एलिसा परख के लिए अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी

एलिसा जैसे परखों का व्यापक रूप से इन-विट्रो निदान, रोग से संबंधित प्रोटीन डिटेक्शन और गुणवत्ता नियंत्रण (जैसे खाद्य एलर्जी की निगरानी) के लिए उपयोग किया जाता है। अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी कोशिका को lyse और इंट्रासेलुलर प्रोटीन, डीएनए, आरएनए और ऑर्गेनेल्स को अलग करने के लिए एक तेजी से, विश्वसनीय और प्रजनन योग्य तकनीक है। Hielscher अल्ट्रासोनिक्स एकल नमूनों, कई शीशियों के साथ-साथ माइक्रोटिटर प्लेटों और 96-अच्छी प्लेटों की सुविधाजनक तैयारी के लिए विभिन्न अल्ट्रासोनिक समाधान प्रदान करता है।

एलिसा – एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसोर्बेंट परख

एलिसा एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसोर्बेंट परख के लिए खड़ा है और लिगांड-बाध्यकारी परख की श्रेणी की एक व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली जैव रासायनिक विश्लेषण तकनीक है। एलिसा में, विशेष बाध्यकारी गुणों के साथ एक स्थिर ठोस चरण पर एक तरल नमूना जोड़ा जाता है। आम तौर पर, स्थिर ठोस चरण को अच्छी तरह से प्लेट या एलिसा प्लेट पर कोटिंग के रूप में लागू किया जाता है। फिर, विभिन्न तरल अभिकर्मकों को क्रमिक रूप से जोड़ा जाता है, इनक्यूबेटेड किया जाता है, और धोया जाता है, ताकि अंत में एक ऑप्टिकल परिवर्तन (उदाहरण के लिए, एक एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया के उत्पाद द्वारा रंग विकास) अच्छी तरह से अंतिम तरल में होता है। ऑप्टिकल परिवर्तन एक तथाकथित मात्रात्मक द्वारा एनालिट की मात्रा को मापने की अनुमति देता है “पढ़ना "। मात्रात्मक पठन के लिए, संचारित प्रकाश की तीव्रता का पता लगाने और मापने के लिए एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, फ्लोरोमीटर या ल्यूमिनोमीटर का उपयोग किया जाता है। विश्लेषणात्मक प्रतिक्रियाओं के दौरान संकेत के प्रवर्धन से पता लगाने की संवेदनशीलता प्रभावित होती है। चूंकि एंजाइम प्रतिक्रियाओं की अच्छी तरह से जांच की जाती है और विश्वसनीय प्रवर्धन प्रक्रियाएं होती हैं, इसलिए एंजाइमों का उपयोग संकेत बनाने के लिए किया जाता है। एंजाइमों को सटीक मात्राकरण की अनुमति देने के लिए निश्चित अनुपात में डिटेक्शन रिएजेंट्स से जोड़ा जाता है, जो "एंजाइम से जुड़े" इम्यूनोसोर्बेंट परख का नाम भी बताता है।
के रूप में एलिसा परख माइक्रोटिटर प्लेटों में प्रदर्शन कर रहे है/९६-अच्छी तरह से प्लेटों, यह प्लेट आधारित परख तकनीक के रूप में जाना जाता है और नैदानिक में विट्रो नैदानिक, अनुसंधान, दवा के विकास आदि का पता लगाने और एंटीबॉडी, पेप्टाइड्स, प्रोटीन, और हार्मोन की मात्रा के लिए प्रयोग किया जाता है ।
एलिसा तकनीक अक्सर चिकित्सा, जैव प्रौद्योगिकी, संयंत्र विकृति में एक नैदानिक उपकरण के रूप में प्रयोग किया जाता है और यह भी कई उद्योगों में एक महत्वपूर्ण गुणवत्ता नियंत्रण माप है ।

पूरा VialTweeter स्थापना: अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर पर VialTweeter sonotrode UP200St

अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी इकाई VialTweeter एलिसा परख से पहले सेल लाइसिस और प्रोटीन एक्सट्रैक्टिंग के लिए प्रयोग किया जाता है

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एलिसा से पहले अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी

एलिसा परख करने से पहले, नमूनों को इस तरह के सेल लाइसिस तैयार करने और इंट्रासेलुलर प्रोटीन, डीएनए, आरएनए आदि को निकालने के कदमों की आवश्यकता होती है। अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और प्रोटीन अलगाव का लाभ इसकी उच्च दक्षता, विश्वसनीयता और प्रजनन क्षमता है। उच्च गुणवत्ता वाले निदान और अनुसंधान परिणाम प्राप्त करने के लिए ये सभी कारक महत्वपूर्ण हैं

एलिसा से पहले अल्ट्रासोनिक लाइसिस के फायदे

  • सजातीय नमूना उपचार
  • पूरी तरह से लाइसिस
  • पूर्ण प्रोटीन निष्कर्षण (जैसे एंटीबॉडी, डीएनए)
  • सेल प्रकार के लिए इष्टतम अनुकूलन
  • किसी भी नमूना आकार के लिए
  • प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य
  • तापमान नियंत्रित
  • एसडी कार्ड पर स्वचालित डेटा प्रोटोकॉलिंग

प्री-एलिसा अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस के लिए प्रोटोकॉल

lysis के लिए जांच-प्रकार UP200St insonifier

  • सेल संस्कृतियों के लिए: अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस से पहले, एक माइक्रोसेंट्रफ्यूज में 270 x ग्राम पर 5 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र कोशिकाएं। रिपा बफर के 30 - 100 माइक्रोल में आकांक्षा और पुनर्स्ल व्यय कोशिकाओं द्वारा सुपरनैंट निकालें। फिर, 30 मिनट के लिए बर्फ पर सेल गोली इनक्यूबेट।
  • अब, सेल नमूना अल्ट्रासोनिक लाइसिस के लिए तैयार है:
    जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर का उपयोग करें (उदाहरण के लिए UP200Ht S26d2 जांच के साथ) या एक अल्ट्रासोनिक मल्टी-सैंपल डिवाइस (उदाहरण के लिए VialTweeter 10 शीशियों तक के एक साथ सोनीट के लिए या माइक्रोटिटर प्लेटों के लिए UIP400MPT/
    एक ही नमूने की जांच-प्रकार के सोनीशन के लिए, कोशिकाओं को 1.5 एमएल माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में रखें।
  • अल्ट्रासोनिकेटर के डिजिटल मेनू में अपनी अल्ट्रासोनिक अवधि, कुल ऊर्जा इनपुट, चक्र मोड और/या तापमान सीमा को पूर्व-सेट करें । यह अत्यधिक विश्वसनीय सोनीफिकेशन और दोहराव सुनिश्चित करता है।
  • सोनोट्रॉड को इनसेट करें और अल्ट्रासोनिक डिवाइस को स्विच ऑन करें। धीरे-धीरे नमूने के माध्यम से अल्ट्रासोनिक जांच के माइक्रो-टिप को समान रूप से नमूने को सोनिकेट करने के लिए स्थानांतरित करें।
    अधिकांश कोशिकाओं के लिए, अल्ट्रासोनिक लाइसिस 10 सेकंड के 2 -4 चक्रों के बाद पूरा किया जाएगा।
  • सोनीफिकेशन के बाद सैंपल से सोनोट्रॉड निकालें। नमूनों को 5 मिनट के लिए बर्फ पर इनक्यूबेटेड किया जाना चाहिए । फिर, 20 मिनट के लिए 10,000 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र मलबे को गोली मारने के लिए। सुपरनेटेंट को एक नई माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें। एनालाइट्स को लेबल करें और -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  • अल्ट्रासोनिक सोनोट्रॉड को शराब से भरे बीकर में शराब या सोनिकेट के साथ ठीक से पोंछकर साफ किया जा सकता है, उदाहरण के लिए 70% इथेनॉल। टाइटेनियम से बने सभी अल्ट्रासोनिक जांच ऑटोक्लेवेबल हैं।

ऊतक होमोजेनेट के लिए:

  • अतिरिक्त हीमोलिसिस रक्त को अच्छी तरह से हटाने के लिए बर्फ-ठंडे पीबीएस (0.01 M, पीएच = 7.4) के साथ ऊतक कुल्ला।
  • टिश्यू (किडनी, हार्ट, फेफड़े, तिल्ली आदि) को तौलें और उसे छोटे-छोटे टुकड़ों में मैकरेट करें, जो पीबीएस में समरूप होते हैं। आवश्यक पीबीएस की मात्रा ऊतक के वजन से संबंधित है। अंगूठे के नियम के रूप में, ऊतक के 1g लगभग 9mL PBS की आवश्यकता है। पीबीएस में कुछ प्रोटीज अवरोधक जोड़ने की सिफारिश की जाती है। (रिपा या हाइपोटोनिक लाइसिस बफर जिसमें प्रोटीज और फॉस्फेटे अवरोधक कॉकटेल होता है, वैकल्पिक रूप से उपयोग किया जा सकता है।
  • ऊतक के आकार के आधार पर, एक छोटा भंवर उपचार (लगभग 1-2 मिनट 15 सेकंड दालों में) ऊतक के पूर्व इलाज के लिए उपयोगी हो सकता है।
  • अपने अल्ट्रासोनिकेटर के लिए एक माइक्रो-टिप, उदाहरण के लिए S26d2 माउंट करें। एक आइस बाथ में ऊतक के साथ नमूना ट्यूब रखें।
  • अपने अल्ट्रासोनिकेटर के साथ नमूना को सोनिकेट करें, उदाहरण के लिए UP200St (80% आयाम) पल्स मोड में 1 मिनट के लिए (15सेकंड ऑन, 15सेकंड ठहराव)। इसका नमूना आइस बाथ में रखें।
  • समरूपता तो विशिष्ट पूल (साइटोसोलिक, परमाणु, माइटोकॉन्ड्रियल या lysosomal) प्राप्त करने के लिए अपकेंद्रित्र कर रहे है ताकि विश्लेषण के लिए प्रोटीन को समृद्ध करने के लिए । 5000×g पर 5 मिनट के लिए नमूना अपकेंद्री करके, सुपरनेट प्राप्त किया जाता है।
सोनोट्रोड एमटीपी-24-8-96 में माइक्रोटिटर प्लेटों के कुओं के सोनिकेशन के लिए आठ अल्ट्रासोनिक जांच की गई है ।

सोनोट्रोड एमटीपी-24-8-96 में माइक्रोटिटर प्लेटों के कुओं के सोनिकेशन के लिए आठ अल्ट्रासोनिक जांच की गई है ।

सोनीशन के दौरान विश्वसनीय तापमान नियंत्रण

तापमान एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया को प्रभावित करने वाला कारक है जो जैविक नमूनों के उपचार के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, उदाहरण के लिए प्रोटीन के थर्मल क्षरण को रोकने के लिए। सभी यांत्रिक नमूना तैयारी तकनीकों के रूप में, सोनीशन गर्मी पैदा करता है। हालांकि, हिल्स्चर अल्ट्रासोनिक्स उपकरणों का उपयोग करते समय नमूनों के तापमान को अच्छी तरह से नियंत्रित किया जा सकता है। हम आपको जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर या VialTweeter पूर्व विश्लेषणात्मक के साथ तैयार करते हुए अपने नमूनों के तापमान की निगरानी और नियंत्रण के लिए विभिन्न विकल्प प्रस्तुत करते हैं।

  1. नमूना तापमान की निगरानी: सभी Hielscher डिजिटल अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर एक बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और एक प्लग करने योग्य तापमान सेंसर से लैस हैं । तापमान सेंसर को अल्ट्रासोनिक डिवाइस में प्लग करें (उदाहरण के लिए, UP200Ht, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) और नमूना ट्यूबों में से एक में तापमान सेंसर की नोक डालें। डिजिटल रंगीन टच-डिस्प्ले के माध्यम से, आप अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर के मेनू में अपने नमूने के लिए एक विशिष्ट तापमान सीमा सेट कर सकते हैं। अधिकतम तापमान पहुंचने और तब तक रुकने पर अल्ट्रासोनिकेटर स्वचालित रूप से बंद हो जाएगा जब तक कि नमूना तापमान ∆ सेट तापमान के कम मूल्य तक नहीं नीचे हो जाता है। इसके बाद सोनिकेशन अपने आप फिर से शुरू हो जाता है। यह स्मार्ट फीचर हीट-प्रेरित दुर्गति को रोकता है।
  2. अल्ट्रासोनिक मल्टी-सैंपल यूनिट VialTweeter के बारे में, टाइटेनियम ब्लॉक, जो नमूना ट्यूबों को पकड़ता है, पूर्व ठंडा किया जा सकता है। वियलट्वीटर ब्लॉक (केवल ट्रांसड्यूसर के बिना सोनोट्रोड!) फ्रिज या फ्रीजर में टाइटेनियम ब्लॉक को प्री-कूल करने के लिए लें, नमूने में तापमान वृद्धि को स्थगित करने में मदद करता है। यदि संभव हो, तो नमूना खुद को प्री-कूल भी किया जा सकता है।
  3. सोनीशन के दौरान ठंडा करने के लिए आइस बाथ या सूखी बर्फ का इस्तेमाल करें। एक आइस बाथ में सोनीशन के दौरान अपने नमूना ट्यूब (ओं) रखें। विएलट्वीटर के लिए सूखी बर्फ से भरी उथली ट्रे का इस्तेमाल करें और छठी को सूखी बर्फ पर रखें ताकि गर्मी तेजी से नष्ट हो सके।

दुनिया भर में ग्राहक जैविक, जैव रासायनिक, चिकित्सा और नैदानिक प्रयोगशालाओं में अपने दैनिक नमूना तैयारी कार्य के लिए Hielscher जांच-अल्ट्रासोनिकेटर के साथ-साथ बहु-नमूना सोनीट्वीटर और UIP400MTP का उपयोग करते हैं। बुद्धिमान सॉफ्टवेयर और Hielscher प्रोसेसर के तापमान नियंत्रण, तापमान मज़बूती से नियंत्रित है और गर्मी प्रेरित नमूना गिरावट से बचा । Hielscher अल्ट्रासोनिक समाधान के साथ अल्ट्रासोनिक नमूना तैयारी अत्यधिक विश्वसनीय और प्रजनन योग्य परिणाम बचाता है!

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कृपया अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर, अनुप्रयोगों और कीमत के बारे में अतिरिक्त जानकारी का अनुरोध करने के लिए नीचे दिए गए फॉर्म का उपयोग करें। हम आपके साथ आपकी प्रक्रिया पर चर्चा करने और आपकी आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए एक अल्ट्रासोनिक सिस्टम पेश करने के लिए खुश होंगे!









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Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics प्रयोगशाला, पायलट और औद्योगिक पैमाने पर अनुप्रयोगों, फैलाव, पायसीकरण और निष्कर्षण मिश्रण के लिए उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक समरूपता का निर्माण करता है ।

साहित्य/संदर्भ



जानने के योग्य तथ्य

एलिसा के प्रकार

एलिसा के कई प्रकार के होते हैं, जो उनके कार्य सिद्धांत से प्रतिष्ठित होते हैं। उन्हें प्रत्यक्ष एलिसा, अप्रत्यक्ष एलिसा, सैंडविच एलिसा, प्रतिस्पर्धी एलिसा और रिवर्स एलिसा के रूप में जाना जाता है। नीचे, हम आपको विभिन्न एलिसा प्रकारों और उनकी मुख्य विशेषताओं और मतभेदों पर एक सिंहावलोकन प्रस्तुत करते हैं।
एलिसा को गुणात्मक या मात्रात्मक प्रारूप में चलाया जा सकता है। गुणात्मक परिणाम एक सरल सकारात्मक या नकारात्मक परिणाम प्रदान करते हैं, जबकि मात्रात्मक एलिसा में नमूने का ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) एक मानक वक्र की तुलना में होता है, जो आमतौर पर लक्षित अणु के ज्ञात-एकाग्रता समाधान का धारावाहिक कमजोर होता है।

डायरेक्ट एलिसा

प्रत्यक्ष एलिसा एलिसा का सबसे सरल परख रूप है, जहां केवल एंजाइम लेबल वाली प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है और माध्यमिक एंटीबॉडी की आवश्यकता नहीं होती है। एंजाइम लेबल वाली प्राइमरी एंटीबॉडी सीधे टारगेट यानी एंटीजन से बांधती है। बफर एंटीजन समाधान को माइक्रोटिटर प्लेट (आमतौर पर 96-अच्छी प्लेटें, एलिसा-प्लेट्स) के प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है, जहां चार्ज इंटरैक्शन के माध्यम से प्लास्टिक की सतह का पालन करता है। जब प्राथमिक एंटीबॉडी से जुड़ा एंजाइम अपने सब्सट्रेट के साथ प्रतिक्रिया करता है, तो यह एक दृश्यमान संकेत पैदा करता है जिसे स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, फ्लोरोमीटर या ल्यूमिनोमीटर के माध्यम से मापा जा सकता है।

अप्रत्यक्ष एलिसा

अप्रत्यक्ष एलिसा परीक्षण के लिए, एक प्राथमिक एंटीबॉडी और एक माध्यमिक एंटीबॉडी दोनों की आवश्यकता होती है। हालांकि, प्रत्यक्ष एलिसा के विपरीत, प्राथमिक एंटीबॉडी नहीं है, लेकिन माध्यमिक एंटीबॉडी को एंजाइम के साथ लेबल किया गया है। एंटीजन को अच्छी तरह की प्लेट में स्थिर किया जाता है और प्राथमिक एंटीबॉडी से बंधा होता है। बाद में, एंजाइम लेबल माध्यमिक एंटीबॉडी प्राथमिक एंटीबॉडी के लिए बांधता है। अंत में, माध्यमिक एंटीबॉडी से जुड़ा एंजाइम एक दृश्य संकेत का उत्पादन करने के लिए अपने सब्सट्रेट के साथ प्रतिक्रिया करता है जिसका पता लगाया जा सकता है।

सैंडविच एलिसा

प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष एलिसा परीक्षणों में, एंटीजन को अच्छी तरह की प्लेट की सतह पर स्थिर और लेपित किया जाता है, सैंडविच एलिसा में एंटीबॉडी को एलिसा-प्लेट की प्लास्टिक की सतह पर स्थिर किया जाता है। सैंडविच एलिसा में स्थिर एंटीबॉडी को कैप्चर एंटीबॉडी के रूप में जाना जाता है। इसके अतिरिक्त कैप्चर एंटीबॉडी के लिए, सैंडविच एलिसा में भी तथाकथित डिटेक्शन एंटीबॉडी की आवश्यकता होती है। डिटेक्शन एंटीबॉडी में एक अवेलेबल प्राइमरी डिटेक्शन एंटीबॉडी और एंजाइम-लेबल सेकंडरी डिटेक्शन एंटीबॉडी शामिल है।
स्टेपवाइज, ब्याज का एंटीजन प्लेट में स्थिर एंटीबॉडी पर कब्जा करने के लिए बांधता है। फिर, प्राथमिक पहचान एंटीबॉडी एंटीजन को बांधता है। बाद में, माध्यमिक पहचान एंटीबॉडी प्राथमिक पहचान एंटीबॉडी के लिए बांधता है। अंतिम प्रतिक्रिया चरण में, एंजाइम एक दृश्य संकेत का उत्पादन करने के लिए अपने सब्सट्रेट के साथ प्रतिक्रिया करता है जिसे ऑप्टिकल रूप से पता लगाया जा सकता है।

प्रतिस्पर्धी एलिसा

प्रतिस्पर्धी एलिसा, जिसे अवरोध एलिसा के रूप में भी जाना जाता है, सबसे जटिल एलिसा प्रकार है क्योंकि इसमें अवरोधक एंटीजन का उपयोग शामिल है। तीन प्रारूपों में से प्रत्येक, प्रत्यक्ष, अप्रत्यक्ष, और सैंडविच एलिसा, प्रतिस्पर्धी एलिसा प्रारूप के लिए अनुकूलित किया जा सकता है । प्रतिस्पर्धी एलिसा में, अवरोधक एंटीजन और ब्याज के एंटीजन प्राथमिक एंटीबॉडी के लिए बाध्यकारी के लिए प्रतिस्पर्धा करते हैं।
प्रतिस्पर्धी एलिसा के लिए, अवेलेबल एंटीबॉडी को इसके एंटीजन यानी नमूने की उपस्थिति में इनक्यूबेटेड किया जाता है। इन बाउंड एंटीबॉडी/एंटीजन कॉम्प्लेक्स को फिर एंटीजन-लेपित कुएं में जोड़ा जाता है ।
प्लेट को धोया जाता है, ताकि अनबाउंड एंटीबॉडी को हटा दिया जाए। प्रतिस्पर्धी एलिसा का नाम इस तथ्य के कारण है कि नमूने में अधिक एंटीजन होता है, अधिक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनते हैं। इसका मतलब यह है कि कुएं में एंटीजन को बांधने के लिए कम अनबाउंड एंटीबॉडी उपलब्ध हैं और एंटीजन को उपलब्ध एंटीबॉडी के लिए प्रतिस्पर्धा करनी चाहिए। प्राथमिक एंटीबॉडी से मेल खाने वाला एक माध्यमिक एंटीबॉडी जोड़ा जाता है। यह दूसरा एंटीबॉडी एंजाइम से जुड़ा हुआ है। जब सब्सट्रेट को जोड़ा जाता है, तो शेष एंजाइम क्रोमोजेनिक या फ्लोरोसेंट सिग्नल उत्पन्न करते हैं।
इस बिंदु पर, सिग्नल के अंतिम संतृप्ति से बचने के लिए प्रतिक्रिया बंद कर दी जाती है।
कुछ प्रतिस्पर्धी एलिसा किट में एंजाइम से जुड़े एंटीबॉडी के बजाय एंजाइम से जुड़े एंटीजन शामिल हैं । लेबल एंटीजन नमूना एंटीजन (अवेलेबल) के साथ प्राथमिक एंटीबॉडी बाध्यकारी साइटों के लिए प्रतिस्पर्धा करता है। नमूने में कम एंटीजन, अधिक लेबल एंटीजन अच्छी तरह से बनाए रखा जाता है और संकेत मजबूत होता है।

रिवर्स एलिसा

रिवर्स एलिसा अच्छी तरह से प्लेटों का उपयोग नहीं करता है, लेकिन परीक्षण तरल पदार्थ में निलंबित एंटीजन छोड़ देता है । रिवर्स एलिसा परीक्षण एंटीजन के माध्यम से बंधे एंटीबॉडी की मात्रा को मापता है। यह विशेष रूप से पश्चिम नील नदी वायरस लिफाफा प्रोटीन का पता लगाने और जांच करने के लिए विकसित किया गया था और यह कैसे वायरस विशिष्ट एंटीबॉडी खोजने में सक्षम है ।

एंजाइमेटिक मार्कर एलिसा के लिए इस्तेमाल किया

नीचे दी गई सूची एलिसा परख में उपयोग किए जाने वाले सबसे आम एंजाइमेटिक मार्कर देती है, जो परख के परिणामों को पूरा होने पर मापा जा सकता है।

  • ओपीडी (ओ-फेनिलेनिडाइमाइन डाइहाइड्रोक्लोराइड) एचआरपी (सहिजन पेरोक्सिडेस) का पता लगाने के लिए एम्बर बदल जाता है, जिसका उपयोग अक्सर एक संयुग्मित प्रोटीन के रूप में किया जाता है।
  • टीएमबी (3,3′,5,5′- एचआरपी का पता लगाते समय टेट्रामेथाइलबेंजीडीन नीला हो जाता है और सल्फ्यूरिक या फॉस्फोरिक एसिड के अलावा पीले हो जाता है।
  • एबीटीएस (2,2′- एचआरपी का पता लगाते समय एजिनोबिस [3-एथिलबेंजोथियाजोलिन-6-सल्फोनिक एसिड]-डायमोनियम नमक) हरा हो जाता है।
  • क्षारीय फॉस्फेट का पता लगाते समय पीएनपीपी (पी-नाइट्रोफेनिल फॉस्फेट, डिसोडियम सॉल्ट) पीला हो जाता है।