सार्स-सीओवी-2 कोरोनावायरस इनएक्टिवस के लिए प्रोटोकॉल सोनीशन के साथ

हिलेशर VialTweeter एक अद्वितीय अल्ट्रासोनिक मल्टी-सैंपल तैयारी इकाई है, जिसका उपयोग कोरोनावायरस सार्स-सीओवी-2 को निष्क्रिय करने के लिए किया जाता है। VialTweeter एक साथ 10 नमूना शीशियों को तैयार करने की अनुमति देता है और इस तरह बड़े पैमाने पर नमूना प्रसंस्करण के लिए आदर्श इकाई है।

VialTweeter के साथ सार्स-CoV-2 कोरोनावायरस की निष्क्रियता

फिक्स्ड को हटाने के बाद, एकालेयर्स को 1mL MEM/5% FBS और sonicated (3 × 10 सेकंड पर, 10 सेकंड 100% बिजली और आयाम पर बंद) में कोशिकाओं को स्क्रैप करने से पहले फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) के साथ तीन बार धोया गया था Hielscher अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर का उपयोग कर VialTweeter के साथ UP200St संलग्नक. सुपरनेटैंट्स को 10 मिनट के लिए ३००० × जी पर अपकेंद्री द्वारा स्पष्ट किया गया था । 

नीचे वेल्च एट अल (२०२०) द्वारा सार्स-CoV-2 कोरोनावायरस निष्क्रियता के लिए पूरा प्रोटोकॉल यहां पढ़ें:

कोशिकाएं और वायरस

वेरो E6 कोशिकाएं (वेरो C1008; एटीसीसी सीआरएल-1586) संशोधित ईगल के न्यूनतम आवश्यक माध्यम (एमईएम) में 10% (v/v) भ्रूण बछड़ा सीरम (एफसीएस) के साथ पूरक किया गया था। वायरस का इस्तेमाल सार्स-CoV-2 तनाव hCOV-19/England/2/2020, 29/01/2020 को ब्रिटेन में पहले रोगी क्लस्टर से पीएचई द्वारा अलग किया गया था । इस वायरस 1 मार्ग पर प्राप्त किया गया था और 2 या 3 मार्ग पर निष्क्रियता अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया ।
सार्स-सीओवी-2 निष्क्रियता के साथ-साथ रिएजेंट साइटोटॉक्सिकिटी को हटाने के लिए उपयोग किए जाने वाले अभिकर्षकों और रसायनों के लिए कृपया वेल्च एट अल (2020) की वैज्ञानिक रिपोर्ट देखें।

डिटर्जेंट द्वारा वायरस निष्क्रियता – सार्स-CoV-2 कोरोनावायरस निष्क्रियता प्रोटोकॉल वेल्च एट अल द्वारा 2020

सार्स-CoV-2 निष्क्रियता

वाणिज्यिक उत्पादों के लिए, वायरस की तैयारी (ऊतक संस्कृति तरल पदार्थ, 1 से 10 × लेकर टिटर⁶ 1 × 10 तक⁸ PFU/ml) सांद्रता पर अभिकर्मकों के साथ और उपयोग के लिए निर्माताओं के निर्देशों में अनुशंसित संपर्क समय के लिए, जहां उपलब्ध है, या सांद्रता और विशेष रूप से परीक्षण प्रयोगशालाओं द्वारा अनुरोध किए गए समय के लिए ट्रिप्लिकेट में इलाज किया गया था । जहां निर्माता द्वारा सांद्रता की एक श्रृंखला दी गई थी, नमूना करने के लिए उत्पाद का सबसे कम अनुपात परीक्षण किया गया था (यानी परीक्षण उत्पाद की सबसे कम अनुशंसित एकाग्रता)। नमूना परिवहन ट्यूब अभिकर्मकों को ऊतक संस्कृति तरल पदार्थ की एक मात्रा के अनुपात का उपयोग करके दस मात्रा में अभिकर्मित करने का परीक्षण किया गया था, जब तक कि निर्माता द्वारा पुनर्प्रेत के लिए नमूना तरल पदार्थ का मात्रा अनुपात निर्दिष्ट नहीं किया गया था। डिटर्जेंट, फिक्सेटिव्स और सॉल्वैंट्स को इंगित समय के लिए इंगित सांद्रता पर परीक्षण किया गया था। सभी निष्क्रियता कदम परिवेश कमरे के तापमान (18 - 25 डिग्री सेल्सियस) पर किए गए थे। वैकल्पिक नमूना प्रकारों के परीक्षण के लिए, वायरस को 1:9 के अनुपात में संकेतित नमूना मैट्रिक्स में नुकीला किया गया था, फिर ऊपर के रूप में परीक्षण अभिकर्मकों के साथ इलाज किया गया था। सभी प्रयोगों में परीक्षण रिएजेंट के स्थान पर पीबीएस के समकक्ष मात्रा के साथ ट्रिपलीकेट कंट्रोल मॉक-ट्रीट किए गए नमूने शामिल थे । आवश्यक संपर्क समय के तुरंत बाद, उचित रूप से चयनित निस्पंदन मैट्रिक्स का उपयोग करके 1mL का इलाज नमूने को संसाधित किया गया था। निष्क्रियता परीक्षण के लिए रिएजेंट हटाने पियर्स 4mL डिटर्जेंट रिमूवल स्पिन कॉलम (थर्मो फिशर) का उपयोग कर एक बड़ा स्पिन कॉलम प्रारूप में किया गया था, या खाली पियर्स 10mL क्षमता अपकेंद्रित्र कॉलम (थर्मो फिशर) SM2 जैव मोती के साथ भरने के द्वारा, Sephacryl S-400HR या Sephadex LH-20 4mL पैक मोती/resin देने के लिए । एमिकन फिल्टर का उपयोग कर शुद्धिकरण के लिए, 2 × 500μl नमूनों को पहले वर्णित विधि द्वारा दो अपकेंद्रित्र फिल्टर का उपयोग करके शुद्ध किया गया था, फिर एक साथ जमा किया गया था। ग्लूटारल्डिहाइड हटाने के साथ फॉर्मलडिहाइड और फॉर्मलडिहाइड के लिए, एक फ़िल्टर का उपयोग 1× 500μl नमूना मात्रा के साथ किया गया था, 500μl PBS में प्रसंस्करण के बाद फिर से निलंबित किया गया था, और 400ul MEM/5% एफबीएस में जोड़ा गया था। संक्रमित की निष्क्रियता के लिए मोनोलेयर्स, 12.5 सेमी² वेरो E6 कोशिकाओं के फ्लास्क (2.5 × 10⁶ कोशिकाओं/2.5mL MEM/5% FBS में फ्लास्क) MOI ०.००१ पर संक्रमित थे और 37 डिग्री सेल्सियस/5% सीओ पर इनक्यूबेटेड₂ 24 घंटे के लिए। सुपरनैंट को हटा दिया गया था, और कोशिकाओं को 15 या 60 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर फॉर्मलडिहाइड, या फॉर्मलडिहाइड और ग्लूटारल्डिहाइड के 5mL का उपयोग करके तय किया गया था। फिक्सेटिव को हटा दिया गया था, और मोनोलेयर ने 1mL MEM/5% FBS और सोनिकेटेड (3 × 10 सेकंड पर, 10 सेकंड 100% बिजली और आयाम) में VialTweeter लगाव (Hielscher अल्ट्रासाउंड प्रौद्योगिकी) के साथ एक UP200St का उपयोग करके कोशिकाओं को स्क्रैप करने से पहले पीबीएस के साथ तीन बार धोया। सुपरनेटैंट्स को 10 मिनट के लिए ३००० × जी पर अपकेंद्री द्वारा स्पष्ट किया गया था ।

वेल्च एट अल 2020 द्वारा प्रोटोकॉल के अनुसार अल्ट्रासोनिक VialTweeter के साथ सार्स-CoV-2 कोरोनावायरस निष्क्रियता के लिए इस्तेमाल किया अभिवात का विवरण

Hielscher VialTweeter के उपयोग सहित पूर्ण प्रोटोकॉल यहां पाया जा सकता है:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

परिष्कृत अल्ट्रासोनिक डिमेम्ब्राटर और सेल बाधित

बहु-नमूना अल्ट्रासोनिकेटर VialTweeter जैविक, जैव रासायनिक और नैदानिक प्रयोगशालाओं में नमूना तैयारी के लिए कई अल्ट्रासोनिक समाधानों में से एक है। Hielscher Ultrasonics आपके आवेदन के लिए आदर्श अल्ट्रासोनिक डिमेब्रेटर प्रदान करता है, उदाहरण के लिए सेल लाइसिस, सेल एक्सट्रैक्शन, टिश्यू होमोजेनाइजेशन, लाइसेट घुलनशीलता, भंग, नमूना डगैसिंग आदि।
आइए जानते हैं कि यदि आप प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष रूप से सोनिकेशन पसंद करते हैं और अल्ट्रासोनिक नमूना उपचार का लक्ष्य क्या है, तो आपको प्रति घंटे और दिन कितने नमूनों की प्रक्रिया करनी होती है। हम आपको अपने दैनिक कार्य दिनचर्या के लिए सबसे उपयुक्त अल्ट्रासोनिक इकाई की सलाह देंगे!
Hielscher अल्ट्रासोनिक्स ' डिजिटल अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर स्मार्ट सॉफ्टवेयर, स्वचालित डेटा रिकॉर्डिंग, तापमान नियंत्रण के लिए आसान पूर्व सेटिंग विकल्प, sonication अवधि, चक्र/पल्स मोड के साथ ही नमूना रोशनी और ब्राउज़र रिमोट कंट्रोल से सुसज्जित हैं । हम अपने अल्ट्रासोनिक उपकरणों को यथासंभव स्मार्ट बनाने का प्रयास करते हैं ताकि आपका शोध और कार्य दिनचर्या यथासंभव सुविधाजनक और सफल हो सके।
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