लाइसिस बफर को अल्ट्रासोनिक ऊतक होमोजेनाइज़र का उपयोग करके कुशलतापूर्वक और त्वरित तैयार किया जा सकता है। चूंकि अल्ट्रासोनिकेटर मिश्रण, घुलने और फैलाने के लिए एक सपना उपकरण हैं, इसलिए वे लाइसिस बफर की विश्वसनीय और उपयोगकर्ता के अनुकूल तैयारी की अनुमति देते हैं।

लाइसिस बफर की अल्ट्रासोनिक तैयारी

अल्ट्रासोनिक ऊतक होमोजेनाइज़र सेल व्यवधान, लाइसिस और निष्कर्षण के लिए एक सामान्य उपकरण हैं, इसलिए अधिकांश प्रयोगशालाओं में उपलब्ध हैं। जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर के लिए एक द्वितीयक अनुप्रयोग लाइसिस बफर की तैयारी है।

लाइसिस बफर एक समाधान है जिसका उपयोग ओपन (लाइस) कोशिकाओं को तोड़ने और डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए उनकी सामग्री को छोड़ने के लिए किया जाता है। लाइसिस बफर की विशिष्ट संरचना कोशिकाओं के प्रकार और डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोग के आधार पर भिन्न हो सकती है। हालांकि, एक विशिष्ट लाइसिस बफर में डिटर्जेंट, लवण और प्रोटीज इनहिबिटर जैसे घटक होते हैं। बफरिंग लवण (जैसे ट्रिस-एचसीएल) और आयनिक लवण (जैसे एनएसीएल) का उपयोग आमतौर पर लाइसेट के पीएच और ऑस्मोलरिटी को विनियमित करने के लिए किया जाता है।
लाइसिस बफर बनाने के लिए, घटकों को उचित सांद्रता और पीएच में एक साथ मिलाया जाता है। मिश्रण को आमतौर पर तब तक हिलाया या हिलाया जाता है जब तक कि घटक भंग नहीं हो जाते हैं और समाधान सजातीय होता है।
अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजेशन एक विधि है जिसका उपयोग घटकों के मिश्रण और विघटन में सुधार करके एक अच्छा लाइसिस बफर बनाने में मदद करने के लिए किया जा सकता है। इस विधि में, अल्ट्रासाउंड तरंगें – आम तौर पर 20 से 30 kHz की सीमा में – मिश्रण पर लागू होते हैं, जो गुहिकायन बुलबुले बनाता है जो ढह जाता है और तीव्र स्थानीय ऊर्जा उत्पन्न करता है, जिससे यांत्रिक कतरनी और घटकों का मिश्रण होता है।
अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजेशन प्रक्रिया घटकों के किसी भी झुरमुट या समुच्चय को तोड़ने में मदद कर सकती है, और यह सुनिश्चित कर सकती है कि समाधान समान रूप से मिश्रित है। नतीजतन, इस तरह के बेहतर लाइसिस बफर से अधिक कुशल सेल व्यवधान और निकाली गई सामग्री की उच्च पैदावार हो सकती है। इसके अतिरिक्त, अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजेशन पारंपरिक सरगर्मी या हिलाने के तरीकों की तुलना में लाइसिस बफर बनाने के लिए आवश्यक समय को कम कर सकता है।
कुल मिलाकर, अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजेशन लाइसिस बफर तैयारी की गुणवत्ता और दक्षता में सुधार के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है।

अल्ट्रासोनिक लाइसिस बफर तैयारी के लिए प्रोटोकॉल

यह एक जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर का उपयोग करके लाइसिस बफर बनाने के लिए एक सामान्य प्रोटोकॉल है:
 
सामग्री:

• पसंद के डिटर्जेंट (जैसे ट्राइटन एक्स -100, एसडीएस, चैप्स)
• पसंद का नमक (जैसे NaCl, KCl)
• प्रोटीज इनहिबिटर (जैसे पीएमएसएफ, एप्रोटिनिन, ल्यूपेप्टिन)
• ultrasonicator
• हलचल मच गई
• विआयनीकृत पानी
• पीएच मीटर या पीएच स्ट्रिप्स

 
 
चरण-दर-चरण निर्देश:

1. उन कोशिकाओं या ऊतकों के आधार पर लाइसिस बफर की संरचना निर्धारित करें जिन्हें आप लाइसिंग करेंगे, और डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए आप लाइसेट का उपयोग करेंगे। वांछित सांद्रता पर डिटर्जेंट, लवण और प्रोटीज अवरोधकों के स्टॉक समाधान तैयार करें।
2. बीकर या फ्लास्क में डिटर्जेंट, लवण और प्रोटीज इनहिबिटर के स्टॉक समाधान जोड़ें।
3. मात्रा को बफर की वांछित मात्रा तक लाने के लिए विआयनीकृत पानी जोड़ें।
4. प्री-मिक्स समाधान प्राप्त करने के लिए एक स्टिरर का उपयोग करके घटकों को मिलाएं।
5. पीएच मीटर या पीएच स्ट्रिप्स का उपयोग करके बफर के पीएच को मापें, और एसिड या बेस की छोटी मात्रा के साथ आवश्यक पीएच को समायोजित करें।
6. प्री-मिक्स समाधान को समरूप करने के लिए प्रोब-टाइप अल्ट्रासोनिकेटर का उपयोग करें ताकि एक अत्यधिक समरूप समाधान प्राप्त हो सके। इसलिए, समाधान को कुछ सेकंड के लिए तब तक करें जब तक कि समाधान पूरी तरह से मिश्रित न हो जाए और कोई भी झुरमुट या समुच्चय टूट न जाए। सोनिकेशन की अवधि और शक्ति को उपयोग किए जाने वाले विशिष्ट लाइसिस बफर और अल्ट्रासोनिकेटर के आधार पर अनुकूलित किया जा सकता है।
7. अल्ट्रासोनिकेशन के बाद, बफर के पीएच को फिर से मापें और आवश्यकतानुसार समायोजित करें।
8. सोनिकेशन के दौरान बनने वाले किसी भी मलबे या समुच्चय को हटाने के लिए बफर को 0.2 माइक्रोन फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर करें।
9. लाइसिस बफर अब उपयोग के लिए तैयार है।

 
नोट: लाइसिस बफर की सटीक संरचना और पीएच कोशिकाओं या ऊतक ों और डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के आधार पर भिन्न हो सकते हैं। उपरोक्त प्रोटोकॉल एक सामान्य दिशानिर्देश है और इसे विशिष्ट अनुप्रयोगों के लिए अनुकूलित करने की आवश्यकता हो सकती है।
 
अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र आमतौर पर सेल व्यवधान और इंट्रासेल्युलर अणुओं के निष्कर्षण के लिए उपयोग किए जाते हैं। इसलिए कई लाइसिस अनुप्रयोग न केवल लाइसिस बफर की तैयारी के लिए, बल्कि यांत्रिक सेल व्यवधान और निष्कर्षण के लिए भी जांच-प्रकार के सोनिकेशन का उपयोग करते हैं।
यह अल्ट्रासोनिक ऊतक होमोजेनाइज़र को प्रयोगशालाओं के लिए एक बहुमुखी उपकरण बनाता है और सूक्ष्म जीव विज्ञान, जैव प्रौद्योगिकी और जीवन विज्ञान में अल्ट्रासोनिकेटर के व्यापक उपयोग की व्याख्या करता है।

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