अल्ट्रासोनिक शीशी के साथ नमूना तैयार करनाट्वीटर
विश्लेषण से पहले नमूना तैयार करने के लिए विभिन्न पूर्व-विश्लेषणात्मक प्रक्रियाओं जैसे ऊतक समरूपीकरण, lysis, प्रोटीन का निष्कर्षण, डीएनए, आरएनए, ऑर्गेनेल और अन्य इंट्रासेल्युलर पदार्थों, घुलने और degassing की आवश्यकता हो सकती है। वायलट्वीटर एक अद्वितीय अल्ट्रासोनिक उपकरण है जो बिल्कुल समान परिस्थितियों में एक साथ कई नमूना ट्यूब तैयार करता है। बंद टेस्ट ट्यूबों के अप्रत्यक्ष sonication के कारण, पार संदूषण और नमूना हानि से बचा जाता है.
अल्ट्रासोनिक नमूना तैयार करना
अल्ट्रासोनिकेशन नमूना उपचार की एक सामान्य तकनीक है ताकि पॉलिमर चेन रिएक्शन (पीसीआर), वेस्टर्न ब्लॉट्स, परख, आणविक अनुक्रमण, क्रोमैटोग्राफी आदि जैसे विश्लेषण के लिए नमूना तैयार किया जा सके। अल्ट्रासोनिकेशन एक तकनीक है जिसका उपयोग प्रयोगशालाओं में व्यापक रूप से पूर्व-विश्लेषणात्मक रूप से नमूनों के इलाज के लिए किया जाता है। सोनिकेशन का एक बड़ा फायदा यह है कि अल्ट्रासाउंड का कार्य सिद्धांत विशुद्ध रूप से यांत्रिक बलों पर आधारित है। अल्ट्रासोनिक लसीका और सेल व्यवधान सोनोमैकेनिकल कतरनी बलों द्वारा प्राप्त किया जाता है, जो अल्ट्रासोनिकेशन को यह लाभ देता है कि प्रोटीन निष्कर्षण के लिए उपयोग किए जाने वाले सॉल्वैंट्स का उपयोग लाइसिस के दौरान भी किया जा सकता है। अल्ट्रासोनिक सेल व्यवधान जैसे वायलट्वीटर सेल की दीवारों / झिल्ली को तोड़ते हैं और सेल इंटीरियर और विलायक के बीच बड़े पैमाने पर हस्तांतरण को बढ़ावा देते हैं। इस प्रकार, विश्लेषण (जैसे डीएनए, आरएनए, प्रोटीन, ऑर्गेनेल आदि) कुशलतापूर्वक सेल मैट्रिक्स से विलायक में स्थानांतरित हो जाते हैं। इसका मतलब है कि अल्ट्रासोनिक सेल व्यवधान प्रक्रिया के साथ शमन और निष्कर्षण के चरण ओवरलैप होते हैं, जो अल्ट्रासोनिक लसीका को बहुत प्रभावी बनाता है। इसके अलावा, अल्ट्रासोनिक नमूना तैयार करने के लिए डिटर्जेंट और अन्य लाइसिस अभिकर्मकों की आवश्यकता नहीं होती है, जो लाइसेट की संरचना को बदल और नष्ट कर सकते हैं और शुद्धि के साथ बाद की परेशानियों के लिए जाना जाता है। एक अन्य lysis विधि, एंजाइमी व्यवधान के लिए लंबे इनक्यूबेशन समय की आवश्यकता होती है और अक्सर गैर-प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम देता है। अल्ट्रासोनिक नमूना तैयार करना नमूना तैयार करने में आम समस्याओं पर काबू पाता है जैसे ऊतक समरूपीकरण, सेल व्यवधान, lysis, प्रोटीन निष्कर्षण और lysate घुलनशीलता। चूंकि अल्ट्रासोनिक उपचार की तीव्रता को जैविक नमूने में बिल्कुल नियंत्रित और समायोजित किया जा सकता है, इसलिए गिरावट और नमूना हानि से बचा जाता है। स्वचालित रूप से निगरानी और नियंत्रित नमूना तापमान, पल्स मोड और सोनीशन अवधि इष्टतम परिणाम सुनिश्चित करते हैं।
वायलट्वीटर प्रयोगशाला के काम के लिए विशेष रूप से सुविधाजनक है जिसके लिए समान परिस्थितियों में कई नमूनों की एक साथ तैयारी की आवश्यकता होती है। वायलट्वीटर एक अल्ट्रासोनिक ब्लॉक सोनोट्रोड है जो 10 शीशियों (जैसे एपेंडोर्फ, सेंट्रीफ्यूज, एनयूएनसी ट्यूब, क्रायो-शीशियों) को पकड़ सकता है और उन्हें ठीक नियंत्रित परिस्थितियों में तीव्रता से सोनिकेट करता है। चूंकि अल्ट्रासोनिक ऊर्जा शीशियों की दीवारों के माध्यम से नमूना माध्यम में युग्मित होती है, इसलिए उपचार के दौरान शीशियां बंद रहती हैं। इस प्रकार, नमूना हानि और क्रॉस-संदूषण से पूरी तरह से बचा जाता है।
शीशियों और ट्यूबों VialTweeter फिटिंग
वायलट्वीटर 10 सामान्य शंक्वाकार या गोल-नीचे ट्यूबों जैसे एपेंडॉर्फ, अपकेंद्रित्र, क्रायो-शीशियों और विभिन्न एनयूएनसी शीशी प्रकारों को पकड़ने के लिए उपयुक्त है, लेकिन छेद को अनुरोध पर अन्य शीशी और ट्यूब आकारों में अनुकूलित किया जा सकता है। कृपया हमें बताएं कि आप किस प्रकार के टेस्ट ट्यूब का उपयोग करना चाहते हैं ताकि हम आपके वायलट्वीटर को तदनुसार संशोधित कर सकें। फाल्कन ट्यूब और अन्य परीक्षण कंटेनर, बीकर और जहाजों जैसे बड़े टेस्ट ट्यूब के लिए, वायलप्रेस एक सुविधाजनक समाधान है।
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वायलप्रेस के साथ वायलट्वीटर
जबकि वायलट्वीटर अपने 10 ट्यूबों के छेद के साथ पहले से ही एक अद्वितीय और अत्यधिक कार्यात्मक अल्ट्रासोनिक डिवाइस है, वायलप्रेस ऐड-ऑन वायलट्वीटर को ऑपरेशन के लिए और भी बहुमुखी और लचीला बनाता है। वायलप्रेस वायलट्वीटर के लिए एक सहायक उपकरण है जिसमें एक क्लैंप-ऑन बार होता है जो बड़े नमूना ट्यूबों जैसे फाल्कन ट्यूब या अन्य छोटे से मध्यम आकार के परीक्षण बीकर को वायलट्वीटर फ्रंट में ठीक करने की अनुमति देता है। बाईं ओर की तस्वीर में VialTweeter को ब्लॉक में 10 Eppendorf शीशियों को पकड़े हुए दिखाया गया है, जबकि VialPress सोनिकेशन के लिए सामने की ओर एक बड़ी टेस्ट ट्यूब को ठीक करता है। वायलप्रेस तीव्र सोनीशन के लिए 5 बड़े टेस्ट ट्यूब तक रखने में सक्षम है।
VialTweeter नमूना तैयारी प्रोटोकॉल
VialTweeter व्यापक रूप से जैविक नमूनों को sonicate करने के लिए प्रयोग किया जाता है। विश्लेषण से पहले, नमूनों को जैव रासायनिक या बायोफिजिकल विश्लेषण और परख के लिए तैयार किया जाना चाहिए, उदाहरण के लिए लाइसिस, ऊतक समरूपीकरण, प्रोटीन निष्कर्षण, डीएनए / आरएनए कतरनी, डिगैसिंग आदि। VialTweeter इन अल्ट्रासोनिक प्रक्रियाओं को मज़बूती से पूरा करता है और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्रदान करता है। वायलट्वीटर का एक सामान्य अनुप्रयोग स्तनधारी (मानव और पशु) ऊतकों के साथ-साथ बैक्टीरिया कोशिकाओं और वायरल कणों का लसीका/कोशिका व्यवधान है। सफलतापूर्वक वायलट्वीटर-उपचारित जैविक नमूनों में मानव फेफड़े के उपकला कोशिकाएं, हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल, मायलोइड ल्यूकेमिया कोशिकाएं शामिल हैं, एस्चेरिचिया कोलाई, बेसिलस सबटिलिस, बेसिलस एन्थ्रेसिस, फ्रांसिसेला तुलारेंसिस, यर्सिनिया पेस्टिस, स्ट्रेप्टोकोकस पायोजेनेस, कौलोबैक्टर क्रिसेंटस, माइकोप्लाज्मा निमोनियामाइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस कॉम्प्लेक्स (एमटीबीसी) और कई अन्य बैक्टीरिया, वनस्पति और माइक्रोबियल कोशिकाएं।
नीचे, आप VialTweeter की विशेषता वाले कुछ चयनित प्रोटोकॉल पा सकते हैं।
- ऊतक समरूपता
- सेल व्यवधान & lysis
- प्रोटीन निष्कर्षण
- डीएनए/आरएनए बाल काटना
- सेल गोली घुलनशीलता
- रोगज़नक़ का पता लगाना
- डीगैसिंग
- इन-विट्रो डायग्नोस्टिक्स
- पूर्व-विश्लेषणात्मक उपचार
- प्रोटिओमिक्स
इन-विवो ग्लूटाथियोन निर्धारण के लिए वायलट्वीटर के साथ ई.कोलाई लाइसिस
तनाव MG1655 के Escherichia कोलाई बैक्टीरिया MOPS न्यूनतम माध्यम में 200ml की कुल मात्रा में उगाए गए थे जब तक कि 600 का A0.5 तक नहीं पहुंच गया था। तनाव उपचार के लिए संस्कृति को 50 मिलीलीटर संस्कृतियों में विभाजित किया गया था। 0.79 एमएम एलिसिन, 1 एमएम डायमाइड, या डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (नियंत्रण) के साथ इनक्यूबेशन के 15 मिनट के बाद, कोशिकाओं को 10 मिन के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 4,000 ग्राम पर काटा गया। कोशिकाओं KPE बफर के 700μl में छर्रों के निलंबन से पहले KPE बफर के साथ दो बार धोया गया. डिप्रोटीन के लिए, अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा कोशिकाओं के विघटन से पहले 10% (डब्ल्यू / वी) सल्फोसैलिसिलिक एसिड के 300μl को जोड़ा गया था (3 x 1 मिनट; वायलट्वीटर अल्ट्रासोनिकेटर)। सुपरनेटेंट सेंट्रीफ्यूजेशन (30 मिनट, 13,000 ग्राम, 4 डिग्री सेल्सियस) के बाद एकत्र किए गए थे। सल्फोसैलिसिलिक एसिड सांद्रता केपीई बफर के 3 संस्करणों के अलावा 1% तक कम हो गई थी। कुल ग्लूटाथियोन और जीएसएसजी के माप ऊपर वर्णित के रूप में किए गए थे। सेलुलर ग्लूटाथियोन सांद्रता की गणना ई की मात्रा के आधार पर की गई थी कोलाई 6.7×10-15 लीटर की कोशिकाओं की कोशिकाओं और A600 0.5 की कोशिका घनत्व (1×108 कोशिकाओं एमएल -1 संस्कृति के बराबर)। जीएसएच सांद्रता की गणना कुल ग्लूटाथियोन से 2 [जीएसएसजी] के घटाव द्वारा की गई थी। (मुलर एट अल 2016)
अल्फा-सिंक्यूक्लिन फाइब्रिल विखंडन वायलट्वीटर के साथ
VialTweeter sonicator का व्यापक रूप से अल्फा-सिंक्यूक्लिन फाइब्रिल और रिबन के विश्वसनीय और कुशल विखंडन के लिए उपयोग किया जाता है। VialTweeter के साथ अल्फा-सिंक्यूक्लिन विखंडन के लिए विस्तृत विवरण, प्रोटोकॉल और संदर्भ खोजने के लिए यहां क्लिक करें!
ग्रेफाइट फर्नेस परमाणु अवशोषण स्पेक्ट्रोमेट्री से पहले वायलट्वीटर के साथ सेल लाइसिस
बेसिलस सबटिलिस 168 (टीआरपीसी 2) एंटीबायोटिक तनाव के 15 मिनट के संपर्क में थे, फिर कोशिकाओं को 3,320 x ग्राम पर काटा गया, 100 एमएम ट्रिस / 1 एमएम ईडीटीए, पीएच 7.5 के साथ पांच बार धोया गया, 10 एमएम ट्रिस, पीएच 7.5 में फिर से निलंबित कर दिया गया और एक हिल्स्चर वायलट्वीटर उपकरण में अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा बाधित किया गया। (वेन्ज़ेल एट अल 2014)
मास स्पेक्ट्रोमेट्री से पहले VialTweeter नमूना तैयार करना
मानव CD344 हेमटोपोइएटिक स्टेम/पूर्वज कोशिकाओं के lyophilized सेल छर्रों को 10μxoltel ���l (पेप्टाइड कमजोर पड़ने वाली श्रृंखला के लिए थोक HEK293 तैयारी के लिए 200μl) में 100 मिमी अमोनियम हाइड्रोजन कार्बोनेट में 8 M यूरिया में फिर से निलंबित कर दिया गया था और 60% के आयाम पर Hielscher VialTweeter के साथ sonication द्वारा सहायता प्राप्त lysed, 60% का एक चक्र और बर्फ पर मध्यवर्ती शीतलन के साथ तीन बार के लिए 20s की अवधि। (आमोन एवं अन्य 2019)
VialPress का उपयोग कर नमूना तैयारी प्रोटोकॉल
ताजा सलाद (लैक्टुका सैटिवा) को 0.5 एम एचईपीईएस बफर (पीएच 8, केओएच समायोजित) में 1 ग्राम संयंत्र (ताजा वजन) से 200, 100, 50, या 20 एमएल बफर समाधान के अनुपात में समरूप किया गया था। बफर समाधान मात्रा के लिए संयंत्र द्रव्यमान का अनुपात 3.5 और 12 एमएल के बीच कुल समरूप मात्रा रखने के लिए विविध था। बफर समाधान मात्रा के लिए संयंत्र द्रव्यमान का अनुपात कुल समरूप मात्रा को 3.5 और 12 एमएल के बीच रखने के लिए विविध था, जिससे जांच के साथ समरूपीकरण की अनुमति मिली। Homogenates तो 3 मिनट (80% नाड़ी और 100% शक्ति) के लिए 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, जर्मनी) से लैस VialTweeter के साथ एक UP100St का उपयोग कर अप्रत्यक्ष ultrasonication से गुजरना पड़ा। इस उपकरण का उपयोग करने से संदूषण से बचा गया। (लॉटन एट अल 2019)
VialTweeter के साथ Sonication के दौरान विश्वसनीय तापमान नियंत्रण
तापमान एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया-प्रभावित कारक है जो जैविक नमूनों के उपचार के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। सभी यांत्रिक नमूना तैयार करने की तकनीकों के रूप में, सोनिकेशन गर्मी पैदा करता है। हालांकि, VialTweeter का उपयोग करते समय नमूनों का तापमान अच्छी तरह से नियंत्रित किया जा सकता है। हम आपको विश्लेषण के लिए VialTweeter और VialPress के साथ तैयार करते समय अपने नमूनों के तापमान की निगरानी और नियंत्रण करने के लिए विभिन्न विकल्प प्रस्तुत करते हैं।
- नमूना तापमान की निगरानी: अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर UP200St, जो वायलट्वीटर चलाता है, एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और एक प्लग करने योग्य तापमान सेंसर से लैस है। तापमान संवेदक को UP200St में प्लग करें और नमूना ट्यूबों में से एक में तापमान संवेदक की नोक डालें। डिजिटल रंगीन टच प्रदर्शन के माध्यम से, आप अपने नमूना sonication के लिए एक विशिष्ट तापमान रेंज UP200St के मेनू में सेट कर सकते हैं. अधिकतम तापमान तक पहुंचने पर अल्ट्रासोनिकेटर स्वचालित रूप से बंद हो जाएगा और तब तक रुकेगा जब तक कि नमूना तापमान निर्धारित तापमान ∆ के निचले मूल्य तक नीचे न हो जाए। फिर सोनिकेशन स्वचालित रूप से फिर से शुरू होता है। यह स्मार्ट फीचर गर्मी से प्रेरित गिरावट को रोकता है।
- VialTweeter ब्लॉक को प्री-कूल्ड किया जा सकता है। टाइटेनियम ब्लॉक को पूर्व-ठंडा करने के लिए फ्रिज या फ्रीजर में वायलट्वीटर ब्लॉक (ट्रांसड्यूसर के बिना केवल सोनोट्रोड!) डालें, नमूने में तापमान वृद्धि को स्थगित करने में मदद करता है। यदि संभव हो तो, नमूना स्वयं भी पूर्व-ठंडा किया जा सकता है।
- सोनिकेशन के दौरान ठंडा करने के लिए सूखी बर्फ का उपयोग करें। सूखी बर्फ से भरी उथली ट्रे का उपयोग करें और वायलट्वीटर को सूखी बर्फ पर रखें ताकि गर्मी तेजी से फैल सके।
दुनिया भर में ग्राहक जैविक, जैव रासायनिक, चिकित्सा और नैदानिक प्रयोगशालाओं में अपने दैनिक नमूना तैयार करने के काम के लिए वायलट्वीटर और वायलप्रेस का उपयोग करते हैं। बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और UP200St प्रोसेसर के तापमान नियंत्रण, तापमान मज़बूती से नियंत्रित किया जाता है और गर्मी प्रेरित नमूना गिरावट से बचा जाता है। VialTweeter और VialPress के साथ अल्ट्रासोनिक नमूना तैयार करना अत्यधिक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्रदान करता है!
VialTweeter का तकनीकी विवरण
वायलट्वीटर टाइटेनियम से बना एक ब्लॉक सोनोट्रोड है जो ब्लॉक के भीतर छेद में 10 शीशियों तक पकड़ सकता है। इसके अतिरिक्त, 5 बड़े टेस्ट ट्यूबों तक VialTweeter सामने VialPress का उपयोग करके क्लैंप किया जा सकता है। वायलट्वीटर को इस तरह से डिज़ाइन किया गया है कि विश्वसनीय और समान सोनीशन परिणाम सुनिश्चित करने के लिए अल्ट्रासोनिकेशन ऊर्जा को प्रत्येक सम्मिलित शीशी में समान रूप से वितरित किया जाता है। एक छोटी धुरी वायलट्वीटर सोनोट्रोड को असमान जमीन पर समायोजित करती है और टेस्ट ट्यूबों को लंबवत रूप से संरेखित करती है।
एक नज़र में VialTweeter के लाभ
- एक साथ 10 शीशियों तक की तीव्र sonication
- नमूने में पोत की दीवार के माध्यम से उच्च अल्ट्रासोनिक तीव्रता पर अप्रत्यक्ष sonication
- अप्रत्यक्ष sonication पार संदूषण और नमूना हानि से बचा जाता है
- समायोज्य और नियंत्रणीय sonication आयाम के कारण प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम
- वायलप्रेस आपको बड़ी ट्यूबों को सोनिकेट करने में सक्षम बनाता है
- समायोज्य आयाम 20 से 100% तक
- समायोज्य पल्स मोड 0 से 100% तक
- आटोक्लेवबल
VialTweeter द्वारा संचालित है यूपी200सेंट, एक 200 वाट शक्तिशाली अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर। UP200St एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर से लैस है जो आयाम, सोनीशन समय, धड़कन और तापमान जैसे सभी महत्वपूर्ण अल्ट्रासोनिक प्रक्रिया मापदंडों पर सटीक नियंत्रण की अनुमति देता है। यह VialTweeter जैविक और जैव रासायनिक प्रयोगशालाओं में सफल प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रक्रिया परिणामों के लिए एक विश्वसनीय उपकरण बनाता है।
आयाम को 20 और 100% के बीच समायोजित किया जा सकता है और इस तरह अल्ट्रासोनिक तीव्रता को आपके नमूने में अनुकूलित करने की अनुमति देता है। उदाहरण के लिए, डीएनए और आरएनए के कतरनी और विखंडन के लिए बहुत छोटे डीएनए टुकड़ों के उत्पादन को रोकने के लिए एक मामूली आयाम की आवश्यकता होती है, माउस मस्तिष्क के ऊतक समरूपता को उच्च तीव्रता वाले सोनिकेशन की आवश्यकता होती है। UP200St प्रोसेसर पर स्मार्ट और सहज ज्ञान युक्त मेनू के माध्यम से आदर्श आयाम, sonication तीव्रता और अवधि चुनें. मेनू और सेटिंग्स को रंगीन टच डिस्प्ले के माध्यम से आसानी से एक्सेस और संचालित किया जा सकता है। सेटिंग्स में आप आयाम, स्पंदन / चक्र मोड, सोनीशन अवधि, कुल ऊर्जा इनपुट और तापमान सीमा जैसे सोनीशन पैरामीटर पूर्व-सेट कर सकते हैं। अनुसंधान और उत्पादन में, परीक्षणों और परीक्षण परिणामों की पुनरावृत्ति महत्वपूर्ण है। इसका मतलब है कि प्रक्रिया की स्थिति और सोनीशन प्रोटोकॉल की सटीक रिकॉर्डिंग पूरी तरह से महत्वपूर्ण है। स्वचालित डेटा प्रोटोकॉल एक एकीकृत एसडी-कार्ड पर सीएसवी फ़ाइल में सभी सोनीशन डेटा लिखता है ताकि आप आसानी से विभिन्न सोनीशन रन की जांच और तुलना कर सकें। सभी अल्ट्रासोनिक प्रक्रिया डेटा को आसानी से एक्सेस किया जा सकता है और सीएसवी फ़ाइल के रूप में साझा किया जा सकता है।
Hielscher Ultrasonics आपको अपने शोध कार्य को सुविधाजनक बनाने और सुधारने के लिए उन्नत तकनीक प्रदान करने का प्रयास करता है!
अल्ट्रासोनिक शीशी अनुसंधान और विज्ञान में ट्वीटर
वायलट्वीटर एक 200 वाट शक्तिशाली अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर है, जो कई एपेंडोर्फ शीशियों या इसी तरह के टेस्ट ट्यूबों के एक साथ अल्ट्रासोनिक नमूना तैयार करने के लिए आदर्श है। इसलिए, वायलट्वीटर का उपयोग अक्सर अनुसंधान और जीवन विज्ञान के लिए जैविक और जैव रासायनिक प्रयोगशालाओं में किया जाता है। नीचे आप अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर VialTweeter की विशेषता वाले वैज्ञानिक लेखों का चयन पा सकते हैं। लेख अल्ट्रासोनिक नमूना समरूपीकरण, सेल व्यवधान और lysis, डीएनए बाल काटना और विखंडन, प्रोटीन और बायोएक्टिव यौगिकों के निष्कर्षण के साथ-साथ कोरोनावायरस SARS-CoV-2 की निष्क्रियता जैसे विभिन्न अनुप्रयोगों को कवर करते हैं। यदि आप एक विशिष्ट आवेदन और संबंधित वैज्ञानिक संदर्भों की तलाश कर रहे हैं, तो कृपया हमसे संपर्क करें।
- FactSheet VialTweeter VT26dxx – Customized VialTweeter Sonicator for Single Test Tubes or Vials
- FactSheet VialTweeter – Sonicator for Simultaneous Sample Preparation
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