तुत करते हैं।
- नमूना तापमान की निगरानी: अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर UP200St, जो VialTweeter ड्राइव, एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और एक खामियों को दूर करने योग्य तापमान सेंसर से सुसज्जित है । UP200St में तापमान सेंसर प्लग और नमूना ट्यूबों में से एक में तापमान सेंसर की नोक डालें। डिजिटल रंगीन टच-डिस्प्ले के माध्यम से, आप अपने नमूने के लिए एक विशिष्ट तापमान सीमा UP200St के मेनू में सेट कर सकते हैं। अधिकतम तापमान पहुंचने और तब तक रुकने पर अल्ट्रासोनिकेटर स्वचालित रूप से बंद हो जाएगा जब तक कि नमूना तापमान ∆ सेट तापमान के कम मूल्य तक नहीं नीचे हो जाता है। इसके बाद सोनिकेशन अपने आप फिर से शुरू हो जाता है। यह स्मार्ट फीचर हीट-प्रेरित दुर्गति को रोकता है।
- VialTweeter ब्लॉक पूर्व ठंडा किया जा सकता है। वियलट्वीटर ब्लॉक (केवल ट्रांसड्यूसर के बिना सोनोट्रोड!) फ्रिज या फ्रीजर में टाइटेनियम ब्लॉक को प्री-कूल करने के लिए लें, नमूने में तापमान वृद्धि को स्थगित करने में मदद करता है। यदि संभव हो, तो नमूना खुद को प्री-कूल भी किया जा सकता है।
- सोनीशन के दौरान ठंडा करने के लिए सूखी बर्फ का प्रयोग करें। सूखी बर्फ से भरी उथली ट्रे का इस्तेमाल करें और छठी को सूखी बर्फ पर रखें ताकि गर्मी तेजी से नष्ट हो सके।
दुनिया भर में ग्राहक जैविक, जैव रासायनिक, चिकित्सा और नैदानिक प्रयोगशालाओं में अपने दैनिक नमूना तैयारी के काम के लिए VialTweeter और VialPress का उपयोग करते हैं। UP200St प्रोसेसर के बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और तापमान नियंत्रण, तापमान मज़बूती से नियंत्रित है और गर्मी प्रेरित नमूना गिरावट से बचा है । VialTweeter और VialPress के साथ अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी अत्यधिक विश्वसनीय और प्रजनन योग्य परिणाम प्रदान करता है!
VialTweeter के तकनीकी विवरण
VialTweeter टाइटेनियम से बना एक ब्लॉक सोनोट्रॉड है जो ब्लॉक के भीतर छेद में 10 शीशियों तक पकड़ सकता है। इसके अतिरिक्त, VialPress का उपयोग करके 5 बड़े टेस्ट ट्यूबों को VialTweeter मोर्चे पर दबाया जा सकता है। VialTweeter इतना डिज़ाइन किया गया है कि अल्ट्रासोनिकेशन ऊर्जा को विश्वसनीय और समान रूप से परिणाम सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक डाला शीशी में समान रूप से वितरित किया जाता है। एक छोटी सी धुरी VialTweeter सोनोट्रॉड को असमान जमीन पर समायोजित करती है और परीक्षण ट्यूबों को लंबवत संरेखित करती है।
एक नज़र में VialTweeter के लाभ
- के लिए 10 शीशियों के तीव्र sonication के एक साथ
- नमूना में पोत दीवार के माध्यम से उच्च अल्ट्रासोनिक तीव्रता पर अप्रत्यक्ष sonication
- अप्रत्यक्ष sonication के पार संदूषण और नमूना नुकसान से बचा जाता है
- समायोज्य और नियंत्रणीय sonication आयाम के कारण प्रजननीय परिणाम
- VialPress बड़ा ट्यूब sonicate करने के लिए सक्षम बनाता है
- 20 से 100% तक समायोज्य आयाम
- 0 से 100% करने के लिए समायोज्य पल्स मोड
- autoclavable
VialTweeter द्वारा संचालित है UP200St, एक 200 वाट शक्तिशाली अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर। UP200St एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर से लैस है जो आयाम, सोनीशन समय, स्पंदन और तापमान जैसे सभी महत्वपूर्ण अल्ट्रासोनिक प्रक्रिया मापदंडों पर सटीक नियंत्रण की अनुमति देता है। यह जैविक और जैव रासायनिक प्रयोगशालाओं में सफल प्रजनन प्रक्रिया के परिणाम के लिए VialTweeter एक विश्वसनीय उपकरण बनाता है।
आयाम को 20 और 100% के बीच समायोजित किया जा सकता है और इस प्रकार अल्ट्रासोनिक तीव्रता को आपके नमूने में अनुकूलित करने की अनुमति देता है। उदाहरण के लिए, डीएनए और आरएनए के कतरन और विखंडन के लिए बहुत छोटे डीएनए टुकड़ों के उत्पादन को रोकने के लिए एक मामूली आयाम की आवश्यकता होती है, माउस मस्तिष्क के ऊतक समरूपता को उच्च तीव्रता के सोनीएशन की आवश्यकता होती है। UP200St प्रोसेसर पर स्मार्ट और सहज मेनू के माध्यम से आदर्श आयाम, सोनीशन तीव्रता और अवधि चुनें। मेनू और सेटिंग्स आसानी से पहुँचा और रंगीन स्पर्श प्रदर्शन के माध्यम से संचालित किया जा सकता है। सेटिंग्स में आप एम्पलिट्यूड, स्पंदन/चक्र मोड, सोनीशन अवधि, कुल ऊर्जा इनपुट और तापमान सीमा जैसे सोनीशन पैरामीटर को प्री-सेट कर सकते हैं। अनुसंधान और उत्पादन में, परीक्षणों और परीक्षण परिणामों की पुनरावृत्ति महत्वपूर्ण है । इसका मतलब यह है कि प्रक्रिया की स्थिति और सोनीशन प्रोटोकॉल की सटीक रिकॉर्डिंग पूरी तरह से महत्वपूर्ण हैं। स्वचालित डेटा प्रोटोकॉललिंग एक एकीकृत एसडी-कार्ड पर सीएसवी फ़ाइल में सभी सोनीशन डेटा लिखता है ताकि आप आसानी से विभिन्न सोनीशन रन की जांच और तुलना कर सकें। सभी अल्ट्रासोनिक प्रक्रिया डेटा को सीएसवी फ़ाइल के रूप में आसानी से एक्सेस और साझा किया जा सकता है।
Hielscher Ultrasonics आपको अपने शोध कार्य को सुविधाजनक और बेहतर बनाने के लिए उन्नत तकनीक प्रदान करने का प्रयास करता है!
अप्रत्यक्ष सोनीफिकेशन के लिए VialPress के साथ VialTweeter।
साहित्य/संदर्भ
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J. E., Slusarenko A. J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry, Vol. 291, No. 22, 2016. 11477-11490.
- Tim Krischuns; Franziska Günl; Lea Henschel; Marco Binder; Joschka Willemsen; Sebastian Schloer; Ursula Rescher; Vanessa Gerlt; Gert Zimmer; Carolin Nordhoff; Stephan Ludwig; Linda Brunotte (2018): Phosphorylation of TRIM28 Enhances the Expression of IFN-β and Proinflammatory Cytokines During HPAIV Infection of Human Lung Epithelial Cells. Frontiers in immunology Vol. 9, September 2018.
- Michaela Wenzel, Alina Iulia Chiriac, Andreas Otto, Dagmar Zweytick, Caroline May, Catherine Schumacher, Ronald Gust, H. Bauke Albada, Maya Penkova, Ute Krämer, Ralf Erdmann, Nils Metzler-Nolte, Suzana K. Straus, Erhard Bremer, Dörte Becher, Heike Brötz-Oesterhelt, Hans-Georg Sahl, Julia E. Bandow (2014): Small Cationic Antimicrobial Peptides Delocalize Peripheral Membrane Proteins. PNAS April 8, 2014.
- Stephanie Laughton; Adam Laycock; Frank von der Kammer;Thilo Hofmann; Elizabeth A. Casman; Sónia M. Rodrigues; Gregory V. Lowry (2019): Persistence of copper-based nanoparticle-containing foliar sprays in Lactuca sativa (lettuce) characterized by spICP-MS. Journal of Nanoparticle Research 21:174, 2019.
- Sabine Amon, Fabienne Meier-Abt, Ludovic C. Gillet, Slavica Dimitrieva, Alexandre P. A. Theocharides, Markus G. Manz, Ruedi Aebersold (2019): Sensitive Quantitative Proteomics of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Data-independent Acquisition Mass Spectrometry. Molecular & Cellular Proteomics 18, 2019. 1454–1467.
अल्ट्रासोनिक प्रोसेसिंग: हिल्स्चर आपको व्यवहार्यता और अनुकूलन से वाणिज्यिक उत्पादन में सहायता करता है!