अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा BL21 कोशिकाओं की सेल लाइसिस

प्रोटीन अभिव्यक्ति के लिए BL21 कोशिकाएं

BL21 सेल एक रासायनिक रूप से सक्षम ई. कोलाई बैक्टीरियल तनाव है जो T7 आरएनए पॉलीमरेज-आईपीटीजी प्रेरण प्रणाली का उपयोग करके परिवर्तन और उच्च स्तरीय प्रोटीन अभिव्यक्ति के लिए उपयुक्त है। BL21 कोशिकाएं किसी भी जीन की उच्च दक्षता वाले प्रोटीन अभिव्यक्ति की अनुमति देती हैं जो T7 प्रमोटर के नियंत्रण में है। ई. कोलाई तनाव BL21 (DE3) T7 प्रमोटर आधारित अभिव्यक्ति वैक्टर के साथ संयुक्त एक T7 आरएनए पॉलीमरेज आधारित प्रोटीन उत्पादन तनाव है और व्यापक रूप से प्रयोगशालाओं और उद्योग में लागू करने के लिए recombinant प्रोटीन का उत्पादन है । BL21 (DE3) में, पुनर्संयोजन प्रोटीन को एन्कोडिंग जीन की अभिव्यक्ति क्रोमोसोमली इनकोडेड टी 7 आरएनए पॉलीमरेज (T7 आरएनएपी) द्वारा लिखित है, जो पारंपरिक ई. कोलाई आरएनएपी की तुलना में आठ गुना तेजी से टाइप करता है। यह तनाव BL21 (DE3) अत्यधिक कुशल बनाता है और सबसे पसंदीदा प्रोटीन अभिव्यक्ति सेल प्रणालियों में से एक में बदल जाता है ।

BL21 कोशिकाओं से अल्ट्रासोनिक लाइसिस और प्रोटीन निष्कर्षण के लिए प्रोटोकॉल

BL21 कोशिकाओं की सेल लाइसिस ज्यादातर सोडियम लॉरॉयल सरकोसिनेट (जिसे सरकोसिल के रूप में भी जाना जाता है) के साथ संयोजन में अल्ट्रासोनिकेशन का उपयोग करके लाइसिस बफर के रूप में किया जाता है। अल्ट्रासोनिक सेल व्यवधान और प्रोटीन निष्कर्षण के फायदे विश्वसनीयता, प्रजनन क्षमता के साथ-साथ अल्ट्रासोनिकेटर के सरल, सुरक्षित और तेजी से संचालन में झूठ बोलते हैं। नीचे दिए गए प्रोटोकॉल अल्ट्रासोनिक BL21 सेल लाइसिस के लिए कदम-दर-कदम दिशा देता है:

• चैपरवन प्रोटीन को हटाने के लिए, BL21 बैक्टीरियल छर्रों को 50 मिलीलीटर बर्फ ठंडे सोडियम ट्राइस-ईडीए (एसटीई) बफर (10 एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच 8.0, 1 एमएम ईडीटीए, 150 एमएमएल एनएसीएल 100 mm PMSF के साथ पूरक) में फिर से निलंबित कर दिया गया था।
• lysozyme (10 मिलीग्राम/मिलीलीटर) के ५०० उल जोड़ा जाता है और कोशिकाओं को 15 मिनट के लिए बर्फ पर इनक्यूबेटेड किया जाता है ।
• बाद में, डीटीटी के 500 उल और 7 मिलीलीटर सरकोसिल (एसटीई बफर में बने 10% (w/v) जोड़े जाते हैं।
• यह सभी शुद्धि बफ़र्स बर्फ ठंडा रखने के लिए और बर्फ पर हर समय नमूनों को बनाए रखने के लिए आवश्यक है । यदि संभव हो तो कोल्ड रूम में सभी शुद्धि कदम उठाए जाने चाहिए।



• अल्ट्रासोनिक लाइसिस और प्रोटीन निष्कर्षण के लिए, नमूनों में ध्वनियुक्त कर रहे हैं VialTweeter मल्टीसैंपल अल्ट्रासोनिकेटर प्रत्येक सोनीसेशन के बीच 2 मिनट के अंतराल के साथ 100% आयाम पर 4 x 30 सेकंड के लिए। वैकल्पिक रूप से, माइक्रो-टिप के साथ एक जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजर जैसे, UP200Ht S26d2 (3 x 30 सेकंड, 2 मिनट अल्ट्रासोनिक चक्र, 80% आयाम के बीच ठहराव) के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है।
• आगे शुद्धिकरण चरणों के लिए, नमूनों को बर्फ पर रखा जाना चाहिए या वैकल्पिक रूप से आगे की प्रक्रिया तक -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाना चाहिए।

पूर्वतक तापमान नियंत्रण के तहत अल्ट्रासोनिक लाइसिस

जैविक नमूनों को संभालते समय सटीक और विश्वसनीय तापमान नियंत्रण महत्वपूर्ण है। उच्च तापमान नमूनों में थर्मल-प्रेरित प्रोटीन क्षरण शुरू करते हैं।
सभी यांत्रिक नमूना तैयारी तकनीकों के रूप में, सोनीशन गर्मी पैदा करता है। हालांकि, VialTweeter का उपयोग करते समय नमूनों के तापमान को अच्छी तरह से नियंत्रित किया जा सकता है। हम आपको विश्लेषण के लिए VialTweeter और VialPress के साथ तैयार करते हुए अपने नमूनों के तापमान की निगरानी और नियंत्रण के लिए विभिन्न विकल्प प्रस्तुत करते हैं।

1. नमूना तापमान की निगरानी: अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर UP200St, जो VialTweeter ड्राइव, एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और एक खामियों को दूर करने योग्य तापमान सेंसर से सुसज्जित है । UP200St में तापमान सेंसर प्लग और नमूना ट्यूबों में से एक में तापमान सेंसर की नोक डालें। डिजिटल रंगीन टच-डिस्प्ले के माध्यम से, आप अपने नमूने के लिए एक विशिष्ट तापमान सीमा UP200St के मेनू में सेट कर सकते हैं। अधिकतम तापमान पहुंचने और तब तक रुकने पर अल्ट्रासोनिकेटर स्वचालित रूप से बंद हो जाएगा जब तक कि नमूना तापमान ∆ सेट तापमान के कम मूल्य तक नहीं नीचे हो जाता है। इसके बाद सोनिकेशन अपने आप फिर से शुरू हो जाता है। यह स्मार्ट फीचर हीट-प्रेरित दुर्गति को रोकता है।
2. VialTweeter ब्लॉक पूर्व ठंडा किया जा सकता है। वियलट्वीटर ब्लॉक (केवल ट्रांसड्यूसर के बिना सोनोट्रोड!) फ्रिज या फ्रीजर में टाइटेनियम ब्लॉक को प्री-कूल करने के लिए लें, नमूने में तापमान वृद्धि को स्थगित करने में मदद करता है। यदि संभव हो, तो नमूना खुद को प्री-कूल भी किया जा सकता है।
3. सोनीशन के दौरान ठंडा करने के लिए सूखी बर्फ का प्रयोग करें। सूखी बर्फ से भरी उथली ट्रे का इस्तेमाल करें और शीशी पर बर्फ पर रखें ताकि गर्मी तेजी से नष्ट हो सके।

दुनिया भर में ग्राहक जैविक, जैव रासायनिक, चिकित्सा और नैदानिक प्रयोगशालाओं में अपने दैनिक नमूना तैयारी के काम के लिए VialTweeter और VialPress का उपयोग करते हैं। UP200St प्रोसेसर के बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और तापमान नियंत्रण, तापमान मज़बूती से नियंत्रित है और गर्मी प्रेरित नमूना गिरावट से बचा है । VialTweeter और VialPress के साथ अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी अत्यधिक विश्वसनीय और प्रजनन योग्य परिणाम प्रदान करता है!

अपने Lysis आवेदन के लिए इष्टतम अल्ट्रासोनिक बाधित का पता लगाएं

Hielscher Ultrasonics प्रयोगशालाओं, बेंच-टॉप और औद्योगिक पैमाने पर प्रणालियों के लिए उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक सेल बाधित और समरूपता के लंबे समय से अनुभवी निर्माता है। आपका बैक्टीरियल सेल संस्कृति का आकार, आपका शोध या उत्पादन लक्ष्य और प्रति घंटे या दिन प्रक्रिया करने के लिए सेल की मात्रा आपके आवेदन के लिए सही अल्ट्रासोनिक सेल बाधित खोजने के लिए आवश्यक कारक हैं।
Hielscher Ultrasonics बहु नमूनों के एक साथ सोनीफिकेशन के लिए विभिन्न समाधान प्रदान करता है (VialTweeter के साथ 10 शीशियों तक) और बड़े पैमाने पर नमूने (यानी, UIP400MTP के साथ माइक्रोटिटर प्लेटें/एलिसा प्लेटें), साथ ही क्लासिक जांच प्रकार प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिकेटर ५० से ४०० वाट के लिए विभिन्न शक्ति के स्तर के साथ पूरी तरह से औद्योगिक अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर के साथ वाणिज्यिक सेल व्यवधान और बड़े उत्पादन में प्रोटीन निष्कर्षण के लिए 16,000वाट प्रति इकाई तक । सभी Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर पूर्ण भार के तहत 24/7/365 आपरेशन के लिए बनाया गया है । मजबूती और विश्वसनीयता हमारे अल्ट्रासोनिक उपकरणों की मुख्य विशेषताएं हैं।
सभी डिजिटल अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजर स्मार्ट सॉफ्टवेयर, रंगीन टच डिस्प्ले और ऑटोमैटिक डेटा प्रोटोकॉललिंग से लैस हैं, जो अल्ट्रासोनिक डिवाइस को लैब और उत्पादन सुविधाओं में एक सुविधाजनक काम उपकरण बनाते हैं ।
आइए जानते हैं, किस तरह की कोशिकाएं, किस मात्रा में, किस आवृत्ति के साथ और किस लक्ष्य के साथ आपको अपने जैविक नमूनों को संसाधित करना है। हम आपको अपनी प्रक्रिया आवश्यकताओं के लिए सबसे उपयुक्त अल्ट्रासोनिक सेल बाधित करने की सलाह देंगे।

नीचे दी गई तालिका आपको वाणिज्यिक अनुप्रयोगों के लिए औद्योगिक अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर के लिए कॉम्पैक्ट हैंड-हेल्ड होमोजेनाइजर्स और मल्टीसैंपल अल्ट्रासोनिकेटर से हमारे अल्ट्रासोनिक सिस्टम की अनुमानित प्रसंस्करण क्षमता का संकेत देती है: