एलिसा परख के लिए अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी

एलिसा जैसे परखों का व्यापक रूप से इन-विट्रो निदान, रोग से संबंधित प्रोटीन डिटेक्शन और गुणवत्ता नियंत्रण (जैसे खाद्य एलर्जी की निगरानी) के लिए उपयोग किया जाता है। अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी कोशिका को lyse और इंट्रासेलुलर प्रोटीन, डीएनए, आरएनए और ऑर्गेनेल्स को अलग करने के लिए एक तेजी से, विश्वसनीय और प्रजनन योग्य तकनीक है। Hielscher अल्ट्रासोनिक्स एकल नमूनों, कई शीशियों के साथ-साथ माइक्रोटिटर प्लेटों और 96-अच्छी प्लेटों की सुविधाजनक तैयारी के लिए विभिन्न अल्ट्रासोनिक समाधान प्रदान करता है।

एलिसा – एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसोर्बेंट परख

एलिसा एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसोर्बेंट परख के लिए खड़ा है और लिगांड-बाध्यकारी परख की श्रेणी की एक व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली जैव रासायनिक विश्लेषण तकनीक है। एलिसा में, विशेष बाध्यकारी गुणों के साथ एक स्थिर ठोस चरण पर एक तरल नमूना जोड़ा जाता है। आम तौर पर, स्थिर ठोस चरण को अच्छी तरह से प्लेट या एलिसा प्लेट पर कोटिंग के रूप में लागू किया जाता है। फिर, विभिन्न तरल अभिकर्मकों को क्रमिक रूप से जोड़ा जाता है, इनक्यूबेटेड किया जाता है, और धोया जाता है, ताकि अंत में एक ऑप्टिकल परिवर्तन (उदाहरण के लिए, एक एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया के उत्पाद द्वारा रंग विकास) अच्छी तरह से अंतिम तरल में होता है। ऑप्टिकल परिवर्तन एक तथाकथित मात्रात्मक द्वारा एनालिट की मात्रा को मापने की अनुमति देता है “पढ़ना "। मात्रात्मक पठन के लिए, संचारित प्रकाश की तीव्रता का पता लगाने और मापने के लिए एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, फ्लोरोमीटर या ल्यूमिनोमीटर का उपयोग किया जाता है। विश्लेषणात्मक प्रतिक्रियाओं के दौरान संकेत के प्रवर्धन से पता लगाने की संवेदनशीलता प्रभावित होती है। चूंकि एंजाइम प्रतिक्रियाओं की अच्छी तरह से जांच की जाती है और विश्वसनीय प्रवर्धन प्रक्रियाएं होती हैं, इसलिए एंजाइमों का उपयोग संकेत बनाने के लिए किया जाता है। एंजाइमों को सटीक मात्राकरण की अनुमति देने के लिए निश्चित अनुपात में डिटेक्शन रिएजेंट्स से जोड़ा जाता है, जो "एंजाइम से जुड़े" इम्यूनोसोर्बेंट परख का नाम भी बताता है।
के रूप में एलिसा परख माइक्रोटिटर प्लेटों में प्रदर्शन कर रहे है/९६-अच्छी तरह से प्लेटों, यह प्लेट आधारित परख तकनीक के रूप में जाना जाता है और नैदानिक में विट्रो नैदानिक, अनुसंधान, दवा के विकास आदि का पता लगाने और एंटीबॉडी, पेप्टाइड्स, प्रोटीन, और हार्मोन की मात्रा के लिए प्रयोग किया जाता है ।
एलिसा तकनीक अक्सर चिकित्सा, जैव प्रौद्योगिकी, संयंत्र विकृति में एक नैदानिक उपकरण के रूप में प्रयोग किया जाता है और यह भी कई उद्योगों में एक महत्वपूर्ण गुणवत्ता नियंत्रण माप है ।

एलिसा से पहले अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी

एलिसा परख करने से पहले, नमूनों को इस तरह के सेल लाइसिस तैयार करने और इंट्रासेलुलर प्रोटीन, डीएनए, आरएनए आदि को निकालने के कदमों की आवश्यकता होती है। अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और प्रोटीन अलगाव का लाभ इसकी उच्च दक्षता, विश्वसनीयता और प्रजनन क्षमता है। उच्च गुणवत्ता वाले निदान और अनुसंधान परिणाम प्राप्त करने के लिए ये सभी कारक महत्वपूर्ण हैं

प्री-एलिसा अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस के लिए प्रोटोकॉल

• सेल संस्कृतियों के लिए: अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस से पहले, एक माइक्रोसेंट्रफ्यूज में 270 x ग्राम पर 5 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र कोशिकाएं। रिपा बफर के 30 - 100 माइक्रोल में आकांक्षा और पुनर्स्ल व्यय कोशिकाओं द्वारा सुपरनैंट निकालें। फिर, 30 मिनट के लिए बर्फ पर सेल गोली इनक्यूबेट।
• अब, सेल नमूना अल्ट्रासोनिक लाइसिस के लिए तैयार है:
  जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर का उपयोग करें (उदाहरण के लिए UP200Ht S26d2 जांच के साथ) या एक अल्ट्रासोनिक मल्टी-सैंपल डिवाइस (उदाहरण के लिए VialTweeter 10 शीशियों तक के एक साथ सोनीट के लिए या माइक्रोटिटर प्लेटों के लिए UIP400MPT/
  एक ही नमूने की जांच-प्रकार के सोनीशन के लिए, कोशिकाओं को 1.5 एमएल माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में रखें।
• अल्ट्रासोनिकेटर के डिजिटल मेनू में अपनी अल्ट्रासोनिक अवधि, कुल ऊर्जा इनपुट, चक्र मोड और/या तापमान सीमा को पूर्व-सेट करें । यह अत्यधिक विश्वसनीय सोनीफिकेशन और दोहराव सुनिश्चित करता है।
• सोनोट्रॉड को इनसेट करें और अल्ट्रासोनिक डिवाइस को स्विच ऑन करें। धीरे-धीरे नमूने के माध्यम से अल्ट्रासोनिक जांच के माइक्रो-टिप को समान रूप से नमूने को सोनिकेट करने के लिए स्थानांतरित करें।
  अधिकांश कोशिकाओं के लिए, अल्ट्रासोनिक लाइसिस 10 सेकंड के 2 -4 चक्रों के बाद पूरा किया जाएगा।
• सोनीफिकेशन के बाद सैंपल से सोनोट्रॉड निकालें। नमूनों को 5 मिनट के लिए बर्फ पर इनक्यूबेटेड किया जाना चाहिए । फिर, 20 मिनट के लिए 10,000 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र मलबे को गोली मारने के लिए। सुपरनेटेंट को एक नई माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। एनालाइट्स को लेबल करें और -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
• अल्ट्रासोनिक सोनोट्रॉड को शराब से भरे बीकर में शराब या सोनिकेट के साथ ठीक से पोंछकर साफ किया जा सकता है, उदाहरण के लिए 70% इथेनॉल। टाइटेनियम से बने सभी अल्ट्रासोनिक जांच ऑटोक्लेवेबल हैं।

ऊतक होमोजेनेट के लिए:

• अतिरिक्त हीमोलिसिस रक्त को अच्छी तरह से हटाने के लिए बर्फ-ठंडे पीबीएस (0.01 M, पीएच = 7.4) के साथ ऊतक कुल्ला।
• टिश्यू (किडनी, हार्ट, फेफड़े, तिल्ली आदि) को तौलें और उसे छोटे-छोटे टुकड़ों में मैकरेट करें, जो पीबीएस में समरूप होते हैं। आवश्यक पीबीएस की मात्रा ऊतक के वजन से संबंधित है। अंगूठे के नियम के रूप में, ऊतक के 1g लगभग 9mL PBS की आवश्यकता है। पीबीएस में कुछ प्रोटीज अवरोधक जोड़ने की सिफारिश की जाती है। (रिपा या हाइपोटोनिक लाइसिस बफर जिसमें प्रोटीज और फॉस्फेटे अवरोधक कॉकटेल होता है, वैकल्पिक रूप से उपयोग किया जा सकता है।
• ऊतक के आकार के आधार पर, एक छोटा भंवर उपचार (लगभग 1-2 मिनट 15 सेकंड दालों में) ऊतक के पूर्व इलाज के लिए उपयोगी हो सकता है।
• अपने अल्ट्रासोनिकेटर के लिए एक माइक्रो-टिप, उदाहरण के लिए S26d2 माउंट करें। एक आइस बाथ में ऊतक के साथ नमूना ट्यूब रखें।
• अपने अल्ट्रासोनिकेटर के साथ नमूना को सोनिकेट करें, उदाहरण के लिए UP200St (80% आयाम) पल्स मोड में 1 मिनट के लिए (15सेकंड ऑन, 15सेकंड ठहराव)। इसका नमूना आइस बाथ में रखें।
• समरूपता तो विशिष्ट पूल (साइटोसोलिक, परमाणु, माइटोकॉन्ड्रियल या lysosomal) प्राप्त करने के लिए अपकेंद्रित्र कर रहे है ताकि विश्लेषण के लिए प्रोटीन को समृद्ध करने के लिए । 5000×g पर 5 मिनट के लिए नमूना अपकेंद्री करके, सुपरनेट प्राप्त किया जाता है।

सोनीशन के दौरान विश्वसनीय तापमान नियंत्रण

तापमान एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया को प्रभावित करने वाला कारक है जो जैविक नमूनों के उपचार के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, उदाहरण के लिए प्रोटीन के थर्मल क्षरण को रोकने के लिए। सभी यांत्रिक नमूना तैयारी तकनीकों के रूप में, सोनीशन गर्मी पैदा करता है। हालांकि, हिल्स्चर अल्ट्रासोनिक्स उपकरणों का उपयोग करते समय नमूनों के तापमान को अच्छी तरह से नियंत्रित किया जा सकता है। हम आपको जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर या VialTweeter पूर्व विश्लेषणात्मक के साथ तैयार करते हुए अपने नमूनों के तापमान की निगरानी और नियंत्रण के लिए विभिन्न विकल्प प्रस्तुत करते हैं।

1. नमूना तापमान की निगरानी: सभी Hielscher डिजिटल अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और एक प्लग करने योग्य तापमान सेंसर से लैस हैं । तापमान सेंसर को अल्ट्रासोनिक डिवाइस में प्लग करें (उदाहरण के लिए, UP200Ht, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) और नमूना ट्यूबों में से एक में तापमान सेंसर की नोक डालें। डिजिटल रंगीन टच-डिस्प्ले के माध्यम से, आप अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर के मेनू में अपने नमूने के लिए एक विशिष्ट तापमान सीमा सेट कर सकते हैं। अधिकतम तापमान पहुंचने और तब तक रुकने पर अल्ट्रासोनिकेटर स्वचालित रूप से बंद हो जाएगा जब तक कि नमूना तापमान ∆ सेट तापमान के कम मूल्य तक नहीं नीचे हो जाता है। इसके बाद सोनिकेशन अपने आप फिर से शुरू हो जाता है। यह स्मार्ट फीचर हीट-प्रेरित दुर्गति को रोकता है।
2. अल्ट्रासोनिक मल्टी-सैंपल यूनिट VialTweeter के बारे में, टाइटेनियम ब्लॉक, जो नमूना ट्यूबों को पकड़ता है, पूर्व ठंडा किया जा सकता है। वियलट्वीटर ब्लॉक (केवल ट्रांसड्यूसर के बिना सोनोट्रोड!) फ्रिज या फ्रीजर में टाइटेनियम ब्लॉक को प्री-कूल करने के लिए लें, नमूने में तापमान वृद्धि को स्थगित करने में मदद करता है। यदि संभव हो, तो नमूना खुद को प्री-कूल भी किया जा सकता है।
3. सोनीशन के दौरान ठंडा करने के लिए आइस बाथ या सूखी बर्फ का इस्तेमाल करें। एक आइस बाथ में सोनीशन के दौरान अपने नमूना ट्यूब (ओं) रखें। विएलट्वीटर के लिए सूखी बर्फ से भरी उथली ट्रे का इस्तेमाल करें और छठी को सूखी बर्फ पर रखें ताकि गर्मी तेजी से नष्ट हो सके।

दुनिया भर में ग्राहक जैविक, जैव रासायनिक, चिकित्सा और नैदानिक प्रयोगशालाओं में अपने दैनिक नमूना तैयारी कार्य के लिए Hielscher जांच-अल्ट्रासोनिकेटर के साथ-साथ बहु-नमूना सोनीट्वीटर और UIP400MTP का उपयोग करते हैं। बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और Hielscher प्रोसेसर के तापमान नियंत्रण, तापमान मज़बूती से नियंत्रित है और गर्मी प्रेरित नमूना गिरावट से बचा । Hielscher अल्ट्रासोनिक समाधान के साथ अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी अत्यधिक विश्वसनीय और प्रजनन योग्य परिणाम बचाता है!