अल्ट्रासोनिकेशन से तैयार बफ़र विलयन

अल्ट्रासोनिक ऊतक होमोजेनाइज़र का उपयोग करके लाइसिस बफ़र कुशलतापूर्वक और तेज़ी से तैयार किए जा सकते हैं। चूँकि अल्ट्रासोनिकेटर मिश्रण, घोलने और परिक्षेपण के लिए आदर्श उपकरण हैं, इसलिए इनसे लाइसिस बफ़र विश्वसनीय और उपयोगकर्ता-अनुकूल तरीके से तैयार किए जा सकते हैं।

लाइसिस बफ़र की अल्ट्रासोनिक तैयारी

अल्ट्रासोनिक ऊतक होमोजेनाइज़र कोशिका विघटन, लाइसिस और निष्कर्षण के लिए एक सामान्य उपकरण हैं, इसलिए अधिकांश प्रयोगशालाओं में उपलब्ध होते हैं। प्रोब-प्रकार के अल्ट्रासोनिकेटर का एक द्वितीयक अनुप्रयोग लाइसिस बफ़र तैयार करना है।

लाइसिस बफ़र एक ऐसा विलयन है जिसका उपयोग कोशिकाओं को तोड़कर खोलने (लाइसिस करने) और आगे के विश्लेषण के लिए उनकी अंतर्वस्तु को मुक्त करने के लिए किया जाता है। लाइसिस बफ़र का विशिष्ट संघटन लाइसिस की जा रही कोशिकाओं के प्रकार और आगे के अनुप्रयोग के आधार पर अलग-अलग हो सकता है। हालाँकि, एक सामान्य लाइसिस बफ़र में डिटर्जेंट, लवण और प्रोटीएज़ अवरोधक जैसे घटक होते हैं। लाइसेट के pH और परासरणीय सांद्रता को नियंत्रित करने के लिए आमतौर पर बफ़रिंग लवण (जैसे Tris-HCl) और आयनिक लवण (जैसे NaCl) का उपयोग किया जाता है।
लाइसिस बफ़र बनाने के लिए घटकों को उचित सांद्रताओं और pH पर एक साथ मिलाया जाता है। मिश्रण को आमतौर पर तब तक हिलाया या झकझोरा जाता है जब तक घटक घुल न जाएँ और विलयन समांगी न हो जाए।
अल्ट्रासोनिक समांगीकरण एक ऐसी विधि है जिसका उपयोग घटकों के मिश्रण और घुलने में सुधार करके अच्छा लाइसिस बफ़र बनाने में सहायता के लिए किया जा सकता है। इस विधि में मिश्रण पर अल्ट्रासाउंड तरंगें – सामान्यतः 20 से 30 kHz की सीमा में – लागू की जाती हैं, जिससे कैविटेशन बुलबुले बनते हैं। ये बुलबुले ढहकर तीव्र स्थानीय ऊर्जा उत्पन्न करते हैं, जिससे घटकों में यांत्रिक अपरूपण और मिश्रण होता है।
अल्ट्रासोनिक समांगीकरण प्रक्रिया घटकों की किसी भी गाँठ या समुच्चय को तोड़ने और यह सुनिश्चित करने में सहायता कर सकती है कि विलयन एकसमान रूप से मिश्रित हो। परिणामस्वरूप, इस प्रकार का बेहतर लाइसिस बफ़र अधिक कुशल कोशिका विघटन और निष्कर्षित पदार्थ की अधिक उपज दे सकता है। इसके अतिरिक्त, अल्ट्रासोनिक समांगीकरण पारंपरिक हिलाने या झकझोरने की विधियों की तुलना में लाइसिस बफ़र बनाने में लगने वाला समय कम कर सकता है।
कुल मिलाकर, अल्ट्रासोनिक समांगीकरण लाइसिस बफ़र की तैयारी की गुणवत्ता और दक्षता में सुधार करने का एक शक्तिशाली साधन है।

अल्ट्रासोनिक विधि से लाइसिस बफ़र तैयार करने का प्रोटोकॉल

प्रोब-प्रकार के अल्ट्रासोनिकेटर का उपयोग करके लाइसिस बफ़र बनाने का यह एक सामान्य प्रोटोकॉल है:
 
सामग्री:

• पसंद के डिटर्जेंट (जैसे Triton X-100, SDS, CHAPS)
• पसंद के लवण (जैसे NaCl, KCl)
• प्रोटीएज़ अवरोधक (जैसे PMSF, एप्रोटिनिन, ल्यूपेप्टिन)
• अल्ट्रासोनिकेटर
• विलोडक
• विआयनीकृत जल
• pH मीटर या pH पट्टियाँ

 
 
चरण-दर-चरण निर्देश:

1. जिन कोशिकाओं या ऊतकों का आप लाइसिस करेंगे और जिन आगे के अनुप्रयोगों के लिए आप लाइसेट का उपयोग करेंगे, उनके आधार पर लाइसिस बफ़र का संघटन निर्धारित करें। डिटर्जेंट, लवण और प्रोटीएज़ अवरोधकों के स्टॉक विलयन वांछित सांद्रताओं पर तैयार करें।
2. डिटर्जेंट, लवण और प्रोटीएज़ अवरोधकों के स्टॉक विलयन एक बीकर या फ़्लास्क में डालें।
3. बफ़र का आयतन वांछित मात्रा तक पहुँचाने के लिए विआयनीकृत जल डालें।
4. पूर्वमिश्रित विलयन प्राप्त करने के लिए विलोडक का उपयोग करके घटकों को मिलाएँ।
5. pH मीटर या pH पट्टियों का उपयोग करके बफ़र का pH मापें और अम्ल या क्षार की थोड़ी-थोड़ी मात्रा डालकर आवश्यकतानुसार pH समायोजित करें।
6. पूर्वमिश्रित विलयन को समांगी बनाने के लिए प्रोब-प्रकार के अल्ट्रासोनिकेटर का उपयोग करें, ताकि अत्यधिक समांगी विलयन प्राप्त हो। इसके लिए विलयन का कुछ सेकंड तक सोनिकेशन करें, जब तक कि विलयन पूरी तरह मिश्रित न हो जाए और कोई भी गाँठ या समुच्चय टूट न जाए। उपयोग किए गए विशिष्ट लाइसिस बफ़र और अल्ट्रासोनिकेटर के आधार पर सोनिकेशन की अवधि और शक्ति को अनुकूलित किया जा सकता है।
7. अल्ट्रासोनिकेशन के बाद बफ़र का pH दोबारा मापें और आवश्यकतानुसार समायोजित करें।
8. सोनिकेशन के दौरान बने हो सकने वाले किसी भी मलबे या समुच्चय को हटाने के लिए बफ़र को 0.2 माइक्रोन फ़िल्टर से छानें।
9. लाइसिस बफ़र अब उपयोग के लिए तैयार है।

 
नोट: लाइसिस बफ़र का सटीक संघटन और pH लाइसिस की जा रही कोशिकाओं या ऊतकों तथा आगे के अनुप्रयोगों के आधार पर अलग-अलग हो सकते हैं। उपरोक्त प्रोटोकॉल एक सामान्य दिशानिर्देश है और विशिष्ट अनुप्रयोगों के लिए इसे अनुकूलित करने की आवश्यकता हो सकती है।
 
अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र का उपयोग आमतौर पर कोशिका विघटन और अंतःकोशिकीय अणुओं के निष्कर्षण के लिए किया जाता है। इसलिए कई लाइसिस अनुप्रयोगों में प्रोब-प्रकार के सोनिकेशन का उपयोग लाइसिस बफ़र तैयार करने के साथ-साथ यांत्रिक कोशिका विघटन और निष्कर्षण के लिए भी किया जाता है।
इससे अल्ट्रासोनिक ऊतक होमोजेनाइज़र प्रयोगशालाओं के लिए एक बहुउपयोगी उपकरण बन जाते हैं और सूक्ष्मजीवविज्ञान, जैवप्रौद्योगिकी तथा जीवन विज्ञान में अल्ट्रासोनिकेटर के व्यापक उपयोग का कारण स्पष्ट होता है।

अल्ट्रासोनिक प्रयोगशाला होमोजेनाइज़र

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डिज़ाइन, निर्माण और परामर्श – जर्मनी में निर्मित गुणवत्ता

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नीचे दी गई तालिका हमारे विभिन्न प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिकेटर का अवलोकन प्रस्तुत करती है: