अल्ट्रासोनिक VialTweeter के साथ नमूना तैयारी

अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी

Ultrasonication is a common technique of sample treatment in order to get the sample ready for analyses such as polymers chain reaction (PCR), Western Blots, assays, molecular sequencing, chromatography etc. Ultrasonication is a technique widely used in laboratories to treat samples pre-analytically. A major advantage of sonication is that the working principle of ultrasound is based on purely mechanical forces. Ultrasonic lysis and cell disruption is achieved by sonomechanical shear forces, which gives ultrasonication the advantage that the solvents used for protein extraction can be used also during lysis. Ultrasonic cell disruptors such as the VialTweeter break the cell walls / membranes and promote mass transfer between cell interior and solvent. Thereby, the analyte (e.g. DNA, RNA, proteins, organelles etc.) are efficiently transferred from the cell matrix into the solvent. This means the steps of quenching and extraction overlap with the ultrasonic cell disruption process, which makes ultrasonic lysis very effective. Furthermore, ultrasonic sample preparation does not require detergents and other lysis reagents, which might alter and destruct the structure of the lysate and is known for the subsequent troubles with purification. Another lysis method, the enzymatic disruption requires long incubation times and delivers often non-reproducible results. Ultrasonic sample preparation overcomes common problems in sample preparation such as tissue homogenization, cell disruption, lysis, protein extraction and lysate solubilization. Since the intensity of the ultrasonic treatment can be exactly controlled and adjusted to the biological sample, degradation and sample loss are avoided. Automatically monitored and controlled sample temperature, pulse mode and sonication duration ensure optimum outcomes.

VialTweeter प्रयोगशाला के काम के लिए विशेष रूप से सुविधाजनक है कि एक ही शर्तों के तहत कई नमूनों की एक साथ तैयारी की आवश्यकता है । VialTweeter एक अल्ट्रासोनिक ब्लॉक सोनोट्रॉड है जो 10 शीशियों (जैसे एपपेनडोर्फ, सेंट्रिगेज, नुएनसी ट्यूब, क्रायो-शीशियों) तक पकड़ सकता है और ठीक नियंत्रित परिस्थितियों में उन्हें तीव्रता से सोनिकेट करता है। चूंकि अल्ट्रासोनिक ऊर्जा को शीशियों की दीवारों के माध्यम से नमूना माध्यम में युग्मित किया जाता है, इसलिए उपचार के दौरान शीशियां बंद रहती हैं। जिससे सैंपल लॉस और क्रॉस संदूषण से पूरी तरह से बचा जा सकता है।

शीशियों और ट्यूबों फिटिंग VialTweeter

VialTweeter 10 आम शंकु या गोल-नीचे ट्यूब जैसे एपेंडोर्फ, अपकेंद्रित्र, क्रायो-शीशी और विभिन्न NUNC शीशी प्रकारों को पकड़ने के लिए अनुकूलित है, लेकिन छेद अनुरोध पर अन्य शीशी और ट्यूब आकार के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। कृपया हमें बताएं कि आप किस तरह की टेस्ट ट्यूब का उपयोग करना चाहते हैं ताकि हम तदनुसार आपके VialTweeter को संशोधित कर सकें। फाल्कन ट्यूब और अन्य परीक्षण कंटेनरों, बीकर्स और जहाजों जैसे बड़े परीक्षण ट्यूबों के लिए, VialPress एक सुविधाजनक समाधान है।

VialPress के साथ VialTweeter

जबकि VialTweeter अपने 10 ट्यूबों छेद के साथ ही पहले से ही एक अद्वितीय और अत्यधिक कार्यात्मक अल्ट्रासोनिक डिवाइस है, VialPress ऐड-ऑन VialTweeter को ऑपरेशन के लिए और भी बहुमुखी और लचीला बनाता है। VialPress VialTweeter के लिए एक सहायक है जिसमें क्लैंप-ऑन बार शामिल है जो बड़े नमूना ट्यूबों जैसे फाल्कन ट्यूब या अन्य छोटे से मध्य आकार के परीक्षण बीकर्स को VialTweeter के सामने उतारने की अनुमति देता है। बाईं ओर की तस्वीर में ब्लॉक में 10 एपेंडोर्फ शीशियों को पकड़े हुए VialTweeter को दिखाया गया है, जबकि VialPress सोनीफिकेशन के लिए सामने एक बड़ा टेस्ट ट्यूब फिक्सेट करता है । VialPress तीव्र सोनीफिकेशन के लिए 5 बड़े टेस्ट ट्यूब तक रखने में सक्षम है।

VialTweeter नमूना तैयारी प्रोटोकॉल

VialTweeter व्यापक रूप से जैविक नमूनों को सोनीकेट करने के लिए प्रयोग किया जाता है। विश्लेषण से पहले, नमूनों को जैव रासायनिक या जैव भौतिक विश्लेषणों और परखों के लिए तैयार किया जाना चाहिए, उदाहरण के लिए लाइसिस, ऊतक समरूपता, प्रोटीन निष्कर्षण, डीएनए/आरएनए कतरनी, डेगासिंग आदि । VialTweeter इन अल्ट्रासोनिक प्रक्रियाओं को मज़बूती से पूरा करता है और प्रजनन योग्य परिणाम प्रदान करता है। VialTweeter का एक आम आवेदन स्तनधारी (मानव और पशु) ऊतकों के साथ ही बैक्टीरिया कोशिकाओं और वायरल कणों के lysis/सेल व्यवधान है । सफलतापूर्वक VialTweeter-इलाज जैविक नमूनों में मानव फेफड़ों के एपिथेलियल कोशिकाएं, हीमेटोपोइटिक स्टेम सेल, माइलॉयड ल्यूकेमिया कोशिकाएं शामिल हैं, एस्चेरिचिया कोलाई, बेसिलस सुबटिलिस, बैसिलस एंथ्रेसिस, फ्रांसिसेला तुलेरेन्सिस, यरसिनिया पेस्टिस, स्ट्रेप्टोकोकस पायोजीन्स, कॉलोबैक्टर वर्धमान, माइकोप्लाज्मा निमोनिया, माइकोबैक्टीरिया/माइकोबैक्टीरियम तपेदिक परिसर (एमटीबीसी) और कई अन्य जीवाणु, वनस्पति और माइक्रोबियल कोशिकाएं ।
नीचे, आप VialTweeter की विशेषता वाले कुछ चयनित प्रोटोकॉल पा सकते हैं।

ई. कोलाई Lysis में वीवो ग्लूटाथिएक दृढ़ संकल्प के लिए VialTweeter के साथ

तनाव MG1655 के Escherichia कोलाई बैक्टीरिया 0.5 के एक A600 तक पहुंच गया था जब तक 200 मिलीलीटर की कुल मात्रा में MOPS ंयूनतम माध्यम में उगाया गया। संस्कृति तनाव उपचार के लिए ५०-मिलीलीटर संस्कृतियों में विभाजित किया गया था । 0.79 m allicin, 1 mm diamide, या डाइमेथिल सल्फॉक्साइड (नियंत्रण) के साथ इनक्यूबेशन के 15 मिनट के बाद, कोशिकाओं को 10 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 4,000ग्राम पर काटा गया था। केपीई बफर के 700μl में छर्रों के पुनर्पियों से पहले केपीई बफर के साथ कोशिकाओं को दो बार धोया गया था। डेप्रेटिनेशन के लिए, अल्ट्रासोनिकेशन (3 x 1 मिनट) द्वारा कोशिकाओं के व्यवधान से पहले 10% (w/v) सल्फोसालिसिलिक एसिड के 300μl जोड़े गए थे; VialTweeter अल्ट्रासोनिकेटर)। अपकेंद्रित्र (30 मिनट, 13,000ग्राम, 4 डिग्री सेल्सियस) के बाद सुपरनेटेंट एकत्र किए गए थे। केपीई बफर के 3 वॉल्यूम के अलावा सल्फोसलिसिलिक एसिड सांद्रता को 1% तक कम कर दिया गया था। ऊपर वर्णित कुल ग्लूटाथिएक और जीएसएसजी के माप किए गए। सेलुलर ग्लूटाथिएक सांद्रता की गणना 6.7×10-15 लीटर की ई कोलाई कोशिकाओं की मात्रा और A600 0.5 (1×108 कोशिकाओं एमएल-1 संस्कृति के बराबर) के सेल घनत्व के आधार पर की गई थी। जीएसएच सांद्रता की गणना कुल ग्लूटाथिएक से 2 [जीएसएसजी] के घटाव द्वारा की गई थी। (Müller एट अल 2016)

ग्रेफाइट फर्नेस एटॉमिक अवशोषण स्पेक्ट्रोमेट्री से पहले VialTweeter के साथ सेल लाइसिस

बैसिलस सबटिलिस 168 (trpC2) एंटीबायोटिक तनाव के 15 मिनट के संपर्क में थे, फिर कोशिकाओं को 3,320 x ग्राम पर काटा गया, 100 एमएम ट्रिस/1 एमएम ईडीटीए, पीएच 7.5 के साथ पांच बार धोया गया, 10 एमएम ट्रिस, पीएच 7.5 में पुनः निलंबित किया गया और एक Hielscher VialTweeter उपकरण में अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा बाधित किया गया। (वेनज़ेल एट अल 2014)

मास स्पेक्ट्रोमेट्री से पहले VialTweeter नमूना तैयारी

मानव CD34􏰀 हेमेटोपोइटिक स्टेम/जनक कोशिकाओं के lyophilized सेल छर्रों 10μ􏰇l (थोक HEK293 के लिए थोक HEK293 तैयारी के लिए पेप्टाइड कमजोर पड़ने श्रृंखला के लिए) में 8 एम यूरिया में फिर से निलंबित कर दिया गया 100 m m m अमोनियम हाइड्रोजन कार्बोनेट और lysed 60% के एक आयाम पर Hielscher VialTweeter के साथ सोनीएशन द्वारा सहायता प्राप्त, 60% का एक चक्र और बर्फ पर मध्यवर्ती शीतलन के साथ तीन बार के लिए 20s की अवधि। (अमोन एट अल 2019)

VialPress का उपयोग कर नमूना तैयारी प्रोटोकॉल

ताजा सलाद पत्ता (लैक्टुका सतीवा) को 1 ग्राम संयंत्र (ताजा वजन) से 200, 100, 50, या 20 एमएल बफर समाधान के अनुपात में 0.5 एम एचईपीई बफर (पीएच 8, कोह समायोजित) में समरूप बनाया गया था। 3.5 और 12 एमएल के बीच कुल समरूप मात्रा रखने के लिए पौधे द्रव्यमान से बफर समाधान मात्रा का अनुपात भिन्न था। संयंत्र द्रव्यमान से बफर समाधान की मात्रा का अनुपात 3.5 और 12 एमएल के बीच कुल समरूप मात्रा रखने के लिए भिन्न था, जिससे जांच के साथ समरूपता की अनुमति मिली। होमोजेनेट ने 3 मिनट (80% पल्स और 100% पावर) के लिए 200xt VialPress (Hielscher अल्ट्रासोनिक्स जीएमबीएच, जर्मनी) से लैस VialTweeter के साथ एक UP200St का उपयोग करके अप्रत्यक्ष अल्ट्रासोनिकेशन किया। इस डिवाइस का उपयोग करने से प्रदूषण से बचा गया। (लॉटन एट अल 2019)

VialTweeter के साथ सोनीशन के दौरान विश्वसनीय तापमान नियंत्रण

तापमान एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया को प्रभावित करने वाला कारक है जो जैविक नमूनों के उपचार के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। सभी यांत्रिक नमूना तैयारी तकनीकों के रूप में, सोनीशन गर्मी पैदा करता है। हालांकि, VialTweeter का उपयोग करते समय नमूनों के तापमान को अच्छी तरह से नियंत्रित किया जा सकता है। हम आपको विश्लेषण के लिए VialTweeter और VialPress के साथ तैयार करते हुए अपने नमूनों के तापमान की निगरानी और नियंत्रण के लिए विभिन्न विकल्प प्रस्तुत करते हैं।

1. नमूना तापमान की निगरानी: अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर UP200St, जो VialTweeter ड्राइव, एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और एक खामियों को दूर करने योग्य तापमान सेंसर से सुसज्जित है । UP200St में तापमान सेंसर प्लग और नमूना ट्यूबों में से एक में तापमान सेंसर की नोक डालें। डिजिटल रंगीन टच-डिस्प्ले के माध्यम से, आप अपने नमूने के लिए एक विशिष्ट तापमान सीमा UP200St के मेनू में सेट कर सकते हैं। अधिकतम तापमान पहुंचने और तब तक रुकने पर अल्ट्रासोनिकेटर स्वचालित रूप से बंद हो जाएगा जब तक कि नमूना तापमान ∆ सेट तापमान के कम मूल्य तक नहीं नीचे हो जाता है। इसके बाद सोनिकेशन अपने आप फिर से शुरू हो जाता है। यह स्मार्ट फीचर हीट-प्रेरित दुर्गति को रोकता है।
2. VialTweeter ब्लॉक पूर्व ठंडा किया जा सकता है। वियलट्वीटर ब्लॉक (केवल ट्रांसड्यूसर के बिना सोनोट्रोड!) फ्रिज या फ्रीजर में टाइटेनियम ब्लॉक को प्री-कूल करने के लिए लें, नमूने में तापमान वृद्धि को स्थगित करने में मदद करता है। यदि संभव हो, तो नमूना खुद को प्री-कूल भी किया जा सकता है।
3. सोनीशन के दौरान ठंडा करने के लिए सूखी बर्फ का प्रयोग करें। सूखी बर्फ से भरी उथली ट्रे का इस्तेमाल करें और छठी को सूखी बर्फ पर रखें ताकि गर्मी तेजी से नष्ट हो सके।

दुनिया भर में ग्राहक जैविक, जैव रासायनिक, चिकित्सा और नैदानिक प्रयोगशालाओं में अपने दैनिक नमूना तैयारी के काम के लिए VialTweeter और VialPress का उपयोग करते हैं। UP200St प्रोसेसर के बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और तापमान नियंत्रण, तापमान मज़बूती से नियंत्रित है और गर्मी प्रेरित नमूना गिरावट से बचा है । VialTweeter और VialPress के साथ अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी अत्यधिक विश्वसनीय और प्रजनन योग्य परिणाम प्रदान करता है!

VialTweeter के तकनीकी विवरण

VialTweeter टाइटेनियम से बना एक ब्लॉक सोनोट्रॉड है जो ब्लॉक के भीतर छेद में 10 शीशियों तक पकड़ सकता है। इसके अतिरिक्त, VialPress का उपयोग करके 5 बड़े टेस्ट ट्यूबों को VialTweeter मोर्चे पर दबाया जा सकता है। VialTweeter इतना डिज़ाइन किया गया है कि अल्ट्रासोनिकेशन ऊर्जा को विश्वसनीय और समान रूप से परिणाम सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक डाला शीशी में समान रूप से वितरित किया जाता है। एक छोटी सी धुरी VialTweeter सोनोट्रॉड को असमान जमीन पर समायोजित करती है और परीक्षण ट्यूबों को लंबवत संरेखित करती है।

एक नज़र में VialTweeter के लाभ

• के लिए 10 शीशियों के तीव्र sonication के एक साथ
• नमूना में पोत दीवार के माध्यम से उच्च अल्ट्रासोनिक तीव्रता पर अप्रत्यक्ष sonication
• अप्रत्यक्ष sonication के पार संदूषण और नमूना नुकसान से बचा जाता है
• समायोज्य और नियंत्रणीय sonication आयाम के कारण प्रजननीय परिणाम
• VialPress बड़ा ट्यूब sonicate करने के लिए सक्षम बनाता है
• 20 से 100% तक समायोज्य आयाम
• 0 से 100% करने के लिए समायोज्य पल्स मोड
• autoclavable

VialTweeter द्वारा संचालित है UP200St, एक 200 वाट शक्तिशाली अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर। UP200St एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर से लैस है जो आयाम, सोनीशन समय, स्पंदन और तापमान जैसे सभी महत्वपूर्ण अल्ट्रासोनिक प्रक्रिया मापदंडों पर सटीक नियंत्रण की अनुमति देता है। यह जैविक और जैव रासायनिक प्रयोगशालाओं में सफल प्रजनन प्रक्रिया के परिणाम के लिए VialTweeter एक विश्वसनीय उपकरण बनाता है।
आयाम को 20 और 100% के बीच समायोजित किया जा सकता है और इस प्रकार अल्ट्रासोनिक तीव्रता को आपके नमूने में अनुकूलित करने की अनुमति देता है। उदाहरण के लिए, डीएनए और आरएनए के कतरन और विखंडन के लिए बहुत छोटे डीएनए टुकड़ों के उत्पादन को रोकने के लिए एक मामूली आयाम की आवश्यकता होती है, माउस मस्तिष्क के ऊतक समरूपता को उच्च तीव्रता के सोनीएशन की आवश्यकता होती है। UP200St प्रोसेसर पर स्मार्ट और सहज मेनू के माध्यम से आदर्श आयाम, सोनीशन तीव्रता और अवधि चुनें। मेनू और सेटिंग्स आसानी से पहुँचा और रंगीन स्पर्श प्रदर्शन के माध्यम से संचालित किया जा सकता है। सेटिंग्स में आप एम्पलिट्यूड, स्पंदन/चक्र मोड, सोनीशन अवधि, कुल ऊर्जा इनपुट और तापमान सीमा जैसे सोनीशन पैरामीटर को प्री-सेट कर सकते हैं। अनुसंधान और उत्पादन में, परीक्षणों और परीक्षण परिणामों की पुनरावृत्ति महत्वपूर्ण है । इसका मतलब यह है कि प्रक्रिया की स्थिति और सोनीशन प्रोटोकॉल की सटीक रिकॉर्डिंग पूरी तरह से महत्वपूर्ण हैं। स्वचालित डेटा प्रोटोकॉललिंग एक एकीकृत एसडी-कार्ड पर सीएसवी फ़ाइल में सभी सोनीशन डेटा लिखता है ताकि आप आसानी से विभिन्न सोनीशन रन की जांच और तुलना कर सकें। सभी अल्ट्रासोनिक प्रक्रिया डेटा को सीएसवी फ़ाइल के रूप में आसानी से एक्सेस और साझा किया जा सकता है।
Hielscher Ultrasonics आपको अपने शोध कार्य को सुविधाजनक और बेहतर बनाने के लिए उन्नत तकनीक प्रदान करने का प्रयास करता है!