कोशिकाओं का अल्ट्रासोनिक विघटन
अल्ट्रासोनिकेशन कोशिकीय संरचनाओं को विघटित करने का एक प्रभावी साधन है। इसलिए, अनुसंधान और विश्लेषण के लिए कोशिकाओं को तोड़कर खोलने तथा अंतःकोशिकीय अणुओं, प्रोटीनों और कोशिकांगों को निकालने के लिए प्रयोगशालाओं में सोनिकेटरों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। औद्योगिक स्तर पर, कोशिका कारखानों से अणुओं को पृथक करने या बायोमास के पाचन को बढ़ावा देने के लिए अल्ट्रासोनिक विघटन और लयन का उपयोग किया जाता है।
अल्ट्रासोनिक विघटन क्या है?
अल्ट्रासोनिक विघटन, जिसे अल्ट्रासोनिक समांगीकरण भी कहा जाता है, एक ऐसी प्रक्रिया है जिसमें तरल माध्यम में कोशिका भित्तियों को तोड़ने और आणविक संरचनाओं को विघटित करने के लिए उच्च-तीव्रता, निम्न-आवृत्ति वाली अल्ट्रासाउंड तरंगों का उपयोग किया जाता है। इस तकनीक का उपयोग आम तौर पर विभिन्न वैज्ञानिक और औद्योगिक अनुप्रयोगों में कई उद्देश्यों के लिए किया जाता है:
कोशिका विघटन: कोशिका झिल्लियों को विघटित करके प्रोटीन, न्यूक्लिक अम्ल और कोशिकांगों जैसी कोशिकीय सामग्रियों को मुक्त करने के लिए कोशिका जीवविज्ञान और आणविक जीवविज्ञान में अल्ट्रासोनिक विघटन का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। यह विश्लेषण के लिए अंतःकोशिकीय घटकों को निकालने या सूक्ष्मजीवविज्ञान और जैव प्रौद्योगिकी प्रक्रियाओं में कोशिकाओं का लयन करने के लिए उपयोगी है।
- समांगीकरण: यह किसी नमूने में घटकों को समान रूप से मिलाने में मदद करता है, विशेषकर जब आपस में अमिश्रणीय तरल पदार्थों के साथ काम किया जा रहा हो या सामग्रियों का एकसमान मिश्रण प्राप्त करने का प्रयास किया जा रहा हो।
- प्रोटीन निष्कर्षण: जीवविज्ञान, प्रोटिओमिक्स और जीवन विज्ञान में प्रोटीनों का विश्लेषण एक बहुत आम कार्य है। परीक्षणों में प्रोटीनों का विश्लेषण करने से पहले, उन्हें कोशिका के भीतर से निकालना और पृथक करना आवश्यक होता है। प्रोटीन निष्कर्षण के लिए सोनिकेटरों का उपयोग सबसे व्यापक रूप से अपनाई जाने वाली विधि है।
- DNA खंडन: DNA और RNA अलग-अलग प्रकार के न्यूक्लिक अम्ल हैं, जो कोशिकाओं में आनुवंशिक जानकारी को संग्रहीत और कूटबद्ध करते हैं। DNA और RNA का विश्लेषण करते समय कभी-कभी लंबे सूत्रों का खंडन करना आवश्यक होता है। यह प्रक्रिया सोनिकेशन द्वारा विश्वसनीय और कुशल ढंग से की जा सकती है।
- नमूना तैयारी: अनुसंधान और विश्लेषण में, विभिन्न विश्लेषणात्मक तकनीकों से पहले नमूना तैयार करना एक सामान्य प्रक्रिया है। अल्ट्रासोनिक विघटन नमूनों को घोलने या परिक्षेपित करने में मदद कर सकता है, जिससे विश्लेषणों की सटीकता और पुनरुत्पादकता में सुधार हो सकता है।
प्रोब-प्रकार का सोनिकेटर UP200St कोशिकाओं के विघटन, कोशिका विघटन और निष्कर्षण के लिए
अल्ट्रासोनिक विघटन के लाभ
विघटन, कोशिका विघटन और अंतःकोशिकीय अणुओं तथा प्रोटीनों के निष्कर्षण के लिए प्रोब-प्रकार के सोनिकेटर का उपयोग क्यों करें? सोनिकेटर या अल्ट्रासोनिक डिस्मेम्ब्रेटर अनेक लाभ प्रदान करता है, जो उच्च-दाब समांगीकरण, बॉल मिलिंग या माइक्रोफ्लुइडाइज़ेशन जैसी अन्य विघटन विधियों की तुलना में सोनिकेशन को श्रेष्ठ तकनीक बनाते हैं।
- गैर-तापीय: अल्ट्रासोनिक विघटन एक गैर-तापीय विधि है, जिसका अर्थ है कि यह सामग्रियों को तोड़ने के लिए ऊष्मा पर निर्भर नहीं करती। यह उन अनुप्रयोगों के लिए लाभप्रद है जहाँ उच्च तापमान ऊष्मा-संवेदनशील नमूनों को खराब कर सकता है।
- सटीक और नियंत्रित: इस प्रक्रिया को उच्च सटीकता के साथ नियंत्रित किया जा सकता है, जिससे विशिष्ट विघटन, मिश्रण या कण आकार में कमी संभव होती है।
- त्वरित और कुशल: अल्ट्रासोनिकेशन आम तौर पर एक तेज़ और कुशल विधि है, जो इसे उच्च प्रसंस्करण क्षमता वाले अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त बनाती है।
- रसायनों का कम उपयोग: कई मामलों में, अल्ट्रासोनिक विघटन तीव्र प्रभाव वाले रसायनों या कार्बनिक विलायकों की आवश्यकता को कम कर सकता है, जो पर्यावरण के अनुकूल हो सकता है और रासायनिक संदूषण का जोखिम कम कर सकता है।
- न पिसाई माध्यम, न नोज़ल: बॉल/बीड मिलिंग या उच्च-दाब होमोजेनाइज़र जैसी वैकल्पिक विघटन तकनीकों के कुछ नुकसान हैं। बॉल/बीड मिलिंग में पिसाई माध्यमों (बीड या मोतियों) का उपयोग आवश्यक होता है, जिन्हें काफी मेहनत से अलग और साफ करना पड़ता है। उच्च-दाब होमोजेनाइज़र में नोज़ल होते हैं, जिनके अवरुद्ध होने की आशंका रहती है। इसके विपरीत, अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र उपयोग में आसान, अत्यधिक विश्वसनीय और मज़बूत होते हैं तथा उन्हें बहुत कम रखरखाव की आवश्यकता होती है।
- बहुउपयोगिता: इसका उपयोग बैक्टीरिया, पादप कोशिकाओं, स्तनधारी ऊतकों, शैवाल, कवक आदि सहित अनेक प्रकार की सामग्रियों पर किया जा सकता है, जिससे यह विभिन्न क्षेत्रों में एक बहुउपयोगी तकनीक बन जाती है।
पैमाना बढ़ाने की क्षमता: अल्ट्रासोनिक तकनीक का पैमाना औद्योगिक प्रक्रियाओं के लिए बढ़ाया जा सकता है, जिससे यह प्रयोगशाला और बड़े पैमाने के उत्पादन, दोनों के अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त होती है।
अल्ट्रासोनिक विघटन और कोशिका विघटन का कार्य सिद्धांत
अल्ट्रासोनिकेशन उपचारित तरल में बारी-बारी से उच्च-दाब और निम्न-दाब वाली तरंगें उत्पन्न करता है। निम्न-दाब चक्र के दौरान, अल्ट्रासोनिक तरंगें तरल में छोटे निर्वात बुलबुले बनाती हैं, जो उच्च-दाब चक्र के दौरान प्रचंड रूप से ध्वस्त हो जाते हैं। इस घटना को कैविटेशन कहा जाता है। कैविटेशन बुलबुले का अंतःस्फोट प्रबल द्रवगतिकीय अपरूपण बल उत्पन्न करता है, जो पहले सोनोपोरेशन और उसके बाद कोशिकीय संरचनाओं का कुशल विघटन करते हैं। अंतःकोशिकीय अणु और कोशिकांग पूरी तरह से विलायक में मुक्त हो जाते हैं।
कोशिकीय संरचनाओं का अल्ट्रासोनिक विघटन
अपरूपण बल रेशेदार, सेल्यूलोज़युक्त सामग्री को महीन कणों में विघटित कर सकते हैं और कोशिकीय संरचना की भित्तियों को तोड़ सकते हैं। इससे स्टार्च या शर्करा जैसी अधिक अंतःकोशिकीय सामग्री तरल में मुक्त होती है। इसके अतिरिक्त, कोशिका भित्ति की सामग्री भी छोटे अवशेषों में टूट जाती है।
इस प्रभाव का उपयोग कार्बनिक पदार्थों के किण्वन, पाचन और अन्य रूपांतरण प्रक्रियाओं के लिए किया जा सकता है। मिलिंग और पिसाई के बाद, अल्ट्रासोनिकेशन स्टार्च जैसी अधिक अंतःकोशिकीय सामग्री के साथ-साथ कोशिका भित्ति के अवशेषों को भी उन एंज़ाइमों के लिए उपलब्ध कराता है जो स्टार्च को शर्कराओं में परिवर्तित करते हैं। यह द्रवीकरण या शर्करीकरण के दौरान एंज़ाइमों के संपर्क में आने वाले सतह क्षेत्र को भी बढ़ाता है। इससे आम तौर पर यीस्ट किण्वन और अन्य रूपांतरण प्रक्रियाओं की गति और उपज बढ़ती है, उदाहरण के लिए बायोमास से एथेनॉल उत्पादन बढ़ाने के लिए।
अल्ट्रासोनिक विघटन का उपयोग करें – किसी भी पैमाने पर विश्वसनीय और कुशल ढंग से
Hielscher सोनिकेटर विभिन्न शक्ति रेटिंग और प्रसंस्करण क्षमताओं के साथ उपलब्ध हैं। चाहे आप कुछ माइक्रोलीटर से लेकर कुछ लीटर तक के छोटे जैविक नमूनों का सोनिकेशन करना चाहते हों या उत्पादन के लिए कोशिकाओं या बायोमास की बड़ी प्रवाह धाराओं को संसाधित करना चाहते हों, Hielscher Ultrasonics आपके जैविक अनुप्रयोग के लिए सबसे उपयुक्त अल्ट्रासोनिक डिस्मेम्ब्रेटर प्रदान करेगा।
- 1mL से लगभग 5L के लिए प्रयोगशाला स्तर, उदाहरण के लिए 22mm सोनोट्रोड वाला UP400St
- लगभग 0.1 से 20L/min पर बेंचटॉप स्तर, उदाहरण के लिए 34mm सोनोट्रोड और प्रवाह सेल वाला UIP1000hdT
- 20L/min से शुरू होने वाला उत्पादन स्तर, उदाहरण के लिए UIP4000hdT या UIP16000hdT
नीचे दी गई तालिका हमारे प्रयोगशाला आकार के अल्ट्रासोनिकेटरों की अनुमानित प्रसंस्करण क्षमता का संकेत देती है:
| अनुशंसित उपकरण | बैच आयतन | प्रवाह दर |
|---|---|---|
| UIP400MTP 96-वेल प्लेट सोनिकेटर | मल्टी-वेल / माइक्रोटाइटर प्लेटें | n.a. |
| अल्ट्रासोनिक CupHorn | वायल या बीकर के लिए CupHorn | n.a. |
| GDmini2 | अल्ट्रासोनिक सूक्ष्म-प्रवाह रिएक्टर | n.a. |
| VialTweeter | 0.5 से 1.5mL | n.a. |
| UP100H | 1 से 500mL | 10 से 200mL/min |
| UP200Ht, UP200St | 10 से 1000mL | 20 से 200mL/min |
| UP400St | 10 से 2000mL | 20 से 400mL/min |
| अल्ट्रासोनिक छलनी शेकर | n.a. | n.a. |
यदि आप कोशिकाओं के विघटन के लिए अल्ट्रासोनिक उपकरणों के उपयोग के बारे में अधिक जानकारी प्राप्त करना चाहते हैं, तो कृपया नीचे दिए गए फ़ॉर्म का उपयोग करें। हमें आपकी सहायता करके खुशी होगी।
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नीचे दी गई तालिका हमारे औद्योगिक अल्ट्रासोनिकेटरों की अनुमानित प्रसंस्करण क्षमता का संकेत देती है:
| बैच आयतन | प्रवाह दर | अनुशंसित उपकरण |
|---|---|---|
| 200mL से 5L | 0.05 से 1L/min | UIP500hdT |
| 1 से 10L | 0.1 से 2L/min | UIP1000hdT |
| 5 से 20L | 0.2 से 4L/min | UIP2000hdT |
| 10 से 100L | 2 से 10L/min | UIP4000hdT |
| 15 से 150L | 3 से 15L/min | UIP6000hdT | n.a. | 10 से 100L/min | UIP16000 |
| n.a. | इससे अधिक | उपकरणों का समूह – UIP16000 |
UP400St अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र कोशिका विलेयीकरण, लयन और प्रोटीन निष्कर्षण के लिए
साहित्य / संदर्भ
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- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
अल्ट्रासोनिक cuphorn नमूनों के निर्जीवाणु समांगीकरण के लिए बंद ट्यूबों और वायलों के तीव्र सोनिकेशन हेतु।
Hielscher Ultrasonics उच्च-प्रदर्शन वाले अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र बनाता है, जिनका आकार प्रयोगशाला स्तर से लेकर औद्योगिक स्तर तक होता है।